Name: recombinant protein expression, crystallization, and biophysical studies of a bacillus-conserved nucleotide pyrophosphorylase, bcmazg
Uploaded: 2017-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG at JoVE.com

X-ışını kırınımı veri setleri, Pohang Hızlandırıcı Laboratuvarının (Kore) kiriş çizgisi 7A&#39;da toplandı. Bu çalışma, Bilim Bakanlığı, BİT ve Gelecek Planlama (2015R1A1A01057574 - MH) tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) aracılığıyla uygulanan Temel Bilim Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir.

1.RBC1531&#39;in Rekombinant Protein Üretimi ve Saflaştırılması <ol><li> Bir rekombinant BC1531 proteini (rBC1531) ekspresyon plazmidinin hazırlanması <ol><li> B. cereus&#39;un genomik DNA&#39;sını hazırlayın 10 . </li><li> Sırasıyla Bam HI ve Sal I kısıtlama enzimi siteleri oluşturmak için ileri ve geri primerler (Bkz. Malzeme Listesi) kullanılarak polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile B. cereus genomik DN...

<ol>
	<li>Ivanova, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+Bacillus+cereus+and+comparative+analysis+with+Bacillus+anthracis.">Genome sequence of Bacillus cereus and comparative analysis with Bacillus anthracis.</a> Nature. 423, 87-91 (2003).</li><li>Spencer, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacillus+anthracis.">Bacillus anthracis.</a> J Clin Pathol. 56, 182-187 (2003).</li><li>Deli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LmbE+proteins+from+Bacillus+cereus+are+de-N-acetylases+with+broad+substrate+specificity+and+are+highly+similar+to+proteins+in+Bacillus+anthracis.">LmbE proteins from Bacillus cereus are de-N-acetylases with broad substrate specificity and are highly similar to proteins in Bacillus anthracis.</a> FEBS J. 277, 2740-2753 (2010).</li><li>Gross, M., Marianovsky, I., Glaser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MazG+--+a+regulator+of+programmed+cell+death+in+Escherichia+coli.">MazG -- a regulator of programmed cell death in Escherichia coli.</a> Mol Microbiol. 59, 590-601 (2006).</li><li>Galperin, M. Y., Moroz, O. V., Wilson, K. S., Murzin, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=House+cleaning,+a+part+of+good+housekeeping.">House cleaning, a part of good housekeeping.</a> Mol Microbiol. 59, 5-19 (2006).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+Escherichia+coli+MazG,+the+regulator+of+nutritional+stress+response.">Crystal structure of Escherichia coli MazG, the regulator of nutritional stress response.</a> J Biol Chem. 283, 15232-15240 (2008).</li><li>Moroz, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimeric+dUTPases,+HisE,+and+MazG+belong+to+a+new+superfamily+of+all-alpha+NTP+pyrophosphohydrolases+with+potential+&amp;#34;house-cleaning&amp;#34;+functions.">Dimeric dUTPases, HisE, and MazG belong to a new superfamily of all-alpha NTP pyrophosphohydrolases with potential &amp;#34;house-cleaning&amp;#34; functions.</a> J Mol Biol. 347, 243-255 (2005).</li><li>Robinson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+putative+house-cleaning+enzyme+encoded+within+an+integron+array:+1.8+A+crystal+structure+defines+a+new+MazG+subtype.">A putative house-cleaning enzyme encoded within an integron array: 1.8 A crystal structure defines a new MazG subtype.</a> Mol Microbiol. 66, 610-621 (2007).</li><li>Moroz, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+crystal+structure+of+a+complex+of+Campylobacter+jejuni+dUTPase+with+substrate+analogue+sheds+light+on+the+mechanism+and+suggests+the+&amp;#34;basic+module&amp;#34;+for+dimeric+d(C/U)TPases.">The crystal structure of a complex of Campylobacter jejuni dUTPase with substrate analogue sheds light on the mechanism and suggests the &amp;#34;basic module&amp;#34; for dimeric d(C/U)TPases.</a> J Mol Biol. 342, 1583-1597 (2004).</li><li>Green, M., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular cloning: A laboratory Manual. 1, (2012).</li><li>Brown, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gene cloning an introduction. , (1986).</li><li>Kim, M. I., Hong, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+the+Bacillus-conserved+MazG+protein,+a+nucleotide+pyrophosphohydrolase.">Crystal structure of the Bacillus-conserved MazG protein, a nucleotide pyrophosphohydrolase.</a> Biochem Biophys Res Commun. 472, 237-242 (2016).</li><li>Sheehan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physical biochemistry: Principles and applications. , (2009).</li><li>Lesley, S. A., Wilson, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+production+and+crystallization+at+the+joint+center+for+structural+genomics.">Protein production and crystallization at the joint center for structural genomics.</a> J Struct Funct Genomics. 6, 71-79 (2005).</li><li>Jeon, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+biochemical+characterization+of+bacterial+YpgQ+protein+reveals+a+metal-dependent+nucleotide+pyrophosphohydrolase.">Structural and biochemical characterization of bacterial YpgQ protein reveals a metal-dependent nucleotide pyrophosphohydrolase.</a> J Struct Biol. 195, 113-122 (2016).</li></ol>

