Name: video tracking protocol to screen deterrent chemistries for honey bees
Uploaded: 2017-06-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Video Tracking Protocol to Screen Deterrent Chemistries for Honey Bees at JoVE.com

ברצוננו להודות לד&quot;ר תומאס קוהר על השימוש בתוכנות מעקב ויזואליות. אנו מודים ג&#39;יימס וילסון וסקוט אוניל על העזרה הטכנית שלהם.

1. הכן קוביות סוכר agarose <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את 8 גרם של סוכר ומכניסים לתוך בקבוק 50 מ&quot;ל Erlenmeyer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממלאים את בקבוק Erlenmeyer עם 20 מ&quot;ל של מים מיונן. ממיסים את הסוכר על ידי swirling את הבקבוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ...

<ol>
	<li>Gallai, N., Salles, J. M., Settele, J., Vaissi&#232;re, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Economic+valuation+of+the+vulnerability+of+world+agriculture+confronted+with+pollinator+decline.">Economic valuation of the vulnerability of world agriculture confronted with pollinator decline.</a> Ecol Econ. 68 (3), 810-821 (2009).</li><li>van Engelsdorp, D., Meixner, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+historical+review+of+managed+honey+bee+populations+in+Europe+and+the+United+States+and+the+factors+that+may+affect+them.">A historical review of managed honey bee populations in Europe and the United States and the factors that may affect them.</a> J Invertebr Pathol. 103, S80-S95 (2010).</li><li>Aizen, M. A., Harder, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Global+Stock+of+Domesticated+Honey+Bees+Is+Growing+Slower+Than+Agricultural+Demand+for+Pollination.">The Global Stock of Domesticated Honey Bees Is Growing Slower Than Agricultural Demand for Pollination.</a> Current Biol. 19 (11), 915-918 (2009).</li><li>Smith, K. M., Loh, E. H., Rostal, M. K., Zambrana-torrelio, C. M., Mendiola, L., Daszak, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogens,+Pests,+and+Economics+Drivers+of+Honey+Bee+Colony+Declines+and+Losses.">Pathogens, Pests, and Economics Drivers of Honey Bee Colony Declines and Losses.</a> Ecohealth. 10, 434-445 (2014).</li><li>Mullin, C. A., Frazier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Levels+of+Miticides+and+Agrochemicals+in+North+American+Apiaries:+Implications+for+Honey+Bee+Health.">High Levels of Miticides and Agrochemicals in North American Apiaries: Implications for Honey Bee Health.</a> PLoS ONE. 5 (3), (2010).</li><li>Li, Y., Kelley, R. A., Anderson, T. D., Lydy, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+comparison+of+two+multi-residue+methods+for+the+analysis+of+select+pesticides+in+honey+bees,+pollen,+and+wax+by+gas+chromatography+-+quadrupole+mass+spectrometry.">Development and comparison of two multi-residue methods for the analysis of select pesticides in honey bees, pollen, and wax by gas chromatography - quadrupole mass spectrometry.</a> Talanta. 140, 81-87 (2015).</li><li>Kakumanu, M. L., Reeves, A. M., Anderson, T. D., Rodrigues, R. R., Williams, M. A., Williams, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Honey+Bee+Gut+Microbiome+Is+Altered+by+In-Hive+Pesticide+Exposures.">Honey Bee Gut Microbiome Is Altered by In-Hive Pesticide Exposures.</a> Front Microbiol. 7, 1-11 (2016).</li><li>Katz, T. M., Miller, J. H., Hebert, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+repellents:+Historical+perspectives+and+new+developments.">Insect repellents: Historical perspectives and new developments.</a> J Am Acad Dermatol. 58 (5), 865-871 (2008).</li><li>Dickens, J. C., Bohbot, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mini+review:+Mode+of+action+of+mosquito+repellents.">Mini review: Mode of action of mosquito repellents.</a> Pestic Biochem Phys. 106 (3), 149-155 (2013).</li><li>Lawrence, K. L., Achee, N. L., Bernier, U. R., Mundal, K. D., Benante, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+Evaluations+of+Topical+Arthropod+Repellents+in+North,+Central,+and+South+America.">Field Evaluations of Topical Arthropod Repellents in North, Central, and South America.</a> J Med Entomol. 51 (5), 980-988 (2014).</li><li>Collins, A. M., Rubink, W. L., Cuadriello Aguilar, ., I, J., Hellmich Ii, ., L, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+insect+repellents+for+dispersing+defending+honey+bees+(Hymenoptera+Apidae).">Use of insect repellents for dispersing defending honey bees (Hymenoptera Apidae).</a> J Econ Entomol. 89 (3), 608-613 (1996).</li><li>Brown, M., Hebert, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+repellents:+An+overview.">Insect repellents: An overview.</a> J Am Acad Dermatol. 36 (2), 243-249 (1997).</li><li>Teeters, B. S., Johnson, R. M., Ellis, M. D., Siegfried, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+video-tracking+to+assess+sublethal+effects+of+pesticides+on+honey+bees+(Apis+mellifera+L.).">Using video-tracking to assess sublethal effects of pesticides on honey bees (Apis mellifera L.).</a> Environ Toxicol Chem. 31 (6), 1349-1354 (2012).</li><li>Vallet, A., Cassier, P., Lensky, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+the+fine+structure+of+the+honeybee+(Apis+mellifera+L.)+workers+and+the+pheromonal+activity+of+2-heptanone.">Ontogeny of the fine structure of the honeybee (Apis mellifera L.) workers and the pheromonal activity of 2-heptanone.</a> J Insect Physiol. 37 (11), 789-804 (1991).</li><li>Free, J. B., Ja Pickett, ., Ferguson, a. W., Simpkins, J. R., Smith, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repelling+foraging+honeybees+with+alarm+pheromones.">Repelling foraging honeybees with alarm pheromones.</a> J Agr Sci. 105 (2), 255 (1985).</li></ol>

