Name: four-color fluorescence immunohistochemistry of t-cell subpopulations in archival formalin-fixed, paraffin-embedded human oropharyngeal squamous cell carcinoma samples
Uploaded: 2017-07-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinom

Simone Punt, Hollanda Kanser Derneği&#39;nden hibe UL2010-4801 tarafından desteklendi. Bu JoVE protokolünün dayandığı orijinal makalenin tüm yazarlarına, Emilie A. Dronkers, Marij JP Welters, Renske Goedemans, Senada Koljenović, Elisabeth Bloemena, Peter JF Snijders, Arko Gorter ve Sjoerd van&#39;a teşekkür ederiz. Der Burg.

Hasta örnekleri, Hollanda Biyomedikal Bilim Toplulukları Federasyonu İnsan Doku&#39;nun Doğru İkincil Kullanımı Davranış Kurallarında (www.federa.org) açıklanan tıbbi etik yönergelere göre ele alınmıştır. 1. Slayt Hazırlayın <ol><li> Rezeke edilen materyali kullanma tıbbi etik komite iznini aldıktan sonra bir patoloji bölümünden rezeke edilen doku materyalini (her türlü doku) elde edin. NOT: Mevcut deney için, 1970 ve 2011 yılları arasında Leiden, Lei...

<ol>
	<li>Westra, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+changing+face+of+head+and+neck+cancer+in+the+21st+century:+the+impact+of+HPV+on+the+epidemiology+and+pathology+of+oral+cancer.">The changing face of head and neck cancer in the 21st century: the impact of HPV on the epidemiology and pathology of oral cancer.</a> Head Neck Pathol. 3 (1), 78-81 (2009).</li><li>Rietbergen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+papillomavirus+detection+and+comorbidity:+critical+issues+in+selection+of+patients+with+oropharyngeal+cancer+for+treatment+De-escalation+trials.">Human papillomavirus detection and comorbidity: critical issues in selection of patients with oropharyngeal cancer for treatment De-escalation trials.</a> Ann Oncol. 24 (11), 2740-2745 (2013).</li><li>Wallis, S. P., Stafford, N. D., Greenman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+relevance+of+immune+parameters+in+the+tumor+microenvironment+of+head+and+neck+cancers.">Clinical relevance of immune parameters in the tumor microenvironment of head and neck cancers.</a> Head Neck. 37 (3), 449-459 (2015).</li><li>Ye, J., Livergood, R. S., Peng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+and+regulation+of+human+Th17+cells+in+tumor+immunity.">The role and regulation of human Th17 cells in tumor immunity.</a> Am J Pathol. 182 (1), 10-20 (2013).</li><li>Amedei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+analysis+of+pancreatic+cancer-infiltrating+T+lymphocytes+reveals+that+ENO-specific+Tregs+accumulate+in+tumor+tissue+and+inhibit+Th1/Th17+effector+cell+functions.">Ex vivo analysis of pancreatic cancer-infiltrating T lymphocytes reveals that ENO-specific Tregs accumulate in tumor tissue and inhibit Th1/Th17 effector cell functions.</a> Cancer Immunol Immunother. 62 (7), 1249-1260 (2013).</li><li>Whiteside, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+regulatory+T+cells+(Treg)+regulating+in+cancer+and+why?.">What are regulatory T cells (Treg) regulating in cancer and why?.</a> Semin Cancer Biol. 22 (4), 327-334 (2012).</li><li>Punt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angels+and+demons:+Th17+cells+represent+a+beneficial+response,+while+neutrophil+IL-17+is+associated+with+poor+prognosis+in+squamous+cervical+cancer.">Angels and demons: Th17 cells represent a beneficial response, while neutrophil IL-17 is associated with poor prognosis in squamous cervical cancer.</a> Oncoimmunology. 4 (1), e984539 (2015).