Name: laparoscopic technique for serial collection of liver and mesenteric lymph nodes in macaques
Uploaded: 2017-05-02T15:00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques at JoVE.com

Эта работа была поддержана номер гранта P51OD010425 NIH.

<ol>
	<li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cells:+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis.">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14 (3), 141-153 (2014).</li><li>Jacobs, J. P., Braun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+genetic+gardening+of+the+intestinal+microbiome.">Immune and genetic gardening of the intestinal microbiome.</a> FEBS Lett. 588 (22), 4102-4111 (2014).</li><li>Macpherson, A. J., Smith, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+lymph+nodes+at+the+center+of+immune+anatomy.">Mesenteric lymph nodes at the center of immune anatomy.</a> J Exp Med. 203 (3), 497-500 (2006).</li><li>Vaikunthanathan, T., Safinia, N., Lombardi, G., Lechler, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota,+immunity+and+the+liver.">Microbiota, immunity and the liver.</a> Immunol Lett. 171, 36-49 (2016).</li><li>Macpherson, A. J., Heikenwalder, M., Ganal-Vonarburg, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Liver+at+the+Nexus+of+Host-Microbial+Interactions.">The Liver at the Nexus of Host-Microbial Interactions.</a> Cell Host Microbe. 20 (5), 561-571 (2016).</li><li>Shuai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+immunity+in+the+liver.">Adaptive immunity in the liver.</a> Cell Mol Immunol. 13 (3), 354-368 (2016).</li><li>Chun, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+HIV+in+gut-associated+lymphoid+tissue+despite+long-term+antiretroviral+therapy.">Persistence of HIV in gut-associated lymphoid tissue despite long-term antiretroviral therapy.</a> J Infect Dis. 197 (5), 714-720 (2008).</li><li>Horiike, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+nodes+harbor+viral+reservoirs+that+cause+rebound+of+plasma+viremia+in+SIV-infected+macaques+upon+cessation+of+combined+antiretroviral+therapy.">Lymph nodes harbor viral reservoirs that cause rebound of plasma viremia in SIV-infected macaques upon cessation of combined antiretroviral therapy.</a> Virology. 423 (2), 107-118 (2012).</li><li>North, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+sanctuaries+during+highly+active+antiretroviral+therapy+in+a+nonhuman+primate+model+for+AIDS.">Viral sanctuaries during highly active antiretroviral therapy in a nonhuman primate model for AIDS.</a> J Virol. 84 (6), 2913-2922 (2010).</li><li>Xu, H., Wang, X., Lackner, A. A., Veazey, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+down-regulation+and+functional+impairment+of+SIV-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+in+lymphoid+and+mucosal+tissues+during+SIV+infection.">CD8 down-regulation and functional impairment of SIV-specific cytotoxic T lymphocytes in lymphoid and mucosal tissues during SIV infection.</a> J Leukoc Biol. 93 (6), 943-950 (2013).</li><li>Zhang, L., Dailey, P. J., Gettie, A., Blanchard, J., Ho, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Liver+Is+a+Major+Organ+for+Clearing+Simian+Immunodeficiency+Virus+in+Rhesus+Monkeys.">The Liver Is a Major Organ for Clearing Simian Immunodeficiency Virus in Rhesus Monkeys.</a> Journal of Virology. 76 (10), 5271-5273 (2002).</li><li>Dillon, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+altered+intestinal+mucosal+microbiome+in+HIV-1+infection+is+associated+with+mucosal+and+systemic+immune+activation+and+endotoxemia.">An altered intestinal mucosal microbiome in HIV-1 infection is associated with mucosal and systemic immune activation and endotoxemia.</a> Mucosal Immunol. 7 (4), 983-994 (2014).</li><li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection.">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199 (8), 1177-1185 (2009).</li><li>Sandler, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+levels+of+soluble+CD14+independently+predict+mortality+in+HIV+infection.">Plasma levels of soluble CD14 independently predict mortality in HIV infection.</a> J Infect Dis. 203 (6), 780-790 (2011).</li><li>Klase, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysbiotic+bacteria+translocate+in+progressive+SIV+infection.">Dysbiotic bacteria translocate in progressive SIV infection.</a> Mucosal Immunol. 8 (5), 1009-1020 (2015).</li><li>Evans, T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIV-induced+Translocation+of+Bacterial+Products+in+the+Liver+Mobilizes+Myeloid+Dendritic+and+Natural+Killer+Cells+Associated+With+Liver+Damage.">SIV-induced Translocation of Bacterial Products in the Liver Mobilizes Myeloid Dendritic and Natural Killer Cells Associated With Liver Damage.</a> J Infect Dis. 213 (3), 361-369 (2016).</li><li>Fish, R., Danneman, P. J., Brown, M., Karas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. 2 edn. , (2011).</li><li>Flecknell, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Animal Anaesthesia. 3 edn. , (2009).</li><li>Tranquilli, W. J., Thurnom, J. C., Grimm, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lumb and Jones' Veterinary Anesthesia and Analgesia. , (2007).</li><li>Ford, R. B., Mazzaferro, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Kirk and Bistner's Handbook of Veterinary Procedures and Emergency Treatment. 9 edn. , (2012).</li><li>Fransson, B. A., Mayhew, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Small Animal Laparoscopy and Thoracoscopy. , (2015).</li><li>Hensley-McBain, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Fecal+Microbial+Transplantation+on+Microbiome+and+Immunity+in+Simian+Immunodeficiency+Virus-Infected+Macaques.">Effects of Fecal Microbial Transplantation on Microbiome and Immunity in Simian Immunodeficiency Virus-Infected Macaques.</a> J Virol. 90 (10), 4981-4989 (2016).</li><li>Smedley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+Technique+for+Serial+Collection+of+Para-Colonic,+Left+Colic,+and+Inferior+Mesenteric+Lymph+Nodes+in+Macaques.">Laparoscopic Technique for Serial Collection of Para-Colonic, Left Colic, and Inferior Mesenteric Lymph Nodes in Macaques.</a> PLoS One. 11 (6), 0157535 (2016).</li><li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-chain+fatty+acids+induce+both+effector+and+regulatory+T+cells+by+suppression+of+histone+deacetylases+and+regulation+of+the+mTOR-S6K+pathway.">Short-chain fatty acids induce both effector and regulatory T cells by suppression of histone deacetylases and regulation of the mTOR-S6K pathway.</a> Mucosal Immunol. 8 (1), 80-93 (2015).</li><li>Ziegler-Heitbrock, H. W., Ulevitch, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD14:+cell+surface+receptor+and+differentiation+marker.">CD14: cell surface receptor and differentiation marker.</a> Immunol Today. 14 (3), 121-125 (1993).</li><li>Brenchley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection.">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12 (12), 1365-1371 (2006).</li></ol>

