Name: preparation and characterization of novel hdl-mimicking nanoparticles for nerve growth factor encapsulation
Uploaded: 2017-05-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Characterization of Novel HDL-mimicking Nanoparticles for Nerve Growth Factor Encapsulation at JoVE.com

Dette arbejde blev understøttet af NIH R03 NS087322-01 til Dong, X.

BEMÆRK: Dyrestudierne, der indgår i alle procedurer, er blevet godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee ved University of North Texas Health Science Center. 1. Fremstilling af NGF HDL-imiterende nanopartikler <ol><li> Opløsningsmidlerne, phosphatidylcholin (PC), sphingomyelin (SM), phosphatidylserin (PS), cholesteryloleat (CO) og D-a-tocopherylpolyethylenglycolsuccinat (TPGS) opløses i ethanol til fremstilling af stamopløsninger ved 1 mg / ml. BEMÆRK: Stamopløsningerne blev alikvot...

<ol>
	<li>Bruno, B. J., Miller, G. D., Lim, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+and+recent+advances+in+peptide+and+protein+drug+delivery.">Basics and recent advances in peptide and protein drug delivery.</a> Ther Deliv. 4 (11), 1443-1467 (2013).</li><li>Mo, Z. C., Ren, K., Liu, X., Tang, Z. L., Yi, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-density+lipoprotein-mediated+drug+delivery+system.">A high-density lipoprotein-mediated drug delivery system.</a> Adv Drug Deliv Rev. 106 (Pt A), 132-147 (2016).</li><li>Lacko, A. G., Sabnis, N. A., Nagarajan, B., McConathy, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HDL+as+a+drug+and+nucleic+acid+delivery+vehicle.">HDL as a drug and nucleic acid delivery vehicle.</a> Front Pharmacol. 6, 247-252 (2015).</li><li>Vaishya, R., Khurana, V., Patel, S., Mitra, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+delivery+of+protein+therapeutics.">Long-term delivery of protein therapeutics.</a> Expert Opin Drug Deliv. 12 (3), 415-440 (2015).</li><li>Lasic, D. D., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Medical application of liposomes. , (1998).</li><li>Samad, A., Sultana, Y., Aqil, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+drug+delivery+systems:+an+update+review.">Liposomal drug delivery systems: an update review.</a> Curr Drug Deliv. 4 (4), 297-305 (2007).</li><li>Bezemer, J. M., Radersma, R., Grijpma, D. W., Dijkstra, P. J., van Blitterswijk, C. A., Feijen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microspheres+for+protein+delivery+prepared+from+amphiphilic+multiblock+copolymers:+2.+Modulation+of+release+rate.">Microspheres for protein delivery prepared from amphiphilic multiblock copolymers: 2. Modulation of release rate.</a> J Control Release. 67 (2-3), 249-260 (2000).</li><li>Patel, A., Patel, M., Yang, X., Mitra, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+protein+and+peptide+drug+delivery:+a+special+emphasis+on+polymeric+nanoparticles.">Recent advances in protein and peptide drug delivery: a special emphasis on polymeric nanoparticles.</a> Protein Pept lett. 21 (11), 1102-1120 (2014).</li><li>Kuai, R., Li, D., Chen, Y. E., Moon, J. J., Schwendeman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-density+lipoproteins:+nature's+multifunctional+nanoparticles.">High-density lipoproteins: nature's multifunctional nanoparticles.</a> ACS Nano. 10 (3), 3015-3041 (2016).</li><li>Gursky, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+stability+and+functional+remodeling+of+high-density+lipoproteins.">Structural stability and functional remodeling of high-density lipoproteins.</a> FEBS Lett. 589 (19 Pt A), 2627-2639 (2015).</li><li>McMahon, K. M., Thaxton, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-density+lipoproteins+for+the+systemic+delivery+of+short+interfering+RNA.">High-density lipoproteins for the systemic delivery of short interfering RNA.</a> Expert Opin Drug Deliv. 11 (2), 231-247 (2014).</li><li>McMahon, K. M., Foit, L., Angeloni, N. L., Giles, F. J., Gordon, L. I., Thaxton, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+high-density+lipoprotein-like+nanoparticles+as+cancer+therapy.">Synthetic high-density lipoprotein-like nanoparticles as cancer therapy.</a> Cancer Treat Res. 166, 129-150 (2015).</li><li>Lerch, P. G., F&#246;rtsch, V., Hodler, G., Bolli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+and+characterization+of+a+reconstituted+high+density+lipoprotein+for+therapeutic+applications.">Production and characterization of a reconstituted high density lipoprotein for therapeutic applications.</a> Vox Sang. 71 (3), 155-164 (1996).</li><li>Zhang, Z., Chen, J., Ding, L., Jin, H., Lovell, J. F., Corbin, I. R., Cao, W., Lo, P. C., Yang, M., Tsao, M. S., Luo, Q., Zheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HDL-mimicking+peptide-lipid+nanoparticles+with+improved+tumor+targeting.">HDL-mimicking peptide-lipid nanoparticles with improved tumor targeting.</a> Small. 6 (3), 430-437 (2010).</li><li>Kim, Y., Fay, F., Cormode, D. P., Sanchez-Gaytan, B. L., Tang, J., Hennessy, E. J., Ma, M., Moore, K., Farokhzad, O. C., Fisher, E. A., Mulder, W. J., Langer, R., Fayad, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+step+reconstitution+of+multifunctional+high-density+lipoprotein-derived+nanomaterials+using+microfluidics.">Single step reconstitution of multifunctional high-density lipoprotein-derived nanomaterials using microfluidics.</a> ACS Nano. 7 (11), 9975-9983 (2013).</li><li>Prathipati, P., Zhu, J., Dong, X. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+novel+HDL-mimicking+&#945;-tocopherol-coated+nanoparticles+to+encapsulate+nerve+growth+factor+and+evaluation+of+biodistribution.">Development of novel HDL-mimicking &#945;-tocopherol-coated nanoparticles to encapsulate nerve growth factor and evaluation of biodistribution.</a> Eur J Pharm and Biopharm. 108, 126-135 (2016).</li></ol>

