Name: phenotypic analysis of rodent malaria parasite asexual and sexual blood stages and mosquito stages
Uploaded: 2019-05-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phenotypic Analysis of Rodent Malaria Parasite Asexual and Sexual Blood Stages and Mosquito Stages at JoVE.com

Ahmed Aly wordt gesteund door financiering aan de Bezmialem Vakif Universiteit van het Turkse Ministerie van ontwikkelings subsidie 2015BSV036, en door financiering door de Tulane University School of Public Health and Tropical Medicine, en door financiering van NIH-NIAID voor R21Grant 1R21AI111058-01A1.

Alle dierproeven die hier beschreven werden, werden uitgevoerd volgens de goedgekeurde protocollen van het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité (IACUC) van Tulane University en de dierenethiek Commissie van de Bezmialem Vakif Universiteit. Alle andere experimentele protocollen en het gebruik van recombinant DNA werden uitgevoerd volgens de goedgekeurde protocollen van het institutioneel Bioveiligheidscomité (IBC) van Tulane University.
1. infectie van muizen met bloed-fase parasieten v...

Ondanks de gelijkenis in de algemene biologie van hun levenscycli tot die van menselijke malariaparasieten, hebben muizen malaria modellen ook veel gelijkenissen met menselijke Plasmodium soorten die hun gebruik als betrouwbaar in vivo modellen zouden beperken. Bijvoorbeeld, met uitzondering van levende verzwakte parasieten als vaccins, alle vaccin studies met subeenheid en DNA en andere vaccins gaven uitstekende resultaten in het muismodel, maar bij mensen die in endemische gebieden wonen, waren de res...

