Name: whole-cell patch-clamp recordings of isolated primary epithelial cells from the epididymis
Uploaded: 2017-08-03T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis at JoVE.com

Ringraziamo il dottor Christopher Antos per i commenti utili sul testo. Questo lavoro è stato sostenuto dai fondi di start-up dell&#39;Università di ShanghaiTech assegnati a Winnie Shum e dai finanziamenti della National Science Foundation di Cina (NNSFC n.331471370).

Tutti gli esperimenti su animali vengono eseguiti in conformità alle linee guida del comitato istituzionale per la cura e l&#39;uso degli animali di ShanghaiTech, che soddisfano i requisiti locali e internazionali. 1. Animali sperimentali <ol><li> Usi i topi Sprague-Dawley maschi adulti (~ 300-450 g) tra i 8-12 settimane. A questa età nei ratti, gli spermatozoi sono arrivati ​​negli epididimidi cauda. </li></ol> 2. Isolamento delle cellule epiteliali da Rat Epid...

<ol>
	<li>Shum, W. W. C., Ruan, Y. C., Da Silva, N., Breton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Cell-Cell+Cross+Talk+in+the+Epididymis:+Control+of+Luminal+Acidification.">Establishment of Cell-Cell Cross Talk in the Epididymis: Control of Luminal Acidification.</a> J Androl. 32 (6), 576-586 (2011).</li><li>Robaire, B., Hinton, B. T., Plant, T. M., Zeleznik, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Knobil and Neill's Physiology of Reproduction. , 691-771 (2015).</li><li>Da Silva, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dense+network+of+dendritic+cells+populates+the+murine+epididymis.">A dense network of dendritic cells populates the murine epididymis.</a> Reproduction. 141 (5), 653-663 (2011).</li><li>Kolb, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Special Issue on Ionic Channels II. , 51-91 (1990).</li><li>Clapham, D. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+Projections+from+Basal+Cells+Are+Luminal+Sensors+in+Pseudostratified+Epithelia.">Transepithelial Projections from Basal Cells Are Luminal Sensors in Pseudostratified Epithelia.</a> Cell. 135 (6), 1108-1117 (2008).</li><li>Gao, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupling+of+TRPV6+and+TMEM16A+in+epithelial+principal+cells+of+the+rat+epididymis.">Coupling of TRPV6 and TMEM16A in epithelial principal cells of the rat epididymis.</a> J Gen Physiol. 148 (2), 161-182 (2016).</li><li>Huang, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Studies+of+Anion+Secretion+in+Cultured+Human+Epididymal+Cells.">Electrophysiological Studies of Anion Secretion in Cultured Human Epididymal Cells.</a> J Physiol. 455, 455-469 (1992).</li><li>Chan, H. C., Fu, W. O., Chung, Y. W., Chan, P. S. F., Wong, P. Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Atp-Activated+Cation+Conductance+in+Human+Epididymal+Cells.">An Atp-Activated Cation Conductance in Human Epididymal Cells.</a> Biol Repro. 52 (3), 645-652 (1995).</li><li>Cheung, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cell+interaction+underlies+formation+of+fluid+in+the+male+reproductive+tract+of+the+rat.">Cell-cell interaction underlies formation of fluid in the male reproductive tract of the rat.</a> J Gen Physiol. 125 (5), 443-454 (2005).</li><li>Pastor-Soler, N., Pietrement, C., Breton, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+acid/base+transporters+in+the+male+reproductive+tract+and+potential+consequences+of+their+malfunction.">Role of acid/base transporters in the male reproductive tract and potential consequences of their malfunction.</a> Physiol. 20, 417-428 (2005).</li><li>Evans, A. M., Osipenko, O. N., Haworth, S. G., Gurney, A. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Membranes, Ions and Impulses. A Chapter of Classical Biophysics. , (1968).</li><li>Lo, C. M., Keese, C. R., Giaever, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impedance+analysis+of+MDCK+cells+measured+by+electric+cell-substrate+impedance+sensing.">Impedance analysis of MDCK cells measured by electric cell-substrate impedance sensing.</a> Biophys J. 69, 2800-2807 (1995).</li><li>Solsona, C., Innocenti, B., Fernandez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+exocytotic+fusion+by+cell+inflation.">Regulation of exocytotic fusion by cell inflation.</a> Biophys J. 74 (2), 1061-1073 (1998).</li><li>Robinson, D. W., Cameron, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+changes+in+input+resistance+of+rat+hypoglossal+motoneurons+associated+with+whole-cell+recording.">Time-dependent changes in input resistance of rat hypoglossal motoneurons associated with whole-cell recording.</a> J Neurophysiol. 83 (5), 3160-3164 (2000).</li><li>Sontheimer, H., Boulton, A. A., Baker, G. B., Walz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuro Methods: Patch-Clamp Applications and Protocols. , (1995).</li><li>Cheung, Y. M., Hwang, J. C., Wong, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+membrane+potentials+of+the+epididymis+in+rats+[proceedings].">Epithelial membrane potentials of the epididymis in rats [proceedings].</a> J Physiol. 263 (2), 280 (1976).</li><li>Lybaert, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KATP+channel+subunits+are+expressed+in+the+epididymal+epithelium+in+several+mammalian+species.">KATP channel subunits are expressed in the epididymal epithelium in several mammalian species.</a> Biol Reprod. 79 (2), 253-261 (2008).</li></ol>

In questo protocollo, la dispersione enzimatica dei cauda epididimidi di ratto ha fornito costantemente cellule epiteliali sane. La qualità delle cellule epitidimali epiteliali per gli esperimenti di patch-clamp dipende da alcuni passi critici del protocollo. Per esempio, la centrifugazione della miscela cellulare a bassa forza centrifuga (30 xg) è importante per eliminare lo spermatozoo e il contenuto lumino epididimo; Le cellule epitidimali epiteliali diventano insalubre in presenza degli spermatozoi nella coltura c...

