Name: an all-on-chip method for rapid neutrophil chemotaxis analysis directly from a drop of blood
Uploaded: 2017-06-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood at JoVE.com

Эта работа частично поддерживается грантами из Совета по исследованиям естественных наук и инженерных исследований Канады (NSERC) и Канадских институтов исследований в области здравоохранения (CIHR). Мы благодарим Клинический институт прикладных исследований и образования в Большом госпитале Виктории в Виннипеге и Госпитале Семь Оукс в Виннипеге для управления клиническими образцами от людей. Мы благодарим доктора Хагита Переца-Сороку за полезную дискуссию о стратегиях операции анализа. <style type="text/css">
</style> Мы благодарим профессора Каролин Рен и доктора Сяоминя (Коди) Чена из Университета Ватерлоо за их щедрую поддержку в процессе съемок.

Все протоколы сбора образцов человека были одобрены советом по этике научных исследований в Университете Манитобы, Виннипег. 1. Изготовление микрожидкостного устройства ( рисунок 1А ) <ol><li> Маска прозрачности и печати. <ol><li> Создайте устройство, ...

<ol>
	<li>Kolaczkowska, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+recruitment+and+function+in+health+and+inflammation.">Neutrophil recruitment and function in health and inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 13 (13), 159-175 (2013).</li><li>Luster, A. D., Alon, R., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cell+migration+in+inflammation:+present+and+future+therapeutic+targets.">Immune cell migration in inflammation: present and future therapeutic targets.</a> Nat Immunol. 6 (12), 1182-1190 (2005).</li><li>Griffith, J. W., Luster, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cells+in+motion:+migrating+toward+improved+therapies.">Targeting cells in motion: migrating toward improved therapies.</a> Eur. J. Immunol. 43 (6), 1430-1435 (2013).</li><li>Laird, D. J., von Andrian, U. H., Wagers, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+trafficking+in+tissue+development,+growth,+and+disease.">Stem cell trafficking in tissue development, growth, and disease.</a> Cell. 132 (4), 612-630 (2008).</li><li>Condeelis, J., Segall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+cell+movement+in+tumours.">Intravital imaging of cell movement in tumours.</a> Nat Rev Cancer. 3 (12), 921-930 (2003).</li><li>Kruger, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophils:+between+host+defence,+immune+modulation,+and+tissue+injury.">Neutrophils: between host defence, immune modulation, and tissue injury.</a> PLoS Pathog. 11 (3), e1004651 (2015).</li><li>M&#243;csai, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diverse+novel+functions+of+neutrophils+in+immunity,+inflammation,+and+beyond.">Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation, and beyond.</a> J Exp Med. 210 (7), 1283-1299 (2013).</li><li>Foxman, E. F., Campbell, J. J., Butcher, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multistep+navigation+and+the+combinatorial+control+of+leukocyte+chemotaxis.">Multistep navigation and the combinatorial control of leukocyte chemotaxis.</a> J Cell Biol. 139 (7), 1349-1360 (1997).</li><li>Tazzyman, S., Niaz, H., Murdoch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-mediated+tumour+angiogenesis:+subversion+of+immune+responses+to+promote+tumour+growth.">Neutrophil-mediated tumour angiogenesis: subversion of immune responses to promote tumour growth.</a> Semin Cancer Biol. 23 (3), 149-158 (2013).</li><li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> J Exp Med. 115 (3), 453-466 (1962).</li><li>Wu, J., Wu, X., Lin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+microfluidics-based+chemotaxis+studies.">Recent developments in microfluidics-based chemotaxis studies.</a> Lab Chip. 13 (13), 2484-2499 (2013).