Name: laparoscopic technique for serial collection of liver and mesenteric lymph nodes in macaques
Uploaded: 2017-05-02T15:00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי P51OD010425 מספר מענק NIH.

<ol>
	<li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cells:+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis.">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14 (3), 141-153 (2014).</li><li>Jacobs, J. P., Braun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+genetic+gardening+of+the+intestinal+microbiome.">Immune and genetic gardening of the intestinal microbiome.</a> FEBS Lett. 588 (22), 4102-4111 (2014).</li><li>Macpherson, A. J., Smith, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+lymph+nodes+at+the+center+of+immune+anatomy.">Mesenteric lymph nodes at the center of immune anatomy.</a> J Exp Med. 203 (3), 497-500 (2006).</li><li>Vaikunthanathan, T., Safinia, N., Lombardi, G., Lechler, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota,+immunity+and+the+liver.">Microbiota, immunity and the liver.</a> Immunol Lett. 171, 36-49 (2016).</li><li>Macpherson, A. J., Heikenwalder, M., Ganal-Vonarburg, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Liver+at+the+Nexus+of+Host-Microbial+Interactions.">The Liver at the Nexus of Host-Microbial Interactions.</a> Cell Host Microbe. 20 (5), 561-571 (2016).</li><li>Shuai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+immunity+in+the+liver.">Adaptive immunity in the liver.</a> Cell Mol Immunol. 13 (3), 354-368 (2016).</li><li>Chun, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+HIV+in+gut-associated+lymphoid+tissue+despite+long-term+antiretroviral+therapy.">Persistence of HIV in gut-associated lymphoid tissue despite long-term antiretroviral therapy.</a> J Infect Dis. 197 (5), 714-720 (2008).</li><li>Horiike, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+nodes+harbor+viral+reservoirs+that+cause+rebound+of+plasma+viremia+in+SIV-infected+macaques+upon+cessation+of+combined+antiretroviral+therapy.">Lymph nodes harbor viral reservoirs that cause rebound of plasma viremia in SIV-infected macaques upon cessation of combined antiretroviral therapy.</a> Virology. 423 (2), 107-118 (2012).</li><li>North, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+sanctuaries+during+highly+active+antiretroviral+therapy+in+a+nonhuman+primate+model+for+AIDS.">Viral sanctuaries during highly active antiretroviral therapy in a nonhuman primate model for AIDS.</a> J Virol. 84 (6), 2913-2922 (2010).</li><li>Xu, H., Wang, X., Lackner, A. A., Veazey, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+down-regulation+and+functional+impairment+of+SIV-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+in+lymphoid+and+mucosal+tissues+during+SIV+infection.">CD8 down-regulation and functional impairment of SIV-specific cytotoxic T lymphocytes in lymphoid and mucosal tissues during SIV infection.</a> J Leukoc Biol. 93 (6), 943-950 (2013).</li><li>Zhang, L., Dailey, P. J., Gettie, A., Blanchard, J., Ho, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Liver+Is+a+Major+Organ+for+Clearing+Simian+Immunodeficiency+Virus+in+Rhesus+Monkeys.">The Liver Is a Major Organ for Clearing Simian Immunodeficiency Virus in Rhesus Monkeys.</a> Journal of Virology. 76 (10), 5271-5273 (2002).</li><li>Dillon, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+altered+intestinal+mucosal+microbiome+in+HIV-1+infection+is+associated+with+mucosal+and+systemic+immune+activation+and+endotoxemia.">An altered intestinal mucosal microbiome in HIV-1 infection is associated with mucosal and systemic immune activation and endotoxemia.</a> Mucosal Immunol. 7 (4), 983-994 (2014).</li><li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection.">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199 (8), 1177-1185 (2009).</li><li>Sandler, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+soluble+CD14+independently+predict+mortality+in+HIV+infection.">Plasma levels of soluble CD14 independently predict mortality in HIV infection.</a> J Infect Dis. 203 (6), 780-790 (2011).</li><li>Klase, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysbiotic+bacteria+translocate+in+progressive+SIV+infection.">Dysbiotic bacteria translocate in progressive SIV infection.</a> Mucosal Immunol. 8 (5), 1009-1020 (2015).</li><li>Evans, T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIV-induced+Translocation+of+Bacterial+Products+in+the+Liver+Mobilizes+Myeloid+Dendritic+and+Natural+Killer+Cells+Associated+With+Liver+Damage.">SIV-induced Translocation of Bacterial Products in the Liver Mobilizes Myeloid Dendritic and Natural Killer Cells Associated With Liver Damage.</a> J Infect Dis. 213 (3), 361-369 (2016).</li><li>Fish, R., Danneman, P. J., Brown, M., Karas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. 2 edn. , (2011).</li><li>Flecknell, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Animal Anaesthesia. 3 edn. , (2009).</li><li>Tranquilli, W. J., Thurnom, J. C., Grimm, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lumb and Jones' Veterinary Anesthesia and Analgesia. , (2007).</li><li>Ford, R. B., Mazzaferro, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Kirk and Bistner's Handbook of Veterinary Procedures and Emergency Treatment. 9 edn. , (2012).</li><li>Fransson, B. A., Mayhew, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Small Animal Laparoscopy and Thoracoscopy. , (2015).</li><li>Hensley-McBain, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Fecal+Microbial+Transplantation+on+Microbiome+and+Immunity+in+Simian+Immunodeficiency+Virus-Infected+Macaques.">Effects of Fecal Microbial Transplantation on Microbiome and Immunity in Simian Immunodeficiency Virus-Infected Macaques.</a> J Virol. 90 (10), 4981-4989 (2016).</li><li>Smedley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+Technique+for+Serial+Collection+of+Para-Colonic,+Left+Colic,+and+Inferior+Mesenteric+Lymph+Nodes+in+Macaques.">Laparoscopic Technique for Serial Collection of Para-Colonic, Left Colic, and Inferior Mesenteric Lymph Nodes in Macaques.</a> PLoS One. 11 (6), 0157535 (2016).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-chain+fatty+acids+induce+both+effector+and+regulatory+T+cells+by+suppression+of+histone+deacetylases+and+regulation+of+the+mTOR-S6K+pathway.">Short-chain fatty acids induce both effector and regulatory T cells by suppression of histone deacetylases and regulation of the mTOR-S6K pathway.</a> Mucosal Immunol. 8 (1), 80-93 (2015).</li><li>Ziegler-Heitbrock, H. W., Ulevitch, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD14:+cell+surface+receptor+and+differentiation+marker.">CD14: cell surface receptor and differentiation marker.</a> Immunol Today. 14 (3), 121-125 (1993).</li><li>Brenchley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection.">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12 (12), 1365-1371 (2006).</li></ol>

