Name: phenotypic analysis of rodent malaria parasite asexual and sexual blood stages and mosquito stages
Uploaded: 2019-05-30T12:30:00
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अहमद आली विकास अनुदान 2015BSV036 से Bezmialem Vakif विश्वविद्यालय के लिए धन द्वारा समर्थित है, और सार्वजनिक स्वास्थ्य और उष्णकटिबंधीय चिकित्सा के Tulane विश्वविद्यालय स्कूल द्वारा प्रदान की धन द्वारा, और R21Grant के लिए NIH-NIAID से धन द्वारा 1R21AI11058-01A1.

यहां वर्णित सभी पशु प्रयोगों को टूलेन विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) और बेज़ियालम वाकिफ विश्वविद्यालय की पशु नैतिकता समिति के अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार आयोजित किया गया। ?...

मानव मलेरिया परजीवी के लिए अपने जीवन चक्र के सामान्य जीव विज्ञान में समानता के बावजूद, माउस मलेरिया मॉडल भी मानव प्लाज्मोडियम प्रजातियों है कि vivo मॉडल में विश्वसनीय के रूप में उनके उपयोग की सीमा...

मलेरिया परजीवी दुनिया भर में मनुष्यों में मलेरिया के संक्रमण के लाखों लोगों के कारण, 600,000 से अधिक हर साल1मृत्यु के साथ . मानव संक्रमण पांच मलेरिया परजीवी प्रजातियों के कारण होते हैं, जैसे पी फाल्सीपेरम, पी वाइवैक्स, पी ओवले, पी मलेरिया,और पी. अधिकांश नैदानिक मलेरिया नश्वरता उप-सहारा अफ्रीका1में पी फाल्सीपेरम के कारण होती है। एक अन्य मानव मलेरिया परजीवी प्रजाति है कि उप सहारा अफ्रीका के बाहर व्यापक दुनिया भर में रुग्णता का कारण बनता है पी vivax2है. अन्य तीन प्रजातियां सभी अधिक भौगोलिक रूप से प्रतिबंधित हैं और घातक पी नोल्सी3को छोड़कर सौम्य मलेरिया संक्रमण का कारण बनती हैं। संक्रमण के विवो मॉडल में प्रासंगिक और व्यावहारिक गैर मानव की अनुपलब्धता हमेशा से रही है और अभी भी मलेरिया वैक्सीन और दवा के विकास के लिए एक बाधा है। इससे पहले मलेरिया दवा लक्ष्यीकरण और चयापचय अध्ययन ों ने क्रमशः4मुर्गियों और बतखों को संक्रमित करने वाले पी गैलिनोसेसम और पी लोफोरेजैसे एवियन मलेरिया मॉडलों पर व्यापक रूप से भरोसा किया है . इसके बाद, विवो मॉडलों के रूप में विभिन्न टीकों और औषध लक्ष्यीकरण अध्ययनों में कृंतक मलेरिया प्रजातियों को धीरे-धीरे शुरू किया गया। इन वर्षों में, जीव विज्ञान और मानव मलेरिया प्रजातियों के लिए कृंतक मलेरिया मॉडल के जीवन चक्र चरणों के मेजबान परजीवी बातचीत की समानता के सबूत जमा हो गया है.
विशेष रूप से, कृंतक मलेरिया मॉडल का पता लगाने और मच्छर और पूर्व एरिथ्रोसाइटिक चरणों5के जीव विज्ञान की विशेषता के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण थे। तथापि, चार कृंतक मलेरिया प्रजातियां हैं (पी. बरघेई, पी. रक्त की प्रजातियों में रक्त चरणों के तुल्यकालन में अंतर है, जहां पी Chabaudi और पी vinckei उपभेदों के रक्त चरणों ज्यादातर तुल्यकालिक हैं, जबकि पी berghei और पी yoelii के रक्त चरणों6 नहीं कर रहे हैं , 7. एक और उल्लेखनीय अंतर रक्त चरणों है कि कुछ उपभेदों में होता है की आत्म मंजूरी है(उदा. पी yoelii 17X-NL , पी berghei NK65 , और पी vinckei lentum), जबकि अन्य के रक्त संक्रमण एक ही प्रजाति के उपभेदों घातक हो सकता है अगर अनुपचारित छोड़ दिया (पीyoelii 17X-L, पी berghei ANKA, और पी Chabaudi AS). इसके अलावा, पी yoelii 17X-NL तनाव और पी berghei ANKA तनाव अधिमानी रूप से reticulocytesआक्रमण 8,9,10,11, हालांकि पी की इन सुविधाओं. योलाई और पी बर्गेई उपभेदों एक सख्त विकास की आवश्यकता नहीं हैं12,13,14. इसलिए, चूहों उन परजीवी के रक्त चरणों के साथ एक संक्रमण से पहले फेनिलहाइड्रेज़ीन के साथ इलाज कर रहे हैं परजीवी और gametocytemia पी berghei ANKA तनाव के लिए एक मच्छर संक्रमण के लिए आवश्यक बढ़ाने के लिए और पी yoelii के लिए 17X-NL15,16,17,18,19.
मच्छर चरणों के विकास में अंतर भी विभिन्न कृंतक मलेरिया प्रजातियों के बीच मौजूद हैं, सबसे उल्लेखनीय तापमान और इष्टतम मच्छर चरणों के विकास के लिए आवश्यक समय जा रहा है और sporozoite लंबाई5,6, 20| कृंतक मलेरिया प्रजातियों के पूर्व एरिथ्रोसाइटिक चरणों में, मतभेदों में कृंतक प्रजातियां और तनाव शामिल हैं जो संक्रामक स्पोरोज़ोइट टीका के लिए सबसे अधिक संवेदनशील होते हैं, अतिसंवेदनशील कृंतक तनाव में टीका लगाने के लिए आवश्यक स्पोरोजोइट्स की संख्या, इन विट्रो यकृत अवस्था विकास परख के लिए आवश्यक स्तनधारी कोशिका प्रकार , और जिगर चरण विकासकोपूरा करने के लिए समय 5 ,21,22,23,24,25 ,26,27,28,29,30.
