Name: four-color fluorescence immunohistochemistry of t-cell subpopulations in archival formalin-fixed, paraffin-embedded human oropharyngeal squamous cell carcinoma samples
Uploaded: 2017-07-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinom

Simone Punt wurde von der Niederlassung UL2010-4801 von der niederländischen Krebsgesellschaft unterstützt. Wir danken allen Co-Autoren des Originalpapiers, auf denen dieses JoVE-Protokoll basiert: Emilie A. Dronkers, Marij JP Welters, Renske Goedemans, Senada Koljenović, Elisabeth Bloemena, Peter JF Snijders, Arko Gorter und Sjoerd van Der Burg

Patientenproben wurden nach den medizinischen Richtlinien behandelt, die im Verhaltenskodex für die ordnungsgemäße Sekundärnutzung des menschlichen Gewebes des niederländischen Verbandes der biomedizinischen wissenschaftlichen Gesellschaften (www.federa.org) beschrieben sind. 1. Vorlagen vorbereiten <ol><li> Erhalten Sie reseziertes Gewebematerial (jede Art von Gewebe) aus einer Pathologie-Abteilung, nachdem Sie medizinischen ethischen Ausschuss die Erlaubnis erhalten, reseziertes Mat...

<ol>
	<li>Westra, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+changing+face+of+head+and+neck+cancer+in+the+21st+century:+the+impact+of+HPV+on+the+epidemiology+and+pathology+of+oral+cancer.">The changing face of head and neck cancer in the 21st century: the impact of HPV on the epidemiology and pathology of oral cancer.</a> Head Neck Pathol. 3 (1), 78-81 (2009).</li><li>Rietbergen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+detection+and+comorbidity:+critical+issues+in+selection+of+patients+with+oropharyngeal+cancer+for+treatment+De-escalation+trials.">Human papillomavirus detection and comorbidity: critical issues in selection of patients with oropharyngeal cancer for treatment De-escalation trials.</a> Ann Oncol. 24 (11), 2740-2745 (2013).</li><li>Wallis, S. P., Stafford, N. D., Greenman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+relevance+of+immune+parameters+in+the+tumor+microenvironment+of+head+and+neck+cancers.">Clinical relevance of immune parameters in the tumor microenvironment of head and neck cancers.</a> Head Neck. 37 (3), 449-459 (2015).</li><li>Ye, J., Livergood, R. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+regulatory+T+cells+(Treg)+regulating+in+cancer+and+why?.">What are regulatory T cells (Treg) regulating in cancer and why?.</a> Semin Cancer Biol. 22 (4), 327-334 (2012).</li><li>Punt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angels+and+demons:+Th17+cells+represent+a+beneficial+response,+while+neutrophil+IL-17+is+associated+with+poor+prognosis+in+squamous+cervical+cancer.">Angels and demons: Th17 cells represent a beneficial response, while neutrophil IL-17 is associated with poor prognosis in squamous cervical cancer.</a> Oncoimmunology. 4 (1), e984539 (2015).</li><li>Bamias, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significant+differences+of+lymphocytes+isolated+from+ascites+of+patients+with+ovarian+cancer+compared+to+blood+and+tumor+lymphocytes.