החוקרים מצהירים שום אינטרסים כלכליים מתחרים.

<html> הנה, אנחנו מדגימים טכניקה פולשנית עבור אוסף סדרה של MLN ו ביופסיות כבדות כי הייתה שיעור הצלחה 100% בחיות אלו ואחרות לא המתוארים במחקר זה. יתר על כן, שימוש בטכניקה זו על אותו החיים ברחבי זמן לא היה קשור בשום תופעות לוואי. ואכן, לא חלו סיבוכים הנובעים משימוש בטכניקה זו בקבוצות אחרות של בעלי חיים שהיו נגועים ב- SIV, הקופי / וירוס הכשל החיסוני האנושי (שיב), או וירוס זיקה (נתונים שלא פורסמו). בדומה לכך, הניתוח הזה הוכיח את יעילותו גם אצל בעלי חיים שעברו ניתוח בטן גדול בעבר, והן חיות thrombocytopenic (נתונים שלא פורסמו). הראינו כי דגימות אלה ניתן לאסוף באמצעות אותם שני פורטים על ידי היפוך מיקום המצלמה בעת מעבר MLN בכבד הימנעות צורך חתכים נוספים. גורמים המשפיעים על האוסף של MLN דווחו בעבר 13. class = &quot;jove_content&quot;&gt; עד ארבע קולקציות של 3 MLN ו 3 ביופסיות כבדות כל בוצע לאורך זמן על בעלי חיים בודדים בלי סיבוכים, שינויים בשערי ההצלחה, או שינויים בנתונים שנאספו. בנוסף, טכניקת אוסף MLN / כבד לפרוסקופיים זה כבר משולב בהצלחה עם הליכים אחרים כגון אוסף של LNs פריפריה, ואת עליונות אנדוסקופית נמוכות ביופסיות GI, שאיבת מוח עצם, אוסף נוזל השדרתי, ו venipuncture באותו אירוע ההרדמה המאפשר הערכה מקיפה של וירולוגית ותגובות חיסוניות באופן סדרתי (נתונים שלא פורסמו). ההליך כולו בדרך כלל לוקח 30 - 45 דקות כדי להשלים מושגת באמצעות שני ~ 0.5 חתכים ס&quot;מ. אצל בעלי חיים שמנים, ייתכן שיהיה צורך לבצע חתך גדול יותר (~ 1 - 1.5 ס&quot;מ) כדי לאחזר MLN דרך ולהצריך זמן נוסף כדי להשלים. בעלי חיים עם שומן mesenteric נרחב קרובות דורשים ניסיון משמעותי דifferentiate MLN מן השומן שמסביב. MLN נמצא בדרך כלל לאורך כלי דם mesenteric ו נראה נפוצה יותר ליד נקודות סניף הכלי. היבט קריטי של הטכניקה הזו הוא שהיא דורשת MLN הנבחרת יש ניידות מספיק לפדר להיות exteriorized דרך החתך בבטן. כתוצאה מכך, הטכניקה הזו לא ניתן להשתמש כדי לאסוף MLN קרוב לשורש לפדר. בשל ההגדלה, זה לפעמים יותר קל לזהות MLN עם המצלמה, ואוחזים בסמיכות לבית MLN יכול לעזור באיתור וזיהוי הצומת לאחר שהוא exteriorized. תנוחת Trendelenburg לא תמיד תידרש לאיסוף MLN, ואם MLN ניתן לאחזר בקלות ללא שימוש בעמדת Trendelenburg זה יכול לעשות ביופסיות כבדות יותר קלה כפי שהוא ימנע את האיברים מן ההסטה cranially. לפעמים, אחרי מיקום עמדת Trendelenburg, הכבד מוסט למעלה נגד הסרעפת וחייבת<html> לטפל בעדינות חזרה למקומו לפני לאוסף ביופסיה. כמיקום היציאה