I denne undersøgelse demonstrerer vi en simpel metode til at forberede HDL-imiterende NP&#39;er til NGF-indkapsling. Forskellige NP-leveringssystemer er blevet undersøgt for at levere proteiner. I øjeblikket involverer mange NP-præparater dialyse, opløsningsmiddelfældning og filmhydratisering. Disse processer er generelt komplicerede og udfordrende ved opskalering. Under denne NP-udvikling blev det bestemt, at lipiderne havde stærk adhæsion til beholderens glasvæg, hvilket førte til vanskelighederne ved hydrat...

Macromolekyler, såsom proteiner, peptider og nukleinsyrer, er kommet frem som lovende medicin og har fået stor opmærksomhed i de sidste årtier 1 , 2 . På grund af deres høje effektivitet og specifikke handlingstilstande udviser de et stort terapeutisk potentiale til behandling af cancer, immunforsvar, hiv og relaterede tilstande 3 , 4 . Imidlertid gør fysisk-kemiske egenskaber, såsom deres store molekylære størrelse, tredimensionelle struktur, overfladeafgifter og hydrofil natur, in vivo- afgivelsen af ​​disse makromolekyler meget udfordrende. Dette hæmmer væsentligt deres kliniske anvendelse 4 . Nylige fremskridt inden for lægemiddelleveringssystemer, såsom mikropartikler, polymer nanopartikler (NP&#39;er), liposomer og lipid-NP&#39;er, overvandt disse udfordringer og forbedrede signifikant in vivo- afgivelsen af ​​makromolekyler. HoWever, nogle ulemper med hensyn til disse leveringsgoder er blevet afsløret, herunder lav lægemiddelbelastningskapacitet, lav indfangningseffektivitet, kort halveringstid, tab af bioaktivitet og uønskede bivirkninger 5 , 6 , 7 , 8 . Effektive bæresystemer forbliver et område af forskningsinteresse. Desuden er udviklingen af ​​analytiske metoder til karakterisering af narkotikaindlæste NP&#39;er mere udfordrende for makromolekyler end for små molekyler. High-density lipoprotein (HDL) er en naturlig NP sammensat af en lipidkerne, der er overtrukket af apolipoproteiner og et phospholipidmonolag. Endogen HDL spiller en kritisk rolle i transporten af ​​lipider, proteiner og nukleinsyrer gennem dets interaktion med målreceptorer, såsom SR-BI, ABCAI og ABCG1. Det er blevet udforsket som et middel til levering af forskellige terapeutiske midler 9, 10 , 11 , 12 . Forskellige fremgangsmåder er blevet udviklet til fremstilling af HDL-imiterende NP&#39;er. Dialyse er en populær tilgang. Ved denne fremgangsmåde dannes NP&#39;er ved at hydrere en lipidfilm under anvendelse af natriumcholatopløsning. Saltet fjernes derefter gennem en 2 dages dialyse med tre buffere 13 . Sonikationsmetoder fremstiller NP&#39;er ved at sonicere en lipidblanding i 60 minutter under en opvarmningstilstand; NP&#39;erne renses yderligere ved hjælp af gelkromatografi 14 . Mikrofluidika genererer NP&#39;er via en mikrofluidisk enhed, der blander phospholipider og apolipoprotein AI (Apo AI) -opløsninger ved at skabe mikrovortice i et fokuseringsmønster 15 . Disse metoder kan tydeligvis være tidskrævende, hårde og vanskelige til industriel opskalering. I denne artikel introducerer vi forberedelsen og karakteriseringen af ​​nye HDL-imiterende NP&#39;er til nerveVækstfaktor (NGF) indkapsling. NGF er en disulfidbundet polypeptid-homodimer indeholdende to 13,6-kDa polypeptidmonomerer. En ny fremgangsmåde til fremstilling af NP&#39;erne ved homogenisering efterfulgt af indkapslingen af ​​NGF i NP&#39;erne blev udviklet. De NGF HDL-imiterende NP&#39;er blev karakteriseret for partikelstørrelse, størrelsesfordeling, zeta potentiale og in vitro frigivelse. Deres bioaktivitet blev evalueret for neuritudvækst i PC12-celler. Biodistributionen af ​​NGF HDL-imiterende NP&#39;er blev sammenlignet med den for fri NGF efter intravenøs injektion i mus.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Beta-NGF</td>
			<td>Creative Biomart</td>
			<td>NGF-05H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-a-Phosphatidylcholine (PC)</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>131601P</td>
			<td>95%, Egg, Chicken</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sphingomyelin (SM)</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>860062P</td>