Авторы заявляют нет конкурирующих финансовых интересов.

Здесь мы демонстрируем минимально инвазивный метод для последовательного сбора МЛН и биопсии печени, которые имели показатель успеха 100% в этих и других животных, не описанных в данном исследовании. Кроме того, использование этого метода на одних и тех же животных во времени не было связано с какими-либо побочными эффектами. В самом деле, не было никаких осложнений в результате использования этой методики в других когорт животных, которые были инфицированы ВИО, обезьяний / вируса иммунодефицита человека (SHIV) или вируса Зика (неопубликованные данные). Кроме того, эта операция оказалась успешной, даже у животных, которые ранее подверглись крупной абдоминальной хирургии, а также в животных с тромбоцитопенией (неопубликованные данные). Мы показали, что эти образцы могут быть собраны через те же два порта путем изменения местоположения камеры при переключении из MLN в печени избежать необходимости в дополнительных надрезов. Факторы , влияющие на сбор МЛН уже сообщалось ранее 13. <pкласс = «jove_content»&gt; До четырех сборников 3 МЛН и 3 биопсии печени каждого был проведен во время на отдельных животное без осложнений, изменения в показателях успеха, или изменения в собранных данные. Кроме того, эта лапароскопической техники коллекция / печени МЛН успешно сочетать с другими процедурами, такими, как сбор периферических лимфоузлов, эндоскопических верхних и нижних биопсий GI, аспирации костного мозга, спинномозговой сбора жидкости и венепункции в то же анестезирующего случае позволяющей обширной оценки вирусологические и иммунологические реакции в последовательной манере (неопубликованные данные). Вся процедура обычно занимает 30 - 45 минут, чтобы закончить и осуществляется через два ~ 0,5 см надрезы. У тучных животных, это может быть необходимо, чтобы сделать больший разрез (~ 1 - 1,5 см), чтобы восстановить MLN через и может потребоваться дополнительное время для завершения. Животные с большим мезентериального жира часто требует значительного опыта в гifferentiate МЛН из окружающего жира. МЛН часто встречаются вдоль мезентериальных сосудов и, как представляется, более распространены вблизи точек ветвления в сосудах. Одним из важнейших аспектов этого метода является то, что она требует выбранный MLN, чтобы иметь достаточную подвижность в брыжейки, чтобы быть выводили через разрез брюшной стенки. В результате, этот метод не может быть использован для сбора МЛН близко к корню брыжейки. В связи с увеличением, это в разы легче идентифицировать МЛН с камерой, и захватывая в непосредственной близости от МЛН может помочь с расположением и идентификации узла после его выводили. Использование положения Тренделенбурга не всегда может потребоваться для сбора МЛН, и если МЛН могут быть легко получены без использования позиции Тренделенбурга это может сделать биопсию печени легче, поскольку это позволит предотвратить органы от смещения краниально. Время от времени, после размещения в Тренделенбурга положение, печень смещается вверх к диафрагме и должен<html> аккуратно манипулируют в исходное положение до сбора биопсии. По мере того как порт для размещения коллекции MLN находится слева, биопсия печени, как правило, взята из левой боковой и левой медиальной доли печени, поскольку они находятся ближе к канюле. Собранные МЛН и биопсия печени при условии, урожаев широких клеток для различных последующих анализов и показала высокую жизнеспособность собранных клеток. Здесь клетки окрашивали для проточной цитометрии анализа лейкоцитов и лимфоцитов населения, а также основные различия между этими двумя важными иммунными органами были выяснены. Например, МЛН были высоко обогащены CD4 + Т - клетки по сравнению с печенью из - за важность MLN в качестве центральных точек для сбора и распространения адаптивных иммунных ответов, а также на важность CD4 + T для управления воспалительными и толерогенные ответы на среду антигенов, полученные из пищевого рациона и GI-резидентов микроорганизмовs = &quot;Xref&quot;&gt; 24. Тем не менее, печень была значительно обогащенные для CD14 + лейкоцитов по сравнению с MLN. CD14 экспрессируется преимущественно на моноцитах и макрофагах и является ключевым компонентом рецепторного комплекса для бактериального липополисахарида (LPS) 25. Действительно, увеличение плазменной концентрации растворимого CD14 связаны с микробной транслокации и активации иммунной системы у ВИЧ и SIV патогенных инфекций 26. Таким образом, более высокие частоты CD14 + лейкоциты в печени , вероятно , является результатом большей бактериальной нагрузки в этом органе по сравнению с MLN. Здесь мы демонстрируем быстрое и минимально инвазивной хирургической техники для последовательного сбора МЛН и биопсии печени, используя только две небольшие надрезы для лапароскопической записи, не привело к каким-либо неблагоприятных последствий. Эти образцы обеспечивают полезный путь для оценки ключевых процессов иммунологических, вирусологических и микробиологических, которые берут пнулисе в MLN и печени, которые являются отдельными и уникальными от системного иммунитета. Точно так же, биопсия печени имеет решающее значение для долгосрочной оценки последствий ВИЧ / SIV, лекарственной терапии, и транслокаций микробов, которые часто объединяются , чтобы вызвать существенное повреждение печени 16. Кроме того, поскольку МЛН печень и иммунные органы подвержены желудочно-кишечный микробиоценоз, способность оценивать иммунитет в этих органах через время обеспечивает отличную платформу для понимания той роли, которую играет микробиом в поддержании иммунного гомеостаза хозяина. Взятые вместе, оценка печени и МЛН имеет важное значение в контексте вакцин и терапевтических эффективностей, SIV вирусного клиренса резервуара и общего иммунитета слизистых оболочек. Возможность сбора этих образцов с помощью минимально инвазивного подхода означает, что существует меньший риск воспаления, связанные с процедурой, чем существует в настоящее время опубликованных методик и меньшим воздействием на физиологии животных. В фуры, мы будем оценивать потенциал, чтобы объединить коллекцию МЛН и печени с коллекцией селезенки через те же два места порта, чтобы обеспечить выборки другой важной и отдельной части иммунной системы, которая, как было показано, чтобы играть важную роль в ряд моделей заболеваний.

