Name: electrophysiological method for whole-cell voltage clamp recordings from drosophila photoreceptors
Uploaded: 2017-06-13T13:00:00
Duration: 10 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Electrophysiological Method for Whole-cell Voltage Clamp Recordings from Drosophila Photoreceptors at JoVE.com

وقد حظي الجزء التجريبي من هذا البحث بدعم من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم الوطنية الأميركية-الإسرائيلية (بم و إيل)، ومؤسسة العلوم الإسرائيلية (إيسف)، و بروجيكتوكوبيراتيون ديوتسش (ديب) (إلى بم)، و بيوتيشنولوغي ومجلس بحوث العلوم البيولوجية (أرقام منحة ببسرك: بب / M007006 / 1 و بب / D007585 / 1) إلى رش

<ol>
	<li>Hardie, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+recordings+of+the+light+induced+current+in+dissociated+Drosophila+photoreceptors:+evidence+for+feedback+by+calcium+permeating+the+light-sensitive+channels.">Whole-cell recordings of the light induced current in dissociated Drosophila photoreceptors: evidence for feedback by calcium permeating the light-sensitive channels.</a> Proc. R. Soc. Lond. B. 245, 203-210 (1991).</li><li>Ranganathan, R., Harris, G. L., Stevens, C. F., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+mutant+defective+in+extracellular+calcium-+dependent+photoreceptor+deactivation+and+rapid+desensitization.">A Drosophila mutant defective in extracellular calcium- dependent photoreceptor deactivation and rapid desensitization.</a> Nature. 354, 230-232 (1991).</li><li>Martin, J. H., Benzer, S., Rudnicka, M., Miller, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calphotin:+a+Drosophila+photoreceptor+cell+calcium-binding+protein.">Calphotin: a Drosophila photoreceptor cell calcium-binding protein.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90 (4), 1531-1535 (1993).</li><li>Weiss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+and+Ca2++buffering+are+essential+for+prevention+of+light-induced+retinal+degeneration.">Compartmentalization and Ca2+ buffering are essential for prevention of light-induced retinal degeneration.</a> J Neurosci. 32 (42), 14696-14708 (2012).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+activation,+adaptation,+and+cell+survival+functions+of+the+Na+++/Ca+2++exchanger+CalX.">Light activation, adaptation, and cell survival functions of the Na + /Ca 2+ exchanger CalX.</a> Neuron. 45 (3), 367-378 (2005).</li><li>Weckstrom, M., Hardie, R. C., Laughlin, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-activated+potassium+channels+in+blowfly+photoreceptors+and+their+role+in+light+adaptation.">Voltage-activated potassium channels in blowfly photoreceptors and their role in light adaptation.</a> J. Physiol. Lond. 440, (1991).</li><li>Frolov, R. V., Immonen, E. V., Weckstr&#246;m, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+blue-+and+green-sensitive+photoreceptors+of+the+cricket+Gryllus+bimaculatus.">Performance of blue- and green-sensitive photoreceptors of the cricket Gryllus bimaculatus.</a> J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 200 (3), 209-219 (2014).</li><li>Nasi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+clamp+of+dissociated+photoreceptors+from+the+eye+of+Lima+scabra.">Whole-cell clamp of dissociated photoreceptors from the eye of Lima scabra.</a> J Gen Physiol. 97 (1), 35-54 (1991).</li><li>Nasi, E., Gomez, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-activated+ion+channels+in+solitary+photoreceptors+of+the+scallop+Pecten+irradians.">Light-activated ion channels in solitary photoreceptors of the scallop Pecten irradians.</a> J. Gen. Physiol. 99, 747-769 (1992).</li><li>Hardie, R. C., Peretz, A., Pollock, J. A., Minke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca+2++limits+the+development+of+the+light+response+in+Drosophila+photoreceptors.">Ca 2+ limits the development of the light response in Drosophila photoreceptors.</a> Proc. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 252, 223-229 (1993).</li><li>Kohn, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Cooperation+between+the+IP3+Receptor+and+Phospholipase+C+Secures+the+High+Sensitivity+to+Light+of+Drosophila+Photoreceptors+In+Vivo.">Functional Cooperation between the IP3 Receptor and Phospholipase C Secures the High Sensitivity to Light of Drosophila Photoreceptors In Vivo.</a> J Neurosci. 35 (6), 2530-2546 (2015).</li><li>Hevers, W., Hardie, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+modulates+the+voltage+dependence+of+delayed+rectifier+and+Shaker+potassium+channels+in+Drosophila+photoreceptors.">Serotonin modulates the voltage dependence of delayed rectifier and Shaker potassium channels in Drosophila photoreceptors.</a> Neuron. 14 (4), 845-856 (1995).</li><li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity.">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li><li>Henderson, S. R., Reuss, H., Hardie, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+photon+responses+in+Drosophila+photoreceptors+and+their+regulation+by+Ca+2.">Single photon responses in Drosophila photoreceptors and their regulation by Ca 2.</a> J. Physiol. Lond. 524 (Pt 1), 179-194 (2000).</li><li>Scott, K., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assembly+of+the+Drosophila+phototransduction+cascade+into+a+signalling+complex+shapes+elementary+responses.">Assembly of the Drosophila phototransduction cascade into a signalling complex shapes elementary responses.</a> Nature. 395 (6704), 805-808 (1998).</li><li>Elia, N., Frechter, S., Gedi, Y., Minke, B., Selinger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excess+of+G+betae+over+G+qalphae+in+vivo+prevents+dark,+spontaneous+activity+of+Drosophila+photoreceptors.">Excess of G betae over G qalphae in vivo prevents dark, spontaneous activity of Drosophila photoreceptors.</a> J. Cell Biol. 171 (3), 517-526 (2005).</li><li>Katz, B., Minke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipase+C-Mediated+Suppression+of+Dark+Noise+Enables+Single-Photon+Detection+in+Drosophila+Photoreceptors.">Phospholipase C-Mediated Suppression of Dark Noise Enables Single-Photon Detection in Drosophila Photoreceptors.</a> J. Neurosci. 32 (8), 2722-2733 (2012).</li><li>Hardie, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+amplification+in+Drosophila+phototransduction.+Roles+for+G+protein,+phospholipase+C,+and+diacylglycerol+kinase.">Molecular basis of amplification in Drosophila phototransduction. Roles for G protein, phospholipase C, and diacylglycerol kinase.</a> Neuron. 36 (4), 689-701 (2002).