</li><li>Bamias, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Significant+differences+of+lymphocytes+isolated+from+ascites+of+patients+with+ovarian+cancer+compared+to+blood+and+tumor+lymphocytes.+Association+of+CD3+CD56++cells+with+platinum+resistance.">Significant differences of lymphocytes isolated from ascites of patients with ovarian cancer compared to blood and tumor lymphocytes. Association of CD3+CD56+ cells with platinum resistance.</a> Gynecol Oncol. 106 (1), 75-81 (2007).</li><li>Gasparoto, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patients+with+oral+squamous+cell+carcinoma+are+characterized+by+increased+frequency+of+suppressive+regulatory+T+cells+in+the+blood+and+tumor+microenvironment.">Patients with oral squamous cell carcinoma are characterized by increased frequency of suppressive regulatory T cells in the blood and tumor microenvironment.</a> Cancer Immunol Immunother. 59 (6), 819-828 (2010).</li><li>Jordanova, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+leukocyte+antigen+class+I,+MHC+class+I+chain-related+molecule+A,+and+CD8+/regulatory+T-cell+ratio:+which+variable+determines+survival+of+cervical+cancer+patients?.">Human leukocyte antigen class I, MHC class I chain-related molecule A, and CD8+/regulatory T-cell ratio: which variable determines survival of cervical cancer patients?.</a> Clin Cancer Res. 14 (7), 2028-2035 (2008).</li><li>van Esch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+classical+and+nonclassical+HLA+expression+in+recurrent+and+progressive+HPV-induced+usual+vulvar+intraepithelial+neoplasia+and+implications+for+immunotherapy.">Alterations in classical and nonclassical HLA expression in recurrent and progressive HPV-induced usual vulvar intraepithelial neoplasia and implications for immunotherapy.</a> Int J Cancer. 135 (4), 830-842 (2014).</li><li>Heeren, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+effect+of+different+PD-L1+expression+patterns+in+squamous+cell+carcinoma+and+adenocarcinoma+of+the+cervix.">Prognostic effect of different PD-L1 expression patterns in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the cervix.</a> Mod Pathol. 29 (7), 753-763 (2016).</li><li>Punt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+beneficial+tumor+microenvironment+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+is+characterized+by+a+high+T+cell+and+low+IL-17(+)+cell+frequency.">A beneficial tumor microenvironment in oropharyngeal squamous cell carcinoma is characterized by a high T cell and low IL-17(+) cell frequency.</a> Cancer Immunol Immunother. 65 (4), 393-403 (2016).</li><li>Kirkwood, B. R., Sterne, J. A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Essential Medical Statistics. , (2003).</li><li>Kleinbaum, D. G., Klein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Survival Analysis: A Self-Learning Text. , (2005).</li><li>Fabre, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+Tumor+Microenvironment:+The+Protumor+Effects+of+IL-17+Related+to+Cancer+Type.">Targeting the Tumor Microenvironment: The Protumor Effects of IL-17 Related to Cancer Type.</a> Int J Mol Sci. 17 (9), (2016).</li><li>Feng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multispectral+imaging+of+formalin-fixed+tissue+predicts+ability+to+generate+tumor-infiltrating+lymphocytes+from+melanoma.">Multispectral imaging of formalin-fixed tissue predicts ability to generate tumor-infiltrating lymphocytes from melanoma.</a> J Immunother Cancer. 3 (47), (2015).</li></ol>