+Association+of+CD3+CD56++cells+with+platinum+resistance.">Significant differences of lymphocytes isolated from ascites of patients with ovarian cancer compared to blood and tumor lymphocytes. Association of CD3+CD56+ cells with platinum resistance.</a> Gynecol Oncol. 106 (1), 75-81 (2007).</li><li>Gasparoto, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patients+with+oral+squamous+cell+carcinoma+are+characterized+by+increased+frequency+of+suppressive+regulatory+T+cells+in+the+blood+and+tumor+microenvironment.">Patients with oral squamous cell carcinoma are characterized by increased frequency of suppressive regulatory T cells in the blood and tumor microenvironment.</a> Cancer Immunol Immunother. 59 (6), 819-828 (2010).</li><li>Jordanova, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+leukocyte+antigen+class+I,+MHC+class+I+chain-related+molecule+A,+and+CD8+/regulatory+T-cell+ratio:+which+variable+determines+survival+of+cervical+cancer+patients?.">Human leukocyte antigen class I, MHC class I chain-related molecule A, and CD8+/regulatory T-cell ratio: which variable determines survival of cervical cancer patients?.</a> Clin Cancer Res. 14 (7), 2028-2035 (2008).</li><li>van Esch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+classical+and+nonclassical+HLA+expression+in+recurrent+and+progressive+HPV-induced+usual+vulvar+intraepithelial+neoplasia+and+implications+for+immunotherapy.">Alterations in classical and nonclassical HLA expression in recurrent and progressive HPV-induced usual vulvar intraepithelial neoplasia and implications for immunotherapy.</a> Int J Cancer. 135 (4), 830-842 (2014).</li><li>Heeren, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+effect+of+different+PD-L1+expression+patterns+in+squamous+cell+carcinoma+and+adenocarcinoma+of+the+cervix.">Prognostic effect of different PD-L1 expression patterns in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the cervix.</a> Mod Pathol. 29 (7), 753-763 (2016).</li><li>Punt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+beneficial+tumor+microenvironment+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+is+characterized+by+a+high+T+cell+and+low+IL-17(+)+cell+frequency.">A beneficial tumor microenvironment in oropharyngeal squamous cell carcinoma is characterized by a high T cell and low IL-17(+) cell frequency.</a> Cancer Immunol Immunother. 65 (4), 393-403 (2016).</li><li>Kirkwood, B. R., Sterne, J. A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Essential Medical Statistics. , (2003).</li><li>Kleinbaum, D. G., Klein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Survival Analysis: A Self-Learning Text. , (2005).</li><li>Fabre, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Tumor+Microenvironment:+The+Protumor+Effects+of+IL-17+Related+to+Cancer+Type.">Targeting the Tumor Microenvironment: The Protumor Effects of IL-17 Related to Cancer Type.</a> Int J Mol Sci. 17 (9), (2016).</li><li>Feng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+imaging+of+formalin-fixed+tissue+predicts+ability+to+generate+tumor-infiltrating+lymphocytes+from+melanoma.">Multispectral imaging of formalin-fixed tissue predicts ability to generate tumor-infiltrating lymphocytes from melanoma.</a> J Immunother Cancer. 3 (47), (2015).</li></ol>

