Name: high-resolution imaging and analysis of individual astral microtubule dynamics in budding yeast
Uploaded: 2017-04-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast at JoVE.com

نشكر كيري بلوم (جامعة نورث كارولينا)، كيونغ لي (NCI)، ستيفن ماركوس (جامعة ولاية كولورادو)، وإلمار شيبيل (UNIVERSITAT هايدلبرغ) لتبادل مختلف البلازميدات FP-TUB1. ونحن ممتنون لميليسا غاردنر (جامعة مينيسوتا) لتدريب لنا في طريقة إعداد غرفة الشرائح. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) منح R01GM112893-01A1 (لJKM) وT32GM008730 (م).

1. إعداد لوحات -LEU التسرب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 800 مل من عقيم، الماء منزوع الأيونات (DIH 2 O) إلى قارورة 2 L. إضافة 26.71 غرام من قاعدة التسرب مسحوق (تاريخ الميلاد)، 0.69 غرام من CSM-لوي، و 20 غراما من أجار. الاختلاط مع شريط مغناطيسي. جلب إلى 1 L م?...

<ol>
	<li>Zanic, M., Widlund, P. O., Hyman, A. A., Howard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+between+XMAP215+and+EB1+increases+microtubule+growth+rates+to+physiological+levels.">Synergy between XMAP215 and EB1 increases microtubule growth rates to physiological levels.</a> Nat Cell Biol. 15 (6), 688-693 (2013).</li><li>Mimori-Kiyosue, Y., Shiina, N., Tsukita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamic+behavior+of+the+APC-binding+protein+EB1+on+the+distal+ends+of+microtubules.">The dynamic behavior of the APC-binding protein EB1 on the distal ends of microtubules.</a> Curr Biol. 10 (14), 865-868 (2000).</li><li>Byers, B., Goetsch, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+spindles+and+spindle+plaques+in+the+cell+cycle+and+conjugation+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Behavior of spindles and spindle plaques in the cell cycle and conjugation of Saccharomyces cerevisiae.</a> J Bacteriol. 124 (1), 511-523 (1975).</li><li>Marschall, L. G., Jeng, R. L., Mulholland, J., Stearns, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Tub4p,+a+yeast+gamma-tubulin-like+protein:+implications+for+microtubule-organizing+center+function.">Analysis of Tub4p, a yeast gamma-tubulin-like protein: implications for microtubule-organizing center function.</a> J Cell Biol. 134 (2), 443-454 (1996).</li><li>Spang, A., Geissler, S., Grein, K., Schiebel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gamma-Tubulin-like+Tub4p+of+Saccharomyces+cerevisiae+is+associated+with+the+spindle+pole+body+substructures+that+organize+microtubules+and+is+required+for+mitotic+spindle+formation.">gamma-Tubulin-like Tub4p of Saccharomyces cerevisiae is associated with the spindle pole body substructures that organize microtubules and is required for mitotic spindle formation.</a> J Cell Biol. 134 (2), 429-441 (1996).</li><li>Winey, M., Bloom, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+spindle+form+and+function.">Mitotic spindle form and function.</a> Genetics. 190 (4), 1197-1224 (2012).</li><li>Gupta, M. L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Tubulin+C354+mutations+that+severely+decrease+microtubule+dynamics+do+not+prevent+nuclear+migration+in+yeast.">beta-Tubulin C354 mutations that severely decrease microtubule dynamics do not prevent nuclear migration in yeast.</a> Mol Biol Cell. 13 (8), 2919-2932 (2002).</li><li>Moore, J. K., Cooper, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinating+mitosis+with+cell+polarity:+Molecular+motors+at+the+cell+cortex.">Coordinating mitosis with cell polarity: Molecular motors at the cell cortex.</a> Semin Cell Dev Biol. 21 (3), 283-289 (2010).</li><li>Gartz Hanson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+alpha-tubulin+mutation+disrupts+neural+development+and+tubulin+proteostasis.">Novel alpha-tubulin mutation disrupts neural development and tubulin proteostasis.</a> Dev Biol. 409 (2), 406-419 (2016).</li><li>Fees, C. P., Aiken, J., O'Toole, E. T., Giddings, T. H. J., Moore, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+negatively+charged+carboxy-terminal+tail+of+beta-tubulin+promotes+proper+chromosome+segregation.">The negatively charged carboxy-terminal tail of beta-tubulin promotes proper chromosome segregation.</a> Mol Biol Cell. 27 (11), 1786-1796 (2016).</li><li>Song, S., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+function+of+Saccharomyces+cerevisiae+CDC5+in+cytokinesis.">A novel function of Saccharomyces cerevisiae CDC5 in cytokinesis.</a> J Cell Biol. 152 (3), 451-469 (2001).</li><li>Knop, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+tagging+of+yeast+genes+using+a+PCR-based+strategy:+more+tags+and+improved+practical+routines.">Epitope tagging of yeast genes using a PCR-based strategy: more tags and improved practical routines.</a> Yeast. 15 (10B), 963-972 (1999).</li><li>Kosco, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+microtubule+dynamics+by+Stu2p+is+essential+for+spindle+orientation+and+metaphase+chromosome+alignment+in+yeast.">Control of microtubule dynamics by Stu2p is essential for spindle orientation and metaphase chromosome alignment in yeast.</a> Mol Biol Cell. 12 (9), 2870-2880 (2001).</li><li>Toso, R. J., Jordan, M. A., Farrell, K. W., Matsumoto, B., Wilson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+stabilization+of+microtubule+dynamic+instability+in+vitro+by+vinblastine.">Kinetic stabilization of microtubule dynamic instability in vitro by vinblastine.</a> Biochemistry. 32 (5), 1285-1293 (1993).</li><li>Aiken, J., Sept, D., Costanzo, M., Boone, C., Cooper, J. A., Moore, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+reveals+novel+and+discrete+functions+for+tubulin+carboxy-terminal+tails.">Genome-wide analysis reveals novel and discrete functions for tubulin carboxy-terminal tails.</a> Curr Biol. 24 (12), 1295-1303 (2014).</li><li>Straight, A. F., Marshall, W. F., Sedat, J. W., Murray, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis+in+living+budding+yeast:+anaphase+A+but+no+metaphase+plate.">Mitosis in living budding yeast: anaphase A but no metaphase plate.</a> Science. 277 (5325), 574-578 (1997).</li><li>Khmelinskii, A., Lawrence, C., Roostalu, J., Schiebel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cdc14-regulated+midzone+assembly+controls+anaphase+B.">Cdc14-regulated midzone assembly controls anaphase B.</a> J Cell Biol. 177 (6), 981-993 (2007).</li><li>Markus, S. M., Omer, S., Baranowski, K., Lee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Plasmids+for+Fluorescent+Protein+Tagging+of+Microtubules+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Improved Plasmids for Fluorescent Protein Tagging of Microtubules in Saccharomyces cerevisiae.</a> Traffic. 16 (7), 773-786 (2015).</li></ol>

