Name: whole-cell patch-clamp recordings of isolated primary epithelial cells from the epididymis
Uploaded: 2017-08-03T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis at JoVE.com

Wir danken Dr. Christopher Antos für hilfreiche Kommentare zum Text. Diese Arbeit wurde unterstützt durch Start-up-Finanzierung von ShanghaiTech University verliehen an Winnie Shum und durch die Finanzierung von der National Natural Science Foundation von China (NNSFC Nr. 31471370).

Alle Tierversuche werden in Übereinstimmung mit den Richtlinien des ShanghaiTech University Institutional Animal Care and Use Committee durchgeführt, die die lokalen und internationalen Anforderungen erfüllen. 1. Experimentelle Tiere <ol><li> Verwenden Sie erwachsene männliche Sprague-Dawley-Ratten (~ 300-450 g) zwischen 8-12 Wochen alt. In diesem Alter bei den Ratten ist das Sperma in den Cauda-Nebenhoden angekommen. </li></ol> 2. Isolierung von Epithelzellen aus...

<ol>
	<li>Shum, W. W. C., Ruan, Y. C., Da Silva, N., Breton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Cell-Cell+Cross+Talk+in+the+Epididymis:+Control+of+Luminal+Acidification.">Establishment of Cell-Cell Cross Talk in the Epididymis: Control of Luminal Acidification.</a> J Androl. 32 (6), 576-586 (2011).</li><li>Robaire, B., Hinton, B. T., Plant, T. M., Zeleznik, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Knobil and Neill's Physiology of Reproduction. , 691-771 (2015).</li><li>Da Silva, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dense+network+of+dendritic+cells+populates+the+murine+epididymis.">A dense network of dendritic cells populates the murine epididymis.</a> Reproduction. 141 (5), 653-663 (2011).</li><li>Kolb, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Special Issue on Ionic Channels II. , 51-91 (1990).</li><li>Clapham, D. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+Projections+from+Basal+Cells+Are+Luminal+Sensors+in+Pseudostratified+Epithelia.">Transepithelial Projections from Basal Cells Are Luminal Sensors in Pseudostratified Epithelia.</a> Cell. 135 (6), 1108-1117 (2008).</li><li>Gao, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupling+of+TRPV6+and+TMEM16A+in+epithelial+principal+cells+of+the+rat+epididymis.">Coupling of TRPV6 and TMEM16A in epithelial principal cells of the rat epididymis.</a> J Gen Physiol. 148 (2), 161-182 (2016).</li><li>Huang, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Studies+of+Anion+Secretion+in+Cultured+Human+Epididymal+Cells.">Electrophysiological Studies of Anion Secretion in Cultured Human Epididymal Cells.</a> J Physiol. 455, 455-469 (1992).</li><li>Chan, H. C., Fu, W. O., Chung, Y. W., Chan, P. S. F., Wong, P. Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Atp-Activated+Cation+Conductance+in+Human+Epididymal+Cells.">An Atp-Activated Cation Conductance in Human Epididymal Cells.</a> Biol Repro. 52 (3), 645-652 (1995).</li><li>Cheung, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cell+interaction+underlies+formation+of+fluid+in+the+male+reproductive+tract+of+the+rat.">Cell-cell interaction underlies formation of fluid in the male reproductive tract of the rat.</a> J Gen Physiol. 125 (5), 443-454 (2005).</li><li>Pastor-Soler, N., Pietrement, C., Breton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+acid/base+transporters+in+the+male+reproductive+tract+and+potential+consequences+of+their+malfunction.">Role of acid/base transporters in the male reproductive tract and potential consequences of their malfunction.</a> Physiol. 20, 417-428 (2005).</li><li>Evans, A. M., Osipenko, O. N., Haworth, S. G., Gurney, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resting+potentials+and+potassium+currents+during+development+of+pulmonary+artery+smooth+muscle+cells.">Resting potentials and potassium currents during development of pulmonary artery smooth muscle cells.</a> Ame J Physiol-Heart Circ Physiol. 275 (3), 887-899 (1998).</li><li>Golowasch, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+Capacitance+Measurements+Revisited:+Dependence+of+Capacitance+Value+on+Measurement+Method+in+Nonisopotential+Neurons.">Membrane Capacitance Measurements Revisited: Dependence of Capacitance Value on Measurement Method in Nonisopotential Neurons.</a> J Neurophysiol. 102 (4), 2161-2175 (2009).</li><li>Cole, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Membranes, Ions and Impulses. A Chapter of Classical Biophysics. , (1968).</li><li>Lo, C. M., Keese, C. R., Giaever, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impedance+analysis+of+MDCK+cells+measured+by+electric+cell-substrate+impedance+sensing.">Impedance analysis of MDCK cells measured by electric cell-substrate impedance sensing.</a> Biophys J. 69, 2800-2807 (1995).</li><li>Solsona, C., Innocenti, B., Fernandez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+exocytotic+fusion+by+cell+inflation.">Regulation of exocytotic fusion by cell inflation.</a> Biophys J. 74 (2), 1061-1073 (1998).</li><li>Robinson, D. W., Cameron, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+changes+in+input+resistance+of+rat+hypoglossal+motoneurons+associated+with+whole-cell+recording.">Time-dependent changes in input resistance of rat hypoglossal motoneurons associated with whole-cell recording.</a> J Neurophysiol. 83 (5), 3160-3164 (2000).</li><li>Sontheimer, H., Boulton, A. A., Baker, G. B., Walz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuro Methods: Patch-Clamp Applications and Protocols. , (1995).</li><li>Cheung, Y. M., Hwang, J. C., Wong, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+membrane+potentials+of+the+epididymis+in+rats+[proceedings].">Epithelial membrane potentials of the epididymis in rats [proceedings].</a> J Physiol. 263 (2), 280 (1976).</li><li>Lybaert, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KATP+channel+subunits+are+expressed+in+the+epididymal+epithelium+in+several+mammalian+species.">KATP channel subunits are expressed in the epididymal epithelium in several mammalian species.</a> Biol Reprod. 79 (2), 253-261 (2008).</li></ol>