Für das beschriebene Protokoll ist eines der kritischsten Schritte, um die korrekte Verdünnung der verwendeten primären Antikörper zu bestimmen. Die Verdünnung der markierten Sekundärantikörper betrug 1: 200, wie vom Hersteller dieser spezifischen Alexa-markierten Antikörper empfohlen. Die Verdünnung der primären Antikörper sollte dann durch eine serielle Verdünnung bestimmt werden, vorzugsweise unter Verwendung von zwei verschiedenen Proben des beabsichtigten Gewebetyps (in diesem Fall OPSCC). Die optimale ...

Oropharyngeale Plattenepithelkarzinome (OPSCCs) sind eine heterogene Gruppe von Plattenepithelkarzinomen, die aus dem Oropharynx stammen. Risikofaktoren für OPSCC umfassen humanes Papillomavirus (HPV) Infektion und Alkohol und Tabakkonsum 1 , 2 . Die Rolle der Immunantwort und wie man sie in einer klinischen Umgebung einsetzt, beginnt erst zu erforschen. Die Tumor-Mikroumgebung wird durch Immunzellen infiltriert, die an der Krebs-Stelle angezogen werden. Obwohl eine hohe CD8 + zytotoxische T-Zell-Frequenz mit einem verbesserten Überleben bei OPSCC-Patienten 3 korreliert wurde, ist die Rolle anderer T-Zell-Teilmengen, einschließlich Tregs und Th17-Zellen, noch unklar 4 . Während Th1- und Th17-Zellen in der Immunantwort-Targeting-Tumorzellen helfen sollen, sind Tregs für ihre Fähigkeiten bekannt, um die Aktivität anderer T-Zellen zu unterdrücken 5 . Die Anwesenheit von TRegs wurde gefunden, um mit günstigen und ungünstigen Reaktionen in verschiedenen Tumortypen zu korrelieren 6 . Da nicht alle im Blut vorhandenen Immunzellen den Tumor in gleichem Maße infiltrieren, liefert das Studium der lokalen Tumor-Mikroumgebung das zuverlässigste Maß für die gegen das Tumor gerichtete Immunantwort. Das Ziel dieser Studie ist es, die Korrelation zwischen den Zahlen und Arten der Immunzellen und dem klinischen Ergebnis zu bestimmen. Wir verwendeten vierfarbige Fluoreszenz-IHC-Bildgebung, um die Anzahl und Lokalisierung verschiedener T-Zell-Subpopulationen in humanem OPSCC zu analysieren. Wir konzentrierten uns auf totale T-Lymphozyten (CD3 + ), Th17-Zellen und immunsuppressive FoxP3 + Tregs, deren Differenzierungsweg eng mit Th17-Zellen verwandt ist. Th17-Zellen zeichnen sich durch die Kombination von CD3 und IL-17 aus. Das Cytokin IL-17 kann auch durch Nicht-T-Zellen 7 hergestellt werden . Wir haben die Verteilung der Intra-Epitierung bestimmtHelialen und stromalen T-Zellen, Tregs, Th17 und IL-17 + Nicht-T-Zellen in einer großen Reihe von OPSCC-Fällen und analysierten die Korrelationen mit dem Überleben des Patienten. Mehrfarbige Fluoreszenz IHC wurde verwendet, um die Expression von CD3, Foxp3 und IL-17 in Kombination mit einem DAPI-Gegenfleck zu identifizieren. Dieser Assay erlaubte die einfache und klare Identifizierung von beiden Tumorzellen (unter Verwendung von DAPI-Kernfärbung) und der infiltrierenden T-Zellpopulationen (unter Verwendung einer Kombination verschiedener Marker). Nach der Probenvorbereitung und der Färbung wurde ein Fluoreszenzmikroskop und eine Imaging-Software verwendet, um die verschiedenen verwendeten Fluoreszenzfarben zu trennen und die Anzahl und den Typ der Zellen zu bestimmen, die sowohl im Tumorepithel als auch im Tumor-assoziierten Stroma vorhanden waren. Ein alternativer Assay zur Quantifizierung und Phänotypen von Immunzellpopulationen ist die Durchflusszytometrieanalyse oder die Zytometrie nach der Zeit des Fluges (CyTOF) -Analyse von Tumor- oder peripheren Proben ( dh Blut oder Aszites). Mit diesemTechnik, alle Informationen über die Lokalisierung und die relative Verteilung der verschiedenen Zelltypen geht verloren. Die Verwendung und Analyse von peripheren Proben liefert auch keine Information darüber, welche Zellen in der Lage sind, die Tumor-Mikroumgebung zu infiltrieren. Blut- und Ascite-Immunzellenanalysen haben gezeigt, dass sie nicht den Phänotyp und die Häufigkeit der Immunzelleninfiltration des Tumorgewebes 8 , 9 widerspiegeln. Eine weitere Alternative ist die Verwendung von Hellfeldmikroskopie. Ein Vorteil dieser Technik gegenüber der Fluoreszenz-Bildgebung ist die Abwesenheit von Gewebe-Autofluoreszenz. Obwohl einige Proben mehr Autofluoreszenz - insbesondere Erythrozyten, aber auch andere Zelltypen enthalten, einschließlich neutrophiler Granulozyten - können diese Bereiche bei der Analyse fast aller Proben leicht entfernt werden. Immunfluoreszenz bietet den Vorteil, mehrere Marker in einer Probe zu analysieren, indem ein Panel mit gezielter Fluoreszenz verwendet wirdNt Wellenlängen. Dies ist derzeit in gleichem Maße für die Hellfeldmikroskopie aufgrund des Fehlens einer ausreichenden Anzahl von Etiketten und handelsüblichen Antikörper-Isotypen für ein bestimmtes Antigen unmöglich. Die hier beschriebene mehrfarbige Fluoreszenz-IHC-Technik wurde in vielen verschiedenen Krebsarten und Antikörperkombinationen verwendet, um verschiedene Immunzellpopulationen sowie Tumorzell-exprimierte Moleküle wie menschliche Leukozytenantigene (HLA) und PD-L1 10 , 11 , 12 Das Protokoll wurde mit vielen verschiedenen Arten von Proben und Antikörpern etabliert und validiert.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1379">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Pathos Delta Ultra Rapid Tissue Processor</td>