ويقدم نموذج الخميرة في مهدها المزايا الرئيسية لجمع قياسات عالية الدقة للديناميات أنيبيب في مكان في الجسم الحي، بما في ذلك القدرة على الأنابيب الدقيقة صورة واحدة مع مرور الوقت والقدرة على التعامل مع tubulins والمنظمين أنيبيب باستخدام أدوات علم الوراثة الخميرة. <p ...

الأنابيب الدقيقة هي البوليمرات هيكل الخلية مصنوعة من مفارز البروتين αβ تويولين وتستخدم في طائفة واسعة من السياقات الخلوية، بما في ذلك النقل داخل الخلايا، انقسام الخلايا، التشكل، والحركة. لبناء شبكات أنيبيب لهذه الأدوار المتنوعة، يجب أن خلايا تنظيم بعناية أين ومتى الأنابيب الدقيقة النموذج. ويتم إنجاز هذا النظام عن طريق التحكم في ردود الفعل التي إما تجميع مفارز-αβ تويولين في البوليمرات أنيبيب أو الأنابيب الدقيقة تفكيك إلى وحدات الحرة؛ هذا هو المعروف باسم ديناميات أنيبيب. والهدف الرئيسي من حقل أنيبيب هو توضيح الآليات الجزيئية التي تنظم ديناميات أنيبيب، بما في ذلك دراسات مفارز-αβ تويولين والمنظمين خارجي أن ربط تويولين و / أو الأنابيب الدقيقة. والمنهج التجريبي راسخة هو إعادة هذا النظام في المختبر باستخدام تنقية البروتين αβ تويولين، في كثير من الأحيان في كومbination مع المنظمين خارجي النقاء. ورغم أن هذا هو نهج مفيد، فمن الواضح أن ديناميات أنيبيب في أنظمة أعيد تختلف بشدة من تلك التي لوحظت في الخلايا الحية. على سبيل المثال، الأنابيب الدقيقة تنمو بشكل أسرع وأبطأ يتقلص في الجسم الحي من في المختبر. ويمكن أن يعزى هذه الاختلافات بتوافر المعروف المنظمين خارجي 1، فضلا عن العوامل بعد، غير محددة في الخلايا. لذا، فمن الأهمية بمكان لتحديد أنشطة المنظمين أنيبيب والمسوخ التي تعطل ديناميكية في سياق الخلوي الأصلي. على الرغم من أن نماذج متعددة الخلايا وقد ثبت أن الأنظمة السائدة للتحقيق وظيفة أنيبيب وتنظيم عالي المستوى، والعديد من الاهتمامات العملية تحد بشدة من فائدة هذه نماذج لقياس دقيق للديناميات أنيبيب. أولا، عدد كبير من الأنابيب الدقيقة، التي تتراوح بين عشرات الآلاف في كل خلية، يجعل من الصعب بثقةتتبع الأنابيب الدقيقة الفردية على مر الزمن. وتتناول العديد من الدراسات هذا التحدي من خلال تصوير البروتينات التي توطين بشكل انتقائي لغايات أنيبيب، مثل البروتينات في (EB) أسرة ملزم نهاية. ومع ذلك، ومن المعروف أن هذه البروتينات في توطين فقط إلى أقاصي المتزايد الأنابيب الدقيقة في metazoans 2. ولذلك، يقتصر فائدة هذه البروتينات لقياس مباشرة معدلات النمو، في حين فقط قياس غير مباشر جوانب أخرى من ديناميكية، مثل تكرار كارثة. ثانيا، على الرغم من التقدم في التكنولوجيا التحرير الجينوم، وخلق الخلايا التي تعبر عن ثابت تويولين fluorescently المسمى أو إدخال تحولات على التعامل بشكل انتقائي تويولين أو أنيبيب المنظمين لا يزال يشكل تحديا كبيرا. وعلاوة على ذلك، فإن وجود العديد من isotypes تويولين في metazoans يفند دراسة كيفية تأثير الطفرات الجينات تويولين الفردية. ويوفر نظام الخميرة في مهدها العديد من المزايا الهامة لقياس في الجسم الحي microtubuديناميات جنيه. الخميرة لديها شبكة أنيبيب مبسطة تسمح التصور من الأنابيب الدقيقة الفردية. في الخميرة، والأنابيب الدقيقة تنبع من تنظيم المراكز المعروفة باسم الهيئات القطب المغزل (SPBs)، والتي هي جزء لا يتجزأ في الغلاف النووي 3. وSPBs بمثابة السقالات لمجمعات للγ تويولين الصغيرة التي nucleate الأنابيب الدقيقة 4، 5. SPBs nucleate فئتين من الأنابيب الدقيقة، الأنابيب الدقيقة المغزل والأنابيب الدقيقة نجمي. ميكروتثبول المغزل مشروع في جبلة النواة ومهمة لربط إلى الكروموسومات عبر الأنابيب الدقيقة الحيز الحركي ولتحقيق الاستقرار في المغزل عبر تداخل الأنابيب الدقيقة بين القطبين 6. في المقابل، مشروع الأنابيب الدقيقة نجمي الخارج في العصارة الخلوية ونادرة نسبيا مقارنة مع شبكة كثيفة من الأنابيب الدقيقة المغزل. خلال الانقسام، وخلايا ما قبل طور الصعود ليس لها سوى 1-2 الأنابيب الدقيقة نجمي المنبثقة من أي SPB. هذه موجودة وأناالأنابيب الدقيقة ndividual بدلا من حزم 7. دور الأنابيب الدقيقة نجمي خلال الانقسام هو نقل نواة والمغزل في تقاطع بين الأم وبرعم المقصورات، والمعروفة باسم الرقبة مهدها. وتنطوي هذه الحركة مسارات واضحة المعالم التي تولد قوة على الأنابيب الدقيقة نجمي، وسحب نواة والمغزل نحو وفي نهاية المطاف إلى الرقبة برعم 8. ميزة أخرى للنظام الخميرة هي فائدة علم الوراثة، والتي يمكن استخدامها لتحقيق المنظمين أنيبيب ومفارز تويولين بدقة لا مثيل لها. تمتلك الخميرة أيضا مرجع مبسط لisotypes تويولين: واحد-β تويولين الجين (TUB2) واثنين من الجينات ألفا تويولين (TUB1 وTUB3). الطفرات يمكن إدخال بسهولة في هذه الجينات، وبالتالي درس في عدد السكان