In diesem Protokoll führte die enzymatische Dispersion der Ratten-Cauda-Epididymide konsequent zu gesunden Epithelzellen. Die Qualität der epididymalen Epithelzellen für die Patch-Clamp-Experimente hängt von einigen kritischen Schritten im Protokoll ab. Zum Beispiel ist die Zentrifugation der Zellmischung bei einer niedrigen Zentrifugalkraft (30 xg) für die Entfernung der Spermatozoen und des epididymalen Lumeninhalts wichtig; Die epididymalen Epithelzellen werden in Gegenwart der Spermatozoen in der Zellkultur ung...

Die Nebenhoden im männlichen Fortpflanzungstrakt sind ein Organ, das mit einer Schicht von Mosaik-Epithelzellen ausgekleidet ist. Wie in anderen Epithelgeweben arbeiten die verschiedenen Zelltypen des epididymalen Epithels, einschließlich der Hauptzellen, klaren Zellen, Basalzellen und Zellen aus den immunologischen und lymphatischen Systemen, in einer konzertierten Weise als Barriere an der Tubulusfront und als die Stützzellen für die Spermienreifung und Physiologie 1 , 2 , 3 . So spielen diese Epithelzellen eine wesentliche Rolle in der reproduktiven Gesundheit. Epithelzellen werden im Allgemeinen als nicht-erregbare Zellen angesehen, die aufgrund von fehlenden spannungsgesteuerten Na + - oder Ca 2+ -Kanälen 4 , 5 nicht in der Lage sind, All-or-none-Aktionspotentiale als Reaktion auf depolarisierende Stimuli zu erzeugen. Epithelzellen exprimieren jedoch uniQue Sätze von Ionenkanälen und Transportern, die ihre spezialisierten physiologischen Rollen regeln, wie Sekretion und Nährstofftransport 6 . Verschiedene Epithelzellen besitzen daher charakteristische elektrische Eigenschaften. Beispielsweise exprimieren die Hauptzellen die CFTR für den Fluid- und Chloridtransport und exprimieren den TRPV6 für die Calciumreabsorption, während die klaren Zellen die Protonenpumpe V-ATPase zur Luminesäurebildung 1 , 7 , 8 , 9 exprimieren. Manche Transporter und Ionenkanäle, die die physiologischen Merkmale der epididymalen Epithelzellen regulieren, wurden berichtet, aber die funktionellen Eigenschaften von epididymalen Epithelzellen sind weitgehend noch nicht verstanden 10 , 11 , 12 , 13 . WhOle-Zell-Patch-Clamp-Aufzeichnung ist eine etablierte Technik zur Untersuchung der intrinsischen Eigenschaften sowohl erregbarer als auch nicht erregbarer Zellen und ist besonders hilfreich für die Untersuchung der Funktionen von primär dissoziierten Zellen in heterogenen Zellproben; Die Spannungsklemme dient zur Messung der passiven Membraneigenschaften und der Ionenströme einzelner Zellen 14 , 15 . Die passiven Membraneigenschaften umfassen Eingangswiderstand und Kapazität. Der frühere Parameter gibt die intrinsische Membranleitfähigkeit an, während letzteres die Oberfläche der Zellmembran impliziert (eine Phospholipiddoppelschicht, bei der sich Ionenkanäle und Transporter befinden, die als dünner Isolator dienen, der extrazelluläre und intrazelluläre Medien trennt). Die Membrankapazität ist direkt proportional zur Oberfläche der Zellmembran. Zusammen mit dem Membranwiderstand, der durch den Eingangswiderstand reflektiert wird, ist die Membranzeitkonstante, wWas zeigt, wie schnell das Zellmembranpotential auf den Fluss von Ionenkanalströmen reagiert, kann bestimmt werden. In dieser Hinsicht werden durch die Kombination der Stromansprechcharakteristiken aus einer Reihe von an die Zellen angelegten Spannungsschritten die biophysikalischen Kinetiken und Eigenschaften der Zellen bestimmt 15 , 16 , 17 , 18 . In der vorliegenden Arbeit beschreiben wir die Verfahren zur Isolierung von Epithelzellen aus dem Ratten-Cauda-Nebenhoden und die Schritte zur Messung der Membraneigenschaften verschiedener Zelltypen in der dissoziierten Zellmischung unter Verwendung der Ganzzell-Patch-Clamp. Wir zeigen, dass die epididymalen Hauptzellen unterschiedliche elektrophysiologische Membranen aufweisen und dass die Leitwerte leicht aus anderen Zelltypen identifiziert werden können.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="624">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Instrument of AXON system</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:149px;">Computer controlled amplifier</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices - Axon</td>
			<td style="width:139px;">Multiclamp 700B patch-clamp amplifier</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Digital Acquisition system</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices - Axon</td>
			<td style="width:139px;">Digidata 1550 converter</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Microscope</td>
			<td style="width:129px;">Olympus</td>
			<td style="width:139px;">BX-61WI</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:139px;">MPC-325</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Recording chamber and in-line Heater</td>
			<td style="width:129px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:139px;">TC-324C</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Instrument of HEKA system</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Patch Clamp amplifier</td>
			<td style="width:129px;">Harvard Bioscience - HEKA</td>
			<td style="width:139px;">EPC-10 USB double</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Microscope</td>
