Name: dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling
Uploaded: 2017-08-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling at JoVE.com

MAK מודה תמיכה עבור עבודה זו של מכוני הבריאות הלאומיים / מכון הסרטן הלאומי מעניק מספר - 1R15CA152985-01A1. פרויקט זה נתמך גם על ידי מיאמי באוניברסיטה לתואר ראשון מחקר פרס התוכנית, אוניברסיטת מיאמי דוקטורט-הסמכה הזדמנויות למילגות, של אוניברסיטת מיאמי מלומדים קייטנה.

ההליכים וידאו והנחת המתוארים להלן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) באוניברסיטת מיאמי.
 1. הכנה ובדיקה הגירוי <ol><li>צור שני תחומים ברורים הליך כירורגי, שולחן הניתוחים של הטבלה פעולה-מאוחרת. שלב שני אזורים עם כל חומרים וכלים הדרושים.
	שולחן <ol><li>הבמה פע...

<ol>
	<li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer.">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li><li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+in+mice.">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li><li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse.">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin.">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li><li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li><li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras(G12D)+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li><li>Taylor, D. K., Mook, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+Waste+Anesthetic+Gas+Concentrations+Associated+with+the+Open-Drop+Method.">Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein.">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li><li>Ma, J., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics.">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li><li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-&#946;+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression.">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-&#946; signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer.">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li><li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data.">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li><li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis:+Clinical+Profile,+Histology,+and+Natural+History+After+Resection.">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li></ol>

משמעות לגבי שיטות קיימות בעוד אחרים קטעי וידאו לא רשמי של העכבר והניתוחים קיימים, המאמר וידאו מספק לאיכות המקצועית הראשונה, עמית שנסקרו, הדגמה ויזואלית של כל השלבים מפורט הנדרש לחילוץ קצירת בלבלב עכבר על-ידי דיסקציה10 . הקל להיות איבר הראשי עבור פעילות חילוף החומרים...

העכבר התפתחה חשוב במודל חיה של סרטן הלבלב האנושי1,2. ב- Ptf1acre / +; LSL-קראסG12D / + דגם העכבר, קריסטן עכברוש סרקומה (K-Ras) אונקוגן מופעל באופן בלעדי הלבלב, וכתוצאה מכך חניכה של נגעים טרום סרטניים בלבלב, המכונה הלבלב neoplasias intraepithelial הנרתיק (PanINs), לזה ההתקדמות כדי אדנוקרצינומות ductal הלבלב, נפוץ המכונה PDACs3. מערכת מודל זה העכבר מספק אחד מהדגמים הכי זמין בבעלי חיים עבור סרטן הלבלב האנושי4,5, עם יתרון נוסף העולות PanINs בתוך בחמשת החודשים הראשונים של החיים ולעיתים קרובות התקדמות PDAC בתוך יחיד בן4,5, ואילו סרטן הלבלב מתרחשת לעתים קרובות ביותר בבני 60-70 שנים של גיל.
מיצוי של הלבלב על ידי ניתוח של Ptf1acre / +; LSL-קראסG12D / + עכברים בגילאים שונים מאפשרת בדיקה היסטולוגית האורך מקיפה של התפתחות סרטן הלבלב, החל בשלבים המוקדמים הייתה דרך ההתקדמות PDAC3,4 , 5. קצירת הלבלב בגילאים הנעים מ-5 עד חמישה עשר חודשים יכול לשמש גם כדי להכין טישו תמציות לאפיין שינויים כלליים בחילוף החומרים4 הלבלב להתרחש במהלך המעבר בריא רקמה חולה 6,7.
מאמר זה מציג מדריך ויזואלי מלא של כל השלבים הדרושים לביצוע חילוץ הלבלב של העכבר, מספקת קווים מנחים עבור אחסון פוג'אלאדוצ'נוי זהאלאזי לצורך ניתוח נוסף. מדריך זה יהיה שווה ערך עבור יחידים ניסוי על מחלות אחרות הלבלב, לרבות סוג של סוכרת, צריכה להיות שימושית במיוחד סטודנטים, חוקרים חדשים למחקר מעורבים קציר של הלבלב העכבר באמצעות ניתוח פרופיל מטבולי או ניתוחים היסטולוגית.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass Jar&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3140-150</td>
			<td style="width:167px;">The glass jar used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Lid of Glass Jar</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">9985-150</td>
			<td>The glass jar lid used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">9201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Squeeze bottle&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">03-409-10DD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">100% Ethanol</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">22-032-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">245-684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foam Boards</td>
			<td style="width:288px;">Therapak</td>
			<td style="width:119px;">562908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">200205SHN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL 21G Syringes</td>
			<td style="width:288px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.0 mL Microcentrifuge Tubes&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">02-681-258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Pads</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S67011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T-Pins Length:&#160; 2&#34;&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Advance Store Products</td>
			<td>X32T-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sterilizing Wipes</td>
			<td style="width:288px;">Professional Disposables International Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Q85084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Analytical Balance</td>
			<td style="width:288px;">Marshall Scientific</td>
			<td style="width:119px;">ME-AE200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4L Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Taylor-Wharton</td>
			<td style="width:119px;">4LD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shallow Wide Mouth Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F3087-V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Floating Microtube Rack</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">60986-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10-500-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isothesia (Isoflurane)&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">050033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liquid Nitrogen</td>
			<td style="width:288px;">Wright Brothers</td>
			<td style="width:119px;">NIT-60-XX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Kras Strain</td>
			<td style="width:288px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">OO8179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Cre Strain</td>
			<td style="width:288px;">MMRRC</td>
			<td style="width:119px;">OOO435-UNC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling

לנו יש כבר חוקרת את הלבלב גורם שעתוק ספציפיים, 1a cre-recombinase; לקס-עצור-סלומון-קריסטן עכברוש סרקומה, גליצין כדי חומצה אספרטית-codon 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) העכבר זן כמודל של סרטן הלבלב אנושי. מטרת המחקר הנוכחי שלנו הוא לזהות סמנים מטבוליים חדשניים של התקדמות סרטן הלבלב. ערכנו פרופיל מטבולי של שתן, צואה, דם, ואת תמציות רקמת הלבלב, כמו גם ניתוחים היסטולוגית של הלבלב לביים את התקדמות סרטן. הלבלב העכבר אינו איבר מוצק מוגדר היטב כמו בבני אדם, אך מעדיף רקמה רכה diffusely מבוזרת לא בקלות המזוהה על-ידי אנשים מכירים את האנטומיה הפנימית העכבר או על ידי יחידים שיש להם מעט או ללא ניסיון ביצוע העכבר איברים והניתוחים. מטרת מאמר זה היא לספק מפורטת step-wise ויזואלית הפגנה מדריך טירונים להסרת הלבלב העכבר על ידי ניתוח. מאמר זה צריך להיות יקר במיוחד סטודנטים, חוקרים חדשים למחקר הדורש קציר בלבלב עכבר על-ידי ניתוח פרופיל מטבולי או ניתוחים היסטולוגית.

איור 1 מציג סקירה של האזור סביבת ההפעלה, איור 2 מציג את אזור הפעולה פוסט. כאשר הגדרה זו מספקת את כמות מינימלית של ציוד, מעצבים, אנשים יכולים לבחור לשנות את זה בצורה הטובה ביותר לצרכים בודדים. הפרוטוקול צריך להיות מוטבת בהתאם לצרכים הספציפיים...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling at JoVE.com

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

המאמר וידאו מספק הפגנה מפורט של ההליכים הנדרשים בהצלחה להסיר בלבלב עכבר על-ידי ניתוח עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי.

דיסקציה של הלבלב העכבר עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Collection Protocol for Human Pancreas

אוסף פרוטוקול לבלב אנוש

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

כל הזגוגיות ההומור Dissection לניתוח Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

פגיעה כירורגית ללבלב העכבר באמצעות קשירת של צינור הלבלב כמודל להאנדוקרינית ואקסוקרינית תכנות מחדש והפצה

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis

עשה ואל תעשה בהכנת השריר cryosections לניתוח היסטולוגית

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

העכבר מודל עבור השתלת לבלב בטכניקה השינוי הצמיד

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

בבדיקה היסטולוגית ו echocardiographic של מורפולוגיה לב העכבר

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

דיסקציה והתרבות Explant של Allantois מאתר לניתוח במבחנה של קובץ מצורף Allantoic

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

ניתוח כמותי מיקרו-CT Aortopathy במודל של עכברים של β-aminopropionitrile-induced מפרצת אבי העורקים, דיסקציה

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

המנגנונים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן באמצעות מבודד את Perfused המעי הדק עכברוש

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...