Açıklanan protokol için en kritik adımlardan biri, kullanılan primer antikorların doğru seyreltilmesini belirlemektir. Etiketli sekonder antikorların seyreltilmesi, bu spesifik Alexa etiketli antikorların imalatçısı tarafından tavsiye edildiği gibi 1: 200 idi. Birincil antikorların seyreltilmesi, daha sonra tercihen amaçlanan doku türünün iki farklı numunesi (bu durumda OPSCC) kullanılarak bir seri seyreltme ile belirlenmelidir. Optimal çalışma seyreltmesi, arka plan gürültüsü olmaksızın ve...

Orofaringeal skuamoz hücreli karsinomlar (OPSCC), orofarenks kaynaklı heterojen bir skuamöz hücreli kanser grubudur. OPSCC için risk faktörleri human papillomavirus (HPV) enfeksiyonu ve alkol ve tütün kullanımı 1 , 2&#39;yi içerir . Bağışıklık tepkisinin rolü ve bunun klinik ortamda nasıl kullanılacağı henüz keşfedilmeye başlandı. Tümör mikro-çevre, kanser bölgesine çekici olan immün hücreler tarafından sızdırılır. Yüksek CD8 + sitotoksik T hücre frekansı OPSCC hastalarında 3 sağkalımın iyileşmesiyle korele olmasına rağmen, Tregs ve Th17 hücreleri de dahil olmak üzere diğer T hücre alt gruplarının rolü hala net değildir 4 . Th1 ve Th17 hücrelerinin tümör hücrelerini hedefleyen bağışıklık tepkisine yardımcı olması beklenirken, Treg&#39;ler diğer T hücrelerinin aktivitesini bastırma kabiliyetleri açısından iyi bilinir 5 . Bununla birlikte, T varlığıRegların farklı tümör tiplerinde hem olumlu hem de olumsuz yanıtlarla korele olduğu bulunmuştur 6 . Kanda bulunan tüm immün hücreler aynı derecede tümöre nüfuz etmediğinden, lokal tümör mikro ortamının incelenmesi tümöre yöneltilen bağışıklık tepkisinin en güvenilir ölçümünü sağlar. Bu çalışmanın amacı immün hücrelerin sayı ve tipleri ile klinik sonuç arasındaki korelasyonun belirlenmesidir. İnsan OPSCC&#39;sindeki çeşitli T hücresi alt popülasyonlarının sayısını ve lokalizasyonunu analiz etmek için dört renk flüoresan IHC görüntüleme kullandık. Toplam T lenfositlerine (CD3 + ), Th17 hücrelerine ve immünsüpresif FoxP3 + Treg&#39;lere odaklandık ve farklılaşma yolu Th17 hücreleriyle yakından ilişkiliydi. Th17 hücreleri CD3 ve IL-17 kombinasyonu ile karakterize edilir. Sitokin IL-17, aynı zamanda T olmayan hücreler tarafından üretilebilir 7 . İntra epitop dağılımını saptadıkHelial ve stromal T hücreleri, Tregs, Th17 ve IL-17 + T olmayan hücrelerden oluşan gruptan seçildi ve hasta sağkalımı ile olan korelasyonlarını analiz etti. Bir DAPI karşıt lekesi ile kombinasyon halinde CD3, Foxp3 ve IL-17 ekspresyonunu tanımlamak için çok renkli floresans IHC kullanıldı. Bu tahlil, her iki tümör hücresinin (DAPI nükleer boyaması kullanılarak) kolaylıkla ve net bir şekilde tanımlanmasına ve sızma T hücresi popülasyonlarının (farklı markörlerin bir kombinasyonu kullanılarak) tespit edilmesine izin verdi. Örnek hazırlama ve boyamayı takiben, kullanılan flüoresan renkleri ayırmak ve hem tümör epitelyumunda hem de tümör ilişkili stromada bulunan hücre sayısını ve türünü belirlemek için bir floresan mikroskopu ve görüntüleme yazılımı kullanıldı. Bağışıklık hücre popülasyonlarının sayısallaştırılması ve fenotiplenmesi için alternatif bir analiz, tümörün veya periferik örneklerin ( örn., Kan veya asit) uçuş zamanına (CyTOF) göre akış sitometrisi analizi veya sitometridir. Bunu kullanarakTekniği ile lokalizasyon ve farklı hücre tiplerinin göreceli dağılımı ile ilgili tüm bilgiler kaybolur. Periferik örneklerin kullanımı ve analizi, hangi hücrelerin tümörün mikro ortamına sızabildiğiyle ilgili bilgi sağlamamaktadır. Kan ve asitle immün hücre analizleri tümör dokusunda 8, 9 bağışık hücre içi filtrasyonundan fenotip ve sıklığını yansıtacak şekilde gösterilmemiştir edilmiştir. Başka bir alternatif parlak alan mikroskobu kullanımıdır. Bu tekniğin flüoresan görüntüleme üzerindeki avantajı, doku otofloresansının bulunmamasıdır. Bazı örneklerde daha otofloresans, özellikle eritrositler, ancak nötrofilik granülositler de dahil olmak üzere diğer hücre türleri de bulunmakla birlikte, bu bölgeler hemen hemen tüm numunelerin analizinde kolayca alınabilir. İmmünofloresans, hedeflenen flüoresan panelini kullanarak bir örnekteki birden fazla işaretçiyi analiz etme avantajını sunarNt dalga boyları. Bu, belirli bir antijen için yeterli sayıda etiketin ve piyasada mevcut olan antikor izotiplerinin olmaması nedeniyle parlak alan mikroskopisi için aynı ölçüde mümkün değildir. Burada tarif edilen çok renkli floresan IHC tekniği, insan lökosit antijenler (HLA) ve PD-L1 10, 11 gibi farklı immün hücre popülasyonları, hem de tümör hücresi-tanımlı molekülleri, çalışma kanser türleri ve antikor kombinasyonları bir çok farklı kullanılmıştır 12 . Protokol, birçok farklı örnek ve antikor çeşidi kullanılarak kurulmuş ve onaylanmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1379">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Pathos Delta Ultra Rapid Tissue Processor</td>