			<td style="width:129px;">Olympus</td>
			<td style="width:139px;">IX73</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:139px;">MPC-325</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Recording chamber and in-line Heater</td>
			<td style="width:129px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:139px;">TC-324C</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Other Instrument</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Micropipette Puller</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instrument&#160;</td>
			<td style="width:139px;">P-1000</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:149px;">Recording Chamber</td>
			<td style="width:129px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:139px;">RC-26G or homemade chamber</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:149px;">Borosilicate capillary glass with filament</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instrument / Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:139px;">BF150-86-10</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Vibration isolation table</td>
			<td style="width:129px;">TMC&#160;</td>
			<td style="width:139px;">63544</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Digital Camare</td>
			<td style="width:129px;">HAMAMASTU</td>
			<td style="width:139px;">ORCA-Flash4.0 V2 C11440-22CU</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Reagents for isolation</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:129px;">Gibco</td>
			<td style="width:139px;">22400089</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:129px;">Gibca</td>
			<td style="width:139px;">15140112</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">IMDM</td>
			<td style="width:129px;">ATCC&#160;</td>
			<td style="width:139px;">30-2005&#160;</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">IMDM</td>
			<td height="22" style="height:22px;width:129px;">Gibco</td>
			<td style="width:139px;">C12440500BT</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Collagenase I</td>
			<td style="width:129px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">C0130</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Collagenase II</td>
			<td style="width:129px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">C6885</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">5-&#945;-dihydrotestosterone</td>
			<td style="width:129px;">Medchemexpress</td>
			<td style="width:139px;">HY-A0120</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:129px;">capricorn</td>
			<td style="width:139px;">FBS-12A</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:149px;">Micropipette internal solutions (K+-based solution) (pH 7.2, 280-295 mOsm)</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">KCl, 35mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900068</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">MgCl2 &#183; 6H2O, 2mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">M2393</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">EGTA, 0.1mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">E4378</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">HEPES, 10mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900477</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">K-gluconate, 100mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">P-1847</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Mg-ATP, 3mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/Various</td>
			<td style="width:139px;">A9187</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:149px;">The standard external recording physiological salt solution (PSS) (pH 7.4, 300-310 mOsm)</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">NaCl, 140mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900058</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">KCl, 4.7mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900068</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">CaCl2, 2.5mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900266</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">MgCl2 &#183; 6H2O, 1.2mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">M2393</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">NaH2PO4, 1.2mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900060</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">HEPES, 10mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900477</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Glucose, 10mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900392</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">For pH adjustment</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">NaOH</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900797</td>
			<td style="width:207px;">Purity &#62;=97%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">KOH</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">60371</td>
			<td style="width:207px;">Purity &#62;=99.99%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-cell patch-clamp recordings of isolated primary epithelial cells from the epididymis

