Name: light sheet-based fluorescence microscopy of living or fixed and stained tribolium castaneum embryos
Uploaded: 2017-04-28T15:00:00
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Wir danken Sven Plath für den technischen Support. Die Glia-blau transgene Linie war ein freundliches Geschenk von Gregor Bucher (Göttingen, Deutschland). Die Forschung wurde von dem Exzellenzcluster Frankfurt am Main für Makromolekulare Komplexe (CEF-MC, EXC 115, Sprecher Volker Dötsch) teilweise zu Ehks am Buchmann-Institut für Molekulare Biowissenschaften (BMLS, Direktor Enrico Schleiff) an der Goethe gewährt finanziert Universität Frankfurt am Main von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG).

1. Haltung von Tribolium Cultures HINWEIS: Standardbedingungen werden als eine Inkubationstemperatur von 25 ° C und 70% relativer Luftfeuchtigkeit in einem 12 h definiert Hell / 12 h Dunkel-Zyklus. Weitere Informationen über die Tribolium Haltung, sind entsprechende Richtlinien 64 zur Verfügung. Dieses Protokoll erfordert zwei verschiedene Mehlbasis Medien, die in Kilogramm-Mengen und gespeichert für mehrere Monate vorbereitet werden kann. <ol>...

Qualitätskontrolle In Echtzeit- Bildgebung Assays, muss die Herstellung und Aufzeichnungsverfahren nicht-invasiv sein, dh weder die mechanische und chemische Behandlung (Sammlung, dechorionation, auf die Probenhaltermontage) noch die integrierte Energiebelastung während der Beobachtung sollte die Lebensfähigkeit der Probe beeinflussen. Für Studien, die WT Entwicklung zu charakterisieren, ist es nur die Verwendung von Daten aus Experimenten empfohlen, in denen de...

