Name: protocols for investigating the host-tissue distribution, transmission-mode, and effect on the host fitness of a densovirus in the cotton bollworm
Uploaded: 2017-04-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי תכנית המחקר הלאומית מפתח הבסיסי של סין (מס 2013CB127602) וקרן המדע עבור Creative מחקר קבוצות של הקרן הלאומית למדע של סין (מס &#39;31,321,004).

1. בנייה של המושבה bollworm כותנה HaDV2 נטולת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זחלי bollworm כותנה אחוריים (armigera ח) על דיאטה מלאכותית 32 בחדר צמיחה מבוקר או תא אקלים מלאכותי ב 25 ± 1 ° C, עם 14 אור H / 10 h כהים ולחות יחסית 60%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לס...

<ol>
	<li>Tang, P., Chiu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenomics+for+the+discovery+of+novel+human+viruses.">Metagenomics for the discovery of novel human viruses.</a> Future Microbiol. 5, 177-189 (2010).</li><li>Rosario, K., Breitbart, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+viral+world+through+metagenomics.">Exploring the viral world through metagenomics.</a> Curr. Opin. Virol. 1, 289-297 (2011).</li><li>Hugenholtz, P., Tyson, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiology+-+metagenomics.">Microbiology - metagenomics.</a> Nature. 455, 481-483 (2008).</li><li>Kristensen, D. M., Mushegian, A. R., Dolja, V. V., Koonin, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+dimensions+of+the+virus+world+discovered+through+metagenomics.">New dimensions of the virus world discovered through metagenomics.</a> Trends Microbiol. 18, 11-19 (2010).</li><li>Kleiner, M., Hooper, L. V., Duerkop, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+methods+to+purify+virus-like+particles+for+metagenomic+sequencing+of+intestinal+viromes.">Evaluation of methods to purify virus-like particles for metagenomic sequencing of intestinal viromes.</a> BMC Genomics. 16, 7 (2015).</li><li>Ho, T., Tzanetakis, I. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+virus+detection+and+discovery+pipeline+using+next+generation+sequencing.">Development of a virus detection and discovery pipeline using next generation sequencing.</a> Virology. 471, 54-60 (2014).</li><li>Marx, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+you+sequence+ecology?+Metagenomics+of+adaptive+diversification.">Can you sequence ecology? Metagenomics of adaptive diversification.</a> PLoS Biol. 11, e1001487 (2013).</li><li>Radford, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+next-generation+sequencing+technologies+in+virology.">Application of next-generation sequencing technologies in virology.</a> J. Gen. Virol. 93, 1853-1868 (2012).</li><li>Liu, S. J., Chen, Y. T., Bonning, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+virus+discovery+in+insects.">RNA virus discovery in insects.</a> Curr. Opin. Insect Sci. 8, 54-61 (2015).</li><li>Mokili, J. L., Rohwer, F., Dutilh, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenomics+and+future+perspectives+in+virus+discovery.">Metagenomics and future perspectives in virus discovery.</a> Curr. Opin. Virol. 2, 63-77 (2012).</li><li>Liu, S. J., Vijayendran, D., Bonning, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next+generation+sequencing+technologies+for+insect+virus+discovery.">Next generation sequencing technologies for insect virus discovery.</a> Viruses-Basel. 3, 1849-1869 (2011).</li><li>Cook, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+virus+discovery+and+genome+reconstruction+from+field+RNA+samples+reveals+highly+divergent+viruses+in+Dipteran+hosts.">Novel virus discovery and genome reconstruction from field RNA samples reveals highly divergent viruses in Dipteran hosts.</a> PLoS ONE. 8, e80720 (2013).</li><li>Webster, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+discovery,+distribution,+and+evolution+of+viruses+associated+with+Drosophila+melanogaster.">The discovery, distribution, and evolution of viruses associated with Drosophila melanogaster.</a> PLoS Biol. 13, e1002210 (2015).</li><li>Granberg, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenomic+detection+of+viral+pathogens+in+spanish+honeybees:+co-infection+by+aphid+lethal+paralysis,+israel+acute+paralysis+and+lake+sinai+viruses.">Metagenomic detection of viral pathogens in spanish honeybees: co-infection by aphid lethal paralysis, israel acute paralysis and lake sinai viruses.