לאיסוף MLN הוא שמאלה, ביופסיות כבדות בדרך כלל נלקחות מן האונות בכבד המדיאלי לרוחב שמאל שמאל כפי שהם קרובים הצינורית. MLN נאסף ביופסיות כבדות ספקו תשואות תא מספיק עבור מגוון רחב של זרם ניתוחים והראו כדאיויות גבוהות של התאים שנאספו. הנה, התאים היו מוכתמים עבור ניתוח התזרים cytometric של אוכלוסיות לויקוציטים ו לימפוציטים, ואת ההבדלים עיקריים בין שני האיברים חיסוניים חשובים האלה לובנו. לדוגמה, MLN היו מועשר עבור תאים מסוג CD4 + T לעומת הכבד, בשל החשיבות של MLN כנקודות מרכזי לאיסוף והפצת המערכת החיסונית אדפטיבית, כמו גם את החשיבות של CD4 + T לניהול דלקתיות תגובות tolerogenic אל המילייה אנטיגנים שמקורם צריכה תזונתית ומיקרואורגניזמים GI-התושבs = &quot;Xref&quot;&gt; 24. עם זאת, הכבד הועשר משמעותי עבור CD14 + לויקוציטים בהשוואת mln. CD14 מתבטא בעיקר על מונוציטים מקרופאגים ומהווה מרכיב מרכזי של מתחם קולטן עבור lipopolysaccharide חיידקים (LPS) 25. ואכן, ריכוזי פלזמה מוגברים CD14 המסיס הקשורים טרנסלוקציה חיידקי הפעלה חיסונית ב HIV ודלקות SIV פתוגניים 26. לפיכך, תדירות גבוהה יותר של CD14 + לויקוציטים בכבד תוצאה מסתברת מנטל חיידקי יותר האיבר הזה בהשוואה mln. הנה, אנחנו מדגימים טכניקה כירורגית מהירה זעירה-פולשנית, אוסף סדרה של MLN ו ביופסיות כבדות רק באמצעות שני חתכים קטנים לכניסה לפרוסקופי כי לא הובילה לשום תוצאות שליליות. דגימות אלה משמשות ערוץ שימושי להעריך Virological אימונולוגית, מפתח, ואת תהליכי מיקרוביולוגים כי לקחת PLACE ב MLN והכבד, נבדלות וייחודיות מחסינות מערכתית. באופן דומה, ביופסיות כבד הן קריטיות עבור הערכה ארוכת טווח של תופעות של HIV / SIV, טיפולים תרופתיים, חיידקים translocated, אשר לעתים קרובות לשלב כדי לגרום נזק כבד משמעותית 16. יתרה מזאת, מאחר MLN והכבד הם איברים חיסוניים חשופים חיידקים במערכת עיכול, את היכולת להעריך חסינות באיברים אלה על פני הזמן מספק פלטפורמה מצוינת להבנת התפקיד כי Microbiome משחק בשמירה על הומאוסטזיס החיסון של פונדקאי. יחדיו, הערכה של הכבד MLN הנה בעלת חשיבות רבה בהקשר של חיסון efficacies הטיפולית, אישור למאגר ויראלי SIV, וחסינות רירית בכלל. היכולת לאסוף דגימות אלה באמצעות גישה פולשנית כלומר יש פחות סיכון של דלקת הקשורים בהליך מ קיים עם טכניקות שפורסמו כרגע ופחות השפעה על פיזיולוגית החיות. ב פוture, נוכל להעריך את הפוטנציאל לשלב את אוסף MLN וכבד עם האוסף של טחול באמצעות אותם שני מקומות הנמל כדי לאפשר דגימה של עוד חלק חשוב וייחודי של מערכת החיסון כי הוכח לשחק תפקיד משמעותי מספר מודלי מחלה.