</li><li>Reuss, H., Mojet, M. H., Chyb, S., Hardie, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+the+Drosophila+light-sensitive+channels,+TRP+and+TRPL.">In vivo analysis of the Drosophila light-sensitive channels, TRP and TRPL.</a> Neuron. 19, 1249-1259 (1997).</li><li>Liu, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+identification+and+manipulation+of+the+Ca+2++selectivity+filter+in+the+Drosophila+transient+receptor+potential+channel.">In vivo identification and manipulation of the Ca 2+ selectivity filter in the Drosophila transient receptor potential channel.</a> J. Neurosci. 27 (3), 604-615 (2007).</li><li>Ahmad, S. T., Natochin, M., Barren, B., Artemyev, N. O., O'Tousa, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterologous+expression+of+bovine+rhodopsin+in+Drosophila+photoreceptor+cells.">Heterologous expression of bovine rhodopsin in Drosophila photoreceptor cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47 (9), 3722-3728 (2006).</li><li>Scott, K., Sun, Y., Beckingham, K., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calmodulin+regulation+of+Drosophila+light-activated+channels+and+receptor+function+mediates+termination+of+the+light+response+in+vivo.">Calmodulin regulation of Drosophila light-activated channels and receptor function mediates termination of the light response in vivo.</a> Cell. 91 (3), 375-383 (1997).</li><li>Liu, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca+2++-dependent+metarhodopsin+inactivation+mediated+by+calmodulin+and+NINAC+myosin+III.">Ca 2+ -dependent metarhodopsin inactivation mediated by calmodulin and NINAC myosin III.</a> Neuron. 59 (5), 778-789 (2008).</li><li>Cook, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipase+C+and+termination+of+G-protein-mediated+signalling+in+vivo.">Phospholipase C and termination of G-protein-mediated signalling in vivo.</a> Nat. Cell Biol. 2 (5), 296-301 (2000).</li><li>Hardie, R. C., Franze, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photomechanical+responses+in+Drosophila+photoreceptors.">Photomechanical responses in Drosophila photoreceptors.</a> Science. 338 (6104), 260-263 (2012).</li><li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+TRP+channels+by+protons+and+phosphoinositide+depletion+in+Drosophila+photoreceptors.">Activation of TRP channels by protons and phosphoinositide depletion in Drosophila photoreceptors.</a> Curr. Biol. 20 (3), 189-197 (2010).</li><li>Minke, B., Wu, C. F., Pak, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+light-induce+response+of+the+central+retinular+cells+from+the+electroretinogram+of+Drosophila.">Isolation of light-induce response of the central retinular cells from the electroretinogram of Drosophila.</a> J. Comp. Physiol. 98, 345-355 (1975).</li><li>Hardie, R. C., Minke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+trp+gene+is+essential+for+a+light-activated+Ca2++channel+in+Drosophila+photoreceptors.">The trp gene is essential for a light-activated Ca2+ channel in Drosophila photoreceptors.</a> Neuron. 8, 643-651 (1992).</li><li>Niemeyer, B. A., Suzuki, E., Scott, K., Jalink, K., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+light-activated+conductance+is+composed+of+the+two+channels+TRP+and+TRPL.">The Drosophila light-activated conductance is composed of the two channels TRP and TRPL.</a> Cell. 85 (5), 651-659 (1996).</li><li>Huber, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transient+receptor+potential+protein+(Trp),+a+putative+store-+operated+Ca+2++channel+essential+for+phosphoinositide-mediated+photoreception,+forms+a+signaling+complex+with+NorpA,+InaC+and+InaD.">The transient receptor potential protein (Trp), a putative store- operated Ca 2+ channel essential for phosphoinositide-mediated photoreception, forms a signaling complex with NorpA, InaC and InaD.</a> EMBO J. 15 (24), 7036-7045 (1996).</li><li>Shieh, B. H., Niemeyer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+protein+encoded+by+the+InaD+gene+regulates+recovery+of+visual+transduction+in+Drosophila.">A novel protein encoded by the InaD gene regulates recovery of visual transduction in Drosophila.</a> Neuron. 14 (1), 201-210 (1995).</li><li>Tsunoda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multivalent+PDZ-domain+protein+assembles+signalling+complexes+in+a+G-protein-coupled+cascade.">A multivalent PDZ-domain protein assembles signalling complexes in a G-protein-coupled cascade.</a> Nature. 388 (6639), 243-249 (1997).</li><li>Tsacopoulos, M., Veuthey, A. L., Saravelos, S. G., Perrottet, P., Tsoupras, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+cells+transform+glucose+to+alanine,+which+fuels+the+neurons+in+the+honeybee+retina.">Glial cells transform glucose to alanine, which fuels the neurons in the honeybee retina.</a> J. Neurosci. 14 (3 Pt 1), 1339-1351 (1994).</li><li>Hardie, R. C., Minke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+activation+of+light-sensitive+channels+in+Drosophila+photoreceptors.">Spontaneous activation of light-sensitive channels in Drosophila photoreceptors.</a> J. Gen. Physiol. 103, 389-407 (1994).</li><li>Agam, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+stress+reversibly+activates+the+Drosophila+light-sensitive+channels+TRP+and+TRPL+in+vivo.">Metabolic stress reversibly activates the Drosophila light-sensitive channels TRP and TRPL in vivo.</a> J Neurosci. 20 (15), 5748-5755 (2000).</li><li>Agam, K., Frechter, S., Minke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+Drosophila+TRP+and+TRPL+channels+requires+both+Ca2++and+protein+dephosphorylation.">Activation of the Drosophila TRP and TRPL channels requires both Ca2+ and protein dephosphorylation.</a> Cell Calcium. 35 (2), 87-105 (2004).</li><li>Delgado, R., Mu&#241;oz, Y., Pe&#241;a-Cort&#233;s, H., Giavalisco, P., Bacigalupo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diacylglycerol+activates+the+light-dependent+channel+TRP+in+the+photosensitive+microvilli+of+Drosophila+melanogaster+photoreceptors.">Diacylglycerol activates the light-dependent channel TRP in the photosensitive microvilli of Drosophila melanogaster photoreceptors.</a> J Neurosci. 34 (19), 6679-6686 (2014).</li><li>Parnas, M., Katz, B., Minke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+channel+block+by+Ca2++underlies+the+voltage+dependence+of+Drosophila+TRPL+channel.">Open channel block by Ca2+ underlies the voltage dependence of Drosophila TRPL channel.</a> J. Gen. Physiol. 129 (1), 17-28 (2007).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

