Name: high-resolution imaging and analysis of individual astral microtubule dynamics in budding yeast
Uploaded: 2017-04-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast at JoVE.com

Мы благодарим Керри Блум (Университет Северной Каролины), Кайунг Ли (NCI), Стивен Маркус (Colorado State University) и Эльмар Шибел (Universität Heidelberg) для совместного использования различных FP-TUB1 плазмид. Мы благодарны Мелисса Гарднер (Университет Миннесоты) для обучения нас в способе подготовки слайд-камеры. Эта работа была поддержана Национальным институтом здоровья (NIH) грант R01GM112893-01A1 (до Jkm) и T32GM008730 (до н.э.).

1. Подготовка Тарелки-Leu отсева <ol><li> Добавить 800 мл стерильной деионизированной воды (DIH 2 O) в 2 - литровую колбу. Добавить 26,71 г порошка основы отсев (DOB), 0,69 г CSM-Leu, и 20 г агара. Смешать с магнитной мешалкой. Довести до 1 л с DIH 2 O. </li><li> Автоклаве при 121 ° C и 19 фунтов на квадратный дюйм ...

<ol>
	<li>Zanic, M., Widlund, P. O., Hyman, A. A., Howard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+between+XMAP215+and+EB1+increases+microtubule+growth+rates+to+physiological+levels.">Synergy between XMAP215 and EB1 increases microtubule growth rates to physiological levels.</a> Nat Cell Biol. 15 (6), 688-693 (2013).</li><li>Mimori-Kiyosue, Y., Shiina, N., Tsukita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamic+behavior+of+the+APC-binding+protein+EB1+on+the+distal+ends+of+microtubules.">The dynamic behavior of the APC-binding protein EB1 on the distal ends of microtubules.</a> Curr Biol. 10 (14), 865-868 (2000).</li><li>Byers, B., Goetsch, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavior+of+spindles+and+spindle+plaques+in+the+cell+cycle+and+conjugation+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Behavior of spindles and spindle plaques in the cell cycle and conjugation of Saccharomyces cerevisiae.</a> J Bacteriol. 124 (1), 511-523 (1975).</li><li>Marschall, L. G., Jeng, R. L., Mulholland, J., Stearns, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Tub4p,+a+yeast+gamma-tubulin-like+protein:+implications+for+microtubule-organizing+center+function.">Analysis of Tub4p, a yeast gamma-tubulin-like protein: implications for microtubule-organizing center function.</a> J Cell Biol. 134 (2), 443-454 (1996).</li><li>Spang, A., Geissler, S., Grein, K., Schiebel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gamma-Tubulin-like+Tub4p+of+Saccharomyces+cerevisiae+is+associated+with+the+spindle+pole+body+substructures+that+organize+microtubules+and+is+required+for+mitotic+spindle+formation.">gamma-Tubulin-like Tub4p of Saccharomyces cerevisiae is associated with the spindle pole body substructures that organize microtubules and is required for mitotic spindle formation.</a> J Cell Biol. 134 (2), 429-441 (1996).</li><li>Winey, M., Bloom, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+spindle+form+and+function.">Mitotic spindle form and function.</a> Genetics. 190 (4), 1197-1224 (2012).</li><li>Gupta, M. L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Tubulin+C354+mutations+that+severely+decrease+microtubule+dynamics+do+not+prevent+nuclear+migration+in+yeast.">beta-Tubulin C354 mutations that severely decrease microtubule dynamics do not prevent nuclear migration in yeast.</a> Mol Biol Cell. 13 (8), 2919-2932 (2002).</li><li>Moore, J. K., Cooper, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinating+mitosis+with+cell+polarity:+Molecular+motors+at+the+cell+cortex.">Coordinating mitosis with cell polarity: Molecular motors at the cell cortex.