העיכול (GI) בדרך היא המשטח הרירי הגדול ביותר בגוף, והוא חשוף מספר עצום של אנטיגנים שמקורם במזון, פתוגנים, וקהילות חיידקים endosymbiotic המכונה כמו Microbiome 1, 2. בלוטות לימפה Mesenteric (MLN) קו העיכול והם אתר המנהלת של תפקוד מערכת החיסון לקידום תגובות דלקתיות או tolerogenic כלפי אנטיגנים מגוונים אלה. הארגון הפיזי של MLN יוצר מערכת ממודרת שיכול לתת מענה אנטיגנים מקומי בלי לעורר 3 תגובות מערכתיות. באופן דומה, הדם מתנקז העיכול אל הכבד דרך וריד השער לפני החזרה במחזור, ובכך נחשף חיידקים ומוצרי חיידקים אשר translocated מן העיכול לתוך שכבת הרירית המיוחדת ונכנס הדם 4. הכבד מתפקד גם בתור איבר משני הלימפהיש nd מספר רב של תאי מערכת החיסון, כולל מקרופאגים מיוחדים, כדי להסיר חיידקים translocated 5, 6. לפיכך, MLN ואת הכבד הם האיברים החיסון הראשוני חשוף commensal וחיידקים פתוגניים מ העיכול, כמו גם את המילייה של אנטיגנים ממקורות אחרים, מה שהופך אותם ייחודית וחשובה מבחינה אימונולוגית. MLN אתרים קריטי להערכה של השפעות וירולוגית ו אימונולוגית של נגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) או וירוס הכשל החיסוני הקופי פתוגניים (SIV) זיהום, והם קרוב לוודאי מעורבים הפצת מוקדם של SIV בעקבות האתגר intrarectal. גוט-מזוהה רקמת הלימפה ידוע להיות אתר מרכזי של שכפול HIV מתמיד, למרות שליטה אפקטיבית של viremia ידי טיפולים אנטירטרוויראלי המודרני (ART) 7. במודלי זיהום SIV, MLN הוכח להיות מאגרים חשובים של נגיף רדום והוא רשאילהיות המאגר 8 העיקרי, 9. הכבד הוא גם חשוב זיהום lentiviral כפי שמעיד ההצטברות של תאים ספציפיים SIV CD8 + T ב הכבד של קופי במהלך הזיהום חריף SIV 10. יתר על כן, זה הוא האיבר העיקרי אחראי ניקוי הווירוס ממחזור 11. HIV וזיהומים SIV המשויכים החיידקים במערכת העיכול שינו, שיבשו שלמות האפיתל GI, והגדילה טרנסלוקציה של חיידקים ומוצרי חיידקים מהמעי אל הפריפריה במחזור 12, 13. תהליכים אלה הקשורים הפעלה חיסונית מקומית מערכתית, וגדילה לתחלואה ולתמותה ואנשים נגועים באיידס 14. בשנת זיהום SIV, חיידקים translocated נצפו ב MLN 15, ואילו הצטברות של מיקרופוןמוצרי robial בכבד הוכח לגרום לדלקת פגיעה באיבר 16. לפיכך, בהקשר של HIV ודלקות SIV, את MLN והכבד יכול להיות אינפורמטיבי מאוד להבנת תהליכים דלקתיים מונע על ידי חיידקים במערכת העיכול-תושב. כאן, אנו מציגים טכניקה לפרוסקופית זעיר-פולשנית, דגימה סדרתי של MLN והכבד אצל פרימטים לא אנושיים (NHPs). אנו להפגין ביצועים מוצלחים של טכניקה זו על שני קופי רזוס נקבה בריא (RMS), דגימת כל חיה פעמים, עם 160 ימים בין כל ניתוח. אנחנו הולכים על מנת להשתמש בדגימות הללו כדי להעריך ולהשוות אוכלוסיות לויקוציטים ו הלימפוציטים מפתח בתוך כל איבר באמצעות cytometry זרימה, ולהפגין נתונים עקביים ומתמשך בין שתי נקודות הזמן.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1395">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Artficial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">97-890-8152</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Priority Care Chlorhexidine 2% Scrub</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-842-6153</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Vedco Alcohol, Isopropyl 70%</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-869-6434</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Vedco Vetadine Scrub</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-869-6772</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Hospira Lactated Ringer&#39;s 250 ml</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-800-9325</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Adolescent Laparotomy Surgical Drape</td>
			<td style="width:248px;">Medline</td>
			<td style="width:167px;">DYNJP3004</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Access 40 L Insufflator</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">7205832</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">300XL Xenon Light Source</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">7206084</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">460P 3 &#8211; CCD Digital Camera with Head</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">72200086</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Universal Camera Drape, 7&#8221; x 96&#8221;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">ESS-6920</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Universal Light Guide, 7.5 Ft</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">US.OU225</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Insufflator Tubing</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">TM-102</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Multipurpose Rigid Scope, 2.7mm x 187.5mm, 0 