</li><li>Sackmann, E. K., Fulton, A. L., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+present+and+future+role+of+microfluidics+in+biomedical+research.">The present and future role of microfluidics in biomedical research.</a> Nature. 507 (7491), 181-189 (2014).</li><li>Kim, S., Kim, H. J., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+applications+of+microfluidic+gradient+devices.">Biological applications of microfluidic gradient devices.</a> Integr Biol. 2 (11-12), 584-603 (2010).</li><li>Irimia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+system+for+measuring+neutrophil+migratory+responses+to+fast+switches+of+chemical+gradients.">Microfluidic system for measuring neutrophil migratory responses to fast switches of chemical gradients.</a> Lab Chip. 6 (2), 191-198 (2006).</li><li>Lin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+migration+in+opposing+chemoattractant+gradients+using+microfluidic+chemotaxis+devices.">Neutrophil migration in opposing chemoattractant gradients using microfluidic chemotaxis devices.</a> Ann Biomed Eng. 33 (4), 475-482 (2005).</li><li>Ambravaneswaran, V., Wong, I. Y., Aranyosi, A. J., Toner, M., Irimia, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directional+decisions+during+neutrophil+chemotaxis+inside+bifurcating+channels.">Directional decisions during neutrophil chemotaxis inside bifurcating channels.</a> Integr Biol. 2 (11-12), 639-647 (2010).</li><li>Jones, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+neutrophil+migration+patterns+during+sepsis+after+major+burns.">Spontaneous neutrophil migration patterns during sepsis after major burns.</a> PloS One. 9 (12), e114509 (2014).</li><li>Butler, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burn+injury+reduces+neutrophil+directional+migration+speed+in+microfluidic+devices.">Burn injury reduces neutrophil directional migration speed in microfluidic devices.</a> PloS One. 5 (7), e11921 (2010).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+evaluating+neutrophil+chemotaxis+induced+by+sputum+from+COPD+patients.">A microfluidic platform for evaluating neutrophil chemotaxis induced by sputum from COPD patients.</a> PloS One. 10 (5), e0126523 (2015).</li><li>Sackmann, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+kit-on-a-lid:+a+versatile+platform+for+neutrophil+chemotaxis+assays.">Microfluidic kit-on-a-lid: a versatile platform for neutrophil chemotaxis assays.</a> Blood. 120 (14), e45-e53 (2012).</li><li>Agrawal, N., Toner, M., Irimia, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+migration+assay+from+a+drop+of+blood.">Neutrophil migration assay from a drop of blood.</a> Lab Chip. 8 (12), 2054-2061 (2008).</li><li>Jones, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+platform+for+measuring+neutrophil+chemotaxis+from+unprocessed+human+whole+blood.">Microfluidic platform for measuring neutrophil chemotaxis from unprocessed human whole blood.</a> J Vis Exp. (88), (2014).</li><li>Jones, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+assay+for+precise+measurements+of+mouse,+rat,+and+human+neutrophil+chemotaxis+in+whole-blood+droplets.">Microfluidic assay for precise measurements of mouse, rat, and human neutrophil chemotaxis in whole-blood droplets.</a> J Leukocyte Biol. 100 (1), 241-247 (2016).</li><li>Sackmann, E. K. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+asthma+from+a+drop+of+blood+using+neutrophil+chemotaxis.">Characterizing asthma from a drop of blood using neutrophil chemotaxis.</a> P Natl Acad Sci. 111 (16), 5813-5818 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+all-on-chip+method+for+testing+neutrophil+chemotaxis+induced+by+fMLP+and+COPD+patient's+sputum.">An all-on-chip method for testing neutrophil chemotaxis induced by fMLP and COPD patient's sputum.</a> Technology. 04 (02), 104-109 (2016).</li></ol>