Malariaparasieten veroorzaken honderden miljoenen malaria-infecties bij mensenwereld wijd, met meer dan 600.000 sterfgevallen per jaar1. Menselijke infecties worden veroorzaakt door vijf malaria parasitaire soorten, namelijk p. falciparum, p. vivax, p. ovale, p. malariae, en p.kennis. De meeste klinische malaria sterfte wordt veroorzaakt door P. falciparum in Afrika ten zuiden van de Sahara1. Een andere menselijke malariaparasiet soorten die grote wereldwijde Morbiditeiten buiten het Afrika bezuiden de Sahara veroorzaakt is P. vivax2. De andere drie soorten zijn allemaal meer geografisch beperkt en veroorzaken goedaardige malaria-infecties, behalve de dodelijke P. Prosi3. De onbeschikbaarheid van relevante en praktische niet-humane in vivo-modellen van infecties is altijd geweest en is nog steeds een belemmering voor malaria vaccin en Geneesmiddelenontwikkeling. Eerdere malaria drugs targeting en metabole studies hebben uitgebreid vertrouwd op aviaire malaria modellen zoals p. gallinaceum en p. lophurae, het infecteren van kippen en eenden, respectievelijk4. Daarna werden knaagdier malaria soorten geleidelijk geïntroduceerd in verschillende vaccins en drugs targeting studies als in vivo modellen. In de loop der jaren, het bewijs van gelijkenissen van de biologie en gastheer-parasiet interacties van de levenscyclus stadia van knaagdieren malaria modellen aan menselijke malaria soorten hebben opgebouwd.
In het bijzonder waren Knaagdieren malaria modellen uiterst belangrijk om de biologie van muggen en pre-erytrocytische stadia5te verkennen en karakteriseren. Er zijn echter vier Knaagdieren malaria soorten (p. berghei, p. yoelii, p. chabaudi, en p. vinckei) die verschillende biologische kenmerken hebben, waarvan de meest opvallende in de bloed stadia6. Knaagdier malaria soorten verschillen in de synchroniciteit van bloed stadia, waarbij bloed stadia van p. chabaudi en p. vinckei stammen zijn meestal synchroon, terwijl het bloed stadia van p. berghei en p. yoelii zijn niet6 , 7. een ander opmerkelijk verschil is de zelf klaring van bloed stadia die voorkomt in sommige stammen (bijv. p. yoelii 17x-nl, p. berghei NK65 en P. vinckei lentum), terwijl de bloedinfectie van andere stammen van dezelfde soort kunnen dodelijk zijn indien onbehandeld (P. yoelii 17x-L, p. berghei ANKA, en P. chabaudi as). Bovendien, p. yoelii 17x-nl stam en p. berghei ANKA stam bij voorkeur de reticulocyten8,9,10,11, hoewel deze kenmerken van p. yoelii en P. berghei stammen zijn niet een strikte groei eis12,13,14. Daarom worden muizen behandeld met fenylhydrazine voorafgaand aan een infectie met de bloed stadia van die parasieten om de parasitemie en gametocytemia te verhogen die nodig zijn voor een mug-infectie voor de p. berghei ANKA-stam en voor p. yoelii 17x-nl15,16,17,18,19.
Verschillen in muggen stadia ontwikkeling bestaan ook tussen verschillende Knaagdieren malaria soorten, de meest opvallende is de temperatuur en de tijd die nodig zijn voor optimale muggen stadia ontwikkeling en de sporozoite lengte5,6, 20. In pre-erytrocytische stadia van knaagdier malaria soorten, verschillen omvatten de knaagdieren soorten en stam die het meest vatbaar zijn voor infectieuze sporozoïet inoculatie, het aantal sporozoieten nodig voor de inoculatie in een gevoelige knaagdier stam, de zoogdier celtypen nodig voor in vitro lever fase ontwikkeling testen, en de tijd om te voltooien van de ontwikkeling van de lever fase5,21,22,23,24,25 ,26,27,28,29,30.
Ondanks deze variabele waren knaagdieren malariaparasieten eerder de gunstige modellen voor de toepassing van omgekeerde genetische benaderingen, omdat ze minder tijd en middelen verbruiken met een grote kans op succes31. In feite, knaagdieren malaria modellen waren de beste modellen, en in veel gevallen de enige modellen, beschikbaar voor vele jaren om functioneel te karakteriseren genen uitgedrukt in muggen en lever stadia.
In het licht van de populariteit en de mogelijkheden van omgekeerde genetische benaderingen in knaagdieren malaria modellen, een aantal verschillende methodologieën zijn gebruikt voor het analyseren van de fenotypes van transgene parasiet levenscyclus stadia, met name bloed stadia. Sommige van deze methoden zijn echter inconsistent; bijvoorbeeld, het vergelijken van infecties van bloed-fase parasieten na een IP-injectie (die mogelijk worden afgevoerd naar de peritoneale lymfeklieren en, vanaf daar, kan de bloedbaan in te voeren; daarom, de geïnjecteerde parasieten eindigen niet in de bloedbaan gelijk) , het vergelijken van de Mosquito transmissie van klonen met een verschillend aantal seriële bloed-fase overdrachten of G-nummer (die invloed kunnen hebben op gametocytogenesis32,33), of het vergelijken van transgene parasieten rechtstreeks naar naïef wild-type (WT) parasieten die nooit werden onderworpen aan elektroporation en positieve drug selectie en de verschillende niet-gestandaardiseerde evaluaties van mannelijke gameten exflagellatie. Daarom is het cruciaal om protocollen te standaardiseren die eenvoudig te volgen zijn voor de fenotypische analyse van elk type transgene of WT knaagdier malariaparasieten in het bloed en in de mug om tegemoet te komen aan de biologische variabele van knaagdieren malaria parasietsoorten.
Hierin rapporteren we over een gestandaardiseerd, gedetailleerd experimenteel protocol voor de fenotypische analyse van het bloed en de levenscyclus van muggen van transgene of wild-type p. yoelii en p. berghei parasieten. Deze protocollen zijn ook van toepassing op p. chabaudi en p. vinckei parasieten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:735px;" width="735">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">Heparin</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">375095-100KU</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Xanthurenic acid</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D120804-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Hypoxanthine</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H9377-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Alsever&#39;s solution</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A3551-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenylhydrazine</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P26252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G5516-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Giemsa</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">GS1L-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">26G x 3/8 Precision Glide Needle,&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">305110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">1 ml TB Syringe, 26G x 3/8</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">1 cc Insulin Syringe, U-100 27G</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Isoflurane, USB</td>
			<td style="width:143px;">Piramal</td>
			<td style="width:119px;">2667- 46- 7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">PBS, pH 7.4</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>10010049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">RPMI</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>22400105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>11995065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Pencillin/ Streptomycin</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fiber Glass Wool</td>
			<td style="width:143px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3950</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phenotypic analysis of rodent malaria parasite asexual and sexual blood stages and mosquito stages