</a> Semin Cell Dev Biol. 21 (3), 283-289 (2010).</li><li>Gartz Hanson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+alpha-tubulin+mutation+disrupts+neural+development+and+tubulin+proteostasis.">Novel alpha-tubulin mutation disrupts neural development and tubulin proteostasis.</a> Dev Biol. 409 (2), 406-419 (2016).</li><li>Fees, C. P., Aiken, J., O'Toole, E. T., Giddings, T. H. J., Moore, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+negatively+charged+carboxy-terminal+tail+of+beta-tubulin+promotes+proper+chromosome+segregation.">The negatively charged carboxy-terminal tail of beta-tubulin promotes proper chromosome segregation.</a> Mol Biol Cell. 27 (11), 1786-1796 (2016).</li><li>Song, S., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+function+of+Saccharomyces+cerevisiae+CDC5+in+cytokinesis.">A novel function of Saccharomyces cerevisiae CDC5 in cytokinesis.</a> J Cell Biol. 152 (3), 451-469 (2001).</li><li>Knop, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epitope+tagging+of+yeast+genes+using+a+PCR-based+strategy:+more+tags+and+improved+practical+routines.">Epitope tagging of yeast genes using a PCR-based strategy: more tags and improved practical routines.</a> Yeast. 15 (10B), 963-972 (1999).</li><li>Kosco, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+microtubule+dynamics+by+Stu2p+is+essential+for+spindle+orientation+and+metaphase+chromosome+alignment+in+yeast.">Control of microtubule dynamics by Stu2p is essential for spindle orientation and metaphase chromosome alignment in yeast.</a> Mol Biol Cell. 12 (9), 2870-2880 (2001).</li><li>Toso, R. J., Jordan, M. A., Farrell, K. W., Matsumoto, B., Wilson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+stabilization+of+microtubule+dynamic+instability+in+vitro+by+vinblastine.">Kinetic stabilization of microtubule dynamic instability in vitro by vinblastine.</a> Biochemistry. 32 (5), 1285-1293 (1993).</li><li>Aiken, J., Sept, D., Costanzo, M., Boone, C., Cooper, J. A., Moore, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+analysis+reveals+novel+and+discrete+functions+for+tubulin+carboxy-terminal+tails.">Genome-wide analysis reveals novel and discrete functions for tubulin carboxy-terminal tails.</a> Curr Biol. 24 (12), 1295-1303 (2014).</li><li>Straight, A. F., Marshall, W. F., Sedat, J. W., Murray, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitosis+in+living+budding+yeast:+anaphase+A+but+no+metaphase+plate.">Mitosis in living budding yeast: anaphase A but no metaphase plate.</a> Science. 277 (5325), 574-578 (1997).</li><li>Khmelinskii, A., Lawrence, C., Roostalu, J., Schiebel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cdc14-regulated+midzone+assembly+controls+anaphase+B.">Cdc14-regulated midzone assembly controls anaphase B.</a> J Cell Biol. 177 (6), 981-993 (2007).</li><li>Markus, S. M., Omer, S., Baranowski, K., Lee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Plasmids+for+Fluorescent+Protein+Tagging+of+Microtubules+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Improved Plasmids for Fluorescent Protein Tagging of Microtubules in Saccharomyces cerevisiae.</a> Traffic. 16 (7), 773-786 (2015).</li></ol>

Почкование модель дрожжей предлагает значительные преимущества для сбора измерений с высоким разрешением динамики микротрубочек в обстановке в естественных условиях, в том числе способности к изображению одиночным микротрубочкам с течением времени и способностью манипулиров?...