Studies of true pathogens are limited due to safety restrictions and regulations. Alternatively, pathogens can be studied using evolutionarily related non-pathogens or less pathogenic species. The ba1554 gene is considered a critical gene in B. anthracis. Fortunately, an identical gene is present in nonclinical B. cereus. Thus, without serious safety concerns, recombinant BC1531 protein can be used for biophysical and enzymatic characterization. Here, we described detailed procedures, moving fr...

Rekombinant protein ekspresyonu, sınırlı protein miktarı ve zararlı kontaminasyon gibi doğal protein kaynaklarıyla ilişkili problemlerin üstesinden gelmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca, patojenik genler ve protein araştırmalarında ilave güvenlik önlemleri gerektirmeyen alternatif bir laboratuvar suşu kullanılabilir. Örneğin, Bacillus cereus , yakın evrimsel ilişkileri nedeniyle Bacillus anthracis&#39;i incelemek için faydalı bir modeldir 1 . B. anthracis , insanlarda ve hayvanlarda ölümcül inhalasyon şarbonuna neden olan zorunlu bir patojendir ve potansiyel olarak bir biyolojik silah olarak kullanılabilir 2 . Dolayısıyla, B. anthracis ile ilgili laboratuvar çalışmaları, ABD Hastalık Kontrol Merkezleri tarafından sıkı bir şekilde düzenlenir ve laboratuar alanının negatif oda basıncıyla ayrılması zorunluluğu getiren biyogüvenlik seviyesi 3 (BSL-3) uygulamaları gerektirir. B. anthracis&#39;in aksine </eM&gt;, B. cereus bir BSL-1 ajan olarak kategorize edilir ve bu nedenle en az güvenlik kaygısı vardır. B. cereus , enfeksiyon sırasında gıda zehirlenmesine neden olan ve tıbbi yardım almadan tedavi edilebilen, fırsatçı bir patojendir. Bununla birlikte, B. cereus B. anthracis ile birçok kritik geni paylaştığı için, B. anthracis proteinlerinin fonksiyonları B. cereus 1&#39;in ilgili homologları kullanılarak incelenebilir. B. anthracis&#39;in ba1554 - ba1558 gen kümesi, bc1531 - bc1535 kümesi ile oldukça korunmuştur B. cereus&#39;un yanı sıra Bacillus thuringiensis&#39;in bt1364-bt1368 kümesiyle , gen organizasyonu ve sekansı açısından. Dahası, ilgili kümelerin ilk genleri ( ba1554 , bc1531 ve bt1364 ) tamamen korunmuştur ( yani, % 100 nükleotid sekansı özdeşliği)Bacillus türündeki gen ürününün kritik bir rolü. Bu gen kümelerindeki konumu nedeniyle ba1554 , varsayılan bir transkripsiyon regülatörü 3 olarak yanlış tanımlandı. Bununla birlikte, ba1554 ürününün amino asit sekansı analizi, nükleotid pirofosfohidrolaz aktivitesine sahip olan ve transkripsiyon faktörü aktivitesi 4 , 5 ile ilişkili olmayan MazG ailesine ait olduğunu gösterir. MazG ailesine ait proteinler genel dizi ve uzunluk bakımından çeşitlilik göstermesine rağmen, bir EXXE 12-28 EXXD motifiyle (&quot;X&quot; herhangi bir amino asit artığı anlamına gelir) karakterize edilen yaygın bir ~ 100 kalıntı MazG alanını paylaşırlar ve sayı X kalıntılarının sayısını belirtir). MazG alanı belli bir katalitik etkinliği her zaman doğrudan doğruya açıklamaz. Escherichia coli&#39;den bir MazG üyesi (EcMazG), iki MazG alanına sahiptir, ancakC-terminal MazG alanı enzimatik olarak aktif 6 . Dahası, MazG enzimlerinin substrat özgüllüğü spesifik olmayan nükleozid trifosfatlardan (EcMazG için) belirli dCTP / dATP&#39;ye (integrin ile ilişkili MazG için) ve dUTP&#39;ye (dUTPazlar için) 6 , 7 , 8 , 9 arasında değişir. Bu nedenle, BA1554 proteininin biyofizyokimyasal analizleri, NTPaz etkinliğini teyit etmek ve substrat özgüllüğünü deşifre etmek için gereklidir. Burada, B. anthracis ba1554&#39;ün bir ortologu olan B. cereus bc1531 geninin protein ürününü moleküler düzeyde karakterize etmek için bir BSL-3 tesisi olmayan çoğu laboratuvarın izleyebileceği adım adım bir protokol sunuyoruz. Kısaca, rekombinant BC1531 (rBC1531), E. coli&#39;de eksprese edildi ve bir afınite etiketi kullanılarak arıtıldı. X-ışını kristalografik deneyleri için, kristalRBC1531 proteininin zation koşulları tarandı ve optimize edildi. RBC1531&#39;in enzimatik aktivitesini değerlendirmek için, geleneksel olarak kullanılan radyoaktif olarak işaretlenmiş nükleotidlerden kaçınmak için NTPaz etkinliği kolorimetrik olarak izlenmiştir. Son olarak, elde edilen biyofizikokimyasal verilerin analizi, rBC1531&#39;in oligomerleşme durumunu ve katalitik parametrelerini belirlememize ve rBC1531 kristalinden X-ışını kırınım verilerini elde etmemize olanak sağladı.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bacillus cereus ATCC14579</td>
			<td>Korean Collection for Tissue Culture</td>
			<td>3624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genomic DNA prep kit</td>
			<td>GeneAll</td>
			<td>106-101</td>
			<td>Genomic DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forward primer</td>
			<td>Macrogen</td>
			<td>GAAGGATCCGGAAGCAAAAA 
			CGATGAAAGATATGCA</td>
			<td>BamHI site is underlined</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse primer</td>
			<td>Macrogen</td>
			<td>CTTGTCGACTTATTCTTTCTCT 
			CCCTCATCAATACGTG</td>
			<td>SalI site is underlined</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nPfu-Forte</td>