Recente ontwikkelingen in de genetica en systemen biologie technologieën hebben ons begrip van de biologie van malariaparasieten op moleculair niveau bevorderd. Effectieve malariaparasiet doelen voor de ontwikkeling van vaccins en chemotherapie zijn echter nog steeds beperkt. Dit is grotendeels te wijten aan de onbeschikbaarheid van relevante en praktische in vivo infectie modellen voor menselijke Plasmodium soorten, met name voor p. falciparum en p. vivax. Daarom zijn knaagdier malaria soorten uitgebreid gebruikt als praktisch alternatief in vivo modellen voor malaria vaccin, drug targeting, immuunrespons, en functionele karakterisering studies van gecondengeerde Plasmodiumspp. genen. Inderdaad, knaagdier malaria modellen zijn van onschatbare waarde gebleken, vooral voor het verkennen van mug transmissie en lever stage biologie, en waren onmisbaar voor immunologische studies. Echter, er zijn verschillen in de methoden die worden gebruikt voor het evalueren van de fenotypes van transgene en wild-type ongeslachtelijke en seksuele bloed-fase parasieten. Voorbeelden van deze verschillen zijn de keuze van een intraveneuze versus intraperitoneale infectie van knaagdieren met bloed-fase parasieten en de evaluatie van mannelijke gameten exflagellatie. Hierin worden gestandaardiseerde experimentele methoden beschreven voor het evalueren van de fenotypes van ongeslachtelijke en seksuele bloed stadia in transgene parasieten die verslag doen van Reporter-gen of wild type knaagdier malariaparasieten. We ook detail de methoden voor het evalueren van de fenotypes van malariaparasiet muggen stadia (gameten, ookinetes, oöcysten, en sporozoites) in Anopheles muggen vectoren. Deze methoden zijn gedetailleerd en vereenvoudigd hier voor de dodelijke en niet-dodelijke stammen van p. berghei en p. yoelii maar kan ook worden toegepast met enkele aanpassingen aan p. chabaudi en p. vinckei knaagdier malaria soorten.

Het succes van het toepassen van reverse genetische hulpmiddelen en technieken voor malariaparasieten heeft een revolutie teweeggebracht in het gebied van malaria onderzoek, met de mogelijkheid om toe te voegen, te verwijderen, of te wijzigen specifieke genomische segmenten van verschillende Plasmodium soorten39. Belangrijk is dat de uit te leggen genomische loci is geïdentificeerd en met succes gebruikt om fluorescentie eiwit markers in knaagdieren en me...

Watch this Scientific Journal Video about Phenotypic Analysis of Rodent Malaria Parasite Asexual and Sexual Blood Stages and Mosquito Stages at JoVE.com

Phenotypic Analysis of Rodent Malaria Parasite Asexual and Sexual Blood Stages and Mosquito Stages

Fenotypische analyse van knaagdieren malaria parasiet asexual en seksuele bloed stadia en muggen stadia

Als gevolg van de opvallende gelijkenissen van de levenscyclus en de biologie van knaagdieren malariaparasieten voor menselijke malariaparasieten, knaagdieren malaria modellen zijn onmisbaar geworden voor malaria onderzoek. Hierin hebben we enkele van de belangrijkste technieken gestandaardiseerd die worden gebruikt in de fenotypische analyse van wild-type en transgene knaagdier malaria soorten.

Recent advances in genetics and systems biology technologies have promoted our understanding of the biology of malaria parasites on the molecular level. ...