تويولين متجانسة 9 و 10. وهناك عدد من على نطاق واسعيبني المتاحة لوضع العلامات الأنابيب الدقيقة، وهذه يمكن أن تكون موجهة لتحقيق التكامل في مواضع الكروموسومات للتعبير مستقر (انظر مناقشة). ويتمثل الهدف العام من هذه الطريقة هو أن الأنابيب الدقيقة صورة واحدة في الخلايا الحية الخميرة في أربعة أبعاد (X، Y، Z، وT) لقياسات عالية الدقة للديناميات أنيبيب. وصفت وسائل لدمج يبني لوالتعبير على مستوى منخفض التأسيسية من تويولين fluorescently المسمى في خلايا الخميرة. قبل التصوير، هي التي شنت الخلايا الحية إلى غرف الشرائح المغلفة مع كتين كونكانافالين A لتحقيق الاستقرار في الخلايا للتصوير على المدى الطويل. المعلمات المثلى لاقتناء الصور، فضلا عن سير العمل لتحليل البيانات، وتوصف أيضا.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DOB (dropout bases)</td>
			<td>Sunrise science&#160;</td>
			<td>1650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSM-Leu</td>
			<td>Sunrise science&#160;</td>
			<td>1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Ameresco</td>
			<td>N833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100mm polystyrene plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ssDNA (Samon Sperm)&#160; in sterile DiH2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>&#160;D7656</td>
			<td>resuspend at 10 mg/mL in DiH2O. Store aliquots at -20 &#186;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synthetic Complete Media&#160;</td>
			<td>Sunrise science&#160;</td>
			<td>1459-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concanavalin A</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>L7647</td>
			<td>resuspend at 2 mg/mL in DiH2O. Store aliquots at -20 &#186;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Coverslips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-541-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>paraffin film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VALAP (Equal parts of Vaseline, lanolin and paraffin)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>melt at 75 &#186;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-100-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poyethylene glycol (PEG) 3350</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>202444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti E inverted Perfect Focus microscope</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td>MEA53100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.45 NA 100x CFI Plan Apo objective</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td>MRD01905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piezo electric stage&#160;</td>
			<td>Physik Instrumente</td>
			<td>P-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk scanner</td>
			<td>Yokogawa</td>
			<td>CSU10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser combiner module</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>MCL400B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMCCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>iXon Ultra 897&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements software</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td>MQS31100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB software</td>
			<td>MathWorks, Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ64</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Rasband, W.S., ImageJ, U. S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, http://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2016.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Formats Importer plug-in</td>
			<td>Open Microscopy Environment</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmids</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pUC19-LEU2::GFP-TUB1</td>
			<td></td>
			<td>pSK1050</td>
			<td>reference: Song, S. and Lee, K. S. A novel function of Saccharomyces cerevisiae CDC5 in cytokinesis. J Cell Biol. 152 (3), 451-469 (2001)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution imaging and analysis of individual astral microtubule dynamics in budding yeast