degree</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B30-0007-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Exam and Protective Sheath for 2.7mm x 187.5mm scope with one fixed stopcock</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B10-0025-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Rigid scope, 5mm x 300mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B30-0071-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Veress Needle, 2mm x 80mm&#160;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8302.08</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Solid Probe with Markings, 5mm x 320mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8383.661</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:441px;">Maryland Grasping and Dissecting Forceps with Double Action Ratchet Handle, 3.5mm x 240mm&#160;&#160;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8390.2054</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:441px;">Biopsy Forceps, 3.5mm X 310mm</td>
			<td style="width:248px;">R. Wolf</td>
			<td style="width:167px;">8391.4063</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Plastic Threaded Cannula with Insufflator Port, 3.5mm x 60mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.072</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Plastic Threaded Cannula with Insufflator Port, 5.5mm x 60mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8919.333</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Blunt Tip Trocar</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.101</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Pyramidal Tip Trocar</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.121</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:441px;">CO2</td>
			<td style="width:248px;">Airgas</td>
			<td style="width:167px;">CD USPE</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH30027FS</td>
			<td>with L-Glutamine</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">RNAlater Stabilization Solution</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AM7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Liberase TM Research Grade</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>5401119001</td>
			<td>Commercially available colleganse solution</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Dnase I from bovine pancrease</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">70 &#181;m cell strainers</td>
			<td style="width:248px;">Morganville Scientific</td>
			<td>CSS0200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">5mL Syringe</td>
			<td style="width:248px;">BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">50mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH3007003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">5mL Round-Bottom polystyrene tubes</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>14-959A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">PBS</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH3025601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">LIVE/DEAD Aqua Fixable Dead Cell Stain Kit</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>L34957</td>
			<td>Amine dead cell stain</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">CD45-PerCP (clone D058-1283)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>558411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">PE-CF594 Mouse anti-Hu CD3 (clone SP34-2)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>562406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">BV605 Mouse Anti-Hu CD4 (clone OKT4)</td>
			<td style="width:248px;">Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">APC-H7 Mouse anti-Hu CD8 (clone SK1)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>560179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">PE-Cy5 Mouse Anti-Hu CD20 (clone 2H7)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>555624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">BV786 Mouse Anti-Hu CD14 (clone M5E2)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>563698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">16% PARAFORMALDEHYDE AQ SOLUTN</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50-980-487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">LSR II Flow Cytometer</td>
			<td style="width:248px;">BD</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laparoscopic technique for serial collection of liver and mesenteric lymph nodes in macaques