इन विभिन्नक्षमताओं के बावजूद, कृंतक मलेरिया परजीवी रिवर्स आनुवंशिक दृष्टिकोण के आवेदन के लिए जल्दी अनुकूल मॉडल थे, क्योंकि वे कम समय और संसाधन की सफलता की एक उच्च संभावना के साथ लेने वालीथी 31. वास्तव में, कृंतक मलेरिया मॉडल सबसे अच्छा मॉडल थे, और कई मामलों में केवल मॉडल, कई वर्षों के लिए उपलब्ध कार्यात्मक मच्छर और जिगर के चरणों में व्यक्त जीन की विशेषता.
लोकप्रियता और कृंतक मलेरिया मॉडल में रिवर्स आनुवंशिक दृष्टिकोण की सुविधा के प्रकाश में, विभिन्न तरीकों की एक संख्या transgenic परजीवी जीवन चक्र चरणों, विशेष रूप से रक्त चरणों के phenotypes का विश्लेषण करने के लिए उपयोग किया गया है. हालांकि, इन तरीकों में से कुछ असंगत हैं; उदाहरण के लिए, एक आईपी इंजेक्शन के बाद रक्त-चरण परजीवी के संक्रमण की तुलना (जो संभवतः peritoneal लिम्फ नोड्स के लिए सूखा रहे हैं और, वहाँ से, खून में प्रवेश कर सकते हैं; इसलिए, इंजेक्शन परजीवी खून में समान रूप से अंत नहीं है) , सीरियल रक्त चरण स्थानान्तरण या जी संख्या की एक अलग संख्या के साथ क्लोन के मच्छर संचरण की तुलना (जो gametocytogenesis को प्रभावित कर सकता है32,33), या ट्रांसजेनिक परजीवी की तुलना सीधे भोले जंगली प्रकार (WT) के लिए परजीवी है कि इलेक्ट्रोपोरेशन और सकारात्मक दवा चयन और पुरुष gamete exflagellation के विभिन्न अमानकीकृत मूल्यांकन के अधीन कभी नहीं थे. इसलिए, यह प्रोटोकॉल है कि रक्त में ट्रांसजेनिक या WT कृंतक मलेरिया परजीवी के किसी भी प्रकार के phenotypic विश्लेषण के लिए पालन करने के लिए सरल कर रहे हैं मानकीकरण करने के लिए महत्वपूर्ण है और मच्छर में कृंतक मलेरिया की जैविक variabilities के लिए समायोजित करने के लिए परजीवी प्रजातियों.
इसमें, हम ट्रांसजेनिक या जंगली प्रकार के रक्त और मच्छर जीवन चक्र चरणों के phenotypic विश्लेषण के लिए एक मानकीकृत, विस्तृत प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल पर रिपोर्ट पी yoelii और पी berghei परजीवी. ये प्रोटोकॉल पी चबौडी और पी विन्केई परजीवी पर भी लागू होते हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:735px;" width="735">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">Heparin</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">375095-100KU</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Xanthurenic acid</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D120804-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Hypoxanthine</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">H9377-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Alsever&#39;s solution</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A3551-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">S5761-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenylhydrazine</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P26252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G5516-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Giemsa</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">GS1L-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">26G x 3/8 Precision Glide Needle,&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">305110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">1 ml TB Syringe, 26G x 3/8</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:307px;">1 cc Insulin Syringe, U-100 27G</td>
			<td style="width:143px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Isoflurane, USB</td>
			<td style="width:143px;">Piramal</td>
			<td style="width:119px;">2667- 46- 7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">PBS, pH 7.4</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>10010049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">RPMI</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>22400105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>11995065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Pencillin/ Streptomycin</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:143px;">Gibco</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fiber Glass Wool</td>
			<td style="width:143px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3950</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phenotypic analysis of rodent malaria parasite asexual and sexual blood stages and mosquito stages

