Name: novel assay for cold nociception in drosophila larvae
Uploaded: 2017-04-03T15:00:00
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Ringraziamo Sarah Wu e Camille Graham per lo sviluppo di prime fasi del saggio freddo della sonda, il Bloomington Drosophila Stock Center per gli stock Fly, ed i membri del laboratorio Galko per la lettura critica del manoscritto. Questo lavoro è stato sostenuto da NIH NRSA (NIH F31NS083306) per HNT, e dal NIH R01NS069828, R21NS087360 e Università del Texas MD Anderson Clark Fellowship nella ricerca di base a MJG.

1. Preparazione di larve <ol><li> Sollevare azioni o incroci genetici in un incubatore a 25 ° C. <ol><li> Se la coltura di una croce, utilizzare 20-25 femmine vergini e 15-20 maschi per flaconcino contenente regolare dei media farina di mais mosca. Consentire femmine depongono le uova per circa 48 ore prima di trasferirli ad un nuovo flacone di cibo. </li></ol></li><li> 4-5 giorni dopo lay uovo, raccogliere 3 ° larve instar del genotipo desiderato spruzzando delicatamente un flusso d&#39;acqua nel cibo in...

<ol>
	<li>Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tiling+of+the+Drosophila+epidermis+by+multidendritic+sensory+neurons.">Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons.</a> Development. 129 (12), 2867-2878 (2002).</li><li>Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+regulating+dendritic+outgrowth,+branching,+and+routing+in+Drosophila.">Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in Drosophila.</a> Genes Dev. 13 (19), 2549-2561 (1999).</li><li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects.">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14 (2), 341-351 (1995).</li><li>Hwang, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nociceptive+neurons+protect+Drosophila+larvae+from+parasitoid+wasps.">Nociceptive neurons protect Drosophila larvae from parasitoid wasps.</a> Curr Biol. 17 (24), 2105-2116 (2007).</li><li>Im, S. H., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pokes,+sunburn,+and+hot+sauce:+Drosophila+as+an+emerging+model+for+the+biology+of+nociception.">Pokes, sunburn, and hot sauce: Drosophila as an emerging model for the biology of nociception.</a> Dev Dyn. 241 (1), 16-26 (2012).</li><li>Milinkeviciute, G., Gentile, C., Neely, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+tool+for+studying+the+conserved+genetics+of+pain.">Drosophila as a tool for studying the conserved genetics of pain.</a> Clin Genet. 82 (4), 359-366 (2012).</li><li>Turner, H. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRP+Channels+Pkd2,+NompC,+and+Trpm+Act+in+Cold-Sensing+Neurons+to+Mediate+Unique+Aversive+Behaviors+to+Noxious+Cold+in+Drosophila.">The TRP Channels Pkd2, NompC, and Trpm Act in Cold-Sensing Neurons to Mediate Unique Aversive Behaviors to Noxious Cold in Drosophila.</a> Curr Biol. , (2016).</li><li>Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+mechanosensory+transduction:+mechanoreception-defective+mutations+of+Drosophila.">Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila.</a> Neuron. 12 (6), 1195-1206 (1994).</li><li>Tsubouchi, A., Caldwell, J. C., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+filopodia,+Ripped+Pocket,+NOMPC,+and+NMDARs+contribute+to+the+sense+of+touch+in+Drosophila+larvae.">Dendritic filopodia, Ripped Pocket, NOMPC, and NMDARs contribute to the sense of touch in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 22 (22), 2124-2134 (2012).</li><li>Yan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+NOMPC+is+a+mechanotransduction+channel+subunit+for+gentle-touch+sensation.">Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation.</a> Nature. 493 (7431), 221-225 (2013).</li><li>Tracey, W. D., Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=painless,+a+Drosophila+gene+essential+for+nociception.">painless, a Drosophila gene essential for nociception.</a> Cell. 113 (2), 261-273 (2003).</li><li>Babcock, D. T., Landry, C., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+signaling+mediates+UV-induced+nociceptive+sensitization+in+Drosophila+larvae.">Cytokine signaling mediates UV-induced nociceptive sensitization in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 19 (10), 799-806 (2009).