			<td style="width:167px;">Milestone and Histostar</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:696px;">Automated tissue processor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Histostar</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td style="width:696px;">Tissue block embedding machine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Formaldehyde</td>
			<td style="width:167px;">Baker</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Xylol</td>
			<td style="width:167px;">Merck</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Ethanol</td>
			<td style="width:167px;">Merck</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">milliQ water</td>
			<td style="width:167px;">Elaga Purelab Chorus</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Paraffin wax/Paraclean</td>
			<td style="width:167px;">Klinipath</td>
			<td style="width:143px;">5079A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Microtome tissue holder&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Leica</td>
			<td style="width:143px;">RM225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flex IHC side</td>
			<td style="width:167px;">Dako</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td>Tissue slide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Tris</td>
			<td style="width:167px;">Merk-Milipore</td>
			<td style="width:143px;">1,083,821,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">EDTA</td>
			<td style="width:167px;">Baker</td>
			<td style="width:143px;">1073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">PBS</td>
			<td style="width:167px;">Bio-Rad</td>
			<td>BUF036A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">BSA</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:143px;">A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Rabbit anti-CD3</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td style="width:143px;">ab828</td>
			<td>Titrate required antibody dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Mouse IgG1 anti-FoxP3</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td style="width:143px;">ab20034</td>
			<td>Titrate required antibody dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Goat IgG anti-IL-17</td>
			<td style="width:167px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:143px;">AF-317-NA</td>
			<td>Titrate required antibody dilution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Rabbit Ig isotype control antibody</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td>ab27472</td>
			<td>Use at same final concentration as anti-CD3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Mouse IgG1 isotype control antibody</td>
			<td style="width:167px;">Abcam</td>
			<td>ab91353</td>
			<td>Use at same final concentration as anti-FoxP3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Goat IgG isotype control antibody</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">02-6202</td>
			<td>Use at same final concentration as anti-IL-17</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Donkey anti-rabbit IgG A546</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">A10040</td>
			<td>Dilute 1:200 in 1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Donkey anti-mouse-A647</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">A31571</td>
			<td>Dilute 1:200 in 1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Donkey anti-goat IgG A488</td>
			<td style="width:167px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">A11055</td>
			<td>Dilute 1:200 in 1% BSA/PBS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">VectaShield containing DAPI</td>
			<td style="width:167px;">Vector Laboratories</td>
			<td style="width:143px;">H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LSM700 confocal laser scanning microscope&#160;</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LCI Plan-Neofluar 25x/0.8 Imm Korr DIC M27 objective</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td>420852-9972-720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LSM Zen Software</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td>version 2009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">LSM Image Browser</td>
			<td style="width:167px;">Zeiss</td>
			<td style="width:143px;">version 4.2.0.121</td>
			<td>Available to download at www.zeiss.com/microscopy/int/website/downloads/lsm-image-browser.html.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">SPSS</td>
			<td style="width:167px;">IBM Corp.</td>
			<td style="width:143px;">version 20.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">ImageJ</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:143px;">version 1.50i</td>
			<td>Available to download at http://rsb.info.nih.gov/ij.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