			<td>Enzynomics</td>
			<td>P410</td>
			<td>PCR polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BamHI</td>
			<td>Enzynomics</td>
			<td>R003S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SalI</td>
			<td>Enzynomics</td>
			<td>R009S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pET49b expression vector</td>
			<td>Novagen</td>
			<td>71463</td>
			<td>Expression vector was modified to add affinity tags and BamHI/SalI sites10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA ligase</td>
			<td>Enzynomics</td>
			<td>M001S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis memebrane</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>18265017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry block heater</td>
			<td>JSR</td>
			<td>JSBL-02T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth (Luria-Bertani)</td>
			<td>LPS solution</td>
			<td>LB-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin</td>
			<td>LPS solution</td>
			<td>KAN025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-prep kit</td>
			<td>Favorgen</td>
			<td>FAPDE300</td>
			<td>Plasmid DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BL21(DE3) Competent cell</td>
			<td>Novagen</td>
			<td>69450-3CN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl &#946;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>50-213-378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Daejung</td>
			<td>7548-4100</td>
			<td>PBS material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Daejung</td>
			<td>6566-4405</td>
			<td>PBS material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate</td>
			<td>Bio Basic Inc</td>
			<td>PB0445</td>
			<td>PBS material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate</td>
			<td>Bio Basic Inc</td>
			<td>S0404</td>
			<td>PBS material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Bio Basic Inc</td>
			<td>IB0277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sonicator</td>
			<td>Sonics</td>
			<td>VCX 130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ni-NTA agaros</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>30210</td>
			<td>Nickel bead</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotator</td>
			<td>Finepcr</td>
			<td>AG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Plus Protein Dual Color Standards</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>1610374</td>
			<td>SDS-PAGE protein standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coonmassie Brilliant Blue R-250</td>
			<td>Fisher BioReagents</td>
			<td>BP101-25</td>
			<td>Coomassie staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl alcohol</td>
			<td>Samchun chemical</td>
			<td>M0585</td>
			<td>Coomassie staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Daejung</td>
			<td>1002-4105</td>
			<td>Coomassie staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis memebrane</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>68035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Merckmillipore</td>
			<td>605157-1KUCN</td>
			<td>Prepare aliquots of 20 &#956;l (1 Unit per &#956;l) and store at 70 &#176;C and thaw before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superdex 200 16/600</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>28989335</td>
			<td>Size exclusion chromatography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel filtration standard</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>151-1901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifugal filter</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC800396</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystralization plates</td>
			<td>Hampton research</td>
			<td>HR3-083</td>
			<td>96-well sitting drop plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The JCSG core suite I-IV</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>130924-130927</td>
			<td>Crystallization secreening solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ745T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryschem plates</td>
			<td>Hampton research</td>
			<td>HR3-158</td>
			<td>24-well sitting drop plate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inorganic pyrophosphatase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10108987001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium molybdate solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>13106-76-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-ascorbic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>50-81-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTP substrate</td>
			<td>Startagene</td>
			<td>200415-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>SynergyH1</td>
			<td>microplate reader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 5</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td>Prism 5 for Window</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