В этой статье был описан подробный протокол для непосредственного выделения нейтрофилов из цельной крови, за которым следует тест хемотаксиса, все на одном микрожидкостном чипе. Этот метод предлагает полезные функции в его простой работе, отрицательный отбор высокочистых нейтрофило?...

Хемотаксис, процесс направленной миграции клеток в растворимый градиент концентрации химических веществ, критически участвует во многих биологических процессах, включая иммунный ответ 1 , 2 , 3 , развитие тканей 4 и метастазы рака 5 . Нейтрофилы являются наиболее распространенным подсемейством лейкоцитов и играют решающую роль в обеспечении врожденных функций защиты организма в целом, а также в опосредовании адаптивных иммунных реакций 6 , 7 . Нейтрофилы снабжены высокорегулируемым хемотаксическим механизмом, позволяющим этим подвижным иммунным клеткам реагировать как на хемоаттрактанты, вызванные патогеном ( например, fMLP), так и на хетоаттрактанты хозяина ( например, интерлейкин-8) через хемотаксис 8 . Нейтрофильная миграция и хемотаксис опосредуют различные физиологические проблемыИ такие заболевания, как воспаление и рак 1 , 9 . Таким образом, точная оценка хемотаксиса нейтрофилов является важным функциональным показанием для изучения биологии нейтрофилов и связанных с ними заболеваний. По сравнению с широко используемыми традиционными методами хемотаксиса ( например, анализ трансмуазы 10 ) микрофлюидные устройства демонстрируют большие перспективы для количественной оценки миграции клеток и хемотаксиса благодаря точно контролируемой генерации химического градиента и миниатюризации 11 , 12 , 13 . В течение последних двух десятилетий или около того были разработаны различные микрожидкостные устройства для изучения хемотаксиса различных типов биологических клеток, особенно нейтрофилов 11 . Значительные усилия были посвящены характеристике миграции нейтрофилов в пространственно-временном комплексе че<html> Которые были сконфигурированы в микрожидкостных устройствах 14 , 15 . Были также разработаны интересные стратегии для изучения направленного принятия решений нейтрофилами с использованием микрожидкостных устройств 16. Помимо исследований, основанных на биологических исследованиях, применение микрожидкостных устройств было расширено для тестирования клинических образцов для оценки состояния 17 , 18 , 19 . Однако использование многих микрожидкостных устройств ограничено специализированными исследовательскими лабораториями и требует длительной изоляции нейтрофилов от большого объема образцов крови. Таким образом, наблюдается растущая тенденция разработки интегрированных микрожидкостных устройств для быстрого анализа хемотаксиса нейтрофилов непосредственно из капли цельной крови 20 , 21 , 22 ,Ef &quot;&gt; 23 , 24 . В этом направлении был разработан метод «все на кристалле», который объединяет магнитную отрицательную очистку нейтрофилов и последующий анализ хемотаксиса на одном микрожидкостном устройстве 25 . Этот метод «все на кристалле» имеет следующие новые особенности: 1) в отличие от предыдущих стратегий на чипе, которые изолируют нейтрофилы от крови путем адгезионной фиксации клеток или фильтрации на основе клеток 20 , 22 , этот новый метод позволяет Чистота, магнитное разделение нейтрофилов на кристалле от небольших объемов цельной крови, а также измерение хемотаксиса при стимуляции хемоаттрактанта; 2) структура док-станции ячейки позволяет выровнять начальные положения нейтрофилов близко к каналу химического градиента и позволяет провести простой анализ хемотаксиса без одноцелевого отслеживания; 3) интеграция изоляции нейтрофилов и хемотовОсевой анализ на одном микрожидкостном устройстве позволяет проводить быстрый анализ хемотаксиса с результатом до 25 мин, когда нет прерывания между экспериментальными стадиями. В настоящем документе представлен подробный протокол для метода построения, эксплуатации и анализа данных этого хемотаксиса на основе кристаллов. В статье показано эффективное использование разработанного метода для проведения нейтрофильного хемотаксиса путем тестирования известного рекомбинантного хемоаттрактанта и сложных хемотактических образцов у пациентов, а затем обсуждение стратегий устранения неполадок, ограничений и будущих направлений.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="581">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:581px;">Device fabrication</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mask aligner</td>
			<td>ABM</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Spinner</td>
			<td>Solitec</td>
			<td>5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hotplate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>11301-022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Plasma cleaner</td>
			<td>Harrick Plasma</td>
			<td>PDC-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vacuum dessicator</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-594-15A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Digital scale</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>CS200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SU-8 2000 thinner</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU-8 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SU-8 2025 photoresist</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU-8 2025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SU-8 developer</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU-8 developer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Si wafer</td>
			<td>Silicon, Inc</td>
			<td>LG2065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">isopropyl alcohol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A416-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:159px;">(tridecafluoro-1,1,2,2-tetrahydrooctyl) trichlorosilane</td>
			<td>Gelest</td>
			<td>78560-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Polydimethylsiloxane 
			(PDMS)</td>
			<td>Ellsworth Adhesives</td>
			<td>2065622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Petri Dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB0875714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cutting pad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom-made</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Punchers</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom-made</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">Name </td>
			<td>Source</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">On-chip cell isolation and chemotaxis assay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">RPMI 1640</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3025502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DPBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH3002802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Bovine serum albumin 
			(BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SH3057402</td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">Fibronectin</td>
			<td>VWR</td>
			<td>CACB356008</td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">fMLP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3506-10MG</td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Magnetic disks</td>
			<td style="width:124px;">Indigo Instruments</td>
			<td>44202-1</td>
			<td style="width:164px;">5 mm in diameter, 
			1 mm thick</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">FITC-Dextran</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>FD10S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"> Rhodamine</td>
			<td> 
			Sigma-Aldrich</td>
			<td>R4127-5G</td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Giemsa stain solution</td>
			<td style="width:124px;">Rowley Biochemical Inc.</td>
			<td style="width:135px;">G-472-1-8OZ</td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:159px;">EasySep Direct Human 
			Neutrophil Isolation 
			Kit</td>
			<td style="width:124px;">STEMCELL 
			Technologies Inc</td>
			<td>19666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:159px;">Dithiothreitol</td>
			<td style="width:124px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:159px;"> Nikon Ti-U inverted fluorescent microscope </td>
			<td style="width:124px;">Nikon</td>
			<td>Ti-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Microscope environmental chamber.</td>
			<td style="width:124px;">InVivo Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:159px;"> CCD camera</td>
			<td style="width:124px;">Nikon</td>
			<td>DS-Fi1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an all-on-chip method for rapid neutrophil chemotaxis analysis directly from a drop of blood