Door de opvallende gelijkenissen van de levenscyclus en biologie van knaagdiermalariaparasieten, de menselijke malariaparasieten, zijn knaagdiermalariamodellen onmisbaar geworden voor malariaonderzoek. Deze standaardmethoden kunnen helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van malariaonderzoek over hoe u een fenotypische analyse van wilde type en transgene knaagdiermalariasoorten uitvoeren. Het aantonen van de procedures zal worden afgestudeerde studenten Gozde Deveci en Ilknur Yilmaz uit mijn laboratorium.Begin met het snel ontdooien cryo bewaard bevroren parasiet voorraden en onmiddellijk met behulp van een een milliliter spuit uitgerust met een 26-gauge naald om ten minste twee donormuizen per genotype intraperitoneally injecteren met ongeveer 200 microliter voorraad. Vierentwintig uur na de injectie, gebruik een 24 of 26 meter naald om de staart van de eerste muis prikken en het verzamelen van de bloeddruppel op een microscoop dia. Gebruik de korte rand van een andere dia om het bloed snel over de eerste dia te smeren.Wanneer het bloed volledig is gedroogd, bevestig de dia's in 100% methanol gedurende ten minste een minuut. Bevlek de vaste monsters in Giemsa gedurende 10 tot 15 minuten, gevolgd door een enkele of dubbele gedestilleerde waterwassing. Wanneer de dia's zijn gedroogd, bekijk de monsters onder een 100X doelstelling en olie onderdompeling op een lichtmicroscoop voor het tellen van het totale aantal geïnfecteerde erytrocyten per raster.Twee tot drie dagen na de infectie, veilig een verdoofde muis waarbij de parasietmia heeft bereikt tussen 0,1 tot 1% in de supine positie en gebruik tangen om de huid te tillen in de buurt van de basis van het borstbeen om de oprichting van een huidincisie te vergemakkelijken. Trek de huid uit elkaar op de plaats van de incisie om het middenrif en de bovenkant van de buikholte bloot te leggen en gebruik de tangen om de basis van de ribbenkast vast te houden terwijl het door het middenrif snijdt om de borstholte binnen te gaan. Pin terug de ribbenkast om het hart bloot te stellen en gebruik een een milliliter spuit met ten minste 20 microliter heparine en uitgerust met een 26-gauge naald om voorzichtig de punctie het hartweefsel.Trek de zuiger langzaam in om ongeveer een milliliter bloed te verzamelen en het bloed in een microcentrifugebuis te verdelen. Wanneer al het bloed is geoogst, verwarm de ontvangende muizen onder een rode warmtelamp en laad een insulinespuit uitgerust met een 27-meter naald per ontvanger met de juiste dosis parasiet. Plaats vervolgens de eerste ontvanger in een restrain en injecteer een volledige dosis geïnfecteerde erythrocyten in een verwijde staartader.Voor muggenvoeding, toestaan dat volwassen vier tot zeven dagen oude vrouwelijke Anopheles stephensi of A.gambiae muggen uitgehongerd voor acht tot 12 uur om meer te voeden ten minste 15 minuten op verdoofde geïnfecteerde muizen met de hoogste exflagellation tarief. Om het aantal eicellen per mug te bepalen, euthanaseren 20 tot 30 muggen in de vriezer gedurende niet minder dan 10 minuten en gebruik je een verrekijker dissectieomeen en twee 26 of 27-meter naalden om de muggen op een glazen glijbaan te ontleden met de juiste dissectieoplossing. Om de midgut te ontleden, eerst het onderste deel van de buik op zijn plaats te houden met een naald en duw de thorax voorzichtig heel licht op de kruising tussen de buik en thorax in een opwaartse richting totdat het de thorax scheidt en een wit gekleurde middenduit wordt blootgesteld bungelend naar beneden van de thorax.Snijd nu de midgut van de slokdarm einde met behulp van dezelfde naald die werd gebruikt om de thorax omhoog te duwen, waardoor het scheiden en verspreiden van de midgut. Verhoog de ontleed midgut van het dissectiemedium met behulp van een naald en breng deze over naar een buis gevuld met 200 microliters van RPMI. Wanneer alle midguts zijn ontleed en geoogst, plaats de buis met de midguts in de centrifuge gedurende een minuut op 700 keer g.Maal vervolgens de geoogste weefsels twee keer met een stamper. Breng 12 microliter van de verdunde weefseloplossing over op een hemacytometer en ontcubeer de hemacytometer vijf minuten bij kamertemperatuur om de inhoud te laten bezinken. Bepaal vervolgens het gemiddelde aantal oocyst sporozoïeten op een lichtmicroscoop onder fasecontrast en een 40X vergroting.Om het aantal speekselkliersnorzoenen per mug te bepalen, bevriezen op het juiste tijdstip na het voeden geëuthanaseerde 50 tot 100 vrouwelijke muggen zoals aangetoond en gebruiken ze een ontledende microscoop en de zijkant van een 26- of 27-meternaal om de speekselklieren te isoleren. Om speekselklieren te ontleden, houd eerst de bovenbuik of thorax op zijn plaats met de schuine kant van een naald en duw het hoofd voorzichtig zeer licht en zeer korte duwt op de kruising tussen het hoofd en thorax in een opwaartse richting. Duw tot het hoofd zorgvuldig is gescheiden van de thorax zonder de glazige speekselklier te verscheuren.Gebruik een kort glas Pasteur pipet om de ontleed speekselklier te verhogen van het dissectie medium en plaats het in een 1,5 milliliter buis. Wanneer alle speekselklieren zijn ontleed en geoogst, plaats de buis met de klieren in de centrifuge gedurende een minuut op 700 keer g. Maal de geoogste weefsels twee keer met een stamper.Bepaal vervolgens het gemiddelde aantal speekselkliersgorzoites zoals eerder gedaan. Transgene reporter malaria parasieten ontworpen om EGFP uit te drukken onder de controle van een sterke en constitutieve promotor vertonen de fluorescentie signaal in bloedstadia, ookinetes, jonge eicellen op Anopheles stephensi midguts, en in sporozoïeten geïsoleerd uit de speekselklieren van Anopheles stephensi vrouwtjes. Flow cytometrieparasietpercentagewaarden komen direct overeen met de geschatte parasietmiapercentages verkregen door het monitoren van Giemsa gekleurde dunne bloeduitstrijkjes, zoals aangetoond dat de geldigheid van de laatste kwantificeringsmethode wordt bevestigd.Bovendien hangt de schatting van de percentages van elk van de verschillende aseksueel- en seksuele stadia af van de morfologische evaluatie van de erytrocyten die niet kunnen worden beoordeeld door stromingscytometrie. Vergelijking van de intraperitoneale versus intraveneuze routes van infectie blijkt een statistisch significante daling van de IP geïnfecteerde groep parasietmia percentage in vergelijking met de IV geïnfecteerde groep parasitemia percentage tijdens de eerste vier dagen van de infectie waaruit blijkt dat de IV route van infectie is een meer kwantitatief nauwkeurige route voor tests met de malaria parasiet bloedstadia. Van nota, phenylhydrazine behandeling verhoogt aanzienlijk het aantal gametocyten die de snelheid van mannelijke gamete vorming die op zijn beurt verhoogt de bevruchting tarief en het aantal van alle daaropvolgende mug stadia verhoogt.Er is een schaarste aan gestandaardiseerde methoden voor de fenotypische analyse van knaagdier malaria bloedstadium parasieten en hun overdracht naar de mug vector. Deze methoden zullen helpen om gestandaardiseerde en vereenvoudigde protocollen te bieden voor het bestuderen van deze ziekteverwekkers en hun levenscyclusfasen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Uitputting van specifieke celpopulaties door Complement Uitputting