आनुवंशिकी और प्रणाली जीव विज्ञान प्रौद्योगिकियों में हाल ही में प्रगति आणविक स्तर पर मलेरिया परजीवी के जीव विज्ञान की हमारी समझ को बढ़ावा दिया है. तथापि, वैक्सीन और कीमोथेरेपी विकास के लिए प्रभावी मलेरिया परजीवी लक्ष्य अभी भी सीमित हैं। यह मुख्य रूप से मानव प्लाज्मोडियम प्रजातियों के लिए विवो संक्रमण मॉडल में प्रासंगिक और व्यावहारिक की अनुपलब्धता के कारण है, सबसे विशेष रूप से पी फाल्सीपेरम और पी वाइवैक्सके लिए . इसलिए, कृंतक मलेरिया प्रजातियों बड़े पैमाने पर मलेरिया टीका के लिए vivo मॉडल में व्यावहारिक विकल्प के रूप में इस्तेमाल किया गया है, दवा लक्ष्यीकरण, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, और संरक्षित Plasmodiumspp. जीन के कार्यात्मक लक्षण अध्ययन. दरअसल, कृंतक मलेरिया मॉडल अमूल्य साबित हो गया है, विशेष रूप से मच्छर संचरण और जिगर चरण जीव विज्ञान की खोज के लिए, और प्रतिरक्षा अध्ययन के लिए अपरिहार्य थे. हालांकि, ट्रांसजेनिक और जंगली प्रकार अलैंगिक और यौन रक्त अवस्था परजीवी के phenotypes का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों में विसंगतियां हैं। इन विसंगतियों के उदाहरण रक्त-चरण परजीवी के साथ कृन्तकों के अंतःशिरा बनाम इंट्रापेरिटोनल संक्रमण और पुरुष युग्मक के मूल्यांकन का विकल्प हैं। इसमें, हम रिपोर्टर-जीन या जंगली प्रकार कृंतक मलेरिया परजीवी प्रजातियों को व्यक्त करने वाले ट्रांसजेनिक परजीवी में अलैंगिक और यौन रक्त चरणों के फीनोटाइप का मूल्यांकन करने के लिए मानकीकृत प्रयोगात्मक विधियों का विस्तार करते हैं। हम एनोफील्स मच्छर के वैक्टर के अंदर मलेरिया परजीवी मच्छर चरणों (गेमेट, ओकिनेट्स, ओसिस्ट, और स्पोरोजोइट्स) के फीनोटाइपकाज का मूल्यांकन करने के तरीकों का भी विस्तार से विस्तार करते हैं। इन तरीकों का विस्तृत और सरलीकृत कर रहे हैं यहाँ पी berghei और पी yoelii के घातक और गैर घातक उपभेदों के लिए, लेकिन यह भी पी Chabaudi और पी vinckei कृंतक मलेरिया प्रजातियों के लिए कुछ समायोजन के साथ लागू किया जा सकता है.