Желудочно - кишечный тракт (ЖКТ) является самой большой поверхностью слизистой оболочки тела и подвергается воздействию множества антигенов , полученных из пищи, патогенов и эндосимбиотических бактериальных сообществ , обычно упоминается как микробиом 1, 2. Брыжеечные лимфатические узлы (MLN) выравнивают желудочно-кишечный тракт и являются основным местом иммунной функции для стимулирования или воспалительные реакций толерогенных в направлении этих разнообразных антигенов. Физическая организация МЛН создает разобщенную систему , которая может реагировать на антигены локально , не вызывая системные реакции 3. Кроме того , кровь из водостоков GI тракта к печени путем воротной вены перед возвращением в оборот, и, таким образом , подвергается воздействию микробов и микробных продуктов , которые перемещал из желудочно - кишечного тракта в собственной пластинке слизистой оболочки и введенными в кровоток 4. Печени также функционирует в качестве вторичного лимфоидного органа ай имеет большое количество иммунных клеток, в том числе специализированных макрофагов, чтобы удалить микробы транслоцируется 5, 6. Таким образом, МЛН и печень являются основными иммунные органы подвергаются воздействию синантропных и патогенных бактерий из желудочно-кишечного тракта, а также среда антигенов из других источников, что делает их уникальными и важными с иммунологической точки зрения. МЛН критические участки для оценки вирусологических и иммунологических эффектов вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) или патогенной обезьяний вирус иммунодефицита (SIV) инфекции, и, вероятно, участвуют в начале распространения ВИО следующего ректального вызова. Gut-ассоциированной лимфоидной ткани , как известно, является основным местом постоянной репликации ВИЧ, несмотря на эффективный контроль виремии современными антиретровирусной терапии (АРТ) 7. В SIV моделей инфекции, МЛН были показаны, являются важными резервуарами латентного вируса и могутбыть первичным резервуаром 8, 9. Печени также имеет важное значение в лентивирусов инфекции, о чем свидетельствует накопление SIV специфических CD8 + Т - клеток в печени макак во время острой инфекции SIV 10. Кроме того, она является основным органом , ответственным за очистку вируса из обращения 11. ВИЧ и SIV - инфекции связаны с измененной GI микробиоты, нарушена целостность эпителия ЖКТ и повышение транслокации микробов и микробных продуктов из толстой кишки на периферию и обращения 12, 13. Эти процессы связаны с местной и системной активацией иммунной системы , а также повышенная заболеваемость и смертность у ВИЧ - инфицированные индивидуумов 14. В SIV - инфекции, транслоцируются бактерия была обнаружена в MLN 15, в то время как накопление микрофонаrobial продукты в печени было показано , что приводит к воспалению и повреждению органа 16. Таким образом, в контексте ВИЧ и SIV инфекций, то МЛН и печень могут быть весьма информативными для понимания воспалительных процессов, работающих на GI-резидентах бактерий. Здесь мы представляем минимально инвазивной лапароскопической техники для последовательного отбора проб MLN и печени в отличных от человека приматов (NHPS). Показано, успешное выполнение этой методики на двух здоровых женщин макак (СУР), отбор проб каждого животного два раза, с 160 дней между каждой операцией. Мы продолжаем использовать эти образцы для оценки и сравнения ключевых лейкоцитов и лимфоцитов в популяции каждого органа с помощью проточной цитометрии, и демонстрируют весьма последовательные данные между двумя временными точками.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1395">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Artficial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">97-890-8152</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Priority Care Chlorhexidine 2% Scrub</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-842-6153</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Vedco Alcohol, Isopropyl 70%</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-869-6434</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Vedco Vetadine Scrub</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-869-6772</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Hospira Lactated Ringer&#39;s 250 ml</td>
			<td style="width:248px;">Patterson Veterinary</td>
			<td style="width:167px;">07-800-9325</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Adolescent Laparotomy Surgical Drape</td>
			<td style="width:248px;">Medline</td>
			<td style="width:167px;">DYNJP3004</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Access 40 L Insufflator</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">7205832</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">300XL Xenon Light Source</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">7206084</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">460P 3 &#8211; CCD Digital Camera with Head</td>
			<td style="width:248px;">Dyonics</td>