</a> PLoS ONE. 8, e57459 (2013).</li><li>Runckel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analysis+of+the+honey+bee+microbiome+reveals+four+novel+viruses+and+seasonal+prevalence+of+known+viruses,+Nosema,+and+Crithidia.">Temporal analysis of the honey bee microbiome reveals four novel viruses and seasonal prevalence of known viruses, Nosema, and Crithidia.</a> PLoS ONE. 6, 20656 (2011).</li><li>Cox-Foster, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+metagenomic+survey+of+microbes+in+honey+bee+colony+collapse+disorder.">A metagenomic survey of microbes in honey bee colony collapse disorder.</a> Science. 318, 283-287 (2007).</li><li>Chandler, J. A., Liu, R. M., Bennett, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+shotgun+metagenomic+sequencing+of+northern+California+(USA)+mosquitoes+uncovers+viruses,+bacteria,+and+fungi.">RNA shotgun metagenomic sequencing of northern California (USA) mosquitoes uncovers viruses, bacteria, and fungi.</a> Front. Microbiol. 6, 185 (2015).</li><li>Shi, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+metagenomic+survey+of+viral+abundance+and+diversity+in+mosquitoes+from+Hubei+province.">A metagenomic survey of viral abundance and diversity in mosquitoes from Hubei province.</a> PLoS ONE. 10, e0129845 (2015).</li><li>Nouri, S., Salem, N., Nigg, J. C., Falk, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+array+of+new+viral+sequences+identified+in+worldwide+populations+of+the+Asian+citrus+psyllid+(Diaphorina+citri)+using+viral+metagenomics.">Diverse array of new viral sequences identified in worldwide populations of the Asian citrus psyllid (Diaphorina citri) using viral metagenomics.</a> J. Virol. 90, 2434-2445 (2016).</li><li>Dayaram, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+diverse+circular+single-stranded+DNA+viruses+in+adult+dragonflies+and+damselflies+(Insecta+Odonata)+of+Arizona+and+Oklahoma,+USA.">Identification of diverse circular single-stranded DNA viruses in adult dragonflies and damselflies (Insecta Odonata) of Arizona and Oklahoma, USA.</a> Infect. Genet. Evol. 30, 278-287 (2015).</li><li>Jakubowska, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+occurrence+of+covert+infections+with+small+RNA+viruses+in+the+lepidopteran+Spodoptera+exigua.">Simultaneous occurrence of covert infections with small RNA viruses in the lepidopteran Spodoptera exigua.</a> J.Invert. Pathol. 121, 56-63 (2014).</li><li>Roossinck, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Move+over,+Bacteria!+Viruses+make+their+mark+as+mutualistic+microbial+symbionts.">Move over, Bacteria! Viruses make their mark as mutualistic microbial symbionts.</a> J. Virol. 89, 6532-6535 (2015).</li><li>Ryabov, E. V., Keane, G., Naish, N., Evered, C., Winstanley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Densovirus+induces+winged+morphs+in+asexual+clones+of+the+rosy+apple+aphid,+Dysaphis+plantaginea.">Densovirus induces winged morphs in asexual clones of the rosy apple aphid, Dysaphis plantaginea.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 8465-8470 (2009).</li><li>Roossinck, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+good+viruses:+viral+mutualistic+symbioses.">The good viruses: viral mutualistic symbioses.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9, 99-108 (2011).</li><li>Venkataraman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+seneca+valley+virus-001:+an+oncolytic+picornavirus+representing+a+new+genus.">Structure of seneca valley virus-001: an oncolytic picornavirus representing a new genus.</a> Structure. 16, 1555-1561 (2008).</li><li>Deterding, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+a+virus+infection+suppresses+hepatitis+c+virus+replication+and+may+lead+to+clearance+of+hcv.">Hepatitis a virus infection suppresses hepatitis c virus replication and may lead to clearance of hcv.</a> J. Hepatol. 45, 770-778 (2007).</li><li>Barton, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpesvirus+latency+confers+symbiotic+protection+from+bacterial+infection.">Herpesvirus latency confers symbiotic protection from bacterial infection.