Die rote Mehlkäfer Tribolium castaneum, die von Schwarzkäfer (Tenebrionidae) zur großen Familie gehört, hat eine lange Geschichte in der Landwirtschaft und Lebenswissenschaften und ist die zweite am besten untersuchte Modell Insektenmodellorganismus nach der Fruchtfliege Drosophila melanogaster. In den letzten vier Jahrzehnten wurde es ein starker und beliebtes Insekt Modellorganismus in der Entwicklungsgenetik, in der evolutionären Entwicklungsbiologie und in den letzten zwanzig Jahren in der embryonalen Morphogenese für eine Vielzahl von Gründen: Drosophila und Tribolium gehören beide zur Holometabola, aber etwa 300.000.000 Jahre wichen vor 1, 2, 3, 4. Während die embryonale Entwicklung von Drosophila allgemein als hoch abgeleitet betrachtet wird, zeigt einen Tribolium Vorfahren Modus Entwicklung , die in einem deutlich größeren Anteil an Insektenart 5, 6, 7, 8, 9 zu finden ist. Erstens weist Tribolium nicht-involuted Kopfentwicklung, dh seine Mundwerkzeuge und Antennen entstehen bereits während der Embryonalentwicklung 10, 11, 12, 13, 14, 15. Zweitens folgt Tribolium die Prinzipien der Kurzkeimentwicklung, dh Abdominalsegmente 16 sind der Reihe nach von einer posterioren Wachstumszone während germband Dehnung hinzugefügt, 17, 18, 19. Drittens entwickelt Tribolium und später degradiertzwei extraembryonalen Membranen dh das Amnion, das nur den Embryo ventral abdeckt und der Serosa, die den Embryo vollständig einhüllt 20, 21, 22. Beide Membranen spielen eine entscheidende morphogenetischen 23 sowie Schutzfunktion gegen Mikroorganismen 24, 25 und Austrocknungs 26. Viertens sind die embryonal Entwicklungs Beine während des Larvenentwicklungsstadium voll funktionsfähig und dienen als Primor für den erwachsenen Beine während pupal Metamorphose 27, 28, 29, 30, 31. Aufgrund ihrer geringen Größe und bescheidenen Forderungen, Anbau von Tribolium im Labor ist recht unkompliziert. Kulturen von Wildtyp (WT) Stämme oder transgenen Linien besteht typischerweise von etwa 100-300 Erwachsenen und kann innerhalb von Ein-Liter - Glasflaschen (footprint 80 cm 2) gefüllt drei vor vier Zentimetern hoch (etwa 50 g) mit Wachstumsmedium gehalten werden , das aus Vollkornweizen besteht Mehl mit inaktiver Trockenhefe ergänzt. Eine Wasserversorgung ist nicht erforderlich. Auf diese Weise kann auch kleine Laboratorien Dutzende von Käfern Kulturen innerhalb kleinen oder mittelgroßen Handel erhältlich Insekten Inkubatoren zu halten. Späteren Entwicklungsstadien von Tribolium (Larven nach etwa der vierten Larvenstadium, Puppen und Adulte) leicht aus dem Wachstumsmedium durch Sieben getrennt. Synchronisierte Embryonen erhalten von Erwachsenen für eine kurze Zeit auf Eiablage Medium inkubiert. Für die schnelle Entwicklung, Käfer Kulturen werden bei 32 ° C (etwa vier Wochen pro Generation) gehalten, während der Lagerhaltung typischerweise bei 22 bis 25 ° C (etwa 10 Wochen pro Generation) durchgeführt wird. Innerhalb der letzten zehn Jahre, viele Standard-techniques wurden für Tribolium allmählich angepasst und optimiert, wie 32 in den Schwellenmodellorganismen Bücher zusammengefasst. Von großer Bedeutung sind genetische Methoden vorgeschoben , wie beispielsweise embryonale 33, Larven 34, 35 oder Eltern 36, 37 RNA - Interferenz-basierte Knock-Down, mit Keimbahn - Transformation entweder das 38 piggyBac, 39 oder dem Minos 40 Transposase - System und CRISPR / Cas9 basierter Genom Technik 41. Darüber hinaus hat der Tribolium Genom etwa ein Jahrzehnt 42 her sequenziert worden und ist nun in der dritten Runde der Genomanordnung 43 freizugeben, die 44 effizient und genomweite Identifikation und systematische Analyse von Genen ermöglicht , </sup&gt; oder andere Elemente genetische 45, 46. Darüber hinaus sind die Genome von vier anderen Coleoptera - Spezies für vergleichende genetische Ansätze 47, 48, 49, 50. In Verbindung mit dem sequenzierten Genom, zwei großen genetischen Analysen dh einen Insertionsmutagenese Bildschirm 51 und ein systematischen RNA - Interferenz basierenden Knock-Down - Bildschirm 52 durchgeführt wurden, 53. Fluoreszenz Echtzeit- Bildgebung mit Weitfeld-, konfokaler oder Lichtbogen-Basis - Mikroskopie (LSFM) ermöglicht die embryonale Morphologie von Tribolium als Funktion der Zeit (dh die Morphogenese) in einem mehrdimensionalen Kontext (Tabelle 1) zu beobachten. In Weitfeld- und konfokale Fluoreszenzmikroskopie, die excitation und Emissionslicht wird durch die gleiche Objektivlinse geführt wird. Bei beiden Ansätzen wird die gesamte Probe für jede aufgenommene zweidimensionale Ebene beleuchtet. Somit werden die Proben auf eine sehr hohe Energieniveaus ausgesetzt. In LSFM nur die Fluorophore in der Fokusebene sind auf eine Entkoppelung der Beleuchtung und Detektion angeregt durch Verwendung von zwei senkrecht zueinander angeordneten Objektivlinsen (Abbildung 1). LSFM kommt in zwei kanonische Implementierungen - die einzige Ebene Beleuchtungsmikroskop (SPIM) und das digitale abgetastete Laserlichtbogen basierende Fluoreszenzmikroskop (DSLM, Bild 2) - und bietet mehrere entscheidende Vorteile gegenüber traditionellen Herangehensweisen: (i) intrinsische optischen Schneidens fähig, (ii) ein gutes axiale Auflösung, (iii) stark reduzierter Gehalt an Photobleich, (iv) sehr geringe Phototoxizität, (v) hohe Signal-zu-Rausch-Verhältnis, (vi) relativ hohe Erfassungsgeschwindigkeit, (vii) -Bildgebung entlang mehrerer Richtungen und (viii) tiefere Gewebepenetration durch die Verwendung von niedrigeren numerischen Apertur Beleuchtungsobjektivlinsen 54, 55, 56. LSFM wird bereits in Tribolium zu dokumentieren fast den gesamten embryonalen Morphogenese 57 und zu analysieren , um die Prinzipien der extraembryonalen Membranruptur zu Beginn des Rückenverschlusses 23 erfolgreich eingesetzt. Um die Attraktivität der LSFM in der Tribolium Gemeinschaft und für Insekten Wissenschaft im Allgemeinen zu erhöhen, ist es von großer Bedeutung zu etablieren Standard - Betriebsverfahren und die Methoden, Protokolle und den Pool von Ressourcen auf ein Niveau zu verbessern , wo das Mikroskop ein wird die Einfachheit des -Nutzung Standardwerkzeug in der Entwicklungsbiologie Labors und die biologischen Fragen in den Mittelpunkt der Aufmerksamkeit bleiben. Dieses Protokoll beginnt mit den Grundlagen von Tribolium &lt;/ em&gt; Anbau, dh Wartung, Reproduktion und Embryo - Entnahme. Als nächstes werden zwei Versuchsstrategien dargestellt: (i) Echtzeit- Bildgebung von maßgeschneiderten transgenen Linien und (ii) Darstellung von festen Embryonen , die mit Fluoreszenzfarbstoffen (Tabelle 2) gefärbt wurden. (I) die Agarose - Säule, (ii) die Agarose Hemisphäre und (iii) der neuen Spinnweben Inhaber: Anschließend werden im Detail (Abbildung 3 und Tabelle 3) drei Befestigungstechniken mit leicht unterschiedlichen Zwecken erläutern. Das Protokoll erklärt dann den Einlesevorgang mit LSFM. Bildgebungsverfahren und wichtige Überlegungen skizziert. Schließlich wird