Das Nebenhoden ist ein wesentliches Organ für die Spermienreifung und die reproduktive Gesundheit. Das epididymale Epithel besteht aus aufwendig verbundenen Zelltypen, die sich nicht nur in molekularen und morphologischen Merkmalen, sondern auch in physiologischen Eigenschaften unterscheiden. Diese Unterschiede spiegeln ihre vielfältigen Funktionen wider, die zusammen die notwendige Mikroumgebung für die post-testikuläre Spermienentwicklung im epididymalen Lumen bilden. Das Verständnis der biophysikalischen Eigenschaften der epididymalen Epithelzellen ist entscheidend für die Aufdeckung ihrer Funktionen in der Spermien- und Reproduktionsgesundheit, sowohl unter physiologischen als auch pathophysiologischen Zuständen. Während ihre funktionellen Eigenschaften noch nicht vollständig aufgeklärt sind, können die epididymalen Epithelzellen unter Verwendung der Patch-Clamp-Technik, einem Werkzeug zur Messung der zellulären Ereignisse und der Membraneigenschaften einzelner Zellen, untersucht werden. Hier beschreiben wir die Methoden der Zellisolation und der Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnung auf meaSicher die elektrischen Eigenschaften der primär dissoziierten Epithelzellen aus der Ratte cauda epididymide.

Das beschriebene enzymatische Aufschlussverfahren für die Isolierung von Epithelzellen aus den Ratten-Cauda-Epididymiden ist ein modifiziertes Protokoll aus unseren bisherigen Studien 9 , 12 . Diese Methode erzeugt eine Mischung von Einzelzellen mit über 90% Lebensfähigkeit und ohne Oberflächenblasen oder gequollenes Zellvolumen. Die heterogene Zellmischung besteht hauptsächlich aus Hauptzellen, klaren Zellen und Basalzellen...

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Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

Wir präsentieren ein Protokoll, das Zellisolation und Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnung kombiniert, um die elektrischen Eigenschaften der primär dissoziierten Epithelzellen aus den Ratten-Cauda-Epididymiden zu messen. Dieses Protokoll erlaubt die Untersuchung der funktionellen Eigenschaften von primären epididymalen Epithelzellen, um die physiologische Rolle des Nebenhodens weiter zu erforschen.

Ganzzellige Patch-Clamp Aufnahmen von isolierten primären Epithelzellen aus dem Epididymis

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

Verwendung von isolierten Mitochondrien aus minimalen Mengen an Maus-Skelettmuskel für die Hochdurchsatz-Mikroplatten-Atemmessungen

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Primäre Endodermal Epithelial Cell Culture aus dem Dottersack-Membran der japanischen Wachtel Embry

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Cultivate Primary Nasal Epithelial Cells from Children and Reprogram into Induced Pluripotent Stem Cells

Pflegen Primäre Nasenepithelzellen von Kindern und umprogrammieren in induzierte pluripotente Stammzellen

Nasal epithelial cells (NECs) are the part of the airways that respond to air pollutants and are the first cells infected with respiratory viruses. They ...

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Entwicklung eines<em&gt; In Vitro</em&gt; Assay Kontraktionsfunktion von mesenchymalen Zellen, die Unterzog Epithelial-mesenchymale Transition zur Bewertung

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

In - vitro - Assays für Colony Tri-potente Progenitorzellen Charakterisieren von den Adult Murine Pancreas Isoliert

Stem and progenitor cells from the adult pancreas could be a potential source of therapeutic beta-like cells for treating patients with type 1 diabetes. ...

Generation of Induced-pluripotent Stem Cells Using Fibroblast-like Synoviocytes Isolated from Joints of Rheumatoid Arthritis Patients

Die Erzeugung von Induced-pluripotenten Stammzellen Fibroblast-wie Synoviozyten Isoliert von Gelenken von Patienten mit rheumatoider Arthritis

Mature somatic cells can be reversed into a pluripotent stem cell-like state using a defined set of reprogramming factors. Numerous studies have generated ...

Induction of Mesenchymal-Epithelial Transitions in Sarcoma Cells

Die Induktion von mesenchymalen-Epithelial Transitions in Sarcomzellen

Phenotypic plasticity refers to a phenomenon in which cells transiently gain traits of another lineage. During carcinoma progression, phenotypic ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Schnelle, gezielte Differenzierung der retinalen Pigment epithelialen Zellen aus menschlichen embryonalen oder induzierte pluripotente Stammzellen

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

Die Isolation und die Kultur der primären Epicardial Zellen aus menschlichen Erwachsenen und fetalen Herzens Exemplare

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computergestützte Analyse der Keimbahn Caenorhabditis Elegans , die Verteilung der Kerne, Proteine und das Zytoskelett zu studieren

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...