मलेरिया परजीवी के लिए रिवर्स आनुवंशिक उपकरण और तकनीक लागू करने की सफलता ने मलेरिया अनुसंधान के क्षेत्र में क्रांति ला दी है, जिसमें कई प्लाज्मोडियम प्रजातियों39के विशिष्ट जीन...

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Phenotypic Analysis of Rodent Malaria Parasite Asexual and Sexual Blood Stages and Mosquito Stages

Rodent मलेरिया परजीवी अलैंगिक और यौन रक्त चरणों और मच्छर चरणों का फेनोटाइपिक विश्लेषण

मानव मलेरिया परजीवी के लिए जीवन चक्र और कृंतक मलेरिया परजीवी के जीव विज्ञान की हड़ताली समानताके कारण, कृंतक मलेरिया मॉडल मलेरिया अनुसंधान के लिए अपरिहार्य हो गए हैं। इसमें, हमने जंगली प्रकार और ट्रांसजेनिक कृंतक मलेरिया प्रजातियों के फीनोटाइपिक विश्लेषण में उपयोग की जाने वाली कुछ सबसे महत्वपूर्ण तकनीकों को मानकीकृत किया है।

Recent advances in genetics and systems biology technologies have promoted our understanding of the biology of malaria parasites on the molecular level. ...