			<td>Brain, Porcine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphatidylserine (PS)</td>
			<td>Avanti</td>
			<td>840032P</td>
			<td>Brain, Porcine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesteryl oleate (CO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C9253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-&#945;-Tocopheryl polyethylene glycol succinate (TPGS)</td>
			<td>BASF</td>
			<td>9002-96-4</td>
			<td>Vitamin E Polyethylene Glycol Succinate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protamine sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3369</td>
			<td>meets USP testing specifications</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apolipoprotein A1, Human plasma</td>
			<td>Athens Research &#38; Technology</td>
			<td>16-16-120101</td>
			<td>1mg in 671 &#181;l 10 mM NH4HCO3, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sepharose 4B-CL</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CL4B200</td>
			<td>Cross-linked agarose,&#160; gel filtration chromatography column filling material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sandwich ELISA Kit for NGF</td>
			<td>R&#38;D system</td>
			<td>DY008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640 medium</td>
			<td>GE Healthcare Life Science</td>
			<td>SH30096.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>GE Healthcare Life Science</td>
			<td>SH30074.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC12 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat tail collagen type I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3867</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>31414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzethonium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B8879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Tekmar</td>
			<td>T 25-S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delsa Nano HC particle analyzer</td>
			<td>Beckman-Coulter</td>
			<td>Delsa Nano HC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Float-A-Lyzer G2 Dialysis Device</td>
			<td>Spectrum Laboratories</td>
			<td>G235036</td>
			<td>Molecule Cutoff 300 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendoff</td>
			<td>5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polytron homogenizer</td>
			<td>Kinematica</td>
			<td>PT 1200C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DecapiCone</td>
			<td>&#160;Braintree Scientific Inc.</td>
			<td>DC-M200</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation and characterization of novel hdl-mimicking nanoparticles for nerve growth factor encapsulation

Formålet med denne artikel er at indføre præparations- og karakteriseringsmetoder til nervevækstfaktor (NGF) -belastede, højdensitets-, lipoprotein (HDL) -imiterende nanopartikler (NP&#39;er). HDL&#39;er er endogene NP&#39;er og er blevet udforsket som vehikler til levering af terapeutiske midler. Forskellige fremgangsmåder er blevet udviklet til fremstilling af HDL-imiterende NP&#39;er. Men de er generelt komplicerede, tidskrævende og vanskelige til industriel opskalering. I dette studie blev en-trin-homogenisering brugt til at blande excipienserne og danne prototypen NP&#39;er. NGF er et vandopløseligt protein på 26 kDa. For at lette indkapslingen af ​​NGF i lipidmiljøet af HDL-imiterende NP&#39;er blev protamin USP brugt til at danne et ion-par-kompleks med NGF for at neutralisere ladningerne på NGF-overfladen. NGF / protaminkomplekset blev derefter indført i prototypen NP&#39;er. Apolipoprotein Al blev endelig overtrukket på overfladen af ​​NP&#39;erne. NGF HDL-imiterende NP&#39;er viste foretrukne egenskaber i termenS med partikelstørrelse, størrelsesfordeling, indfangningseffektivitet, in vitro frigivelse, bioaktivitet og biodistribution. Med det omhyggelige design og udforskning af homogenisering i HDL-imiterende NP&#39;er blev proceduren forenklet, og NP&#39;erne blev gjort skalerbar. Desuden blev forskellige udfordringer, som f.eks. Adskillelse af losset NGF fra NP&#39;erne, gennemført pålidelige in vitro frigivelsesundersøgelser og måling af NP&#39;ernes bioaktivitet, overvundet.