Микротрубочки цитоскелета полимеры, изготовленные из ар-тубулина белковых субъединиц и используются в самых разнообразных клеточных контекстах, в том числе внутриклеточного транспорта, деление клеток, морфогенез и моторики. Для построения микротрубочек сетей для этих разнообразных ролей, клетки должны тщательно регулировать, где и когда микротрубочки формы. Это регулирование осуществляется путем регулирования реакции, которые либо собрать ар-тубулин микротрубочек субъединиц в полимеры или разбирать микротрубочки в свободные субъединицы; это известно как динамики микротрубочек. Основная цель поля микротрубочек является выяснение молекулярных механизмов, которые регулируют динамику микротрубочек, в том числе исследования в ае-тубулина подразделений и внешних регуляторов, которые связываются с тубулина и / или микротрубочек. Хорошо установленный экспериментальный подход является воссоздать эту систему в пробирке с использованием очищенного тубулина-аром белка, часто в комание с очищенными внешними регуляторами. Несмотря на то, что это полезный подход, очевидно, что динамика микротрубочек в реконструированных системах сильно отличается от наблюдаемой в живых клетках. Например, микротрубочки растут быстрее и медленнее сокращаться в естественных условиях , чем в пробирке. Эти различия могут быть отнесены к доступности известных внешних регуляторов 1, а также пока-неопределенных факторов в клетках. Поэтому крайне важно, чтобы определить деятельность регуляторов микротрубочек и мутантов, которые нарушают динамику нативную сотовой связи. Хотя многоклеточных модели оказались преобладающими системами для исследования функции микротрубочек и организаций высшего порядка, несколько практических проблем серьезно ограничивают полезность этих моделей для точного измерения динамики микротрубочек. Во-первых, большое число микротрубочек, начиная от десятков до тысяч на клетку, затрудняет уверенноотслеживать отдельные микротрубочки в течение долгого времени. Во многих исследованиях решить эту проблему с помощью визуализации белков, которые селективно локализовать с микротрубочками концов, такие как белки в семействе конечного связывания (EB). Тем не менее, эти белки , как известно, только локализовать на концах растущих микротрубочек в многоклеточных 2. Таким образом, полезность этих белков ограничивается непосредственным измерением темпов роста, в то время как только косвенно измерения других аспектов динамики, такие как частота катастрофы. Во-вторых, несмотря на успехи в редактирования генома технологии, создание клеток, которые стабильно экспрессируют флуоресцентно меченого тубулина или введения мутации избирательно манипулировать тубулина микротрубочек или регуляторов остается серьезной проблемой. Кроме того, наличие многих тубулина изотипов в многоклеточных путает исследование того, как мутации влияют на отдельные гены тубулина. Почкованием система дрожжей обеспечивает несколько важных преимуществ для измерения в естественных условиях microtubuДинамика ля. Дрожжи имеет упрощенные микротрубочки сеть, которая позволяет визуализировать отдельные микротрубочки. В дрожжах, микротрубочки исходят из организации центров , известные как веретена полюсных тел (SPBS), которые встроены в ядерной оболочке 3. В SPBS служит в качестве каркасов для гаммы-тубулина небольших комплексов , которые пузырьковых микротрубочкой 4, 5. SPBS зарождаются два класса микротрубочек, микротрубочки веретена и астральных микротрубочек. Шпиндельные микротрубочки проект в нуклеоплазму и имеет важное значение для крепления к хромосомам с помощью кинетохорных микротрубочек и для стабилизации шпинделя с помощью перекрывающегося межполюснома микротрубочки 6. В противоположность этому, астральные микротрубочки проект наружу в цитозоле и относительно редко по сравнению с плотной сетью микротрубочек веретена. Во время митоза, предварительно анафаза клетка имеет только 1-2 астральных микротрубочки, исходящие от любого SPB; они существуют, как яndividual микротрубочки , а не как пучки 7. Ролью астральных микротрубочек во время митоза является перемещение ядра и шпинделя в стык между матерью и бутоном отсеками, известными как бутон шея. Это движение предполагает четко определенные пути , которые генерируют силы на астральных микротрубочках, натягивая ядро и шпиндель в направлении и в конечном счете в шейку почки 8. Еще одним преимуществом системы дрожжей является полезность его генетики, которые могут быть использованы для исследования регуляторов микротрубочек и тубулина