تطبيق التسجيلات خلية كاملة ل D. ميلانوغاستر المستقبلات الضوئية يسمح لاكتشاف والوظيفي توضيح بروتينات التشوير الجديدة، مثل قنوات ترب 27 ، 28 ، 29 و إيناد 30 ، 31 ، 32 بروتين سقالة. من أي وقت مضى منذ إدخال الأولي لهذه التقنية، فإنه مكن من حل المسائل الأساسية على المدى الطويل فيما يتعلق بالآلية الأيونية والجهد الاعتماد على استجابة الضوء. حدث هذا بسبب القدرة الممنوحة على التحكم بدقة في الجهد الغشاء وخارج الخلية وتكوين الأيونية داخل الخلايا 19 ، 28 . وكانت عقبة رئيسية من تقنية لقط التصحيح في D. ميلانوغاستر هشاشة معزولة أوماتيديبا بريباحصة. وقد كشفت الدراسات التفصيلية أن سلامة الآلات فوتوترانسكتيون يعتمد بشكل حاد على العرض المستمر من أتب، وخصوصا أثناء التعرض للضوء، الأمر الذي يؤدي إلى استهلاك كبير من أتب. لسوء الحظ، والشريط الميكانيكية للخلايا الصباغ ( أي الدبقية)، وهو مطلوب للوصول إلى غشاء مبصرة مع ماصة التصحيح، ويزيل المصدر الرئيسي من الأيضات اللازمة لإنتاج أتب 33 . تطبيق أتب خارجي في ماصة تسجيل يستوفي جزئيا فقط متطلبات لكميات كبيرة من أتب. نقص المعروض من أتب يؤدي إلى تفعيل عفوية للقنوات ترب وإلى تفكك الآلات فوتوترانسكتيون من القنوات تنشيط الضوء، مما تسبب في زيادة كبيرة في كا 2 الخلوية + وإلغاء الاستجابة الطبيعية للضوء 34 ، 35 . هذا التسلسل من الأحداث ليس بسبب الضرر منمستقبلات ضوئية من خلال إجراء تشريح، ولكن بدلا من استنفاد الخلوية من أتب. لمنع هذا التسلسل من الأحداث من حدوث والحفاظ على استجابات الضوء الطبيعي، لا ينبغي أن تتعرض مستقبلات ضوئية لأضواء مكثفة، والتي تستهلك كميات كبيرة من أتب. أيضا، ناد يجب أن تدرج في ماصة تسجيل، ويفترض لتسهيل إنتاج أتب في الميتوكوندريا 18 ، 36 . لقياسات العفوية والكمية المطبات، وصعوبة أعلاه هو الحد الأدنى لأن فقط أضواء خافتة تستخدم. في الممارسة العملية، يمكن الحفاظ على تسجيل خلية كاملة مستقرة لمدة ~ 20-25 دقيقة، على الرغم من أن هناك ميل لحركية الاستجابة لإبطاء خلال هذه الفترة. قد يبقى إعداد واحد من أوماتيديا انفصال قابلة للحياة لمدة تصل إلى 2 ساعة. وهناك عيب إضافي في إعداد أوماتيديا معزولة هو عدم إمكانية الوصول إلى ميكروفيلي، مما يترجم إلى عدم إمكانية الوصول إلى ترب وقنوات تربل إلى ماصة تسجيل، ومنع التسجيلات قناة واحدة. وباستخدام طريقة طوروها، نجح باسيغالوبو وزملاؤه في تسجيل نشاط قناة واحدة مباشرة من ربدومير 37 . ومع ذلك، يختلف هذا النشاط قناة من تلك القنوات تربل أعرب متغايرة في خلايا زراعة الأنسجة 38 ومن النشاط قناة ترب المستمدة من تحليل الضوضاء النار التي تم الحصول عليها من أوماتيديا معزولة 34 . ويفترض أن إجراء تشريح تضررت كثيرا الخلايا مبصرة عند استخدام هذا الأسلوب.

