Name: extraction and purification of polyphenols from freeze-dried berry powder for the treatment of vascular smooth muscle cells in vitro
Uploaded: 2017-07-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction and Purification of Polyphenols from Freeze-dried Berry Powder for the Treatment of Vascular Smooth Muscle Cells In Vitro at JoVE.com

Ce travail a été financé par l&#39;American Heart Association (14GRNT20180028) et le Florida State University Council on Research and Creativity (COFRS).

1. Préparation des réactifs <ol><li> Préparez 80% d&#39;éthanol (100 mL) en mélangeant 80 mL d&#39;éthanol absolu (biologie moléculaire) et 20 mL d&#39;eau stérile de culture cellulaire. </li><li> Pour préparer l&#39;extrait de polyphénol (10 mg / mL), pesez 10 mg de CE ou de PE. Ajouter 1 ml de milieu d&#39;Eagle modifié Modifié Dulbecco (DMEM) sous un capot de culture cellulaire. Vortex la solution. Aliquote dans des portions de 200 μL et stockez à -20 ° C. </li><li> Préparer le tampon de lyse. <ol><...

<ol>
	<li>Morton, L. W., Abu-Amsha Caccetta, R., Puddey, I. B., Croft, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+biological+effects+of+dietary+phenolic+compounds:+relevance+to+cardiovascular+disease.">Chemistry and biological effects of dietary phenolic compounds: relevance to cardiovascular disease.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 27 (3), 152-159 (2000).</li><li>Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+in+health+and+disease.">Gut microbiota in health and disease.</a> Physiol Rev. 90 (3), 859-904 (2010).</li><li>Manach, C., Scalbert, A., Morand, C., Remesy, C., Jimenez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyphenols:+food+sources+and+bioavailability.">Polyphenols: food sources and bioavailability.</a> Am J Clin Nutr. 79 (5), 727-747 (2004).</li><li>Griffiths, G., Trueman, L., Crowther, T., Thomas, B., Smith, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onions--a+global+benefit+to+health.">Onions--a global benefit to health.</a> Phytother Res. 16 (7), 603-615 (2002).</li><li>Mazzoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetic+aspects+of+berries:+from+field+to+health.">The genetic aspects of berries: from field to health.</a> J Sci Food Agric. 96 (2), 365-371 (2016).</li><li>Wang, S. Y., Jiao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scavenging+capacity+of+berry+crops+on+superoxide+radicals,+hydrogen+peroxide,+hydroxyl+radicals,+and+singlet+oxygen.">Scavenging capacity of berry crops on superoxide radicals, hydrogen peroxide, hydroxyl radicals, and singlet oxygen.</a> J Agric Food Chem. 48 (11), 5677-5684 (2000).</li><li>Choi, M. H., Shim, S. M., Kim, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+black+raspberry+seed+containing+anthocyanins+against+oxidative+damage+to+DNA,+protein,+and+lipid.">Protective effect of black raspberry seed containing anthocyanins against oxidative damage to DNA, protein, and lipid.</a> J Food Sci Technol. 53 (2), 1214-1221 (2016).</li><li>Forbes-Hernandez, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Healthy+Effects+of+Strawberry+Polyphenols:+Which+Strategy+behind+Antioxidant+Capacity?.">The Healthy Effects of Strawberry Polyphenols: Which Strategy behind Antioxidant Capacity?.</a> Crit Rev Food Sci Nutr. 56, S46-S59 (2016).</li><li>Figueira, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+a+blueberry+extract+in+acute+inflammation+and+collagen-induced+arthritis+in+the+rat.">Protective effects of a blueberry extract in acute inflammation and collagen-induced arthritis in the rat.</a> Biomed Pharmacother. 83, 1191-1202 (2016).</li><li>Daglia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyphenols+as+antimicrobial+agents.">Polyphenols as antimicrobial agents.</a> Curr Opin Biotechnol. 23 (2), 174-181 (2012).</li><li>H&#252;gel, H. M., Jackson, N., May, B., Zhang, A. L., Xue, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyphenol+protection+and+treatment+of+hypertension.">Polyphenol protection and treatment of hypertension.</a> Phytomedicine. 23 (2), 220-231 (2016).</li><li>Niedzwiecki, A., Roomi, M. W., Kalinovsky, T., Rath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticancer+Efficacy+of+Polyphenols+and+Their+Combinations.">Anticancer Efficacy of Polyphenols and Their Combinations.</a> Nutrients. 8 (9), E552 (2016).</li><li>Kresty, L. A., Mallery, S. R., Stoner, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Black+raspberries+in+cancer+clinical+trials:+Past,+present+and+future.">Black raspberries in cancer clinical trials: Past, present and future.</a> J Berry Res. 6 (2), 251-261 (2016).</li><li>Hertog, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavonoid+intake+and+long-term+risk+of+coronary+heart+disease+and+cancer+in+the+seven+countries+study.">Flavonoid intake and long-term risk of coronary heart disease and cancer in the seven countries study.</a> Arch Intern Med. 155 (4), 381-386 (1995).</li><li>Peterson, J. J., Dwyer, J. T., Jacques, P. F., McCullough, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associations+between+flavonoids+and+cardiovascular+disease+incidence+or+mortality+in+European+and+US+populations.">Associations between flavonoids and cardiovascular disease incidence or mortality in European and US populations.</a> Nutr Rev. 70 (9), 491-508 (2012).