זה פרוטוקול מעקב ויזואלי מספק גישה פשוטה המסך ההרתעה כימית עבור דבורים דבש באופן מהיר וקל יחסית. אין פרוטוקולים מומלצים לבדיקות מעבדה של הרתעה כימית לדבורים. מחקרים קודמים בחצי-שדה ובדקו מחקרי דבש של דבש 14 , 15 ; אולם הפרוטוקולים המתואר?...

דבש הדבש האירופי, Apis melliferaL. , הוא חרק כלכלי חשוב חקלאי המספק שירותי האבקה מוערכים ביותר מ 200 מיליארד דולר ברחבי העולם 1 . בארצות הברית ובאירופה, מספר מושבות הדבש של הדבש הולך ופוחת. ארצות הברית איבדה CA. 60% של מושבות דבורים מנוהלות מנוהל מ 1947-2008 בעוד אירופה איבדה CA. 27% מ 1961-2007 2 , 3 . ישנם מספר גורמים שעשויים להיות אחראים למספר גדל של הפסדי המושבה, כולל אך לא רק, טפילים טפיל, זיהומים פתוגן, שיטות דבורים, ושימוש בחומרי הדברה 2 - 4 . דבש עשוי להיות חשוף חומרי הדברה דרך שני מסלולים עיקריים. חשיפה לחומרי הדברה מחוץ לכוורת יכולה להתרחש כאשר אנשים מחפשים מזון באים במגע עם יבוליםרוססו בכימיקלים להגנה מפני מזיקים. חשיפה לחומרי הדברה בתוך הכוורת יכולה להתרחש כאשר כוורנים משתמשים בכימיקלים כדי לשלוט במזיקים ובפתוגנים, כגון קרדית, חיידקים ומיקרוספורדיה. שאריות חומרי הדברה זוהו בדגימות שעווה, אבקה ודבש דבש מ -24 מכונים בארצות הברית ובקנדה 5 , 6 . ההשפעות של מגע חומרי הדברה לדבורים דבש כוללים רעילות חריפה, כמו גם השפעות קטלניות כגון שיתוק, דיסאוריינטציה, ושינויים התנהגותיים ובריאותיים 1 , 7 . כמו החקלאות המודרנית מחייבת שימוש בחומרי הדברה כדי לשמור על התשואות היבול גבוהה, כימיקלים אלה ימשיכו להיות הסתמך על בעתיד 2 . על מנת להגן טוב יותר על דבורי הדבש מפני חשיפות חומרי הדברה, יש צורך בפיתוח פרוטוקולים ותקנות חדשים.גישה אפשרית אחת להגנה היא שימוש בדוחים כדי להפחית את החשיפה של דבורי דבש לחומרי הדברה בזמן חיפוש מזון. הדברה חרקים (IRs) שימשו בדרך כלל כאמצעי הגנה אישיים נגד נגיפי מחלת הפרקים 8 . הנפוץ ביותר והמוצלחת IR, שפותחה לפני יותר מ -60 שנה, הוא DEET 8 , 9 . זה נחשב תקן הזהב עבור בדיקות דוחה חרקים והוא משמש על ידי ארגון הבריאות העולמי הסוכנות להגנת הסביבה כביקורת חיובית עבור הרומן דוחה בדיקות 10 . בנוסף, DEET נמצא לפזר דבורי דבש מאיום המושבה שלהם 11 . התכונות הנוכחיות הקשורות IRs אישיים כוללים: (1) השפעה מתמשכת נגד מספר רחב של פרוקי רגליים; (2) שאינו מגרה למשתמש כאשר הוא מוחל על העור או על הבגדים; (3) חסר ריח אוריח נעים; (4) אין השפעה על בגדים; (5) לא מראה שמנוני כאשר מוחל על העור לעמוד בפני הזעה, כביסה, וניגוב על ידי המשתמש; (6) אין השפעה על פלסטיק נפוץ; ו (7) יציב מבחינה כימית ובמחיר סביר לשימוש נרחב 12 . דוחה המשמש דבורים דבש רק צריך כמה תכונות אלה כגון השפעות מתמשכות, לא מעצבן על המוליכים, ריח חסר ריח או נעים, יציב מבחינה כימית ובמחיר סביר לשימוש נרחב, ולא רעילים דבורים דבש. עם זאת, לפני בחינת תכונות אלה לעומק, יש צורך בשיטת סינון תרכובות לדחיית / הרתעה באופן תפוקה גבוהה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול assay במעבדה כדי המסך compounds עבור ההרתעה של דבורים דבש, צעד חשוב בקביעת repellency. הפרוטוקול הבא שונה ממחקר קודם המתאר שיטת מעקב ויזואלי כדי להעריך את ההשפעות sublethal של חומרי הדברה על דבורים דבש 13 . HoweVer, פרוטוקול זה שונה בכך שהוא נועד למדוד את ההשפעות של repellents המועמד שעלול להרתיע דבורים דבש מן הדברה מטופלים יבולים. אין פרוטוקולים מומלץ עבור בדיקות מעבדה של ההרתעה כימית דבורים דבש, ובכך, פרוטוקול זה מספק גישה פשוטה המסך תרכובות כאלה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL Erlenmeyer flask</td>
			<td style="width:71px;">Kimax</td>
			<td style="width:119px;">26500-50</td>