Embryo Retrieval erklärt und Vorschläge für grundlegende Datenverarbeitung zur Verfügung gestellt werden. In den repräsentativen Ergebnissen, Livebilddaten von zwei neuartigen maßgefertigte und die Glia-blue 58 transgene Linien gezeigt sind und die jeweiligen Abbildungsdatensätze werden als herunterladbare Ressource bereitgestellt. Zusätzlich BildDaten von Fest Embryonen, die mit einer Vielzahl von Fluoreszenzfarbstoffen gefärbt wurden vorgestellt. Die Diskussion konzentriert sich auf die Qualitätskontrolle, die derzeitigen Beschränkungen des Live-Imaging-Ansatz und die Anpassung des Protokolls zu anderen Arten. Das Protokoll ist für die Lichtbogen-Basis geschrieben Fluoreszenzmikroskope , die mit einer Probenkammer und einer drehbaren Klemmmechanismus für standardisierte Probenhaltern 54, 59, 60, ausgestattet, die mit einem Durchmesser von Metall, Kunststoff oder Glas bestehen typischerweise zylinderförmige Elemente sind , im Millimeterbereich. Das Protokoll ist auch geeignet für beide kanonische Implementierungen, das heißt SPIM und DSLM sowie für Aufbauten mit zwei oder mehr Beleuchtungs- und Detektionsarme 61, 62, 63. Die repräsentativen Ergebnisse zeigen, Daten, die in zwei spektralen Kanälen, grün (illumination mit einem 488 nm-Laser, Feststellung durch einen 525/50 Bandpaßfilters) und Rot (Beleuchtung mit einem 561-nm-Laser, Feststellung durch einen 607/70 Bandpaßfilters), aber das Protokoll kann auf drei oder vier spektrale Kanäle erweitert werden.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">full grain wheat flour</td>
			<td style="width:119px;">Demeter e.V.</td>
			<td style="width:71px;">1.13E+08</td>
			<td style="width:167px;">US: whole wheat flour, UK: whole meal flour</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">405 fine wheat flour</td>
			<td style="width:119px;">Demeter e.V.</td>
			<td style="width:71px;">1.13E+08</td>
			<td style="width:167px;">US: pastry flour, UK: soft flour</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">inactive dry yeast</td>
			<td style="width:119px;">Flystuff / Genesee Scientific</td>
			<td style="width:71px;">62-106</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.4</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:71px;">10010-023</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">sodium hypochlorite, ~12% active Cl</td>
			<td style="width:119px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:71px;">425044-250ML</td>
			<td style="width:167px;">Caution: sodium hypochlorite is corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">low-melt agarose</td>
			<td style="width:119px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:71px;">6351.2</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">6-well plate</td>
			<td style="width:119px;">Orange Scientific</td>
			<td style="width:71px;">4430500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">24-well plate</td>
			<td style="width:119px;">Orange Scientific</td>
			<td style="width:71px;">4430300</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">glass capillaries, internal &#216; 0.46 mm</td>
			<td style="width:119px;">Brand GmbH + Co KG</td>
			<td style="width:71px;">7087 09</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">SYTOX Green</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:71px;">57020</td>
			<td style="width:167px;">Staining solution preparation is explained in Table 2</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">YOYO-1 Iodide</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:71px;">Y3601</td>
			<td style="width:167px;">Staining solution preparation is explained in Table 2</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">BOBO-3 Iodide</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:71px;">B3586</td>
			<td style="width:167px;">Staining solution preparation is explained in Table 2</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:71px;">A12379</td>
			<td style="width:167px;">Staining solution preparation is explained in Table 2</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Alexa Fluor 546 Phalloidin</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:71px;">A22283</td>
			<td style="width:167px;">Staining solution preparation is explained in Table 2</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">sieve, 800 &#181;m mesh size</td>
			<td style="width:119px;">VWR International</td>
			<td style="width:71px;">200.025.222-051</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">sieve, 710 &#181;m mesh size</td>
			<td style="width:119px;">VWR International</td>
			<td style="width:71px;">200.025.222-050</td>
			<td style="width:167px;">for growth medium preparation (step 1.1)</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">sieve, 300 &#181;m mesh size</td>
			<td style="width:119px;">VWR International</td>
			<td style="width:71px;">200.025.222-040</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">sieve, 250 &#181;m mesh size</td>
			<td style="width:119px;">VWR International</td>
			<td style="width:71px;">200.025.222-038</td>
			<td style="width:167px;">for egg laying medium preparation (step 1.2)</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">glass dish, &#216; 100 mm &#215; 20 mm</td>
			<td style="width:119px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:71px;">CLS70165102</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">cell strainer, 100 &#181;m mesh size</td>
			<td style="width:119px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:71px;">352360</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">paint brush, head &#216; 2 mm</td>
			<td style="width:119px;">VWR International</td>
			<td style="width:71px;">149-2121</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">syringe, 1.0 ml</td>
			<td style="width:119px;">B. Braun Medical AG</td>
			<td style="width:71px;">9166017V</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">scintillation vials</td>
			<td style="width:119px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:71px;">M1152-1000EA</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">paraformaldehyde</td>
			<td style="width:119px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:71px;">158127</td>
			<td style="width:167px;">Caution: paraformaldehyde is toxic and corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">n-heptane &#8805; 99%</td>
			<td style="width:119px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:71px;">8654.1</td>
			<td style="width:167px;">Caution: n-heptane is flammable and toxic</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:119px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:71px;">X100-100ML</td>
			<td style="width:167px;">Caution: Trition X-100 is corrosive</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light sheet-based fluorescence microscopy of living or fixed and stained tribolium castaneum embryos