</a> Nature. 447, 326-329 (2007).</li><li>Ponferrada, V. G., Mauck, B. S., Wooley, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+envelope+glycoprotein+of+human+endogenous+retrovirus+herv-w+induces+cellular+resistance+to+spleen+necrosis+virus.">The envelope glycoprotein of human endogenous retrovirus herv-w induces cellular resistance to spleen necrosis virus.</a> Arch. Virol. 148, 659-675 (2003).</li><li>M&#225;rquez, L. M., Redman, R. S., Rodriguez, R. J., Roossinck, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+virus+in+a+fungus+in+a+plant:+three-way+symbiosis+required+for+thermal+tolerance.">A virus in a fungus in a plant: three-way symbiosis required for thermal tolerance.</a> Science. 315, 513-515 (2007).</li><li>Xu, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+genome+sequence+of+a+monosense+densovirus+infecting+the+cotton+bollworm,+Helicoverpa+armigera.">Complete genome sequence of a monosense densovirus infecting the cotton bollworm, Helicoverpa armigera.</a> J. Virol. 86, 10909-10909 (2012).</li><li>Xu, P. J., Liu, Y. Q., Graham, R. I., Wilson, K., Wu, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Densovirus+is+a+mutualistic+symbiont+of+a+global+crop+pest+(Helicoverpa+armigera)+and+protects+against+a+baculovirus+and+Bt+biopesticide.">Densovirus is a mutualistic symbiont of a global crop pest (Helicoverpa armigera) and protects against a baculovirus and Bt biopesticide.</a> PLoS Pathog. 10, e1004490 (2014).</li><li>Liang, G. M., Tan, W. J., Guo, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improvement+in+the+technique+of+arti&#64257;cial+rearing+cotton+bollworm.">An improvement in the technique of arti&#64257;cial rearing cotton bollworm.</a> Plant Protec. 25, 15-17 (1999).</li><li>Zhou, W. G., Rousset, F., O'Neill, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylogeny+and+PCR-based+classification+of+Wolbachia+strains+using+wsp+gene+sequences.">Phylogeny and PCR-based classification of Wolbachia strains using wsp gene sequences.</a> P. Roy. Soc. B-Biol. Sci. 265, 509-515 (1998).</li><li>Mondet, F., de Miranda, J. R., Kretzschmar, A., Le Conte, Y., Mercer, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+front+line:+quantitative+virus+dynamics+in+honeybee+(Apis+mellifera+L.)+colonies+along+a+new+expansion+front+of+the+parasite+Varroa+destructor.">On the front line: quantitative virus dynamics in honeybee (Apis mellifera L.) colonies along a new expansion front of the parasite Varroa destructor.</a> PLoS Pathog. 10, e1004323 (2014).</li><li>Chen, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Israeli+acute+paralysis+virus:+epidemiology,+pathogenesis+and+implications+for+honey+bee+health.">Israeli acute paralysis virus: epidemiology, pathogenesis and implications for honey bee health.</a> PLoS Pathog. 10, e1004261 (2014).</li><li>Hunter, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+field+application+of+RNAi+technology+reducing+israeli+acute+paralysis+virus+disease+in+honey+bees+(Apis+mellifera,+Hymenoptera:+Apidae).">Large-scale field application of RNAi technology reducing israeli acute paralysis virus disease in honey bees (Apis mellifera, Hymenoptera: Apidae).</a> PLoS Pathog. 6, e1001160 (2010).</li><li>Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dengue+virus+-+mosquito+interactions.">Dengue virus - mosquito interactions.</a> Annu. Rev. Entomol. 53, 273-291 (2008).</li><li>Whitfield, A. E., Falk, B. W., Rotenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+vector-mediated+transmission+of+plant+viruses.">Insect vector-mediated transmission of plant viruses.</a> Virology. 479-480, 278-289 (2015).</li><li>Moscardi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+application+of+baculoviruses+for+control+of+Lepidoptera.">Assessment of the application of baculoviruses for control of Lepidoptera.</a> Annu. Rev. Entomol. 44, 257-289 (1999).</li><li>Szelei, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+North-American+and+European+crickets+to+Acheta+domesticus+densovirus+(AdDNV)+and+associated+epizootics.">Susceptibility of North-American and European crickets to Acheta domesticus densovirus (AdDNV) and associated epizootics.</a> J. Invert. Pathol. 106, 394-399 (2011).</li></ol>