</li><li>Chattopadhyay, A., Gilstrap, A. V., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+global+methods+of+assessing+thermal+nociception+in+Drosophila+larvae.">Local and global methods of assessing thermal nociception in Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (63), e3837 (2012).</li><li>Grueber, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+Drosophila+multidendritic+neurons+in+the+central+nervous+system:+links+with+peripheral+dendrite+morphology.">Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology.</a> Development. 134 (1), 55-64 (2007).</li><li>Hughes, C. L., Thomas, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensory+feedback+circuit+coordinates+muscle+activity+in+Drosophila.">A sensory feedback circuit coordinates muscle activity in Drosophila.</a> Mol Cell Neurosci. 35 (2), 383-396 (2007).</li><li>Zhong, L., Hwang, R. Y., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pickpocket+is+a+DEG/ENaC+protein+required+for+mechanical+nociception+in+Drosophila+larvae.">Pickpocket is a DEG/ENaC protein required for mechanical nociception in Drosophila larvae.</a> Curr Biol. 20 (5), 429-434 (2010).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468 (7326), 921-926 (2010).</li><li>Neely, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TrpA1+regulates+thermal+nociception+in+Drosophila.">TrpA1 regulates thermal nociception in Drosophila.</a> PLoS One. 6 (8), e24343 (2011).</li><li>Zhou, Y., Cameron, S., Chang, W. T., Rao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+directional+change+after+mechanical+stimulation+in+Drosophila.">Control of directional change after mechanical stimulation in Drosophila.</a> Mol Brain. 5, 39 (2012).</li><li>Im, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tachykinin+acts+upstream+of+autocrine+Hedgehog+signaling+during+nociceptive+sensitization+in+Drosophila.">Tachykinin acts upstream of autocrine Hedgehog signaling during nociceptive sensitization in Drosophila.</a> Elife. 4, e10735 (2015).</li><li>Babcock, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+regulates+nociceptive+sensitization.">Hedgehog signaling regulates nociceptive sensitization.</a> Curr Biol. 21 (18), 1525-1533 (2011).</li><li>Berrigan, D., Pepin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+Maggots+Move+-+Allometry+and+Kinematics+of+Crawling+in+Larval+Diptera.">How Maggots Move - Allometry and Kinematics of Crawling in Larval Diptera.</a> J. Insect Physiol. 41 (4), 329-337 (1995).</li><li>Galko, M. J., Krasnow, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+genetic+analysis+of+wound+healing+in+Drosophila+larvae.">Cellular and genetic analysis of wound healing in Drosophila larvae.</a> PLoS Biol. 2 (8), E239 (2004).</li><li>Burra, S., Wang, Y., Brock, A. R., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Drosophila+larvae+to+study+epidermal+wound+closure+and+inflammation.">Using Drosophila larvae to study epidermal wound closure and inflammation.</a> Methods Mol Biol. 1037, 449-461 (2013).</li><li>Dar, A. C., Das, T. K., Shokat, K. M., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetic+discovery+of+targets+and+anti-targets+for+cancer+polypharmacology.">Chemical genetic discovery of targets and anti-targets for cancer polypharmacology.</a> Nature. 486 (7401), 80-84 (2012).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila+melanogaster+and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Gill, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multistate+life-tables+and+regression+models.">Multistate life-tables and regression models.</a> Math Popul Stud. 3 (4), 259-276 (1992).</li><li>Mantel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ranking+procedures+for+arbitrarily+restricted+observation.">Ranking procedures for arbitrarily restricted observation.</a> Biometrics. 23 (1), 65-78 (1967).</li><li>Breslow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generalized+Kruskal-Wallis+test+for+comparing+K+samples+subject+to+unequal+patterns+of+censorship.">A generalized Kruskal-Wallis test for comparing K samples subject to unequal patterns of censorship.</a> Biometrika. 57 (3), 579-594 (1970).</li><li>Gehan, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+generalized+wilcoxon+test+for+comparing+arbitrarily+singly-censored+samples.">A generalized wilcoxon test for comparing arbitrarily singly-censored samples.</a> Biometrika. 52, 203-223 (1965).</li></ol>