בלוטות הלימפה mesenteric (MLN) ואת הכבד חשופים לחיידקים ומוצרים חיידקים ממערכת העיכול (GI), מה שהופך אותם ייחודית אימונולוגית. מערכת העיכול ואת MLN הקשורים הן באתרי התרבות הנגיף בשלב מוקדם וירוס הכשל החיסוני האנושי (HIV) זיהום ואת MLN אתרים המאגר חשוב להניח כי הנמל תאים נגועים רדום גם לאחר טיפול תרופתי ממושך (ART). הכבד הוכח לשחק תפקיד משמעותי תגובה חיסונית lentiviruses ומופיע לשחק תפקיד משמעותי אישור של וירוס ממחזור. הפרימאטים הלא-אנושיים (NHP) מודלים ל- HIV תסמונת הכשל החיסוני הנרכש (איידס) מחקה היבטים אלה של הידבקות ב- HIV ודגימה האורך סדרתי של האתרים העיקריים של שכפול נגיפי ואת התגובה החיסונית קשורה במודל זה יעזור להבהיר אירועים קריטיים זיהום, בפתוגנזה , ואת ההשפעה של אסטרטגיות התערבות שונות על אירועים אלה. currאף אוזן גרון שפורסם טכניקות לדגום בכבד MLN יחד לערב ניתוח גדול ו / או necropsy, אשר מגביל את היכולת לחקור אתרים חשובים אלה באופן סדרתי באותה חיה. תיארנו בעבר בטכניקה לפרוסקופית לאיסוף mln. כאן, אנו מתארים טכניקה לפרוסקופית זעירה-פולשנית, דגימה אורכת סדרה של כבד MLN דרך אותו בשני מיקומי יציאת נדרש לאיסוף mln. השימוש באותו שתי יציאות ממזער את ההשפעה על החיות כמו שום חתכים נוספים נדרשים. טכניקה זו יכולה לשמש עם תדר דגימה גדל לעומת ניתוח בטן גדול ומפחיתה הפוטנציאל לסיבוכים כירורגיים הקשורים לתגובות דלקתיות מקומיות מערכתיות שעלולות לסבך פרשנות של תוצאות. יש הליך זה פוטנציאל להקל מחקרים שכללו דגמים NHP תוך שיפור רווחת בעלי החיים.