בעשורים האחרונים, רוב המחקרים על אינטראקציות חרקים-וירוס התמקדו בריאות דבש דבורים 34, 35, 36, וקטורים של מחלות אנושיות 37, צמח וירוסי 38, וכמה וירוסים פתוגניים חרקים שיש פוטנציאל גדול כמו סוכנים ?...

בעשורים האחרונים, את הפיתוח של טכנולוגיית ריצוף כגון סידור הדור הבא (NGS) יש להקל על גילוי וירוסים רבים DNA ו- RNA רומן, במיוחד וירוסים פתוגניים, אבל גם מבודד רומן של וירוסים ידועים בעבר 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. תסיסנית אורגניזם המודל, יותר מ 20 הגנום וירוס חלקיים חדשים זוהו באמצעות טכניקות metagenomic 13. רצפים ויראלי רבים, כולל וירוסים רומן, גם זוהו חרקים אחרים, כגון דבורים ודבש, מ &#39;osquitoes, psyllids דר אסיה, שפיריות, ומיני פרפראים מרובים 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21. בעתיד, ניתן לצפות כי יותר וירוסים רומן יתגלו חרקים באמצעות טכנולוגיות מתקדמות אלה; ומכאן, הבנתנו את אינטראקצית וירוס-מארח עשויה להשתנות בהתאם 6, 9. לדוגמא, אינטראקציות מארח וירוס נחשבות יותר מסובך ממה שחשב בעבר, כי וירוסי רומן רבים מאופיינים כגורם שותפים הדדיים ולא 22 פתוגנים קפדנים. לדוגמא, DplDNV densovirus ההדדי ב plantaginea Dysaphis גורם מורף מכונף<html> מגביר את ניידות, הקלת הפיזור של המארח כמו גם את הווירוס 23. יתר על כן, וירוסים הדדיים תוארו לגבי בריאות יונקת, הבצורת וסובלנות קרה של צמחים, וכן את ההשפעה של זיהומים חיידקיים 24. סנקה העמק וירוס-001 מוצג לתווך cytotoxicity סלקטיבית כלפי תאים סרטניים בסרטן נוירואנדוקריניים כולל 25. הפטיטיס A נגיף לדכא שכפול הפטיטיס C וירוס ועלול להוביל להחלמה מצהבת C 26. חביון ההרפס מקנה הגנה סימביוטית מזיהום חיידקי 27. גליקופרוטאין המעטפה של-W HERV שרטרווירוס האנושי אנדוגני גורם התנגדות הסלולר וירוס נמק הטחול 28. וירוס סובלנות תרמית Curvularia (CThTV) מתוך endophyte פטרייתיים מעורב האינטראקציה ההדדית בין פטרייה זו לבין דשא פאניקה טרופינ&quot;צ &quot;&gt; 29. לפיכך, ידע של האינטראקציות בין הווירוסים מצאו חדש מארחיהם צריכות לייצר נקודות מבט חדשות על הביולוגיה והניהול שלהם. עם זאת, וירוסי רומן, ובמיוחד הווירוסים הסמויים מוצגים שום סימנים ברורים טיפוסיים של זיהום חריף, יש לעיתים רחוקות נחקרו, ואנחנו צריכים צינור ופרוטוקולים כדי לחקור את ההשפעות של וירוסים שנמצאו לאחרונה על מארחיהם. בעבר, דיווחנו השכיחות חדש monosense densovirus Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2) ב bollworm הכותנה, תנשמית האביב, והציגו ראיות של יחסים הדדיים בין HaDV2 ואת כותנת bollworm 30, 31. במאמר זה, נתאר את פרוטוקול המעבדה ללמוד בפירוט את האינטראקציה בין HaDV2 ומארח bollworm הכותנה שלה. הפרוטוקול המובא כאן יכול להיות גם רלוונטי מאוד לחוקרים לבחון את rאולה של וירוסים דרך הפה-המשודר אחרים, במיוחד מזיקים פרפראים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>07-200-740</td>
			<td>Multiple suppliers available.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA extraction kit</td>
			<td>TIANGEN</td>
			<td>DP304-03</td>
			<td>Multiple suppliers available.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>thermal cycler</td>
			<td>Veriti; Applied Biosystems</td>
			<td>4375786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m membrane filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGS025NB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pEASY-T Cloning Vector</td>
			<td>TransGen, Beijing, China</td>
			<td>CT301-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>IDEAL-TEK</td>
			<td>2.SA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premix Ex Taq (Probe qPCR)</td>
			<td>Takara</td>
			<td>RR390A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Probes</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Custom order</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Custom order</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microspectrophotometry NanoDrop 2000c&#160;</td>
			<td>Thermo scientific&#160;</td>
			<td>not available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7500 Real-Time PCR system</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>not available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope SZX-16</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>not available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Multiple suppliers available.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vitamin complex</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Multiple suppliers available.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for investigating the host-tissue distribution, transmission-mode, and effect on the host fitness of a densovirus in the cotton bollworm