Il test qui descritto può essere utilizzato per valutare qualitativamente e quantitativamente nocicezione o sensibilizzazione nocicettiva in larve di diversi background genetici, influenze ambientali, e / o le condizioni di danno-indotta. Poiché questo test consente di applicare focale di uno stimolo freddo, con questo strumento si può valutare la funzione di un sottoinsieme di neuroni sensoriali periferici specificamente in risposta alle basse temperature. È interessante notare che questi comportamenti evocati fred...

Drosophila ha dimostrato di essere molto utile per l&#39;identificazione di nuovi geni conservati e circuiti neuronali che sottendono comportamenti complessi. Mosche forniscono un sofisticato toolkit genetico e un sistema nervoso semplificato che permettono precisa manipolazione genetica e neuronale 1, 2, 3, 4 per sezionare le basi cellulari e molecolari della nocicezione 5, 6, 7. Larve sono particolarmente utili per queste analisi, dato che saggi comportamentali per tocco delicato 8, 9, 10, 11 calore nocive, 12, 13 e sensazione meccanica di stimoli nocivi 4, </sup&gt; 11 sono già stati stabiliti, e la cuticola larvale trasparente permette l&#39;imaging dal vivo o fisso dell&#39;epidermide e neuroni sensoriali sottostanti. Recentemente, un saggio per freddo nocivo è stato anche sviluppato 7, che descriveremo in maggior dettaglio qui. Utilizzando una multa sonda fredda, conico-punta, mostriamo che Drosophila larve presentano un insieme di comportamenti reattivi specifici a freddo, distinto da comportamenti osservati durante la locomozione normale, seguito tocco delicato, o dopo duro stimolo meccanico temperatura o alta 7, 8, 11 . I comportamenti specifici a freddo includono un robusto contrazione tutto il corpo (CT), una 45-90º aumento dei segmenti posteriori (PR) e un aumento simultaneo del segmenti anteriore e posteriore in una forma ad U (US). La prevalenza di questi comportamenti aumenta con temperature decrescenti ma ciascuno picchi sleggermente diverse temperature fredde. Lavori recenti suggeriscono che le risposte CT sono mediati da diversi neuroni sensoriali periferici rispetto a quelle che rispondono a calore nocive o dura stimoli meccanici 7. Proprio come nocicettori vertebrati, Drosophila dendritiche multipla (md) neuroni sensoriali periferici hanno strutture dendritiche complesse che arborize oltre l&#39;epidermide 1. neuroni md sono presenti in ogni segmento corporeo larvale, proiettando loro assoni al cordone nervoso ventrale 14. neuroni sensoriali md sono suddivisi in quattro classi differenti (I-IV) basati sulla morfologia dendritica e hanno diverse funzioni sensoriali 4, 9, 10, 15, 16, 17. Mentre i neuroni classe IV sono necessari per larvali risposte rollio lateralea temperature elevate o rigide stimoli meccanici 4, classe III neuroni sono necessari per delicato tocco risposte 9, 10 e non solo sono attivati dal freddo, ma sono necessarie anche per le risposte comportamentali evocati freddo 7. Entrambi i neuroni classe III e IV utilizzano potenziali canali discreti transient receptor (TRP) per facilitare risposte comportamentali ai nociva 7, 11, 18 e stimoli 9, 10, 17, 19 non-nocivo. Inoltre, nocicezione larvale è sensibilizzato infortunio seguito, a livello cellulare 20 e comportamentali 12, 21. Il saggio descritto qui consente la quantification di una normale o potenzialmente alterato risposte comportamentali a basse temperature che variano da nocivi freddo (≤ 10 ° C), freschi innocui (11-17 ° C), a temperatura ambiente (18-22 ° C). Le temperature fredde utilizzati in questo test è in grado di attivare direttamente classe III neuroni sensoriali, suscitando robusti, aumenta calcio riproducibili e risposte comportamentali evocati freddo, che possono essere qualitativamente e quantitativamente analizzati 7. Questo test può essere applicato a larve di qualsiasi genotipo nonché di larve esposto a diverse condizioni ambientali (alimentazione alterato, lesioni, agenti farmacologici) per determinare i fattori sia genetici e ambientali che hanno un impatto nocicezione freddo, la sensibilizzazione nocicettiva e la plasticità nocicettivo. Dato che thermosensation è onnipresente in molte specie, questo test fornisce un valido strumento per lo studio della nocicezione e può scoprire bersagli gene nuovi o interazioni neuronali che migliorerannola nostra comprensione