			<td style="width:167px;">72200086</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Universal Camera Drape, 7&#8221; x 96&#8221;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">ESS-6920</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Universal Light Guide, 7.5 Ft</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">US.OU225</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Insufflator Tubing</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">TM-102</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Multipurpose Rigid Scope, 2.7mm x 187.5mm, 0 degree</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B30-0007-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Exam and Protective Sheath for 2.7mm x 187.5mm scope with one fixed stopcock</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B10-0025-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Rigid scope, 5mm x 300mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">B30-0071-00</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Veress Needle, 2mm x 80mm&#160;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8302.08</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Solid Probe with Markings, 5mm x 320mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8383.661</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:441px;">Maryland Grasping and Dissecting Forceps with Double Action Ratchet Handle, 3.5mm x 240mm&#160;&#160;</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8390.2054</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="29">
			<td height="29" style="height:29px;width:441px;">Biopsy Forceps, 3.5mm X 310mm</td>
			<td style="width:248px;">R. Wolf</td>
			<td style="width:167px;">8391.4063</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Plastic Threaded Cannula with Insufflator Port, 3.5mm x 60mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.072</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Plastic Threaded Cannula with Insufflator Port, 5.5mm x 60mm</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8919.333</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Blunt Tip Trocar</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.101</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:54px;width:441px;">Pyramidal Tip Trocar</td>
			<td style="width:248px;">Endoscopy Support Services</td>
			<td style="width:167px;">8903.121</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="31">
			<td height="31" style="height:31px;width:441px;">CO2</td>
			<td style="width:248px;">Airgas</td>
			<td style="width:167px;">CD USPE</td>
			<td style="width:539px;"></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH30027FS</td>
			<td>with L-Glutamine</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">RNAlater Stabilization Solution</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AM7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Liberase TM Research Grade</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>5401119001</td>
			<td>Commercially available colleganse solution</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Dnase I from bovine pancrease</td>
			<td style="width:248px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>D5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">70 &#181;m cell strainers</td>
			<td style="width:248px;">Morganville Scientific</td>
			<td>CSS0200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">5mL Syringe</td>
			<td style="width:248px;">BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">50mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH3007003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">5mL Round-Bottom polystyrene tubes</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>14-959A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">PBS</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>SH3025601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">LIVE/DEAD Aqua Fixable Dead Cell Stain Kit</td>
			<td style="width:248px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td>L34957</td>
			<td>Amine dead cell stain</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">CD45-PerCP (clone D058-1283)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>558411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">PE-CF594 Mouse anti-Hu CD3 (clone SP34-2)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>562406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">BV605 Mouse Anti-Hu CD4 (clone OKT4)</td>
			<td style="width:248px;">Biolegend</td>
			<td>317438</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">APC-H7 Mouse anti-Hu CD8 (clone SK1)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>560179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">PE-Cy5 Mouse Anti-Hu CD20 (clone 2H7)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>555624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">BV786 Mouse Anti-Hu CD14 (clone M5E2)</td>
			<td style="width:248px;">BD Biosciences</td>
			<td>563698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;">16% PARAFORMALDEHYDE AQ SOLUTN</td>
			<td style="width:248px;">Fisher Scientific</td>
			<td>50-980-487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:441px;">LSR II Flow Cytometer</td>
			<td style="width:248px;">BD</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laparoscopic technique for serial collection of liver and mesenteric lymph nodes in macaques