וירוסי רומן רבים התגלו מארחי בעלי חיים באמצעות טכנולוגיות רצף של הדור הבא. בעבר, דיווחנו וירוס הדדי, densovirus תנשמית האביב (HaDV2), בעוד מינים פרפראים, את bollworm הכותנה, תנשמית האביב (הובנר). כאן, אנו מתארים את הפרוטוקולים המשמשים כיום כדי לחקור את ההשפעה של HaDV2 על המארח שלו. ראשית, אנו להקים מושבה bollworm כותנה HaDV2 ללא מזוג הרבייה יחיד. ואז, אנחנו בעל פה לחסן כמה צאצאי זחל ילודים עם HaDV2 המכיל נוזל מסונן לייצר שתי מושבות עם אותו הרקע גנטי: אחד HaDV2 נגוע, על אלה שלא נדבקו אחרים. פרוטוקול להשוות פרמטרי שולחן חיים (למשל, זחל, גלמים, ותקופות מבוגרי פוריות) בין יחידים HaDV2 נגועים ואת -uninfected גם מוצג, כמו גם הפרוטוקולים לקביעת חלוקת מארח-רקמות ויעילות העברת HaDV2. פרוטוקולים אלה ווULD גם להיות מתאים חוקר את ההשפעות של וירוסים משודרים אחרים בעל פה על מארחי החרקים שלהם, מארחים פרפראים בפרט.

Progenies מן ההורים שהיו HaDV2 חינם (איור 3 א) שגדלו כמו-זן NONINF. אנחנו בהצלחה מוגברת הגן יקטין באמצעות אותן תבניות DNA, מה שמרמז כי תבניות DNA היו באיכות טובה (האיור 3B). בנוסף, progenies שמונה שנבחרו באקראי היו גם ללא HaDV2 (איור 3 ג), HaNPV <stro...

Watch this Scientific Journal Video about Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm at JoVE.com

Protocols for Investigating the Host-tissue Distribution, Transmission-mode, and Effect on the Host Fitness of a Densovirus in the Cotton Bollworm

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לחקור את חלוקת מארח-רקמות, מצב שידור, וכן השפעה על כושר המארח של densovirus בתוך מינים פרפראים, את bollworm הכותנה. פרוטוקול זה יכול לשמש גם עבור לימוד האינטראקציה בין וירוסים דרך פה-המשודר אחרים ומארחי החרקים שלהם.

פרוטוקולים לחקירת הפצת Host-הרקמה, הילוכים-mode, ואת ההשפעה על כושר Host של Densovirus ב bollworm הכותנה

Many novel viruses have been discovered in animal hosts using next-generation sequencing technologies. Previously, we reported a mutualistic virus, ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Immunology and Infection

Genetics

Viruses

SCIENTISTS IN ACTION

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

בתחום ההדמיה vivo של טפילים טראנסגנטי שושנת יריחו שורה חיים

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

שימוש במודל EpiAirway לאפיון לטווח ארוך מארח הפתוגן אינטראקציות

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

האפקט סינרגיסטי של אור וgentamycin הגלויים על<em&gt; Aeruginosa Pseudomona</em&gt; מיקרואורגניזמים

Recently there were several publications on the  bactericidal effect of visible light, most of them claiming that blue part of  the spectrum (400 nm-500 ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

שימוש בכימיה לחץ כדי למדוד את ההשפעה של זיהום ויראלי בסינתזת RNA Host-Cell

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

חוקר את ההשפעות של פרוביוטיקה על דלקת ריאות התיישבות שימוש<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay דבקות

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Bioenergetics and the Oxidative Burst: Protocols for the Isolation and Evaluation of Human Leukocytes and Platelets

Bioenergetics וחמצוני פרץ: הפרוטוקולים לבידוד ולהערכה של לויקוציטים אדם וטסיות הדם

Mitochondrial dysfunction is known to play a significant role in a number of pathological conditions such as atherosclerosis, diabetes, septic shock, and ...

Human Placental and Decidual Organ Cultures to Study Infections at the Maternal-fetal Interface

שלית Decidual אדם תרבויות איברים ללמוד זיהומים בבית הממשק האם והעובר

The placenta shows a large degree of interspecies anatomic variability. To best understand biology and pathophysiology of the human placenta, it is ...

Implementation of a Permeable Membrane Insert-based Infection System to Study the Effects of Secreted Bacterial Toxins on Mammalian Host Cells

יישום של קרום חדיר מערכת זיהום כנס מבוססת כדי לחקור את ההשפעות של מופרש בקטריאלי רעלים בתא פונדקאי יונק

Many bacterial pathogens secrete potent toxins to aid in the destruction of host tissue, to initiate signaling changes in host cells or to manipulate ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

לדמיין את ההשפעות של כיח על פיתוח biofilm באמצעות מודל תאיים coverglass

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...