four-color fluorescence immunohistochemistry of t-cell subpopulations in archival formalin-fixed, paraffin-embedded human oropharyngeal squamous cell carcinoma samples

Dört renk floresan immünohistokimya (IHC) tekniği, bağıl dağılımı ve dokudaki lokalizasyonu göz önüne alırken, ilgili hücre popülasyonlarını nicelleştirmek için kullanılan bir yöntemdir. Bu teknik, çeşitli tümör tiplerinde bağışıklık sızıntısının araştırılması için yoğun bir şekilde uygulanmıştır. Tümör mikro-çevre, tümör bölgesine çekilen bağışıklık hücreleri tarafından sızdırılır. Farklı immün hücre popülasyonlarının tümör mikro ortamında farklı roller oynadığı ve hastalığın sonucunda farklı bir etkisi olduğu bulunmuştur. Bu el yazması örnek olarak orofaringeal skuamöz hücreli karsinomda (OPSCC) multiparametre floresans IHC&#39;nin kullanımını açıklamaktadır. Bu teknik diğer doku örneklerine ve ilgi konusu hücre tiplerine kadar uzatılabilir. Sunulan çalışmada, büyük bir OPSCC kohortunun (n = 162) intraepitelyal ve stromal bölmesini analiz ettik. Toplam T lenfositleri (CD3 + ), immünosupresif düzenleyiciTümör epitelini stroma&#39;dan ayırmak için bir nükleer kontrast lekesi kullanarak , ory T hücrelerinde (Tregler; yani FoxP3 + ) ve T yardımcı 17 (Th17) hücrelerinde ( yani, IL-17 + CD3 + ). Az sayıda intratümöral IL-17 + T olmayan hücreler bulunan hastalarda iyileştirilmiş hastalıksız sağkalım ile yüksek sayıda T hücresinin korelasyon gösterdiği bulundu. Bu, IL-17 + olmayan T hücrelerinin, kanser hastalarında IL-17 ve kötü sağkalım arasında tarif edilen korelasyonla uyuşan OPSCC&#39;deki zayıf bir immün yanıt ile korele olabileceğini düşündürmektedir. Günümüzde, yeni multiparametre floresan IHC teknikleri 7 farklı florokrom kullanılarak geliştirilmektedir ve tümör mikro ortamında bağışık hücrelerin daha kesin karakterizasyonu ve lokalizasyonu sağlanacaktır.

Protokolü kullanılarak boyanmıştır (n = 162), daha önce tarif edildiği 13 tarif edildiği gibi Leiden Üniversitesi Tıp Merkezi, Leiden, 1970 ve 2011 arasında, Hollanda&#39;da bulunan teşhis konmuş primer orofaringeal tümörlerden elde edilen FFPE ön tümör örneğinden oluşan bir seri, seçilen. Her slaydın bir ila dört rasgele görüntüsü analiz edildi ( Şekil 1 ). Bazı otofloresan hücreler gösterilir, bu da t...

Watch this Scientific Journal Video about Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinom

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

Multiparametre floresan immünohistokimyası, tümör mikro ortamındaki bağışık hücre popülasyonlarının sayısını, göreceli dağılımını ve lokalizasyonunu değerlendirmek için kullanılabilir. Bu el yazması oropharyngeal kanserdeki T hücresi alt popülasyonlarını analiz etmek için bu tekniği tanımlamaktadır.

Arşiv Formalin Sabitlenmiş, Parafin Gömülü İnsan Orofaringeal Skuamöz Hücreli Karsinoma Örneklerinde T-hücresi Subpopülasyonlarının Dört Renkli Floresan İmmunohistokimyası

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Baş ve Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu içinde perinöral invazyon İçin Bir Model

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Baş ve boyun Skuamöz hücreli karsinom için bir küresel tabanlı 3D hücre kültür modelinde test terapi

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

Dil hücre dışı matriks ve dil Skuamöz Hücre Karsinomu Vitro sulandırma imalatı

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

Determination of Protein Expression Level in Cultured Cells by Immunocytochemistry on Paraffin-embedded Cell Blocks

Immunocytochemistry hücre parafin gömülü bloklar tarafından kültürlü hücrelerdeki Protein ifade düzeyinin belirlenmesi

Immunofluorescent staining is currently the method of choice for determination of protein expression levels in cell-culture systems when morphological ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Parafin üzerinde elastik boyama-pT3N0M0 gastrik kanser dokusu gömülü slaytlar

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

IMMUNO-Onkoloji araştırmalar Formalin sabit Karsinomu doku örnekleri Multiplex ayirt Panel otomatik

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

Biyolojik gliyom immünhistokimya parafin gömülü 3D tümörü Neurosphere kültürü üzerinde tarafından değerlendirilmesi

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Skuamöz Hücre Karsinomu Hücre Tümörü bağışıklık profil oluşturma için fareler ve tedaviye yanıt değerlendirme intramucosal aşı

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Multidimensional Coculture System to Model Lung Squamous Carcinoma Progression

Akciğer Skuamöz Karsinom Progresyonunu Modellemek Için Çok Boyutlu Coculture Sistemi

Tumor-stroma interactions play a critical role in the development of lung squamous carcinoma (LUSC). However, understanding how these dynamic interactions ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Formalin-Sabit ve Parafin-Gömülü Doku Örneklerinin Kütle Spektrometrisi Görüntülemesini Kullanarak Tümör Mikroçevresinin Kavranmasının Genişletilmesi

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...