			<td style="width:167px;">Milestone and Histostar</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:696px;">Automated tissue processor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Histostar</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:696px;">Tissue block embedding machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Formaldehyde</td>
			<td style="width:167px;">Baker</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Xylol</td>
			<td style="width:167px;">Merck</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Ethanol</td>
			<td style="width:167px;">Merck</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">milliQ water</td>
			<td style="width:167px;">Elaga Purelab Chorus</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Paraffin wax/Paraclean</td>
			<td style="width:167px;">Klinipath</td>
			<td style="width:143px;">5079A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Microtome tissue holder&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Leica</td>
			<td style="width:143px;">RM225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flex IHC side</td>
			<td style="width:167px;">Dako</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td>Tissue slide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Tris</td>
			<td style="width:167px;">Merk-Milipore</td>
			<td style="width:143px;">1,083,821,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">EDTA</td>
			<td style="width:167px;">Baker</td>
			<td style="width:143px;">1073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">PBS</td>
			<td style="width:167px;">Bio-Rad</td>
			<td>BUF036A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">BSA</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Rabbit anti-CD3</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td style="width:143px;">ab828</td>
			<td>Titrate required antibody dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Mouse IgG1 anti-FoxP3</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td style="width:143px;">ab20034</td>
			<td>Titrate required antibody dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Goat IgG anti-IL-17</td>
			<td style="width:167px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:143px;">AF-317-NA</td>
			<td>Titrate required antibody dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Rabbit Ig isotype control antibody</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td>ab27472</td>
			<td>Use at same final concentration as anti-CD3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Mouse IgG1 isotype control antibody</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td>ab91353</td>
			<td>Use at same final concentration as anti-FoxP3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Goat IgG isotype control antibody</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">02-6202</td>
			<td>Use at same final concentration as anti-IL-17</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Donkey anti-rabbit IgG A546</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">A10040</td>
			<td>Dilute 1:200 in 1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Donkey anti-mouse-A647</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">A31571</td>
			<td>Dilute 1:200 in 1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Donkey anti-goat IgG A488</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">A11055</td>
			<td>Dilute 1:200 in 1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">VectaShield containing DAPI</td>
			<td style="width:167px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:143px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LSM700 confocal laser scanning microscope&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LCI Plan-Neofluar 25x/0.8 Imm Korr DIC M27 objective</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td>420852-9972-720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LSM Zen Software</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td>version 2009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LSM Image Browser</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td style="width:143px;">version 4.2.0.121</td>
			<td>Available to download at www.zeiss.com/microscopy/int/website/downloads/lsm-image-browser.html.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">SPSS</td>
			<td style="width:167px;">IBM Corp.</td>
			<td style="width:143px;">version 20.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">ImageJ</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:143px;">version 1.50i</td>
			<td>Available to download at http://rsb.info.nih.gov/ij.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