субъединицы с беспрецедентной точностью. Дрожжи также обладают упрощенным репертуаром тубулина изотипов: один β-тубулином гена (TUB2) и два альфа-тубулином генов (TUB1 и TUB3). Мутации могут быть легко введены в эти гены , и , таким образом , исследовались в гомогенной популяции тубулина 9, 10. Есть целый ряд широкоимеющиеся конструкции для маркировки микротрубочек, и они могут быть направлены на интеграцию в хромосомных локусах для стабильной экспрессии (см Обсуждения). Общая цель этого метода состоит в изображения одиночных микротрубочек в живых дрожжевых клеток в четырех измерениях (X, Y, Z и T) для измерений с высокой разрешающей способностью динамики микротрубочек. Способы интеграции конструкций для конститутивной, низкого уровня экспрессии флуоресцентно-меченного тубулина в клетках дрожжей описаны. До начала обработки изображений, живые клетки смонтированы в слайде-камеры, покрытых лектин Конканавалин A, чтобы стабилизировать клетки для долгосрочной визуализации. Оптимальные параметры для получения изображения, а также рабочий процесс для анализа данных, также описаны.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>DOB (dropout bases)</td>
			<td>Sunrise science&#160;</td>
			<td>1650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSM-Leu</td>
			<td>Sunrise science&#160;</td>
			<td>1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Ameresco</td>
			<td>N833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100mm polystyrene plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ssDNA (Samon Sperm)&#160; in sterile DiH2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>&#160;D7656</td>
			<td>resuspend at 10 mg/mL in DiH2O. Store aliquots at -20 &#186;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synthetic Complete Media&#160;</td>
			<td>Sunrise science&#160;</td>
			<td>1459-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concanavalin A</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>L7647</td>
			<td>resuspend at 2 mg/mL in DiH2O. Store aliquots at -20 &#186;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Coverslips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-541-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>paraffin film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VALAP (Equal parts of Vaseline, lanolin and paraffin)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>melt at 75 &#186;C before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>forceps&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-100-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poyethylene glycol (PEG) 3350</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>202444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ti E inverted Perfect Focus microscope</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td>MEA53100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.45 NA 100x CFI Plan Apo objective</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td>MRD01905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piezo electric stage&#160;</td>
			<td>Physik Instrumente</td>
			<td>P-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning disk scanner</td>
			<td>Yokogawa</td>
			<td>CSU10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser combiner module</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>MCL400B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMCCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>iXon Ultra 897&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements software</td>
			<td>Nikon Instruments</td>
			<td>MQS31100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB software</td>
			<td>MathWorks, Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ64</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Rasband, W.S., ImageJ, U. S. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA, http://imagej.nih.gov/ij/, 1997-2016.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Formats Importer plug-in</td>
			<td>Open Microscopy Environment</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmids</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pUC19-LEU2::GFP-TUB1</td>
			<td></td>
			<td>pSK1050</td>
			<td>reference: Song, S. and Lee, K. S. A novel function of Saccharomyces cerevisiae CDC5 in cytokinesis. J Cell Biol. 152 (3), 451-469 (2001)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-resolution imaging and analysis of individual astral microtubule dynamics in budding yeast