Нейтрофильная миграция и хемотаксис являются критическими для иммунной системы нашего организма. Микрофлюидные устройства все чаще используются для исследования миграции нейтрофилов и хемотаксиса из-за их преимуществ в визуализации в реальном времени, точного контроля образования градиента концентрации химических веществ и снижения потребления реагентов и проб. В последнее время микрофлюидные исследователи предпринимают все более активные усилия по разработке интегрированных и легко управляемых систем микрофлюидного хемотаксиса непосредственно из цельной крови. В этом направлении был разработан первый метод «все на кристалле» для интеграции магнитной отрицательной очистки нейтрофилов и анализа хемотаксиса с образцами небольших объемов крови. Этот новый метод позволяет быстро провести анализ хемотаксиса нейтрофилов с образцом к результату через 25 мин. В этой статье мы предлагаем подробный метод построения, эксплуатации и анализа данных для этого анализа хемотаксиса на чипе с обсуждением стратегий устранения неисправностей, limiИ будущие направления. Показаны репрезентативные результаты анализа хемотаксиса нейтрофилов, в которых анализируется определенный хемоаттрактант, N- Formyl-Met-Leu-Phe (fMLP) и мокрота у пациента с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) с использованием этого метода «все на кристалле». Этот метод применим ко многим исследованиям, связанным с миграцией клеток и клиническим применениям.

Нейтрофилы отрицательно выбраны из капли цельной крови непосредственно в микрожидкостное устройство. Чистота изолированных нейтрофилов была подтверждена окрашиванием на кристалле Гимса, и результаты показали типичные кольцеобразные и лопастные ядра нейтрофилов (...

Watch this Scientific Journal Video about An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood at JoVE.com

An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

В этой статье представлен подробный метод проведения быстрого анализа хемотаксиса нейтрофилов путем интеграции изоляции нейтрофилов на кристалле из цельной крови и теста на хемотаксис на одном микрожидкостном чипе.

Метод «все на кристалле» для быстрого анализа хемотаксиса нейтрофилов непосредственно из капли крови

Neutrophil migration and chemotaxis are critical for our body's immune system. Microfluidic devices are increasingly used for investigating neutrophil ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

1,5 час порядок идентификации Enterococcus Виды Непосредственно из культуры крови

Enterococci are a common cause of bacteremia with E. faecalis being the predominant species followed by E. faecium.  Because resistance to ampicillin and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Представляем напряжения сдвига в изучении бактериальной адгезии

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

Отслеживание нейтрофилов внутрипросветный Crawling, трансэндотелиальной миграции и Хемотаксис в ткани Прижизненное микроскопии видео

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

Прижизненное микроскопия Селезенка: Количественный анализ паразитов Мобильность и кровотока

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

Высокая пропускная способность Метод обнаружения для вируса гриппа

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

Быстрое выявление грамотрицательных бактерий из крови культуральной жидкости Использование MALDI-TOF масс-спектрометрии

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing

Подготовка крови культуры Пелле для быстрого идентификации бактерий и чувствительности к антибиотикам

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a ...

A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

Быстрый метод обработки крови для увеличения выхода плазмы пептидных уровней в крови человека

Research in the field of food intake regulation is gaining importance. This often includes the measurement of peptides regulating food intake. For the ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Создание установки с высокой пропускной способностью для скрининга малых молекул, которые модулируют с-ди-GMP Передача сигналов в<em&gt; Синегнойной</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...