four-color fluorescence immunohistochemistry of t-cell subpopulations in archival formalin-fixed, paraffin-embedded human oropharyngeal squamous cell carcinoma samples

Die vierfarbige Fluoreszenz-Immunhistochemie (IHC) -Technik ist eine Methode zur Quantifizierung von Zellpopulationen von Interesse unter Berücksichtigung ihrer relativen Verteilung und ihrer Lokalisierung im Gewebe. Diese Technik wurde intensiv angewendet, um das Immun-Infiltrat in verschiedenen Tumortypen zu untersuchen. Die Tumor-Mikroumgebung wird durch Immunzellen infiltriert, die an die Tumorstelle angezogen werden. Verschiedene Immunzellenpopulationen wurden gefunden, um unterschiedliche Rollen in der Tumor-Mikroumgebung zu spielen und einen anderen Einfluss auf das Ergebnis der Erkrankung zu haben. Dieses Manuskript beschreibt die Verwendung von Multiparameter-Fluoreszenz-IHC auf oropharyngealem Plattenepithelkarzinom (OPSCC) als Beispiel. Diese Technik kann auf andere Gewebeproben und Zelltypen von Interesse erweitert werden. In der vorgestellten Studie analysierten wir das intraepitheliale und stromale Kompartiment einer großen OPSCC-Kohorte (n = 162). Wir konzentrierten uns auf totale T-Lymphozyten (CD3 + ), immunsuppressive RegulationOry T-Zellen (Tregs, dh FoxP3 + ) und T-Helfer 17 (Th17) -Zellen ( dh IL-17 + CD3 + ) unter Verwendung eines nuklearen Gegenstiftes zur Unterscheidung von Tumorepithel aus Stroma. Es wurde festgestellt, dass eine hohe Anzahl von T-Zellen mit einem verbesserten krankheitsfreien Überleben bei Patienten mit einer geringen Anzahl von intratumoralen IL-17 + Nicht-T-Zellen korreliert wurde. Dies deutet darauf hin, dass IL-17 + Nicht-T-Zellen mit einer schlechten Immunantwort in OPSCC korreliert werden können, was mit der Korrelation zwischen IL-17 und dem schlechten Überleben bei Krebspatienten übereinstimmt. Derzeit werden neuartige Multiparameter-Fluoreszenz-IHC-Techniken mit bis zu 7 verschiedenen Fluorochromen entwickelt und ermöglichen die präzisere Charakterisierung und Lokalisierung von Immunzellen in der Tumor-Mikroumgebung.

Eine Reihe von FFPE - Proben - Vorbehandlung Tumor aus primären oropharyngealen Tumoren in der Leiden University Medical Center, Leiden, Niederlande zwischen 1970 und 2011 diagnostiziert erhalten, wie zuvor beschrieben ausgewählt wird (n = 162), gefärbt wurde unter Verwendung des Protokolls 13 beschrieben. Ein bis vier zufällige Bilder jeder Folie wurden analysiert ( Abbildung 1 ). Es sind einige autofluoreszierende Zellen angegeb...

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Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

Multiparameter-Fluoreszenz-Immunhistochemie kann verwendet werden, um die Anzahl, die relative Verteilung und die Lokalisierung von Immunzellpopulationen in der Tumor-Mikroumgebung zu bestimmen. Dieses Manuskript beschreibt die Verwendung dieser Technik zur Analyse von T-Zell-Subpopulationen bei oropharyngealen Krebs.

Vier-Farb-Fluoreszenz-Immunhistochemie von T-Zell-Subpopulationen im Archiv Formalin-fixierte, Paraffin-eingebettete menschliche Oropharynx-Plattenepithelkarzinom-Proben

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Ein Modell für Perineurale Invasion in Kopf- und Hals-Plattenepithelkarzinom

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Forschung

Krebsforschung

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Therapie, die Tests in einem Sphäroid-basierten 3D Kultur Zellmodell für Kopf und Hals Squamous Zelle Krebsgeschwür

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Herstellung von Zunge extrazellulären Matrix und Rekonstitution der Zunge Squamous Zelle Krebsgeschwür In-vitro-

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

Bestimmung der Proteinexpressionsgrad in kultivierten Zellen von Immunocytochemistry auf Paraffin-eingebetteten Zellenblöcken

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Elastische Färbung auf Paraffin-eingebetteten Dias von pT3N0M0 Magenkrebsgewebe

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Automatisierte Multiplex Immunfluoreszenz Panel für Immuno-Onkologie-Studien auf Formalin fixiert Karzinom Gewebeproben

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

Bewertung von Biomarkern in Gliom von Immunohistochemistry auf Paraffin-eingebetteten 3D Gliom Neurosphäre Kulturen

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal Impfung des Plattenepithelkarzinom Zellen in Mäusen für Tumor immun Profilierung und Behandlung Antwort Bewertung

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Multidimensional Coculture System to Model Lung Squamous Carcinoma Progression

Multidimensionales Cokultursystem zur Modellierung der Fortschreitender Karzinomprogression der Lunge

Tumor-stroma interactions play a critical role in the development of lung squamous carcinoma (LUSC). However, understanding how these dynamic interactions ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Erweiterung des Verständnisses der Tumormikroumgebung mittels massenspektrometrischer Bildgebung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeproben

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...