recombinant protein expression, crystallization, and biophysical studies of a bacillus-conserved nucleotide pyrophosphorylase, bcmazg

Gerçek patojenlerden genleri ve proteinleri incelerken emniyet kısıtlamalarını ve yönetmelikleri aşmak için bunların homologları incelenebilir. Bacillus anthracis ölümcül inhalasyon şarbonuna neden olan zorunlu bir patojendir. Bacillus cereus , yakın evrimsel ilişkisi nedeniyle B. anthracis&#39;i incelemek için faydalı bir model olarak düşünülür. B. anthracis&#39;in ba1554 - ba1558 gen kümesi B. cereus&#39;daki bc1531 - bc1535 kümesi ile Bacillus thuringiensis&#39;deki bt1364 - bt1368 kümesi ile yüksek oranda korunmuştur, bu da Bacillus cinsindeki ilişkili genlerin kritik rolünü göstermektedir. Bu el yazması, B. anthracis&#39;teki gen kümesinden birinci gen ( ba1554 ) &#39;ün bir protein ürününü B. cereus , bc1531&#39;deki ortologunun rekombinant bir proteinini kullanarak hazırlamak ve karakterize etmek için kullanılan yöntemleri açıklamaktadır.

Bu çalışmada ilgilenilen proteinin karakterizasyonu, tercihen birkaç miligramdan daha fazla rekombinant B. cereus bc1531 (rBC1531) proteininin yeterli bir miktarının hazırlanmasıyla başlamıştır. BC1531 proteinini kodlayan DNA parçası, ba1554&#39;e özdeş ortolog genler içerdiği için B. cereus&#39;un genomik DNA&#39;sını şablon olarak kullanarak PCR ile hazırlandı . RBC1531, E. coli hücrelerinde çözünür bir protein olarak aş...