שיטות מפורטות עיבוד של MLN שנאסף בגישה לפרוסקופית, כמו גם תשואות הסלולר, ותדרים לויקוציטים איברים אלה דווחו בעבר 13. איור 1 מציג נתוני תשואות כדאי הסלולר השוואת MLN ו ביופסיות כבדות נאספים בשתי נקודות זמן בנפרד 160 ימים משני מנהלים אזוריים נקבה בריאות באמצעות טכניקה לפרוסקופית זה. מצאנו כי התשואה הסלולר מן MLN היה גבוה משמעותית מן הכבד (P = 0.0021), עם ממוצע של 33.5 x 10 6 ו 6.74 x 10 6 תאים שהושג, בהתאמה. מכתים וניתוח תא המלח ידי cytometry הזרימה עולה כי&gt; 90% של תאים מבודדים איברים הן היו קיימא. באמצעות זרימת cytometry, אנו הערכנו ומשווים את השפע לויקוציטים הלימפוציטים MLN והכבד. ערכת gating נציג עבור הכבד מוצגת <strong&gt; איור 2, שבו אנו מגודרים ראשונים על תאים בודדים להוציא אגרגטים, ואחריו מבחר של תאי קיימא רק, אז בחירה של CD45 + תאים, ולבסוף CD3 + תאים. מתוך אוכלוסיית CD3 +, בדקנו שכיחותם של CD4 + ו- CD8 + T תאים, בעוד אנו הערכנו שכיחותם של CD14 + ו- CD20 + תאים מן האוכלוסיות CD3-. תזרים נציג cytometry חלק מראה CD45 + ו CD3 + אוכלוסיות מן MLN וכבד הוא בחיות בבית היום 0 ויום 160 מוצג באיור 3, בעוד איור 4 מציג שכיחותם לויקוציטים ו הלימפוציטים עבור שתי הדגימות של שתי החיות. MLN הראה משמעותי שכיחותם גבוהה של CD45 + תאים מאשר בכבד (בממוצע 76.9% ו 7.66% של תאי קיימא, בהתאמה, P = 0.0002). באופן לא מפתיע, MLN הראה פרופורציות גבוהות משמעותי של תאי CD3 + T (P0; 0.0001) ו- CD4 + T תאים (P = 0.0004). מנגד, הכבד הועשר משמעותית עבור CD14 + לויקוציטים בהשוואה MLN (P = 0.0036). MLN הראה ממוצע גבוה של תאי CD8 + T, אבל זה לא היה משמעותי. באופן מפתיע, עבור שתי החיות האלה הן האיברים הפגינו שכיחותם דומה של תאי CD20 + B. התשואות ואת שכיחותם הסלולר של תת לויקוציטים ו הלימפוציטים שונה MLN במחקר זה אשר שדווחו בעבר ערכים 23. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig1.jpg" /> איור 1. תשואה סלולר סה&quot;כ (למעלה) ואת כדאיות התא (למטה) מן סדרתי MLN נאסף כבד ביופסיות. MLN הראה משמעותי בתשואות תא גבוהות מזה של הכבד. עם זאת, שני סוגי מדגם סיפק תאים בשפע ניתוחים במורד הזרם. כדאיויות תא, הנמדדות על ידי הזרימה cytometrically באמצעות כתם אמין תא מת fixable, הראה כי סוגים מדגמים הוא בדרך כלל הניבו&gt; כדאיויות תא 90% לאחר ניתוק רקמה. ברי שגיאה מייצגים סטיית התקן בין דגימות. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig2.jpg" /> איור 2. נציגי cytometry זרימת אסטרטגית Gating. ראשית, תאים מצטברים נכללו, ואחריו מבחר של תאי קיימא רק לאחר מכתים באמצעות כתם אמין תא מת fixable. הבא, לויקוציטים CD45 + נבחרו, ואחריו מבחר של תאי CD3 + T. מתוך האוכלוסייה CD3 +, CD4 + ו- CD8 + T תאים נותחו. מתוך CD3 - אוכלוסייה, CD14 + ו- CD20 + תאים נותחו. תי<html> אסטרטגית gating ים גם שמשה עבור mln. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig3.jpg" /> איור 3. מגרשים cytometry זרימה מן MLN והכבד של שתי חיות Longitudinally. MLN ודגימות כבדות נאספו בנפרד 160 ימים הם חיות. (א). MLN CD45 + תאים (לויקוציטים); (B) הכבד CD45 + תאים (לויקוציטים); (ג) MLN + CD3 + תאים (תאי T); (ד) כבד CD3 + תאים (תאי T). הן אצל בעלי החיים, את MLN הראה פרופורציות גבוהות של CD45 + ו CD3 + תאים לעומת הכבד. מעבר זמן, התדרים של אוכלוסיות אלה היו דומים בשתי החיות.s / ftp_upload / 55,617 / 55617fig3large.jpg&quot; target = &#39;_ blank&#39;&gt; אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig4.jpg" /> איור 4. תדרים של CD45 + תאים (משמאל) ליקוציט שונה לימפוציטים subpopulations (מימין) מול 23 דגימה בודדת. MLNs מוצג תדר גדול המשמעותי של CD45 +, CD3 +, ו CD4 + תאים, בעוד הכבד הראה תדרים גדולים יותר באופן משמעותי של לויקוציטים CD14 +, הוכיח את הפונקציות הייחודיות של כל איבר. ברי שגיאה מייצגים סטיית התקן בין דגימות. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques at JoVE.com