الأنابيب الدقيقة حيوية أساسية للعديد من العمليات الخلوية، ويمكن أن قياسات دقيقة للديناميات أنيبيب توفير نظرة ثاقبة كيف تنظم خلايا هذه العمليات وكيف راثية الطفرات تنظيم تأثير. القياس الكمي لديناميات أنيبيب في نماذج متعددة الخلايا لديها عدد من التحديات المرتبطة بها، بما في ذلك الكثافة العالية أنيبيب والقيود المفروضة على التلاعب الجيني. في المقابل، فإن نموذج الخميرة في مهدها يوفر المزايا التي تغلب على هذه التحديات. يصف هذا البروتوكول وسيلة لقياس ديناميكية الأنابيب الدقيقة واحدة في الخلايا الحية الخميرة. يتم الالتزام الخلايا معربا عن تويولين الموسومة fluorescently إلى غرف الشريحة تجميعها، والسماح لمستقر الحصول على الصور مرور الزمن. دليل مفصل لسرعة عالية، يتم توفير الحصول على الصور رباعية الأبعاد أيضا، وكذلك بروتوكول لقياس خصائص الأنابيب الدقيقة ديناميكية في مداخن صورة مبائر. هذا الأسلوب، جنبا إلى جنب مع علم الوراثة الخميرة التقليدية، سفر الأمثالايديس وهو نهج غير مناسبة فريدة لتقييم كمي لآثار المنظمين أنيبيب أو الطفرات التي تغير نشاط مفارز تويولين.