			<td style="width:167px;">used for making the sugar/agarose cubes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sugar</td>
			<td style="width:71px;">Kroger</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any similar product will sufffice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Deionized water</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>acquired in house</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agarose</td>
			<td style="width:71px;">Apex</td>
			<td style="width:119px;">20-102</td>
			<td>used for making the sugar/agarose cubes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mold for agarose cubes (Weigh Boat)</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any mold that will provide the researcher with a 1.5 X 1.5 X 0.3 cm sugar/agarose cube will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EthoVision XT</td>
			<td style="width:71px;">Noldus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>visual tracking software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">633 nm LEDs</td>
			<td style="width:71px;">Cyron</td>
			<td>HTP904E</td>
			<td>These lights were placed into a constructed light box to illuminate the arenas from below.&#160; The box was a simple wooden structure with a frosted plastic/plexi glass cover that allowed the light to disperse upwards without any glare.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Laptop or PC</td>
			<td style="width:71px;">Dell</td>
			<td style="width:119px;">Inspiron One 2305</td>
			<td>necessary for video tracking software. Any pc device capable of runnin tbe visual tracking software will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bee Keeping protective clothing</td>
			<td style="width:71px;">Dadant &#38; Sons Inc</td>
			<td style="width:119px;">V0126</td>
			<td>any protective hood and jacket will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Hive tool</td>
			<td style="width:71px;">Dadant &#38; Sons Inc</td>
			<td style="width:119px;">M00757</td>
			<td>used to open honey bee hive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Container for honey bees</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any container suitable for housing and storing honey bees will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Featherweight forceps narrow tip</td>
			<td style="width:71px;">Bioquip</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4748</td>
			<td>used to select individual honey bees</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">9 cm (diameter) petri dish</td>
			<td style="width:71px;">Fisher Scientific&#160;</td>
			<td style="width:119px;">S01778</td>
			<td>arena used to contain individual honey bees during video tracking</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Recording Device (Camera)</td>
			<td style="width:71px;">Basler</td>
			<td style="width:119px;">acA-1300-60gm</td>
			<td>any device that can record the subject clearly and transfer the file to a computer will suffice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">GraphPad Prism</td>
			<td style="width:71px;">Graphpad</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>any statistical software package will suffice</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