Динамические микротрубочки являются основой для многих клеточных процессов, а также точные измерения динамики микротрубочек могут дать представление о том, как клетки регулируют эти процессы и как генетические мутации регулирования воздействия. Количественные динамики микротрубочек в многоклеточных моделях имеют целый ряд связанные с этим проблемами, в том числе с высокой плотностью микротрубочек и ограничения на генетических манипуляциях. В отличие от этого, начинающая модель дрожжей обеспечивает преимущества, которые позволяют преодолеть эти трудности. Этот протокол описывает метод измерения динамики одиночных микротрубочек в живых дрожжевых клеток. Клетки, экспрессирующие флуоресцентно меченый тубулин приклеивают к собранным камерам скольжения, что позволяет для стабильного получения изображения в заданном промежутке времени. Подробное руководство для высокоскоростных, приобретение четырехмерного изображения также обеспечивается, а также в качестве протокола для количественной оценки свойств динамических микротрубочек в конфокальной стеке изображения. Этот метод, в сочетании с обычной дрожжевой генетикой, прыIDES подход, который уникально подходит для количественного оценки влияния регуляторов микротрубочек или мутаций, которые изменяют активность тубулина субъединиц.

Измерение динамики микротрубочек в живых клетки дрожжей предоставляет убедительный инструмент для оценки, как мутации в генах, кодирующих регуляторы микротрубочек или тубулин субъединицы полимеризации удара и скорость деполимеризации, а также частоте перехода меж...

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast at JoVE.com

High-resolution Imaging and Analysis of Individual Astral Microtubule Dynamics in Budding Yeast

Баддинги дрожжей является выгодной моделью для изучения динамики микротрубочек в естественных условиях из - за свою мощную генетику и простоту его микротрубочки цитоскелета. Следующий протокол описывает, как преобразовать и культуру дрожжевых клеток, приобретают конфокальной микроскопии изображений и количественного анализа динамики микротрубочек в живых дрожжевых клеток.

Изображения с высоким разрешением и анализ индивидуальной астральных микротрубочек динамики в почкующихся дрожжах

Dynamic microtubules are fundamental to many cellular processes, and accurate measurements of microtubule dynamics can provide insight into how cells ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Replicative Life Span in the Budding Yeast

Диапазона измерений репликативной Жизнь в почкующихся дрожжей

Aging is a degenerative process characterized by a progressive deterioration of cellular components and organelles resulting in mortality. The budding ...

Analysis of the Development of a Morphological Phenotype as a Function of Protein Concentration in Budding Yeast

Анализ развития Морфологические Фенотип как функция концентрации белка в почкующихся дрожжей

Gene deletion and protein overexpression are common methods for studying functions of proteins. In this article, we describe a protocol for analysis of ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

Приобретение флуоресценции интервальной съемки бутонизации дрожжей и анализ Одноклеточный динамики с использованием ПРОТЕЗОВ

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Budding Yeast Protein Extraction and Purification for the Study of Function, Interactions, and Post-translational Modifications

Многообещающая Добыча дрожжевого белка и очистка по изучению функций, взаимодействия и пост-трансляционных модификаций

Homogenization by bead beating is a fast and efficient way to release DNA, RNA, proteins, and metabolites from budding yeast cells, which are notoriously ...

Rapid and Efficient Zebrafish Genotyping Using PCR with High-resolution Melt Analysis

Быстрое и эффективное данио рерио Генотипирование Использование ПЦР с высоким разрешением расплава анализа

Zebrafish is a powerful vertebrate model system for studying development, modeling disease, and performing drug screening. Recently a variety of genetic ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Высокое разрешение Покадровый изображений и автоматизированный анализ динамики микротрубочек в живых человеческих эндотелиальных клеток пупочной вены

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

Applications of pHluorin for Quantitative, Kinetic and High-throughput Analysis of Endocytosis in Budding Yeast

Применение pHluorin для количественного, Kinetic и высокой пропускной способностью анализа эндоцитоза у почкующихся дрожжей

Green fluorescent protein (GFP) and its variants are widely used tools for studying protein localization and dynamics of events such as cytoskeletal ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Использование микрофлюидальных устройств для измерения срок службы и сотовых фенотипов в одиночных дрожжевых клетках почкования

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Изучение митотической и меиотической разложения дрожжей ядерной динамики флуоресценции Live-клеток Микроскопии

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

Measurement of Microtubule Dynamics by Spinning Disk Microscopy in Monopolar Mitotic Spindles

Измерение динамики микротрубок с помощью вращающейся микроскопии диска в монополярных митотическом спинное

We describe a modification of an established method to determine microtubule dynamics in living cells. The protocol is based on the expression of a ...