وقد وضعت الدراسات الوراثية واسعة من ذبابة الفاكهة، ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر ( D. ميلانوغاستر) ، التي بدأت منذ أكثر من 100 سنة، D. ميلانوغاستر يطير كنموذج تجريبي مفيد للغاية للتشريح الجيني للعمليات البيولوجية المعقدة. المنهجية الموصوفة أدناه يجمع بين القوة المتراكمة لل D. ميلانوغاستر الوراثة الجزيئية مع نسبة الإشارة إلى الضوضاء عالية من كامل خلية التصحيح المشبك التسجيلات. هذا الجمع يسمح لدراسة D. ميلانوغاستر فوتوترانزدكتيون كنموذج للإشارة إينوزيتول والدهون وتنظيم قناة ترب وتنشيط، سواء في البيئة الأصلية وعلى أعلى دقة من جزيئات واحدة. تطبيق طريقة تسجيل الخلية بأكملها إلى D. مستقبلات ميلانوغاستر قد أحدثت ثورة في دراسة فوتوترانزكتيون اللافقاريات. وقد تم تطوير هذه الطريقة من قبل هاردي 1 و إندبفي نهاية المطاف من قبل رانغاناثان وزملاؤه قبل 2 ~ 26 عاما، وكان يهدف إلى استغلال أدوات التلاعب الوراثي واسعة من D. ميلانوغاستر واستخدامها للكشف عن آليات فوتوترانزكتيون وإشارة الأينوزيتول والدهون. في البداية، عانت هذه التقنية من انخفاض سريع في حساسية الضوء وانخفاض العائد من أوماتيديا أثناء عملية تشريح، مما منع الدراسات الكمية مفصلة. في وقت لاحق، إضافة أتب و ناد إلى ماصة التصحيح زيادة كبيرة في ملاءمة إعداد للتسجيلات الكمية لفترات طويلة. وبعد ذلك، تم توصيف واسع النطاق لآلية تنبيغ الإشارة على المستوى الجزيئي. حاليا، D. ميلانوغاستر فوتوترانسكتيون هو واحد من عدد قليل من النظم التي فوسفوانوسيتيد إشارات وقنوات ترب يمكن دراستها خارج الجسم الحي في قرار جزيء واحد. وهذا يجعل D. ميلانوغاستر فوتروترانزكتيون و ليثودولوغي وضعت لدراسة هذه الآلية نظام نموذج حساس للغاية. يصف هذا البروتوكول كيفية تشريح الشبكية ميلانوغاستر و ميكانيكالي قطاع أوماتيديا معزولة من الصباغ المحيطة (الدبقية) الخلايا. وهذا يتيح تشكيل الختم جيغا وكامل خلية التصحيح المشبك على الهيئات الخلية مبصرة. لحسن الحظ، فإن معظم بروتينات التشوير تقتصر على ربدومير ولا تنتشر. بالإضافة إلى ذلك، هناك كا 2 + عازلة عازلة غير قابلة للحركة دعا كالفوتين، وتقع بين مقصورة الإشارات وجسم الخلية 3 ، 4 ، ومستوى التعبير عالية من نا + / كا 2 + مبادل (كالكه) في ميكروفيلي 5 . معا، حبس البروتين إلى رابدومير، العازلة كالفوتين، والتعبير عالية من كالك تسمح لفترة طويلة نسبيا ( أي ما يصل إلى ~ 20 دقيقة) تسجيلات خلية كاملة، دون فقدان المكونات الأساسيةمن عملية فوتوترانسكتيون مع الحفاظ على حساسية عالية للضوء. يصف البروتوكول التالي كيفية الحصول على أوماتيديا معزولة وأداء التسجيلات خلية كاملة التي تظهر للحفاظ على الخصائص الأصلية للتسلسل فوتوترانزدكتيون. تم إجراء التجارب كاملة المشبك خلية التصحيح على صرصور فصل ( بيريبلانيتا أميريكانا ) 6 والكريكيت ( غريلوس بيماكولاتوس ) 7 أوماتيديا على نحو مماثل لتلك التي وصفها D. ميلانوغاستر . بالإضافة إلى ذلك، تم إجراء التجارب المشبك التصحيح على مستقبلات ضوئية فصل من البطلينوس الملف، ( ليما سكابرا ) والاسكالوب ( بكتن إراديانز ) بطريقة مختلفة قليلا عن تلك التي أجريت على D. ميلانوغاستر ، مما يسمح لكل خلية كاملة 8 وقياسات قناة واحدة 9 - هنا، وصفت الإنجازات الرئيسية التي تم الحصول عليها في D. ميلانوغاستر باستخدام هذه التقنية. المناقشة طيصف وصف بعض المزالق والقيود المفروضة على هذه التقنية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1363">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;width:292px;">10 ml syringe</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td style="width:309px;"></td>
			<td style="width:508px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">5 ml syringe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">1 ml syringe with elongated tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Petri dish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="left">60 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Silicone dissection dish/block</td>
			<td align="left">Dow Corning</td>
			<td align="left">Sylguard 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td align="left">Throughly mix both components, pour into mould and cure for 2 hours at 60&#7506;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Syringe filters</td>
			<td align="left">Millex</td>
			<td></td>
			<td align="left">22 &#181;m PVDF filter&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Capillaries (for omatidia separation)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="left">Glass, 1.2 x 0.68 mm (~7.5 cm each)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Polyethylene Tubing</td>
			<td align="left">Becton Dickinson</td>
			<td></td>
			<td align="left">1.57 x 1.14 mm (35 cm)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">&#160;2 small beakers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="left">50 ml or less</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">2 paraffin film sheets</td>
			<td align="left">Parafilm M</td>
			<td></td>
			<td align="left">~5 x 5 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Bath chamber</td>
			<td align="left">home made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Cover slips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="left">22 x 22 mm No. 0</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Paraplast Plus</td>
			<td align="left">Sigma</td>
			<td align="left">Paraffin &#8211; polyisobutylene mixture</td>
			<td align="left">To glue the coverslip onto the bottom of the bath chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Ground</td>
			<td align="left">Warner Instruments&#160;</td>
			<td align="left">64-1288</td>
			<td align="left">Hybrid Assembly Ag-AgCl Wire Assembly</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Headless micro dissection needle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="left">Entomology, 12 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Micro dissecting needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Vise</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">2 fine tweezers + 1 rough tweezers</td>
			<td></td>
			<td align="left">Dumont #5, Biology&#160;</td>
			<td align="left">0.05 x 0.02 mm, length 110 mm, Inox</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Stereoscopic zoom Microscope&#160;</td>
			<td align="left">Nikon</td>
			<td align="left">SMZ-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Cold light source</td>
			<td align="left">Schott</td>
			<td align="left">KL1500 LCD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Filter (Color) for cold light source</td>
			<td align="left">Schott</td>
			<td align="left">RG620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Delicate wipers</td>
			<td align="left">Kimtech</td>
			<td></td>
			<td align="left">Kimwipes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Electrode holder</td>
			<td align="left">Warner Instruments</td>
			<td align="left">QSW-T10P</td>
			<td align="left">Q series Holders compatible with Axon amplifiers, straight body style</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Silver Wire</td>
			<td align="left">Warner Instruments</td>
			<td></td>
			<td align="left">0.25 mm diameter, needs to be chloridized</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Micromanipulator</td>
			<td align="left">Sutter Instruments</td>
			<td align="left">MP 85</td>
			<td align="left">Huxley-Wall Style Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Faraday cage</td>
			<td align="left">home made</td>
			<td></td>
			<td align="left">Electromagnetic noise shielding and black front curtain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Anti-vibration Table</td>
			<td align="left">Newport</td>
			<td align="left">VW-3036-OPT-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Osilloscope</td>
			<td align="left">GW</td>
			<td align="left">GOS-622G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Perfusion system</td>
			<td align="left">Warner Instruments</td>
			<td align="left">VC-8P</td>
			<td align="left">Pinch valve control system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Perfusion valve controller</td>
			<td align="left">Scientific instruments</td>
			<td align="left">BPS-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td align="left" height="20" style="height:20px;">Suction system</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Amplifier</td>
			<td align="left">Molecular Device</td>
			<td align="left">Axopatch-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Head-stage</td>
			<td align="left">Molecular Device</td>
			<td align="left">CV - 4</td>
			<td align="left">Gain: x 1/100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">A/D converter</td>
			<td align="left">Molecular Device</td>
			<td align="left">Digidata 1440A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Clampex</td>
			<td align="left">Molecular Device</td>
			<td dir="LTR">10</td>
			<td align="left">software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">pCLAMP</td>
			<td align="left">Molecular Device</td>
			<td>10</td>
			<td align="left">software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Light source (Xenon Arc lamp)</td>
			<td align="left">Sutter Instruments</td>
			<td align="left">Lambda LS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Light detector</td>
			<td align="left">home made</td>
			<td></td>
			<td align="left">phototransistor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Filter wheel and shutter controller</td>
			<td align="left">Sutter Instruments</td>
			<td align="left">Lambda 10-2 with a Uniblitz shutter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Filters (Natural density filter)</td>
			<td align="left">Chroma</td>
			<td align="left">6,5,4,3,2,1,0.5,0.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Filter (Color)</td>
			<td align="left">Schott</td>
			<td align="left">OG590, Edge filter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Xenon Flash Lamp system</td>
			<td align="left">Dr. Rapp OptoElecftronic</td>
			<td align="left">JML-C2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Light guide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="left">Quartz&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Pulse generator</td>
			<td align="left">AMPI</td>
			<td align="left">Master 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Microscope</td>
			<td align="left">Olympus</td>
			<td align="left">IX71, Inverted</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Red illumination filter (Microscope)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="left">RG630 / RG645 &#248;45mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Microscope objective</td>
			<td align="left">Olympus</td>
			<td align="left">X60/0.9 UplanFL N air or X60/1.25 UplanFI oil</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">CCD Camera</td>
			<td align="left">Andor</td>
			<td align="left">iXon DU885K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">NIS Element&#160;</td>
			<td align="left">Nikon</td>
			<td align="left">AR</td>
			<td align="left">software</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td align="left" height="24" style="height:24px;">Ca+2 indicator</td>
			<td align="left">Invitrogen</td>
			<td align="left">Calcium green 5N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Excitation &#38; emission filters and dichroic mirror</td>
			<td align="left">Chroma</td>
			<td align="left">19002 - AT - GFP/FITC Longpass set</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Vertical pipette puller</td>
			<td align="left">Narishige&#160;</td>
			<td align="left">Model PP83</td>
			<td align="left">Use either vertical or horizontal puller, as preferred.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Horizontal pipette puller</td>
			<td align="left">Sutter Instrument&#160;</td>
			<td align="left">Model P-1000 Flaming/Brown Micropipette Puller</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Filament</td>
			<td align="left">Sutter Instrument</td>
			<td></td>
			<td align="left">3 mm trough or square box</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Capillaries</td>
			<td align="left">Harvard Apparatus</td>
			<td align="left">borosilicate glass capillaries</td>
			<td align="left">1 x 0.58 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