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

Zuivering van specifieke cel Bevolking naar fluorescentie-geactiveerde Cell Sorting (FACS)

Experimental and clinical studies often require highly purified cell populations.  FACS is a technique of choice to purify cell populations of known ...

Protocol for Production of a Genetic Cross of the Rodent Malaria Parasites

Protocol voor de productie van een genetische Kruis van het knaagdieren malariaparasieten

Variation in response to antimalarial drugs and in pathogenicity of malaria parasites is of biologic and medical importance. Linkage mapping has led to ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

Intravitale Microscopie van de milt: Kwantitatieve Analyse van Parasite Mobiliteit en Blood Flow

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

Vaccinia Reporter Viruses for Quantifying Viral Function at All Stages of Gene Expression

Vaccinia Reporter Virussen voor kwantificeren Viral Functie in alle stadia van genexpressie

Poxviruses are a family of double stranded DNA viruses that include active human pathogens such as monkeypox, molluscum contagiousum, and Contagalo virus. ...

Mouse Fetal Liver Culture System to Dissect Target Gene Functions at the Early and Late Stages of Terminal Erythropoiesis

Muis foetale lever Cultuur System Doel Gene functies ontleden in de vroege en late stadia van Terminal Erytropoëse

Erythropoiesis involves a dynamic process that begins with committed erythroid burst forming units (BFU-Es) followed by rapidly dividing erythroid colony ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymfocyt Isolatie van Human Skin voor Fenotypische Analyse en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cell Culture

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Phenotypic and Functional Analysis of Activated Regulatory T Cells Isolated from Chronic Lymphocytic Choriomeningitis Virus-infected Mice

Fenotypische en functionele analyse van geactiveerde regulatoire T-cellen Geïsoleerd van Chronische Lymfatische choriomeningitis-virus geïnfecteerde muizen

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

Ontwikkeling van een Hepatitis B Virus reportersysteem de vroege stadia van de replicatiecyclus Monitor

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran verbetert de efficiëntie van de lentivirale transductie van lymfkliertest en menselijke primaire NK-cellen

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...