della nocicezione vertebrati. La sonda a freddo su misura (vedi sonda fredda, Table of Materials) utilizza una temperatura controllata ad anello chiuso dispositivo Peltier, che raffredda l&#39;albero alluminio e punta conica per conduzione termica. Un termistore è incorporato all&#39;interno della punta conica alluminio riporta la temperatura in tempo reale sulla centralina. Un dissipatore di calore e la ventola sono fissati al modulo termoelettrico per regolare il carico del effetto Peltier calore (Qc) e quindi l&#39;intervallo di temperatura desiderato (22-0 ° C) può essere realizzato (vedi Unità di controllo termico, Table of Materials). Lo stimolo nocivo freddo della punta della sonda freddo viene applicato a mano alla linea mediana dorsale, a segmento (s) equidistante dalle estremità anteriori e posteriori (circa segmento A4, vedere Figura 1A) della larva. In risposta a stimoli freddi, larve generalmente producono uno dei tre comportamenti evocati freddo a 10 s cut-off: un corpo pienocontrazione (CT), un aumento di 45-90º segmento anteriore e posteriore in una forma ad U (USA), oppure un aumento dei segmenti posteriori (PR) (descritto in Risultati). Nessuno di questi comportamenti vengono eseguite durante la normale locomozione peristaltica o comportamento di foraggiamento. Questi comportamenti sono anche distinti da risposte tocco delicato e la risposta di laminazione avversione ad alte temperature o nocivi stimoli meccanici.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Cold Probe</td>
			<td style="width:71px;">Pro-Dev Engineering</td>
			<td style="width:119px;">Custom-built on demand</td>
			<td style="width:167px;">Part numbers and construction details can be provided on request</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Thermal Control Unit</td>
			<td style="width:71px;">TE Technology</td>
			<td style="width:119px;">Custom Built enclosure</td>
			<td style="width:167px;">Part numbers and construction details can be provided on request</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Zeiss Stemi 2000 microscope</td>
			<td style="width:71px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">NT55-605</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Fiber-Lite MI-150 High Intensity Illuminator</td>
			<td style="width:71px;">Dolan-Jenner Industries.</td>
			<td style="width:119px;">A20500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Schott Dual Gooseneck 23 inch Fiber Optic Light Guide</td>
			<td style="width:71px;">Schott North America, Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Schott A08575</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:71px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">FS-1670</td>
			<td style="width:167px;">Used to sort and handle larvae. Be sure to smooth and blunt forceps tips slightly to lower the risk of accidently puncturing or injuring the larvae</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Paintbrush</td>
			<td style="width:71px;">Dick Blick Art Materials</td>
			<td style="width:119px;">06762-1002</td>
			<td style="width:167px;">Used to sort and handle larvae. It is helpful if the paintbrush is damp during use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">35 X 10 mm Polystyrene Petri Dish</td>
			<td rowspan="2" style="width:71px;">Falcon</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">351008</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">60 X 10 mm Polystyrene Petri Dish</td>
			<td rowspan="2" style="width:71px;">Falcon</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">351007</td>
			<td rowspan="2" style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Piece of black vinyl (at least 2 x 2 inches)</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Used to provide contrast and orient larvae to the cold probe</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Fisherbrand Scoopula Spatula</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-357Q</td>
			<td style="width:167px;">Used to move food</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Kimtech Science Kimwipes</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">06-666A</td>
			<td style="width:167px;">Used to dry the larvae and cold probe if there is excess moisture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel assay for cold nociception in drosophila larvae