Watch this Scientific Journal Video about Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG at JoVE.com

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Bacillus anthracis ölümcül inhalasyon şarbonunun zorunlu patojendir, bu nedenle genleri ve proteinleri üzerine yapılan çalışmalar kesinlikle düzenlenmiştir. Alternatif bir yaklaşım, ortolog genleri incelemektir. B. cereus , bc1531&#39;de B. antrasis ortologunun biyofizikokimyasal çalışmalarını, minimal deney ekipmanı gerektiren ve ciddi güvenlik endişeleri içermeyen çalışmalarını anlattık.

Birliğin Rekombinant Protein Ekspresyonu, Kristalleştirilmesi ve Biyofiziksel Araştırmaları<em&gt; Bacillus</em&gt; - Konserve Nükleotid Pyrophosphorylase, BcMazG

To overcome safety restrictions and regulations when studying genes and proteins from true pathogens, their homologues can be studied. Bacillus anthracis ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Recombinant Protein Expression, Crystallization, and Biophysical Studies of a Bacillus-conserved Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Termo, İfade, saflaştırılması, ve İnsan serotonin Transporter Kristalizasyon Bound<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

Production, Crystallization and Structure Determination of C. difficile PPEP-1 via Microseeding and Zinc-SAD

Production, Crystallization and Structure Determination of C. difficile PPEP-1 via Microseeding and Zinc-SAD

Üretim, Kristalleşme ve Yapı Tayini ve<em&gt; C. difficile</em&gt; PPEP-1 mikro-tohumlama ve Çinko-SAD aracılığıyla

New therapies are needed to treat Clostridium difficile infections that are a major threat to human health. The C. difficile metalloprotease PPEP-1 is a ...

Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins

Fumarylacetoasetat Hydrolase etki alanı Içeren proteinleri ifade, arıtma, kristalizasyon ve enzim Asdimleri

Fumarylacetoacetate hydrolase (FAH) domain-containing proteins (FAHD) are identified members of the FAH superfamily in eukaryotes. Enzymes of this ...

Fully Processed Recombinant KRAS4b: Isolating and Characterizing the Farnesylated and Methylated Protein

Tam İşlenmiş Rekombinant KRAS4b: Farnesile ve Metillenmiş Proteini Yalıtma ve Karakterize Etme

Protein prenylation is a key modification that is responsible for targeting proteins to intracellular membranes. KRAS4b, which is mutated in 22% of human ...

PCR Mutagenesis, Cloning, Expression, Fast Protein Purification Protocols and Crystallization of the Wild Type and Mutant Forms of Tryptophan Synthase

PCR Mutagenezi, Klonlama, İfade, Hızlı Protein Saflaştırma Protokolleri ve Triptofan Synthase'in Vahşi Tipinin ve Mutant Formlarının Kristalizasyonu

Structural studies with tryptophan synthase (TS) bienzyme complex (&#945;2&#946;2 TS) from Salmonella typhimurium have been performed to better understand ...

Production of Recombinant PRMT Proteins using the Baculovirus Expression Vector System

Baculovirüs Ekspresyon Vektör Sistemi Kullanılarak Rekombinant PRMT Proteinlerinin Üretimi

Protein arginine methyltransferases (PRMTs) methylate arginine residues on a wide variety of proteins that play roles in numerous cellular processes. ...

A "Dual-Addition" Calcium Fluorescence Assay for the High-Throughput Screening of Recombinant G Protein-Coupled Receptors

Rekombinant G Proteinine Bağlı Reseptörlerin Yüksek Verimli Taraması için "Çift İlaveli" Bir Kalsiyum Floresan Testi

G protein-coupled receptors (GPCRs) represent the largest superfamily of receptors and are the targets of numerous human drugs. High-throughput screening ...

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

High-Throughput Protein Crystallization via Microdialysis

Mikrodiyaliz ile Yüksek Verimli Protein Kristalizasyonu

Understanding the structure-function relationships of macromolecules, such as proteins, at the molecular level is vital for biomedicine and modern drug ...

High-Throughput Screening for Protein Crystallization

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography

High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography (Video) | JoVE 

Protein kristalografisi için kristal isabetleri elde etmek için yüksek verimli tarama

X-ray crystallography is the most commonly employed technique to discern macromolecular structures, but the crucial step of crystallizing a protein into ...