Der rote Mehlkäfer Tribolium castaneum ist zu einem wichtigen Insektenmodellorganismus in der Entwicklungsgenetik und Evolutionsentwicklungsbiologie worden. Die Beobachtung von Tribolium Embryonen mit Lichtbogen basierende Fluoreszenzmikroskopie hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Weitfeld- und konfokaler Fluoreszenzmikroskopie. Aufgrund der einzigartigen Eigenschaften eines Lichtbogenbasierten Mikroskop dreidimensionale Bilder lebender Proben mit hohem Signal-Rausch-Verhältnisse und eine deutlich reduzierte Photobleich sowie Phototoxizität entlang mehrerer Richtungen über Perioden aufgezeichnet werden, die mehrere dauern Tage. Mit mehr als vier Jahren der methodischen Entwicklung und eine kontinuierlichen Steigerung von Daten, scheint die Zeit entsprechende Standardarbeitsanweisungen für die Verwendung von Lichtblatt - Technologie in der Tribolium Gemeinschaft zu etablieren sowie in den Insekt Gemeinschaft. Dieses Protokoll beschreibt drei Montagetechniken geeignet foder verschiedene Zwecke, stellt zwei neue maßgeschneiderte transgenen Linien Tribolium geeignet für Langzeit - Echtzeit- Bildgebung, schlägt fünf Fluoreszenzfarbstoffe intrazelluläre Strukturen von festen Embryonen etikettieren und liefert Informationen über die Daten Nachverarbeitung für die rechtzeitige Auswertung der aufgezeichneten Daten. Repräsentative Ergebnisse konzentrieren sich auf die langfristige Echtzeit-Bildgebung, optischen Schneidens und der Beobachtung des gleichen Embryos entlang mehrerer Richtungen. Die entsprechenden Datensätze werden als herunterladbare Ressource bereitgestellt. Schließlich beschreibt das Protokoll Qualitätskontrollen für Echtzeit-Bildgebung Assays aktuellen Einschränkungen und die Anwendbarkeit der beschriebenen Verfahren auf andere Insektenarten. Dieses Protokoll wird für Entwicklungsbiologen in erster Linie gedacht, die Imaging-Lösungen suchen, die Standard-Laborgeräte entwickeln. Es fördert den kontinuierlichen Versuch, die Lücke zwischen den technisch orientierten Laboratorien / Gemeinden zu schließen, die sich entwickeln und Mikros verfeinernKopieren methodologisch und das Life-Science-Labor / Gemeinden, die technischen Herausforderungen &#39;Plug-and-Play&#39; Lösungen erfordern. Darüber hinaus unterstützt es einen axiomatischen Ansatz, der die biologischen Fragen in den Mittelpunkt der Aufmerksamkeit bewegt.