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

כאן, אנו מתארים טכניקה לפרוסקופית זעיר-פולשנית, דגימה סדרתי של הכבד וקשרי הלימפה mesenteric (MLN) ב קופי המאפשר תדר הדגימה גדל, ומפחית פוטנציאל לסיבוכים כירורגיים בהשוואה ביצוע פיום.

טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים Mesenteric הלימפה קופי מקוק

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

טכניקה של Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הכבד זלוף לאחסון, ההערכה, ותיקון שתלי כבד שולי

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

איסוף והפקת DNA רוק לסידור הדור הבא

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

בתדירות גבוהה אולטראסאונד הדמיה של בלוטות לימפה עכבר צוואר הרחם

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Intraoperative Gastroscopy for Tumor Localization in Laparoscopic Surgery for Gastric Adenocarcinoma

גסטרוסקופיה Intraoperative עבור לוקליזציה גידול בכירורגיה לפרוסקופית עבור אדנוקרצינומה קיבה

Determining resection margins for gastric cancer, which are not exposed to the serosal surface of the stomach, is the most important procedure during ...

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

צנתור לטווח ארוך של טרונק לימפה במעי וגביית הלימפה חזירים ילודים

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

לפרוסקופ שמאל רדיקלי ריתה לסרטן הלבלב: אסטרטגיה כירורגית טכניקה וידאו

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

מורנה דיוק-גזור פרוסות הכבד כמודל Vivo Ex של ביולוגיה של הכבד

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

ניתוח ציתום זרימה של תת-סטים של תאים חיסוניים בתוך הטחול מורין, מח העצם, בלוטות הלימפה ורקמות Synovial במודל דלקת מפרקים ניוונית

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Laparoscopic Pancreatoduodenectomy for Pancreatic Cancer Using In-Situ No-Touch Isolation Technique

Laparoscopic Pancreatoduodenectomy for Pancreatic Cancer Using In-Situ No-Touch Isolation Technique

כריתת לבלב לפרוסקופית לסרטן הלבלב באמצעות טכניקת בידוד ללא מגע ממוקד

Laparoscopic pancreatoduodenectomy (LPD) is a standard radical operation for pancreatic head malignant tumors by now. Due to the complex laparoscopic ...

Laparoscopic Non-Mesh Cerclage Pectopexy for Pelvic Organ Prolapse

פקטוקסיה לפרוסקופית ללא רשת לצניחת איברי האגן

Pelvic organ prolapse (POP) is widespread among the female population and significantly impairs the patient's quality of life. It is important to restore ...