В брыжеечных лимфатических узлов (MLN) и печень подвергаются воздействию микробов и микробных продуктов из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), что делает их уникальными иммунологически. Желудочно-кишечный тракт и связанные с ними МЛН сайты ранней вирусной репликации в вирусе иммунодефицита человека (ВИЧ) инфекции и МЛН вероятно важные участки пласта, которые укрывают латентно инфицированные клетки даже после длительной антиретровирусной терапии (АРТ). Печени были показаны, играют важную роль в иммунной реакции на лентивирусы и, как представляется, играют важную роль в оформлении вируса из обращения. Приматы (NHP) модель для ВИЧ и синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) точно имитировать эти аспекты ВИЧ-инфекцию и последовательной продольной выборку первичных участков вирусной репликации и связанные с иммунными ответами в этой модели поможет выяснить важные события в инфекции, патогенез , а также влияние различных стратегий вмешательства на эти события. Теклор опубликованных методов образец печени и МЛН вместе включают основные операции и / или аутопсию, что ограничивает возможность исследовать эти важные сайты в последовательном режиме в том же животном. Ранее мы описали лапароскопический метод для сбора МЛН. Здесь мы описываем минимально инвазивную лапароскопическую технику для последовательной продольной выборки печени и MLN через те же двух мест портов, необходимых для сбора MLN. Использование одних и тех же двух портов сводит к минимуму воздействие на животных, так как не требуется никаких дополнительных разрезов. Эта методика может быть использована с повышенной частотой дискретизации по сравнению с основной абдоминальной хирургией и уменьшает потенциал для хирургических осложнений и связанная с ними местными и системными воспалительными реакциями, которые могли бы осложнить интерпретацию результатов. Эта процедура имеет потенциал для облегчения исследований с участием моделей NHP при одновременном повышении благосостояния животных.