कृंतक मलेरिया परजीवी के जीवनचक्र और जीव विज्ञान की हड़ताली समानताओं के कारण, मानव मलेरिया परजीवी, कृंतक मलेरिया मॉडल मलेरिया अनुसंधान के लिए अपरिहार्य हो गए हैं। ये मानक विधियां मलेरिया अनुसंधान क्षेत्र में महत्वपूर्ण प्रश्नों के उत्तर देने में मदद कर सकती हैं कि जंगली प्रकार और ट्रांसजेनिक कृंतक मलेरिया प्रजातियों का फेनोटाइपिक विश्लेषण कैसे किया जाए। प्रक्रियाओं का प्रदर्शन स्नातक छात्रों Gozde Deveci और Ilknur Yilmaz मेरी प्रयोगशाला से होगा ।क्रायो संरक्षित जमे हुए परजीवी स्टॉक को जल्दी से विगलन करके शुरू करें और तुरंत 26 गेज सुई से लैस एक मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करके लगभग 200 माइक्रोलीटर स्टॉक के साथ कम से कम दो दाता चूहों को जीनोटाइप इंट्रापेरिटोनली इंजेक्ट करें। इंजेक्शन के चौबीस घंटे बाद, पहले माउस की पूंछ को चुभने के लिए 24 या 26 गेज सुई का उपयोग करें और माइक्रोस्कोप स्लाइड पर रक्त की बूंद एकत्र करें। पहली स्लाइड में रक्त को जल्दी से धुंधला करने के लिए एक और स्लाइड के छोटे किनारे का उपयोग करें।जब रक्त पूरी तरह से सूख गया हो, तो स्लाइड को कम से कम एक मिनट के लिए 100% मेथनॉल में ठीक करें। गिमसा में तय नमूनों को 10 से 15 मिनट के लिए दाग दें और इसके बाद सिंगल या डबल डिस्टिल्ड वॉटर वॉश करें । स्लाइड्स में जब सूख गए हैं, तो प्रति ग्रिड संक्रमित एरिथ्रोसाइट्स की कुल संख्या की गिनती के लिए हल्के माइक्रोस्कोप पर 100X उद्देश्य और तेल विसर्जन के तहत नमूनों को देखें ।संक्रमण के दो से तीन दिन बाद, एक एनेस्थेटाइज्ड माउस को सुरक्षित करें जिसमें परजीवी रीढ़ की स्थिति में 0.1 से 1% के बीच पहुंच गया है और त्वचा चीरा के निर्माण को सुविधाजनक बनाने के लिए उरोस्थि के आधार के पास त्वचा को उठाने के लिए संदंश का उपयोग करें। डायाफ्राम और पेट की गुहा के शीर्ष को बेनकाब करने के लिए चीरा की साइट पर त्वचा को अलग खींचें और छाती गुहा में प्रवेश करने के लिए डायाफ्राम के माध्यम से काटने के दौरान रिबकेज के आधार को पकड़ने के लिए संदंश का उपयोग करें। दिल को बेनकाब करने के लिए रिबकेज को पिन करें और एक मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें जिसमें हेपरिन के कम से कम 20 माइक्रोलीटर होते हैं और दिल के ऊतकों को धीरे-धीरे पंचर करने के लिए 26 गेज सुई से लैस होते हैं।धीरे-धीरे लगभग एक मिलीलीटर रक्त एकत्र करने और रक्त को माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में वितरित करने के लिए प्लंजर को वापस लें। जब सभी रक्त काटा गया है, तो प्राप्तकर्ता चूहों को लाल गर्मी के दीपक के नीचे गर्म करें और परजीवी की उचित खुराक के साथ प्रति प्राप्तकर्ता 27 गेज सुई से लैस एक इंसुलिन सिरिंज लोड करें। फिर पहले प्राप्तकर्ता को एक निरोधक में रखें और संक्रमित एरिथ्रोसाइट्स की एक पूरी खुराक को एक फैली हुई पूंछ नस में इंजेक्ट करें।मच्छरों को खिलाने के लिए, वयस्क चार से सात दिन की मादा एनोफेल्स स्टीफेंसी या ए. गैम्बेलिया मच्छरों को आठ से 12 घंटे तक भूखे रहने की अनुमति दें ताकि सबसे अधिक एक्स्लैगलेशन दर के साथ एनेस्थेटाइज्ड संक्रमित चूहों पर कम से 15 मिनट अधिक खिलाया जा सके । प्रति मच्छर ओसिस्ट स्पोरोजोइट्स की संख्या निर्धारित करने के लिए, फ्रीजर में 20 से 30 मच्छरों को कम से कम 10 मिनट के लिए न करें और उचित विच्छेदन समाधान वाले ग्लास स्लाइड पर मच्छरों के मिडगिट को विच्छेदन करने के लिए दूरबीन विच्छेदन गुंजाइश और दो 26 या 27 गेज सुइयों का उपयोग करें। मिडगुट को विच्छेदन करने के लिए, पहले पेट के निचले हिस्से को एक सुई के साथ रखें और पेट और छाती के बीच जंक्शन पर छाती को बहुत हल्के से ऊपर की दिशा में धकेल दें जब तक कि यह छाती को अलग नहीं करता और एक सफेद रंग का मिडगुट छाती से नीचे झूलने के संपर्क में न आए।