Dieses Protokoll beschreibt einen experimentellen Rahmen für die Fluoreszenzabbildung von lebenden oder fixierten und gefärbten Tribolium Embryonen mit LSFM. Aufgrund der geringen Mengen an Photobleichung und Phototoxizität, eine direkte Folge seiner optischen Schneidens Fähigkeit ist LSFM besonders gut geeignet für die Langzeitechtzeit-Bildgebung. Die neuartige Ágóc {ATub&#39;H2B-mEmerald} # 1 transgene Linie ...

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Light Sheet-based Fluorescence Microscopy of Living or Fixed and Stained Tribolium castaneum Embryos

Abbilden der Morphogenese von Insekten Embryonen mit Lichtbogen basierende Fluoreszenzmikroskopie wurde Stand der Technik geworden. Dieses Protokoll beschreibt und vergleicht drei Befestigungstechniken geeignet für Tribolium castaneum Embryonen führt zwei neue maßgeschneiderte transgenen Linien gut geeignet für die Echtzeit- Bildgebung, diskutiert wesentliche Qualitätskontrollen und zeigt den aktuellen experimentellen Beschränkungen.

Lichtblatt-basierte Fluoreszenzmikroskopie lebender oder fixiert und gefärbt<em&gt; Tribolium castaneum</em&gt; Embry

The red flour beetle Tribolium castaneum has become an important insect model organism in developmental genetics and evolutionary developmental biology. ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Light Sheet-based Fluorescence Microscopy of Living or Fixed and Stained Tribolium castaneum Embryos

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Mess Protein Stabilität in Wohnzebrafischembryonen unter Einsatz von Fluoreszenz Decay Nach Photokonversion (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Methods for Precisely Localized Transfer of Cells or DNA into Early Postimplantation Mouse Embryos

Methoden für die genau zu lokalisieren Übertragung von Zellen oder DNA in frühen Postimplantations Maus Embryonen

Manipulation and culture of early mouse embryos is a powerful yet largely under-utilized technology enhancing the value of this model system. Conversely, ...

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

Mit Lichtblatt Fluoreszenzmikroskopie Bild Zebrabärbling Augenentwicklung

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induktion von Hypoxie im lebenden Frosch und Zebrafisch Embryonen

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

Quantitative ganze-Mount Immunfluoreszenz Analyse der kardialen Vorläuferzellen Populationen in Mausembryonen

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Multimodal Hierarchical Imaging of Serial Sections for Finding Specific Cellular Targets within Large Volumes

Multimodale hierarchische Darstellung der Schnittserien für die Suche nach spezifischen zellulären Ziele innerhalb großer Mengen

Targeting specific cells at ultrastructural resolution within a mixed cell population or a tissue can be achieved by hierarchical imaging using a ...

Isotropic Light-Sheet Microscopy and Automated Cell Lineage Analyses to Catalogue Caenorhabditis elegans Embryogenesis with Subcellular Resolution

Isotrope Licht-Sheet-Mikroskopie und automatisierte Zelllineage-Analysen zu Katalog-Caenorhabditis elegans Embryogenese mit subzellulärer Auflösung

Caenorhabditis elegans (C. elegans) stands out as the only organism in which the challenge of understanding the cellular origins of an entire nervous ...

Microinjection of DNA into Eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

Microinjection of DNA into Eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

Mikroinjektion von DNA in Augenknospen in Xenopus laevis Embryonen und Bildgebung von GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

The primary visual projection of tadpoles of the aquatic frog Xenopus laevis serves as an excellent model system for studying mechanisms that regulate the ...

A Layered Mounting Method for Extended Time-Lapse Confocal Microscopy of Whole Zebrafish Embryos

Eine geschichtete Montagemethode für die verlängerte Zeitraffer-Konfokalmikroskopie ganzer Zebrafisch-Embryonen

Dynamics of development can be followed by confocal time-lapse microscopy of live transgenic zebrafish embryos expressing fluorescence in specific tissues ...

Light-Induced GFP Expression in Zebrafish Embryos using the Optogenetic TAEL/C120 System

Lichtinduzierte GFP-Expression in Zebrafischembryonen mit dem optogenetischen TAEL/C120-System

Inducible gene expression systems are an invaluable tool for studying biological processes. Optogenetic expression systems can provide precise control ...