Подробные методы обработки собранных лапароскопии MLN, а также клеточные выходы и частота лейкоцитов в этих органах были ранее сообщались , 13. На рисунке 1 показаны данные сотовой урожайности и жизнеспособности , сравнивающие MLN и биопсии печени , собранных в двух временных точках 160 дней за исключением двух здоровых женщин RMs с использованием этой лапароскопической техники. Мы обнаружили , что клеточный выход из MLN была значительно выше , чем из печени (р = 0,0021), в среднем 33,5 х 10 6 и 6,74 × 10 6 клеток , полученных, соответственно. Мертвые клетки Окрашивание и анализ методом проточной цитометрии показали, что&gt; 90% клеток, выделенных из обоих органов были жизнеспособными. С помощью проточной цитометрии, мы оценили и сравнили обилие лейкоцитов и лимфоцитов в MLN и печени. Представитель схемы стробирования для печени показана на <strong&gt; На рисунке 2, где мы впервые закрытого типа на отдельные клетки , чтобы исключить агрегаты, с последующим отбором только жизнеспособных клеток, а затем выбор из CD45 + клеток, и , наконец , CD3 + клеток. Из популяции CD3 +, мы оценивали распространенность CD4 + и CD8 + Т - клетки, в то время как мы оценивали содержания из CD14 + и CD20 + клеток из CD3- популяций. Представитель проточной цитометрии участков , показывающих CD45 + и CD3 + популяцию из MLN и печень обоих животных в день 0 и дня 160 показаны на рисунке 3, а на рисунке 4 показаны лейкоциты и лимфоциты содержаний для двух выборок два животных. МЛН показали значительно более высокие изобилие CD45 + клеток , чем делали печень ( в среднем 76,9% и 7,66% жизнеспособных клеток соответственно, P = 0,0002). Не удивительно, что МЛН показали значительно более высокие пропорции CD3 + Т - клеток (P0; 0,0001) и CD4 + Т - клетки (P = 0,0004). И наоборот, печень была значительно обогащенные для CD14 + лейкоцитов по сравнению с MLN (P = 0,0036). МЛН показали более высокие средний CD8 + Т - клеток, но это не было статистически значимым. Удивительно, но для этих двух животных оба органа продемонстрировал сходные содержания клеток CD20 + В. Клеточные выходы и содержания различных лейкоцитов и субпопуляции лимфоцитов из MLN в этом исследовании подтвердило ранее сообщались значение 23. <img alt="Рисунок 1" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig1.jpg" /> Рисунок 1. Общая Клеточная Выход (вверху) и Жизнеспособность клеток (снизу) от Серийно Собранный MLN и печени Биопсию. МЛН показали значительно более высокие урожаи клеток, чем делали печень. Тем не менее, оба образца типа представлены широкие ячейки для последующих анализов. Жизнеспособность клеток, измеренный методом cytom потокаetrically с использованием фиксируемых мертвые клетки амина пятно, показал, что оба образца типа, как правило, получали&gt; 90% жизнеспособность клеток после диссоциации ткани. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение между образцами. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig1large.jpg" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig1large.jpg" target="_blank">чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a> <img alt="фигура 2" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig2.jpg" /> Рисунок 2. Представитель проточной цитометрии Gating стратегии. Во-первых, агрегированные клетки были исключены, с последующим отбором только жизнеспособных клеток после окрашивания с использованием фиксируемых мертвых клеток амина пятно. Далее, CD45 + лейкоциты были выбраны, с последующим отбором CD3 + Т - клеток. Из популяции CD3 +, анализировали CD4 + и CD8 + Т - клетки. Из CD3 - населения, CD14 + и CD20 + клетки анализировали. Thi<html> s стратегия стробирования была также использована для МЛН. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig2large.jpg" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig2large.jpg" target="_blank">чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a> <img alt="Рисунок 3" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig3.jpg" /> Рисунок 3. Поток цитометрии участки из MLN и печени двух животных Продольно. МЛН и образцы печени были собраны 160 дней друг от друга для обоих животных. (А). МЛН CD45 + клетки (лейкоциты); (Б) Печень CD45 + клетки (лейкоциты); (С) МЛН + CD3 + клеток (Т - клетки); (D) Печень клеток CD3 + (Т - клетки). Для обоих животных, то МЛН показали более высокие пропорции CD45 + и CD3 + клеток по сравнению с печенью. Через время, частоты этих популяций были одинаковы для обоих животных.s / ftp_upload / 55617 / 55617fig3large.jpg»целевых =„_blank“&gt; Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры. <img alt="Рисунок 4" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig4.jpg" /> Рисунок 4. Частоты CD45 + клетки (слева) и различные лейкоцитарные и субпопуляции (справа) Через 23 индивидуальных выборок. В MLNs отображаются значительно большие частоты CD45 +, CD3 +, и CD4 + клеток, в то время как печень показали значительно более высокие частоты CD14 + лейкоцитов, демонстрируя уникальные функции каждого органа. Столбики ошибок представляют стандартное отклонение между образцами. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig4large.jpg" target="_blank">нажмите здесь</a> , <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig4large.jpg" target="_blank">чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques at JoVE.com