electrophysiological method for whole-cell voltage clamp recordings from drosophila photoreceptors

وقد سجلت ثنائيات التسجيلات المشعة ذات الجهد الكامل من مستشعرات ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة ثورة في مجال التنغيم البصري اللافقاري، مما مكن من استخدام علم الوراثة الجزيئي ميلانوغاستر لدراسة قنوات التشفير الدهني للأنوزيتول وقنوات المستقبلات المؤقتة (ترب) على مستوى الجزيء الواحد. وقد اتقن حفنة من المختبرات هذه التقنية القوية، والتي تمكن من تحليل الاستجابات الفسيولوجية للضوء في ظل ظروف عالية التحكم. هذه التقنية تسمح للسيطرة على وسائل الإعلام داخل الخلايا وخارج الخلية. الغشاء الجهد؛ والتطبيق السريع للمركبات الدوائية، مثل مجموعة متنوعة من المؤشرات الأيونية أو الرقم الهيدروجيني، إلى وسائل الإعلام داخل وخارج الخلية. مع ارتفاع نسبة إشارة إلى الضوضاء بشكل استثنائي، وهذا الأسلوب يتيح قياس الظلام عفوية والتيارات التي يسببها ضوء التيتانيوم ( أي المطبات العفوية والكمية) والميكروسكوبية التي يسببها التيارات الخفيفة (ليك) من الخطيئةغل D. ميلانوغاستر فوتوريبتورس. ويوضح هذا البروتوكول، بتفصيل كبير، جميع الخطوات الرئيسية اللازمة لأداء هذه التقنية، والذي يتضمن كل من التسجيلات الكهربية والبصرية. ويصف الإجراء تشريح الشبكية ذبابة لتحقيق سليمة وقابلة للحياة خارج الجسم الحي معزولة أوماتيديا في غرفة حمام. كما يتم تفصيل المعدات اللازمة لأداء كامل الخلية والقياسات التصوير مضان أيضا. وأخيرا، يتم شرح المزالق في استخدام هذا التحضير الدقيق خلال التجارب الموسعة.