</li><li>Cassidy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+anthocyanin+intake+is+associated+with+a+reduced+risk+of+myocardial+infarction+in+young+and+middle-aged+women.">High anthocyanin intake is associated with a reduced risk of myocardial infarction in young and middle-aged women.</a> Circulation. 127 (2), 188-196 (2013).</li><li>Jacques, P. F., Cassidy, A., Rogers, G., Peterson, J. J., Dwyer, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+flavonoid+intakes+and+CVD+incidence+in+the+Framingham+Offspring+Cohort.">Dietary flavonoid intakes and CVD incidence in the Framingham Offspring Cohort.</a> Br J Nutr. 114 (9), 1496-1503 (2015).</li><li>Aghababaee, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+blackberry+(Morus+nigra+L.)+consumption+on+serum+concentration+of+lipoproteins,+apo+A-I,+apo+B,+and+high-sensitivity-C-reactive+protein+and+blood+pressure+in+dyslipidemic+patients.">Effects of blackberry (Morus nigra L.) consumption on serum concentration of lipoproteins, apo A-I, apo B, and high-sensitivity-C-reactive protein and blood pressure in dyslipidemic patients.</a> J Res Med Sci. 20 (7), 684-691 (2015).</li><li>Jeong, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Rubus+occidentalis+extract+on+blood+pressure+in+patients+with+prehypertension:+Randomized,+double-blinded,+placebo-controlled+clinical+trial.">Effects of Rubus occidentalis extract on blood pressure in patients with prehypertension: Randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial.</a> Nutrition. 32 (4), 461-467 (2016).</li><li>Jia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antihypertensive+effect+of+ethyl+acetate+extract+from+red+raspberry+fruit+in+hypertensive+rats.">The antihypertensive effect of ethyl acetate extract from red raspberry fruit in hypertensive rats.</a> Pharmacogn Mag. 7 (25), 19-24 (2011).</li><li>Feresin, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blackberry,+raspberry+and+black+raspberry+polyphenol+extracts+attenuate+angiotensin+II-induced+senescence+in+vascular+smooth+muscle+cells.">Blackberry, raspberry and black raspberry polyphenol extracts attenuate angiotensin II-induced senescence in vascular smooth muscle cells.</a> Food Funct. 7 (10), 4175-4187 (2016).</li><li>Pergola, C., Rossi, A., Dugo, P., Cuzzocrea, S., Sautebin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+nitric+oxide+biosynthesis+by+anthocyanin+fraction+of+blackberry+extract.">Inhibition of nitric oxide biosynthesis by anthocyanin fraction of blackberry extract.</a> Nitric Oxide. 15 (1), 30-39 (2006).</li><li>Lu, H., Li, J., Zhang, D., Stoner, G. D., Huang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+involved+in+chemoprevention+of+black+raspberry+extracts:+from+transcription+factors+to+their+target+genes.">Molecular mechanisms involved in chemoprevention of black raspberry extracts: from transcription factors to their target genes.</a> Nutr Cancer. 54 (1), 69-78 (2006).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aqueous+extract+of+unripe+Rubus+coreanus+fruit+attenuates+atherosclerosis+by+improving+blood+lipid+profile+and+inhibiting+NF-&#954;B+activation+via+phase+II+gene+expression.">Aqueous extract of unripe Rubus coreanus fruit attenuates atherosclerosis by improving blood lipid profile and inhibiting NF-&#954;B activation via phase II gene expression.</a> J Ethnopharmacol. 146 (2), 515-524 (2013).</li><li>Wang, J., Mazza, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+anthocyanins+and+other+phenolic+compounds+on+the+production+of+tumor+necrosis+factor+alpha+in+LPS/IFN-gamma-activated+RAW+264.7+macrophages.">Effects of anthocyanins and other phenolic compounds on the production of tumor necrosis factor alpha in LPS/IFN-gamma-activated RAW 264.7 macrophages.</a> J Agric Food Chem. 50 (15), 4183-4189 (2002).</li><li>Pascual-Teresa, S., Moreno, D. A., Garcia-Viguera, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flavanols+and+anthocyanins+in+cardiovascular+health:+a+review+of+current+evidence.">Flavanols and anthocyanins in cardiovascular health: a review of current evidence.</a> Int J Mol Sci. 11 (4), 1679-1703 (2010).</li><li>Kim, D. O., Lee, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+Isolation+of+Polyphenolics.">Extraction and Isolation of Polyphenolics.</a> Curr Protoc Food Analyt Chem. 1, 2.1-2.12 (2002).</li><li>Queires, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyphenols+purified+from+the+Brazilian+aroeira+plant+(Schinus+terebinthifolius,+Raddi)+induce+apoptotic+and+autophagic+cell+death+of+DU145+cells.">Polyphenols purified from the Brazilian aroeira plant (Schinus terebinthifolius, Raddi) induce apoptotic and autophagic cell death of DU145 cells.</a> Anticancer Res. 26 (1A), 379-387 (2006).</li><li>Griendling, K. K., Taubman, M. B., Akers, M., Mendlowitz, M., Alexander, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+phosphatidylinositol-specific+phospholipase+C+from+cultured+vascular+smooth+muscle+cells.">Characterization of phosphatidylinositol-specific phospholipase C from cultured vascular smooth muscle cells.</a> J Biol Chem. 266 (23), 15498-15504 (1991).</li><li>Vuong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+a+polyphenol-enriched+preparation+on+chemoprevention+of+mammary+carcinoma+through+cancer+stem+cells+and+inflammatory+pathways+modulation.">Role of a polyphenol-enriched preparation on chemoprevention of mammary carcinoma through cancer stem cells and inflammatory pathways modulation.</a> J Transl Med. 14, (2016).</li></ol>