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

Здесь мы описываем минимально инвазивной лапароскопической техники для последовательного отбора проб печени и брыжеечных лимфатических узлов (MLN) в макак, что позволяет увеличить частоту дискретизации, и уменьшает потенциал для хирургических осложнений, по сравнению с выполнением лапаротомии.

Лапароскопическая Техника для последовательного Сборнике печени и мезентериальных лимфоузлов макак

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Методика Subnormothermic<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Печень перфузии для хранения, оценки и Ремонт окраинных печени трансплантатов

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Сбор и Добыча слюны ДНК к следующей последовательности поколения

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

Высокочастотный ультразвуковой визуализации мыши шейных лимфатических узлов

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Intraoperative Gastroscopy for Tumor Localization in Laparoscopic Surgery for Gastric Adenocarcinoma

Интраоперационная Гастроскопия для локализации опухоли в лапароскопической хирургии для аденокарциномы желудка

Determining resection margins for gastric cancer, which are not exposed to the serosal surface of the stomach, is the most important procedure during ...

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

Долгосрочное Катетеризация Кишечные лимфы Магистральные и коллекции лимфы в неонатальных Свиней

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Лапароскопическая радикальная левая пантомиика для рака поджелудочной железы: Хирургическая стратегия и техника Видео

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Murine Точность Cut печени фрагменты, как Ex Vivo Модель печени биологии

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Цитометрия потока Анализ подмножества иммунных клеток в murine spleen, костном мозге, лимфатических узлах и синовиальной ткани в модели остеоартрита

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Laparoscopic Pancreatoduodenectomy for Pancreatic Cancer Using In-Situ No-Touch Isolation Technique

Laparoscopic Pancreatoduodenectomy for Pancreatic Cancer Using In-Situ No-Touch Isolation Technique

Лапароскопическая панкреатодуоденэктомия при раке поджелудочной железы с использованием метода бесконтактной изоляции in situ

Laparoscopic pancreatoduodenectomy (LPD) is a standard radical operation for pancreatic head malignant tumors by now. Due to the complex laparoscopic ...

Laparoscopic Non-Mesh Cerclage Pectopexy for Pelvic Organ Prolapse

Лапароскопическая несетчатая пектопексия серкляжа при пролапсе тазовых органов

Pelvic organ prolapse (POP) is widespread among the female population and significantly impairs the patient's quality of life. It is important to restore ...