Ingeniørplanen af ​​HDL-efterligning, a-tocopherolcoated NGF NP&#39;er fremstillet ved en ionparstrategi er vist i figur 1 . For at neutralisere overfladetilførsler af NGF blev protamin USP anvendt som ion-pair-middel til dannelse af et kompleks med NGF. For at beskytte bioaktiviteten blev prototype HDL-imiterende NP&#39;er konstrueret, først ved anvendelse af homogenisering; Derefter indkapsles NGF / protaminkomplekset i prototypen NP&#39;er. Homogenisering tilve...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Characterization of Novel HDL-mimicking Nanoparticles for Nerve Growth Factor Encapsulation at JoVE.com

Preparation and Characterization of Novel HDL-mimicking Nanoparticles for Nerve Growth Factor Encapsulation

Enkel homogenisering blev anvendt til at fremstille nye, højdensitets-, lipoproteinlignende nanopartikler til indkapsling af nervevækstfaktor. Udfordringer, detaljerede protokoller til fremstilling af nanopartikler, in vitro karakterisering og in vivo undersøgelser er beskrevet i denne artikel.

Fremstilling og karakterisering af hidtil ukendte HDL-imiterende nanopartikler til nervevækstfaktorindkapsling

The objective of this article is to introduce preparation and characterization methods for nerve growth factor (NGF)-loaded, high-density, lipoprotein ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

Gene Levering og transfektion i Human bugspytkirtelkræftceller hjælp epidermal vækstfaktor receptor-målrettede Gelatine-baseret Engineered Nanovectors

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Electrospinning Growth Factor Releasing Microspheres into Fibrous Scaffolds

Electrospinning Growth Factor Releasing Mikrosfærer i Fiber Stilladser

This procedure describes a method to fabricate a multifaceted substrate to direct nerve cell growth.  This system incorporates mechanical, topographical, ...

Construction and Characterization of a Novel Vocal Fold Bioreactor

Konstruktion og karakterisering af en roman Vocal Fold bioreaktor

In vitro engineering of mechanically active tissues requires the presentation of physiologically relevant mechanical conditions to cultured cells. To ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

Undersøgelse af støkiometrien af ​​epidermal vækstfaktor receptor i intakte celler ved hjælp af korrelative Microscopy

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial

Karakterisering af leukocyt-blodpladerigt fibrin, A Novel biomateriale

Autologous platelet concentrates represent promising innovative tools in the field of regenerative medicine and have been extensively used in oral ...

Polyelectrolyte Complex for Heparin Binding Domain Osteogenic Growth Factor Delivery

Polyelektrolyt kompleks for heparinbindende område osteogent vækstfaktor Delivery

During reconstructive bone surgeries, supraphysiological amounts of growth factors are empirically loaded onto scaffolds to promote successful bone ...

Flash NanoPrecipitation for the Encapsulation of Hydrophobic and Hydrophilic Compounds in Polymeric Nanoparticles

Flash NanoPrecipitation for indkapsling af hydrofobe og hydrofile forbindelser i polymere nanopartikler

The formulation of a therapeutic compound into nanoparticles (NPs) can impart unique properties. For poorly water-soluble drugs, NP formulations can ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

Påvisning af Endotoxin i Nano-formuleringer bruger Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

Designing Porous Silicon Films as Carriers of Nerve Growth Factor

Designe porøs silicium film som bærere af Nerve vækst faktor

Despite the great potential of NGF for treating neurodegenerative diseases, its therapeutic administration represents a significant challenge as the ...

Growth and Characterization of Irradiated Organoids from Mammary Glands

Vækst og karakterisering af bestrålede Organoider fra mælkekirtler

Organoids derived from the digested tissue are multicellular three-dimensional (3D) constructs that better recapitulate in vivo conditions than cell ...