Les polyphénols isolés des baies contiennent des compositions distinctes. Le protocole d&#39;extraction à base d&#39;éthanol décrit ici a permis d&#39;identifier différents niveaux d&#39;acides phénoliques et de flavonoïdes présents dans des extraits de polyphénols bruts et purifiés de BL ( Tableau 1 ). CE a été enrichi en acide gallic, en acide ferulique, en acide 4-O-caffeoylquinique et en acide 5-O-caffeoylquinique. Le processus de purification n&#39;a pas modifié de manière significat...

Les polyphénols sont des composés contenant au moins un anneau phénolique dans leur structure et sont abondamment présents dans le règne végétal 1 . Les humains ont consommé des plantes pendant des millénaires à des fins médicales sans connaître l&#39;existence de tels composés 2 . Beaucoup de fruits et légumes ont des composés polyphénoliques partagés, bien qu&#39;avec des quantités différentes, y compris les flavonoïdes, les stilbènes et les acides phénoliques 3 . Bien que les polyphénols soient souvent associés à des fruits et légumes colorés, cela n&#39;est pas strictement vrai. Par exemple, la zéaxanthine et la xanthine sont présentes dans les légumes qui ne sont pas très colorés, comme les oignons et l&#39;ail, qui proviennent de la famille des écrevisses et sont associés à de nombreux avantages pour la santé 4 . En plus d&#39;être associé à plusieurs avantages pour la santé 5 , les polyphénols servent également les plantes en les protégeant des insectes etD rayonnement ultraviolet 2 . Les polyphénols sont couramment présents dans l&#39;alimentation humaine et sont considérés comme des antioxydants puissants, car ils peuvent éliminer les espèces d&#39;oxygène réactif (ROS) 6 , 7 , 8 . Ils ont également des propriétés anti-inflammatoires 9 , antimicrobiennes 10 , anti-hypertensives 11 et anti-cancérogènes 12 , 13 . Les études épidémiologiques démontrent une association inverse entre la consommation de flavonoïdes et l&#39;incidence des maladies cardiovasculaires (MCV) 16 , 17 et la mortalité 14 , 15 . Les baies sont largement consommés aux États-Unis et ont une grande quantité de polyphénols, y compris les flavonoïdes. Par exemple, la consommation de jus de mûre (BL) (300<html> ML / d) pendant huit semaines a diminué de manière significative la tension artérielle systolique chez les patients dyslipidémiques 18 . Jeong et al. 19 ont rapporté que les hommes et les femmes pré-hypertendus consommant 2,5 g d&#39;extrait de framboise noire (BRB) par jour avaient une pression artérielle inférieure de 24 h et une nuit par rapport à ceux qui consommaient un placebo. Les framboises (RB) ont diminué la tension artérielle tout en augmentant l&#39;expression de la superoxyde dismutase (SOD) chez les rats spontanément hypertendus 20 . Il a récemment été démontré que BL, RB et BRB réduisent les niveaux de ROS et de sénescence induite par l&#39;angiotensine II (Ang II) dans les cellules musculaires lisses vasculaires (VSMC) 21 . De plus, la fraction anthocyanique de l&#39;extrait BL a réduit l&#39;expression de l&#39;oxyde nitrique synthase inducible (iNOS) et a inhibé l&#39;activité du facteur nucléaire kappa B (NF-kB) et de la kinase extracellulaire régulée par le signal (ERK) dans le lipopolysaccharide (LPS) - stimulée Cellules J774Ass = &quot;xref&quot;&gt; 22. Les extraits de BRB ont diminué l&#39;activation NF-κB et l&#39;expression de la cyclooxygénase 2 (COX-2) in vitro 23 , amélioré le profil lipidique et empêché la formation de la lésion de l&#39;athérosclérose chez des souris nourries avec un régime riche en matières grasses 24 . Les anthocyanines, qui sont considérées comme les flavonoïdes les plus abondants dans les baies, modulent la réponse inflammatoire dans les macrophages RAW 264.7 stimulés par le LPS en diminuant la production de facteur 25 de nécrose tumorale (TNF-α) 25 et en diminuant la prolifération et la migration des VSMC 26 . Étant donné qu&#39;il y a eu un intérêt grandissant à comprendre le rôle des polyphénols dans la santé humaine et les maladies, il est important d&#39;optimiser la méthode d&#39;extraction. L&#39;extraction par solvants est largement utilisée à cette fin, car elle est rentable et facilement reproductible. Dans cette étude, une extraction par solvant a été utilisée avec de l&#39;éthanol, avec une extraction assistée par ultrasonsN méthode, qui a été adaptée de Kim et Lee 27 . La purification et le fractionnement des extraits bruts (CE) à l&#39;aide de chloroforme et d&#39;acétate d&#39;éthyle ont été réalisés pour obtenir la fraction d&#39;extrait purifié (PE) adaptée de Queires et al 28 . En outre, on a comparé l&#39;efficacité des extraits de polyphénols bruts versus purifiés de BL pour réduire la phosphorylation basale de ERK1 / 2 et des exemples représentatifs de l&#39;effet inhibiteur de l&#39;extrait de polyphénol BL purifié sur les réductions de signalisation induites par Ang II dans les VSMC ont été fournis.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="971">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">Angiotensin II</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">A9525-10MG</td>