video tracking protocol to screen deterrent chemistries for honey bees

דבורת הדבש האירופית, אפיס מליפרה ל &#39; , היא מאבקה חשובה מבחינה כלכלית וחקלאית שמייצרת מיליארדי דולרים בשנה. מספר דבש מושבות הדבש כבר בירידה בארצות הברית ובמדינות רבות באירופה מאז 1947. מספר גורמים לשחק תפקיד זה ירידה, כולל חשיפה מכוונת של דבורים דבש לחומרי הדברה. פיתוח שיטות ושיטות חדשות מוצדקות להפחתת החשיפה לחומרי הדברה למאובנים אלו. גישה אחת היא השימוש של chemistries דוחה כי להרתיע דבורי דבש לאחרונה טיפול בחומרי הדברה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול להבחין ההרתעה של דבורי דבש חשופים chemistries דוחה לבחור. דבורים דבורים דבש נאספים ומרעב בן לילה באינקובטור 15 שעות לפני הבדיקה. דבשי דבש בודדים ממוקמים לתוך צלחות פטרי שיש להם קוביית סוכר-אגרוזה (טיפול בשליטה) או קוביית סוכר- agarose- מתחם (טיפול דוחה)לאמצע המנה. צלחת פטרי משמש בזירה כי הוא ממוקם תחת מצלמה בתיבה אור כדי להקליט את הפעילות דבורה דבש הדבש באמצעות תוכנת מעקב וידאו. סך של 8 טיפולים ו 8 דוחה נותחו במשך 10 דקות עם כל טיפול היה כפולות עם דבש דבש חדש. כאן אנו מדגימים כי דבורי הדבש נרתעות מקוביות הסוכר-אגרוס עם טיפול מורכב ואילו דבורי הדבש נמשכות לקוביות הסוכר-אגרוס ללא תרכובת נוספת.

פרוטוקול מעקב ויזואלי פותח כדי להקליט את כמות הזמן הדבורים הדבש בילה באזור היעד עם סוכר או agarose (טיפול שליטה) או סוכר agarose- מתחם קוביה (טיפול הרתעה). הזמן המוקלט נותח באמצעות תוכנה סטטיסטית ואת הזמן הממוצע בילה ± שגיאת תקן באזור היעד הוא דיווח כגרף עמו?...