وقد مكنت الطريقة الموصوفة التسجيل الدقيق للتيارات الوحدوية الأساسية التي تولد العوامات الكمونية عفوية وخفيفة أثارت، والذي جمع لإنتاج استجابة العيانية للضوء، في ظل ظروف محددة. كما سمحت المقارنة بين ويلديب والذباب الطافرة التي لها عيوب في جزيئات الإشارات الحرجة ( الشكلان 3 و 5 ) 14 و 15 و 16 و 17 و 18 . وبالإضافة إلى ذلك، فإن القدرة على قياس إمكانات انعكاس تحت ظروف ثنائية الأيونية كشفت الخصائص الفيزيائية الحيوية الأساسية للقنوات ترب و ترب مثل (تربل) قنوات 18 ، 19 . كما مكنت من قياس آثار بدائل الأحماض الأمينية في منطقة المسام من ترب التي عدلت كا 2+نفاذية 20 . استجابة الضوء التي حصل عليها التصحيح المشبك خلية كاملة التسجيلات يعتمد خطيا على شدة الضوء على الأقل 4 أوامر من الحجم. هذا لا يمكن حلها باستخدام إرغ وطرق تسجيل الخلايا. وبناء على ذلك، كشفت سلسلة من الردود على ومضات موجزة من زيادة كثافة ومؤامرة من وظيفة استجابة شدة خطية صارمة من استجابة فلاش مع زيادة شدة الضوء. خطية صارمة يحمل ما لا يقل عن عدة مئات من با، ولكن من النقاش ما إذا كان بعد ذلك هو الخطية أو السيطرة المشبك الذي ينهار ( الشكل 6 ). وتشير هذه النتائج إلى أن الاستجابات العيانية للضوء هي عبارة عن توليف خطي للاستجابات الوحدوية للضوء ( أي المطبات الكمومية). وقد تم تأسيسها بشكل جيد باستخدام تسجيلات الجهد الذي ضوء خافت التحفيز إنديربط تقلبات الجهد منفصلة ( أي المطبات الكمومية) في معظم الأنواع اللافقارية. تنجم المطبات الكمومية D. ميلانوغاستر من افتتاح متزامن من ~ 15 قنوات ترب و ~ 2 قنوات تربل في ذروة عثرة 18 . يتم إنشاء كل عثرة من امتصاص فوتون واحد، في حين أن استجابة العيانية لأضواء أكثر كثافة هو جمع هذه الردود الأولية 14 ، 21 . المطبات تختلف اختلافا كبيرا في الكمون، والوقت بالطبع، والسعة، حتى عندما تكون ظروف التحفيز متطابقة. توليد عثرة هو عملية عشوائية وصفها إحصاءات بواسون، حيث أن كل استيعابها بشكل فعال الفوتون لا يسبب سوى عثرة واحدة. وتتطلب العلاقة بين الفوتون وحيدة العثرة أن كل خطوة في السلسلة لا تشمل آلية &quot;تشغيل&quot; فعالة فحسب، بل أيضا آلية فعالة &quot;منعطفة&quot;. الميزة الوظيفية هي إنتاج أفوتون حساسة جدا مع استجابة عابرة سريعة مناسبة تماما لكل من حساسية والقرار الزمني المطلوبة من قبل النظام البصري. يتم الكشف عن متطلبات آلية إيقاف التشغيل الفعالة عند فشل التصوير الضوئي النشط ( أي ميتارهودوبسين، M) أو هدفه، G q α، ويؤدي إلى الإنتاج المستمر للمطبات لفترة طويلة بعد إيقاف تشغيل الضوء ( الشكل 3 ) 15 ، 22 ، 23 ، 24 . عثرة يمثل النشاط التعاوني للقنوات ترب / تربل في ميكروفيلوس. وعلى هذا النحو، فإن أي فرضية لتفعيل القناة ينبغي أن تفسر أيضا تنشيط القناة التعاونية. في الآونة الأخيرة، وقد أثبتت هاردي وزملاؤه أن الضوء يثير تقلصات سريعة من مستقبلات ضوئية، مما يشير إلى أن ضوء الحساسيات(ترب / تربل) بوابات ميكانيكية 25 . هذا التنشيط الميكانيكي، جنبا إلى جنب مع البروتونات الملحوظة التي أطلقتها بلك بوساطة بيب 2 التحلل، وتعزيز فتح قنوات ترب / تربل وشرح الطبيعة التعاونية لإنتاج عثرة 26 . حاليا، D. مستقبلات ميلانوغاستر هي واحدة من عدد قليل من النظم التي فوسفوانوسيتيد إشارات وقنوات ترب يمكن دراستها في الجسم الحي ، مما يجعل D. ميلانوغاستر فوتوترانزدكتيون والمنهجية التي تم تطويرها لدراسة هذه الآلية نظام نموذج قيمة للغاية. <img alt="الشكل 3" src="/files/ftp_upload/55627/55627fig3.jpg" /> الشكل 3: إناك P209 و P215 إناد المسوخ تكشف استجابة بطيئة إنهاء الاستجابة المجهرية للضوء ومضخات الكم واحدة. ( A ) معزولة أوماتيديوم بريباحصص مع ماصة التصحيح مليئة الفلورسنت لوسيفر الأصفر تش صبغ (الإثارة: 430 نانومتر، الانبعاثات: 540 نانومتر) خلال تسجيل خلية كاملة. لاحظ أن صبغ الفلورسنت منتشر وصفت هيئة خلية مبصرة واحدة وأن الأجسام الخلية مبصرة منفصلة من محاور عصبية ممدود ولكن لا تزال تحافظ على الجدوى. هذا الإعداد هو مناسبة لتسجيلات خلية كاملة في وقت واحد والتجارب التصوير. (بد) الألواح العليا: الجهد خلية كاملة استجابات عثرة الكم فرضت على ضوء خافت المستمر (شريط مفتوح) في وت ، إناك P209 ، و إناد P215 الذباب متحولة. ويلاحظ إنهاء بطيء من المطبات في إناك P209 و إناد P215 المسوخ نسبة إلى الذباب وت . يعرض أدناه أقحم شكل مكبرة من المطبات واحدة. الألواح السفلية: سجلت الخلايا الكاملة المعيارية الاستجابات المجهرية المسجلة لنبضة ضوئية طولها 500 مللي ثانية (1.5 × 10 5 فوتونات لكل ثانية) من ويلديب أعلاه<html> والذباب الطافرة. (إغ) الألواح العليا: كامل خلية الجهد فرضت عثرة الكم الردود على موجزة (1 مللي ثانية)، ضوء خافت استحضار ردود فوتون واحد في ويلديب ، ar2 3 ، و نيناك P235 الذباب متحولة. لاحظ القطار من المطبات لوحظ في arm2 3 و نيناك P235 الذباب متحولة ردا على امتصاص الفوتون واحد. الألواح السفلية: الجهد الكلي خلية الجهد استجابات مقيدة إلى نبض الضوء مس 500 (1.5 × 10 4 فوتونات / ثانية) في المسوخ المقابلة. لاحظ بطء إنهاء الاستجابات العيانية التي لوحظت في ar2 3 و نيناك P235 متحولة الذباب نسبة إلى وت . <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55627/55627fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> d / 55627 / 55627fig4.jpg &quot;/&gt; الشكل 4: الخلوية كا 2 + ديناميات التالية يتأثر إشارة كا 2 + يتأثر تدفق كالفوتين. سلسلة زمنية من الصور مستقبلة للضوء من ويلديب و كين 1٪ الذباب تبين مضان مؤشر كا 2 + خلال التحفيز الضوء. يتم رسم الصور كثافة الخام باستخدام الترميز كاذبة اللون (شريط = 10 ميكرون؛ رؤوس السهام تشير ماصة). الشكل أعيد طبعه بإذن من فايس وآخرون. 