अब उसी सुई का उपयोग करके घेघा के अंत से मिडगुट को काट लें जिसका उपयोग छाती को ऊपर की ओर धकेलने के लिए किया जाता था, इस प्रकार मिडगुट को अलग और फैलाया जाता था। एक सुई का उपयोग कर विच्छेदन माध्यम से विच्छेदित मिडगुट उठाएं और इसे आरपीएमआई के 200 माइक्रोलीटर से भरी ट्यूब में स्थानांतरित करें। जब सभी मिडगट्स को विच्छेदित और काटा गया हो, तो मिडगट्स युक्त ट्यूब को 700 बार ग्राम पर एक मिनट के लिए सेंट्रलाइज में रखें।फिर काटे गए ऊतकों को दो बार मूसल के साथ पीस लें। पतला ऊतक समाधान के 12 माइक्रोलीटर को हेमेसाइटोमीटर में स्थानांतरित करें और सामग्री को व्यवस्थित करने की अनुमति देने के लिए पांच मिनट के लिए कमरे के तापमान पर हेमेसाइटोमीटर को इनक्यूबेट करें। फिर चरण विपरीत और 40X आवर्धन के तहत हल्के माइक्रोस्कोप पर ओसिस्ट स्पोरोजोइट्स की औसत संख्या निर्धारित करें।प्रति मच्छर लार ग्रंथि स्पोरोजोइट्स की संख्या निर्धारित करने के लिए, उचित समय बिंदु पोस्ट फीडिंग पर, 50 से 100 मादा मच्छरों को फ्रीज करें और लार ग्रंथियों को अलग करने के लिए एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप और 26 या 27 गेज सुई के किनारे का उपयोग करें। लार ग्रंथियों को विच्छेदन करने के लिए, पहले एक सुई के बीच के पक्ष के साथ ऊपरी पेट या छाती को रखें और सिर को बहुत हल्के से धक्का दें और सिर और छाती के बीच जंक्शन पर बहुत कम धक्का दें। जब तक सिर को कांच की लार ग्रंथि को फाड़े बिना छाती से सावधानी से अलग न किया जाए तब तक पुश करें।विच्छेदन माध्यम से विच्छेदित लार ग्रंथि को बढ़ाने के लिए एक छोटे ग्लास पाश्चर पिपेट का उपयोग करें और इसे 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में रखें। जब सभी लार ग्रंथियों को विच्छेदित और काटा गया हो, तो ग्रंथियों वाली ट्यूब को 700 बार ग्राम पर एक मिनट के लिए अपकेंद्रित्र में रखें। काटे गए ऊतकों को दो बार मूसल के साथ पीस लें।फिर लार ग्रंथि स्पोरोजोइट्स की औसत संख्या निर्धारित करें जैसा कि पहले किया गया था। ट्रांसजेनिक रिपोर्टर मलेरिया परजीवी एक मजबूत और संविलियन प्रमोटर के नियंत्रण में EGFP व्यक्त करने के लिए इंजीनियर रक्त चरणों में फ्लोरेसेंस संकेत, ookinetes, Anopheles stephensi मिडगट्स पर युवा oocysts, और sporozoites में Anopheles stephensi महिलाओं की लार ग्रंथियों से अलग प्रदर्शन । फ्लो साइटोमेट्री परजीवीता प्रतिशत मूल्य सीधे गिमसा दाग पतले रक्त स्मीयरों की निगरानी करके प्राप्त अनुमानित परजीवी प्रतिशत से मेल खाते हैं जैसा कि बाद की मात्राकरण विधि की वैधता की पुष्टि करता है।इसके अलावा, प्रत्येक अलग-अलग अलैंगिक और यौन चरणों के प्रतिशत का आकलन एरिथ्रोसाइट्स के रूपात्मक मूल्यांकन पर निर्भर करता है जिसका मूल्यांकन प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा नहीं किया जा सकता है। संक्रमण के इंट्रापेरिटोनियल बनाम नसों में मार्गों की तुलना संक्रमण के पहले चार दिनों के दौरान चतुर्थ संक्रमित समूह परजीवी प्रतिशत की तुलना में आईपी संक्रमित समूह परजीवी प्रतिशत में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण कमी का पता चलता है कि संक्रमण का चतुर्थ मार्ग मलेरिया परजीवी रक्त चरणों के साथ परख के लिए अधिक मात्रात्मक रूप से सटीक मार्ग है। ध्यान दें, फिनाइलहाइड्राज़ीन उपचार गेमटोसाइट्स की संख्या में काफी वृद्धि करता है जो पुरुष गेमटे गठन की दर को बढ़ाता है जो बदले में निषेचन दर और बाद के सभी मच्छर चरणों की संख्या को बढ़ाता है।कृंतक मलेरिया रक्त चरण परजीवी और मच्छर वेक्टर के लिए उनके संचरण के फेनोटाइपिकल विश्लेषण के लिए मानकीकृत तरीकों की कमी है। इन तरीकों से इन रोगजनकों और उनके जीवनचक्र चरणों का अध्ययन करने के लिए मानकीकृत और सरलीकृत प्रोटोकॉल प्रदान करने में मदद मिलेगी।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