			<td style="width:343px;">Treatment of VSMCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">&#946;-actin</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">A2228</td>
			<td>Primary antibody (1:5000)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">Blackberry fruit</td>
			<td style="width:157px;">Mercer Foods</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td>Freeze-dried blackberry powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">Catalase&#160;</td>
			<td style="width:157px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:168px;">219010</td>
			<td>Primary antibody (1:1000)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chloroform</td>
			<td style="width:157px;">Biotech Grd, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">97064-678</td>
			<td>Preparation of purified polyphenol extracts</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:157px;">Mediatech, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">10-014-CV</td>
			<td>Culture of VSMCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol (absolute molecular biology grade)</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">E7023-500ML</td>
			<td>Preparation of polyphenol extracts&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethylacetate</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">439169</td>
			<td>Preparation of purified polyphenol extracts</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:303px;">ERK1/2</td>
			<td style="width:157px;">Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">9102S</td>
			<td>Primary antibody (1:500)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">EDTA, 500 mM, pH 8.0</td>
			<td style="width:157px;">Teknova, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">E0306</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">Freeze-Dryer</td>
			<td style="width:157px;">Labconco</td>
			<td style="width:168px;">VirTis Benchtop K</td>
			<td>Preparation of polyphenol extracts</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">FBS</td>
			<td style="width:157px;">Seradigm</td>
			<td style="width:168px;">1400-500</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">HEPES</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">H3375</td>
			<td>Lysis buffer&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">NaCl</td>
			<td style="width:157px;">EMD Millipore, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">7760</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">NaF</td>
			<td style="width:157px;">J.T.Baker, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">3688-01&#160;</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:303px;">Na3VO4</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">450243</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:303px;">Na4P2O7 , decahydrate</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">S-9515</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:303px;">phospho ERK1/2&#160;</td>
			<td style="width:157px;">Cell Signaling Technology, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">9101S</td>
			<td>Primary antibody (1:1000)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">P8340-5ml</td>
			<td>Lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:303px;">Protein assay dye reagent</td>
			<td style="width:157px;">Bio-Rad Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">500-0006</td>
			<td>Protein concentration Measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">PVDF transfer membrane</td>
			<td style="width:157px;">Thermo Scientific, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">88518</td>
			<td>Western blots</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" style="height:41px;width:303px;">Rotatory Evaporator</td>
			<td style="width:157px;">Buchi Labortechnik</td>
			<td style="width:168px;">Rotavapor 
			R3000</td>
			<td>Preparation of polyphenol extracts</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile water</td>
			<td style="width:157px;">Mediatech, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">25-055-CV</td>
			<td>Preparation of polyphenol extracts</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">Sonicator</td>
			<td style="width:157px;">QSonica, LLC</td>
			<td style="width:168px;">Q125</td>
			<td>Preparation of cell extracts</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">SOD2</td>
			<td style="width:157px;">Enzo Life Sciences, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">ADI-SOD-110-F</td>
			<td>Primary antibody (1:1000)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">Triton-X-100</td>
			<td style="width:157px;">Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">X100</td>
			<td>Western blots</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:303px;">Whatman #2 filter paper</td>
			<td style="width:157px;">GE Healthcare, Inc.</td>
			<td style="width:168px;">28317-241</td>
			<td>Preparation of polyphenol extracts</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction and purification of polyphenols from freeze-dried berry powder for the treatment of vascular smooth muscle cells in vitro