4 - <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55627/55627fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 5" src="/files/ftp_upload/55627/55627fig5.jpg" /> الشكل 5: الخصائص الكهربية من وت، ترب، و تربل المسوخ. ( a ) كامل-- خلية الجهد المشبك ريكوردمس من المطبات الكمومية ردا على ضوء خافت المستمر (شريط مفتوح) في وت، ترب 302 ، و ترب P343 الذباب متحولة فارغة. لوحظت انخفاض كبير في السعة من ترب P34 3 المطبات. أقحم: تظهر المطبات الكم واحدة مكبرة من ويلديب و ترب P343 الذباب متحولة فارغة. ( B ) كامل خلية الجهد المشبك التسجيلات ردا على نبضة ضوء 3 ثانية من ويلديب والمسوخ المقابلة. ويلاحظ استجابة عابرة حالة مستقرة من طافرة P343 متحولة. أقحم: يتم عرض ردود الضوء مكبرة من وت و ترب P343 متحولة. ( C ) عائلة من التيارات التي يسببها ضوء فرضه من سلالات ذبابة أعلاه، أثارت ردا على نبض ضوء 20 مللي ثانية، في خطوات الجهد من 3 مف، وقياس حول احتمال انعكاس (E ريف). ( د ) رسم بياني يتآمر متوسط ​​E ريف ويلديب ومتان مختلفةالخبر. أشرطة الخطأ هي سيم احتمال انعكاس (E ريف) من وت بين E إيجابية من ترب 302 ، الذي يعبر فقط ترب، و E ريف طافرة P343 طافرة فارغة، والتي تعبر عن تربل فقط. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55627/55627fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 6" src="/files/ftp_upload/55627/55627fig6.jpg" /> الشكل 6: استجابة فلاش خطي بدقة مع زيادة كثافة الضوء. سلسلة من الاستجابات الحالية لمضات موجزة من زيادة شدة الضوء ومؤامرة من الاعتماد على اتساع الذروة من استجابة الضوء على زيادة شدة ومضات ضوء وجيزة. هذه العلاقة تكشف عن خطية صارمة بين الاستجابة فلاش وزيادة شدة الضوء. هذه الخطية الصارمةيحمل ما لا يقل عن عدة مئات من با، مع شدة الضوء التي تمتد على 4 أوامر من حيث الحجم، في حين أنه من المشكوك فيه ما إذا كان الخطية أو السيطرة المشبك الذي ينهار بعد ذلك. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55627/55627fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الرقم الهيدروجيني </td><td> 7.15 (ضبط مع هيدروكسيد الصوديوم) </td></tr><tr><td> الكاشف </td><td> تركيز (مم) </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> 120 </td></tr><tr><td> بوكل </td><td> 5 </td></tr><tr><td> مغكل 2 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> TES </td><td> 10 </td></tr><tr><td> البرولين </td><td> 25 </td></tr><tr><td> ألانين </td><td> 5 </td></tr><tr><td></td><td> مخزن في -20 درجة مئوية. </td></tr><tr><td colspan= &quot;2&quot;&gt; ملاحظة: هذا الحل هو اسميا كا 2 + مجانا ولكن ليس لديه كا 2+ المخازن المضافة وأضافت وبالتالي سيكون لها ما يقرب من 5-10 ميكرومتر تتبع كا 2 + . حل خارج الخلية (إس) = إس-0Ca 2+ مع 1.5 ملي كاكل 2 ، التي تتم عن طريق إضافة كاكل 2 من 0.5 أو 1 M حل الأسهم إس-0Ca 2+ . </td></tr></tbody></table> الجدول 1: كا + خالية من الحل خارج الخلية (إس). الوصف الكيميائي والكميات المحددة المطلوبة لإنتاج كا + خالية من إس. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> كمية </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 15 مل </td></tr><tr><td> سكر القصب </td><td> 1.5 جم </td></tr><tr><td colspan="2"> تقسيم إلى 150 قسامة ميكرولتر في 1.5 مل قارورة وتخزينها في -20 76، C. </td></tr><tr><td> حل تريتوراتيون (تيسي) </td><td> ملء 1 قارورة من 150 مل من محلول الأسهم مع 1،350 مل إس أو إس-0Ca 2+ ، لتتناسب مع الحل المستخدم أثناء تشريح. </td></tr></tbody></table> الجدول 2: مصل بقري الجنين (فبس) + السكروز - الحل الأسهم. وصف الكيميائية والكميات المحددة المطلوبة لإنتاج مصل الأبقار الجنين (فبس) + السكروز - حل المخزون. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الرقم الهيدروجيني </td><td> 7.15 (ضبط مع كوه) </td></tr><tr><td> الكاشف </td><td> تركيز (مم) </td></tr><tr><td> غلوكونات البوتاسيوم (كغلو) </td><td> 140 </td></tr><tr><td> مغكل 2 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> TES </td><td> 10 </td></tr><tr><td> ملح المغنيسيوم أتب (مغاتب) </td><td> 4 </td></tr><tr><td> ملح صوديوم غتب (نا 2 غتب) </td><td> 0.4 </td></tr><tr><td> β-نيكوتيناميد أدينين هيدروكيد الأدينين (ناد) </td><td> 1 </td></tr><tr><td></td><td> مخزن في -20 درجة مئوية. </td></tr></tbody></table> الجدول 3: الحل داخل الخلايا (IS1). الوصف الكيميائي والكميات المحددة المطلوبة لإنتاج IS1، والتي تستخدم في الغالب لاستجابة كثافة والقياسات عثرة الكم. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الرقم الهيدروجيني </td><td> 7.15 (ضبط مع سوه) </td></tr><tr><td> الكاشف </td><td> تركيز (مم) </td></tr><tr><td> CSCL </td><td> 120 </td></tr><tr><td> مغكل 2 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> TES </td><td> 10 </td></tr><tr><td> ملح المغنيسيوم أتب (مغاتب) </td><td> 4 </td></tr><tr><td> ملح صوديوم غتب (نا 2 غتب) </td><td> 0.4 </td></tr><tr><td> β-نيكوتيناميد أدينين هيدروكيد الأدينين (ناد) </td><td> 1 </td></tr><tr><td> تيترا-إيثيل-أمونيوم كلوريد (تاي) </td><td> 15 </td></tr><tr><td></td><td> مخزن في -20 درجة مئوية. </td></tr></tbody></table> الجدول 4: الحل داخل الخلايا (IS2). الوصف الكيميائي والكميات المحددة المطلوبة لإنتاج الحل IS2 داخل الخلايا، والذي يستخدم في الغالب لقياسات انعكاس المحتملة للتيار الناجم عن الضوء.