विशिष्ट सेल आबादी के पूरक रिक्तीकरण द्वारा रिक्तीकरण

The purification of immune cell populations is often required in order to study their unique functions.  In particular, molecular approaches such as ...

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting FACS

विशिष्ट सेल जनसंख्या के प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छंटनी (FACS) के द्वारा शुद्धीकरण

Experimental and clinical studies often require highly purified cell populations.  FACS is a technique of choice to purify cell populations of known ...

Protocol for Production of a Genetic Cross of the Rodent Malaria Parasites

कृंतक मलेरिया परजीवियों की आनुवंशिक क्रॉस के उत्पादन के लिए प्रोटोकॉल

Variation in response to antimalarial drugs and in pathogenicity of malaria parasites is of biologic and medical importance. Linkage mapping has led to ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

प्लीहा के intravital माइक्रोस्कोपी: परजीवी गतिशीलता और रक्त प्रवाह के मात्रात्मक विश्लेषण

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

Vaccinia Reporter Viruses for Quantifying Viral Function at All Stages of Gene Expression

जीन एक्सप्रेशन के सभी चरणों में वायरल फंक्शन बढ़ाता के लिए चेचक रिपोर्टर वायरस

Poxviruses are a family of double stranded DNA viruses that include active human pathogens such as monkeypox, molluscum contagiousum, and Contagalo virus. ...

Mouse Fetal Liver Culture System to Dissect Target Gene Functions at the Early and Late Stages of Terminal Erythropoiesis

माउस भ्रूण जिगर संस्कृति के लिए सिस्टम टर्मिनल एरिथ्रोपोएसिस की जल्दी और देर चरणों में लक्ष्य जीन कार्य काटना

Erythropoiesis involves a dynamic process that begins with committed erythroid burst forming units (BFU-Es) followed by rapidly dividing erythroid colony ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

प्ररूपी विश्लेषण और के लिए मानव त्वचा से लिम्फोसाइट अलगाव<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; सेल संस्कृति

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Phenotypic and Functional Analysis of Activated Regulatory T Cells Isolated from Chronic Lymphocytic Choriomeningitis Virus-infected Mice

प्ररूपी और सक्रिय विनियामक टी कोशिकाओं के कार्यात्मक विश्लेषण क्रोनिक लिम्फोसाइटिक कोरियोमेनेंनजाइटिस वायरस से संक्रमित चूहों से अलग

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance ...

Development of a Hepatitis B Virus Reporter System to Monitor the Early Stages of the Replication Cycle

एक हेपेटाइटिस बी वायरस संवाददाता प्रणाली का विकास प्रतिकृति चक्र के प्रारंभिक दौर नजर रखने के लिए

Currently, it is possible to construct recombinant forms of various viruses, such as human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) and hepatitis C virus (HCV), ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran Murine और मानव प्राथमिक NK कोशिकाओं की Lentiviral Transduction क्षमता को बढ़ाता है

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...