Come gli organismi di percepire e reagire a temperature nocivi è ancora poco conosciuta. Inoltre, i meccanismi sottostanti sensibilizzazione della macchina sensoriale, come nei pazienti con neuropatia periferica o sensibilizzazione lesioni indotte, non sono ben caratterizzati. Il modello Drosophila geneticamente trattabili è stato utilizzato per studiare le cellule e geni necessari per il rilevamento calore nocive, che ha dato più geni conservati di interesse. Poco si sa tuttavia sulle cellule e recettori importanti per il rilevamento freddo nocivi. Anche se, Drosophila non sopravvive l&#39;esposizione prolungata a temperature fredde (≤10 ° C), ed eviterà fresco, preferendo le temperature più calde in saggi preferenze comportamentali, come essi percepiscono e possibilmente evitare stimoli freddi nocivi è stato recentemente indagato solo. Qui si descrive e caratterizzare i primi freddi nocive (≤10 ° C) del test comportamentaleDrosophila. Con questo strumento e il dosaggio, mostriamo un investigatore come valutare qualitativamente e quantitativamente i comportamenti nocicettivi freddi. Questo può essere fatto in condizioni di coltura normali / sane, o presumibilmente nel contesto della malattia, infortunio o sensibilizzazione. Inoltre, questo test può essere applicato a larve selezionato per genotipi desiderati, che potrebbero avere un impatto thermosensation, dolore, o sensibilizzazione nocicettiva. Dato che il dolore è un processo altamente conservato, da questo test per studiare ulteriormente nocicezione termica sarà probabilmente raccogliere importanti comprensione dei processi di dolore in altre specie, tra cui vertebrati.

Drosophila larve movimento con un movimento peristaltico che comprende pause occasionali, curve testa, e cambiamenti di direzione 22. In risposta alla domanda focale di uno stimolo nocivo freddo tuttavia, larve presentano un insieme di comportamenti unici, a differenza del rullo laterale aversive di calore nocive e stimoli meccanici. Questi comportamenti sono anche diversi dalle risposte al tocco delicato 8, <sup class="...

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Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

Qui mostriamo un nuovo metodo di analisi per studiare nocicezione freddo in Drosophila larve. Questo dosaggio utilizza una sonda custom-built Peltier in grado di applicare una focale stimolo freddo nociva e si traduce in comportamenti specifici a freddo quantificabili. Questa tecnica consentirà un&#39;ulteriore dissezione cellulari e molecolari della nocicezione freddo.

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Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualizzazione dei Propriorecettori in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larve e pupe

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Appetitivo apprendimento associativo olfattiva in<em&gt; Drosophila</em&gt; Le larve

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Light Preference Assay to Study Innate and Circadian Regulated Photobehavior in Drosophila Larvae

Luce Preferenza Assay per studiare Innata e circadiano Photobehavior Regolamentato<em&gt; Drosophila</em&gt; Larve

Light acts as environmental signal to control animal behavior at various levels. The Drosophila larval nervous system is used as a unique model to answer ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly saggio per comportamento alimentare in<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Straightforward Assay for Quantification of Social Avoidance in Drosophila melanogaster

Assay Semplice per la quantificazione della Social Prevenzione in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster is an emerging model to study different aspects of social interactions. For example, flies avoid areas previously occupied by ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Un metodo semplice e poco costoso per la determinazione fredda sensibilità e adattamento nei topi

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraggiamento protocollo percorso di lunghezza per<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Le larve

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

Gusto Preferenza Assay per adulti<em&gt; Drosophila</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput analisi del comportamento motorio nell'analisi di Isola della drosofila

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...