قياس ديناميات أنيبيب في الخلايا الحية الخميرة يوفر أداة مقنعة لتقييم مدى الطفرات في الجينات ترميز المنظمين أنيبيب أو تويولين مفارز البلمرة تأثير ومعدلات التحلل، وكذلك وتيرة الانتقال بين هذه الدول. الشكل (1) يعرض سلسلة زمنية من ديناميات أن?...

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast at JoVE.com

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

في مهدها الخميرة هو نموذج متميز لدراسة ديناميات أنيبيب في الجسم الحي بسبب الوراثة القوية وبساطة الهيكل الخلوي أنيبيب لها. يصف بروتوكول التالية كيفية تحويل والخلايا الثقافة الخميرة، واكتساب مبائر الصور المجهري، وكميا تحليل ديناميات أنيبيب في الخلايا الحية الخميرة.

عالية الدقة التصوير والتحليل من الأفراد بالنجوم أنيبيب حيوية في مهدها الخميرة

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

قياس تنسخي سبان الحياة في الخميرة الناشيء.

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

تحليل للوضع النمط الظاهري المورفولوجية كدالة للتركيز البروتين في الخميرة الناشيء.

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

الحصول على الإسفار الوقت الفاصل بين الأفلام من الخميرة في مهدها وتحليل ديناميات وحيدة الخلية باستخدام الطعوم

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Budding Yeast Protein Extraction and Purification for the Study of Function, Interactions, and Post-translational Modifications

مهدها الخميرة استخراج البروتين وتنقية لدراسة وظيفة، والتفاعلات، والتعديلات بعد متعدية

Homogenization by bead beating is a fast and efficient way to release DNA, RNA, proteins, and metabolites from budding yeast cells, which are notoriously ...

Rapid and Efficient Zebrafish Genotyping Using PCR with High-resolution Melt Analysis

سريعة وفعالة الزرد التنميط الجيني باستخدام PCR عالية الدقة مع تحليل نذوب

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

عالية الدقة التصوير الوقت الفاصل بين وتحليل الآلي للأنيبيب حيوية في المعيشة السري الإنسان خلايا الوريد غشائي

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Applications of pHluorin for Quantitative, Kinetic and High-throughput Analysis of Endocytosis in Budding Yeast

تطبيقات pHluorin لالكمي، الحركية وعالية الإنتاجية تحليل الإلتقام في مهدها الخميرة

Green fluorescent protein (GFP) and its variants are widely used tools for studying protein localization and dynamics of events such as cytoskeletal ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

استخدام أجهزة ميكروفلويديك لقياس عمر والخلوية الظواهر في خلايا الخميرة في مهدها واحدة

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

فحص الديناميات النووية الخميرة الانشطارية الميتومية وMeiotic عن طريق الفلورة الخلية الحية المجهرية

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

قياس ديناميات الأنابيب المجهرية بواسطة المجهر القرص الغزل في المغزل ميتوتيك القطب

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...