Watch this Scientific Journal Video about Electrophysiological Method for Whole-cell Voltage Clamp Recordings from Drosophila Photoreceptors at JoVE.com

Electrophysiological Method for Whole-cell Voltage Clamp Recordings from Drosophila Photoreceptors

تسجيلات خلية كاملة من مستقبلات ذبابة الفاكهة ميلانوغاستر تمكن من قياس المطبات السوداء العفوية، المطبات الكم، والاستجابات العيانية للضوء، والعلاقات الحالية الجهد في ظل ظروف مختلفة. في تركيبة مع D. ميلانوغاستر أدوات التلاعب الجيني، وهذه الطريقة تمكن من دراسة في كل مكان إينوزيتول الدهون مسار الإشارات وهدفها، وقناة ترب.

طريقة الكهربية لالكامل خلية الجهد المشبك تسجيلات من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; المستقبلات الضوئية

Whole-cell voltage clamp recordings from Drosophila melanogaster photoreceptors have revolutionized the field of invertebrate visual transduction, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrophysiological Method for Whole-cell Voltage Clamp Recordings from Drosophila Photoreceptors

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

تسجيلات الكهربية من الألياف المسار عملاق د. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Simultaneous Whole-cell Recordings from Photoreceptors and Second-order Neurons in an Amphibian Retinal Slice Preparation

في وقت واحد تسجيلات خلية كاملة من المستقبلات الضوئية والخلايا العصبية الدرجة الثانية في البرمائيات إعداد شريحة الشبكية

One of the central tasks in retinal neuroscience  is to understand the circuitry of retinal neurons and how those connections are  responsible for shaping ...

Whole Cell Patch Clamp for Investigating the Mechanisms of Infrared Neural Stimulation

كله المشبك التصحيح الخلايا لدراسة آليات التحفيز العصبية الأشعة تحت الحمراء

It has been  demonstrated in recent years that pulsed, infrared laser light can be used to  elicit electrical responses in neural tissue, independent of ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا الجنينية الزرد ماوتنر

Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; Labellar طعم الشعيرات

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings from Morphologically- and Neurochemically-identified Hippocampal Interneurons

خلية كاملة تسجيلات التصحيح، المشبك من Morphologically- وحددت Neurochemically-الحصين Interneurons

GABAergic inhibitory interneurons play a central role within neuronal circuits of the brain. Interneurons comprise a small subset of the neuronal ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

تقرن تسجيلات خلية كاملة في عضوي شرائح الحصين

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

الكهربية والمورفولوجية توصيف العصبية الحادة رقائق في الدماغ عن طريق شرائح الموثوقة التصحيح، المشبك التسجيلات

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings in Brain Slices

تسجيلات خلية كاملة التصحيح، المشبك في الدماغ شرائح

Whole-cell patch-clamp recording is an electrophysiological technique that allows the study of the&#160;electrical properties of a substantial part of the ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

الطريقة الكهربية لالردود تسجيل بين الخلايا الجهد ل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; خلايا مستقبلة للضوء وInterneurons إلى النور المحفزات<em&gt; في فيفو</em