Des études épidémiologiques indiquent que l&#39;augmentation de la consommation de flavonoïdes est en corrélation avec la diminution de la mortalité due aux maladies cardiovasculaires (ECV) aux États-Unis (États-Unis) et en Europe. Les baies sont largement consommés aux États-Unis et ont un contenu polyphénolique élevé. On a montré que les polyphénols interagissent avec de nombreuses cibles moléculaires et exercent de nombreuses fonctions biologiques positives, y compris les effets antioxydants, anti-inflammatoires et cardioprotecteurs. Les polyphénols isolés de la mûre (BL), de la framboise (RB) et de la framboise noire (BRB) réduisent le stress oxydatif et la sénescence cellulaire en réponse à l&#39;angiotensine II (Ang II). Ce travail fournit une description détaillée du protocole utilisé pour préparer les extraits de polyphénols à partir de baies lyophilisées. Les extractions de polyphénols à partir de poudre de baies lyophilisées ont été réalisées en utilisant de l&#39;éthanol aqueux à 80% et un procédé d&#39;extraction assisté par ultrasons. L&#39;extrait brut a été encore purifié et fractionné en utilisant du chloroforme et de l&#39;acétate d&#39;éthyle,respectivement. Les effets des extraits bruts et purifiés ont été testés sur des cellules musculaires lisses vasculaires (VSMC) en culture.

On a déjà démontré que les extraits de polyphénols isolés de BL, RB et BRB réduisaient la sénescence des VSMC en réponse à Ang II 21 . Il a été démontré que ces extraits de polyphénols purifiés modulent la signalisation Ang II en réduisant la phosphorylation d&#39;Akt, de la protéine Kinase Activée par Mitogen (MAPK) et de l&#39;ERK1 / 2. BL empêche la sénescence en réduisant l&#39;expression de la NADPH oxydase (Nox) 1, une enzyme qui produi...

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Extraction and Purification of Polyphenols from Freeze-dried Berry Powder for the Treatment of Vascular Smooth Muscle Cells In Vitro

Ce travail détaille une méthode étape par étape pour préparer des extraits riches en polyphénols à partir de poudres de baies lyophilisées. En outre, il fournit une description détaillée de la façon d&#39;utiliser ces extraits riches en polyphénols dans la culture cellulaire en présence de l&#39;hormone peptidique angiotensine II (Ang II) à l&#39;aide de cellules musculaires lisses vasculaires (VSMC).

Extraction et purification des polyphénols à partir de la poudre de baies lyophilisée pour le traitement des cellules musculaires lisses vasculaires<em&gt; In Vitro</em

Epidemiological studies indicate that increased flavonoid intake correlates with decreased mortality due to cardiovascular diseases (CVD) in the United ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Extraction and Purification of Polyphenols from Freeze-dried Berry Powder for the Treatment of Vascular Smooth Muscle Cells In Vitro

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