Watch this Scientific Journal Video about Video Tracking Protocol to Screen Deterrent Chemistries for Honey Bees at JoVE.com

Video Tracking Protocol to Screen Deterrent Chemistries for Honey Bees

אובדן מושבות דבש הדבש מהווה אתגר לשירותי האבקה של היבול. ההמלצות הנוכחיות להגנה על המאבקים מחייבות גישה חלופית למזעור המגע של דבורי דבש לחומרי הדברה מזיקים באמצעות chemistries דוחה. כאן, אנו מספקים שיטות מפורטות עבור פרוטוקול מעקב חזותי כדי ההרתעה המסך עבור דבורים.

פרוטוקול מעקב וידאו מסך ההרתעה Chemistries עבור דבורים דבש

The European honey bee, Apis mellifera L., is an economically and agriculturally important pollinator that generates billions of dollars annually. Honey ...

Research

JoVE Journal

Environment

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect Cryptococcus fagisuga Lind.

טכניקה למסך בוק האמריקאי להתנגדות לחרקי האשור Scale (<em&gt; Fagisuga Cryptococcus</em&gt; לינד.)

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

Experimental Protocol for Manipulating Plant-induced Soil Heterogeneity

פרוטוקול ניסוי להטרוגניות קרקע מושרה צמח מניפולציה

Coexistence theory has often treated environmental heterogeneity as being independent of the community composition; however biotic feedbacks such as ...

A Protocol for Conducting Rainfall Simulation to Study Soil Runoff

פרוטוקול לעריכת סימולציה גשם לחקר ניגר קרקע

Rainfall is a driving force for the transport of environmental contaminants from agricultural soils to surficial water bodies via surface runoff. The ...

A Push-pull Protocol to Reduce Colonization of Bird Nest Boxes by Honey Bees

פרוטוקול Push-Pull כדי להפחית תיבות קינון Colonization של ציפור על ידי דבורי דבש

Introduction of the invasive Africanized honey bee (AHB) into the Neotropics is a serious problem for many cavity nesting birds, specifically parrots. ...

A Protocol for Collecting and Constructing Soil Core Lysimeters

פרוטוקול Lysimeters Core קרקע איסוף הבנייה

Leaching of nutrients from land applied fertilizers and manure used in agriculture can lead to accelerated eutrophication of surface water. Because the ...

Protocol for Microplastics Sampling on the Sea Surface and Sample Analysis

פרוטוקול עבור דגימת חלקיקים על פני הים וניתוח לדוגמא

Microplastic pollution in the marine environment is a scientific topic that has received increasing attention over the last decade. The majority of ...

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

הערכת ההשפעה של כימיקלים סביבתיים על התפתחות דבורת דבש מן הפרט אל רמת קולוני

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Experimental Protocol for Detecting Mitochondrial Function in Hepatocytes Exposed to Organochlorine Pesticides

פרוטוקול ניסיוני לזיהוי תפקוד מיטוכונדריאלי בהפטוציטים שנחשפו לחומרי הדברה אורגנוכלורין

This paper presents detailed methods on detecting hepatic mitochondrial function for a better understanding the cause of metabolic disorders caused by ...

In Vitro Rearing of Solitary Bees: A Tool for Assessing Larval Risk Factors

In Vitro Rearing of Solitary Bees: A Tool for Assessing Larval Risk Factors

במבחנה גידול דבורים בודד: כלי להערכת גורמי סיכון זחל

Although solitary bees provide crucial pollination services for wild and managed crops, this species-rich group has been largely overlooked in pesticide ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

נסיוני לבחינת תגובה התנהגותית פרופילים בדגים זחל: ליישום הקפאין נוירו-ממריץ

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...