L&#39;epididimo nel tratto riproduttivo maschile è un organo allineato con uno strato di cellule epiteliali mosaiche. Come in altri tessuti epiteliali, i diversi tipi di cellule dell&#39;epitelio epididimo, comprese le cellule principali, le cellule chiare, le cellule basali e le cellule dei sistemi immunologici e linfatici, funzionano in modo concertato per funzionare come barriera alla linea frontale tubulare e come Sostenere le cellule per la maturazione e la fisiologia dello sperma 1 , 2 , 3 . Così, queste cellule epiteliali svolgono un ruolo essenziale nella salute riproduttiva. Le cellule epiteliali sono generalmente considerate come cellule non eccitabili che non sono in grado di generare potenziali d&#39;azione di tutti o nessuno in risposta a stimoli depolarizzanti, a causa della mancanza di canali Na + o Ca 2+ a tensione 4 , 5 . Tuttavia, le cellule epiteliali esprimono uniQue set di canali ionici e trasportatori che regolano i loro ruoli fisiologici specializzati, come il secreto e il trasporto dei nutrienti 6 . Diverse cellule epiteliali quindi possiedono caratteristiche elettriche caratteristiche. Ad esempio, le cellule principali esprimono il CFTR per il trasporto di fluidi e cloruri e esprimono il TRPV6 per il riassorbimento del calcio, mentre le cellule chiare esprimono la pompa protonica V-ATPasi per l&#39;acidificazione lumina 1 , 7 , 8 , 9 . Sono stati riportati alcuni trasportatori e canali ionici che regolano le caratteristiche fisiologiche delle cellule epitidimali epiteliali, ma le proprietà funzionali delle cellule epitidimali non sono ancora state ancora comprese 10 , 11 , 12 , 13 . WhLa registrazione di patch-clamp di olea-cell è una tecnica ben consolidata per esaminare le proprietà intrinseche di cellule eccitabili e non-eccitabili ed è particolarmente utile per studiare le funzioni delle cellule principalmente dissociate in campioni di cellule eterogenee; Il morsetto di tensione viene utilizzato per misurare le proprietà passive della membrana e le correnti ioniche delle singole cellule 14 , 15 . Le proprietà passive della membrana includono la resistenza di ingresso e la capacità. L&#39;ex parametro indica la conduttanza intrinseca della membrana, mentre quest&#39;ultima implica la superficie della membrana cellulare (un bilayer di fosfolipidi, dove sono posizionati canali ionici e trasportatori), che funge da sottile isolante che separa i media extracellulari e intracellulari). La capacità della membrana è direttamente proporzionale alla superficie della membrana cellulare. Insieme alla resistenza della membrana che si riflette dalla resistenza di ingresso, la costante di tempo della membrana, wChe indica quanto velocemente il potenziale della membrana cellulare risponde al flusso delle correnti del canale ionico, può essere determinato. A questo proposito, combinando le caratteristiche di risposta di corrente da una serie di passi di tensione applicati alle cellule, le cinetiche biofisiche e le proprietà delle cellule sono determinate 15 , 16 , 17 , 18 . Nel presente documento descriviamo le procedure per l&#39;isolamento delle cellule epiteliali dal ratto cauda epididymis e le fasi per misurare le proprietà delle membrane di differenti tipi di cellule nella miscela cellulare dissociata usando il patch-clamp di tutta la cellula. Mostriamo che le cellule principali epididimali presentano proprietà elettrofisiologiche distinte delle membrane e che le conduttanze possono essere facilmente identificate da altri tipi di cellule.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="624">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Instrument of AXON system</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:149px;">Computer controlled amplifier</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices - Axon</td>
			<td style="width:139px;">Multiclamp 700B patch-clamp amplifier</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Digital Acquisition system</td>
			<td style="width:129px;">Molecular Devices - Axon</td>
			<td style="width:139px;">Digidata 1550 converter</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Microscope</td>
			<td style="width:129px;">Olympus</td>
			<td style="width:139px;">BX-61WI</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:139px;">MPC-325</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Recording chamber and in-line Heater</td>
			<td style="width:129px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:139px;">TC-324C</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Instrument of HEKA system</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Patch Clamp amplifier</td>
			<td style="width:129px;">Harvard Bioscience - HEKA</td>
			<td style="width:139px;">EPC-10 USB double</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Microscope</td>
			<td style="width:129px;">Olympus</td>
			<td style="width:139px;">IX73</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:139px;">MPC-325</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Recording chamber and in-line Heater</td>
			<td style="width:129px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:139px;">TC-324C</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Other Instrument</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Micropipette Puller</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instrument&#160;</td>
			<td style="width:139px;">P-1000</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:149px;">Recording Chamber</td>
			<td style="width:129px;">Warner Instruments</td>
			<td style="width:139px;">RC-26G or homemade chamber</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:149px;">Borosilicate capillary glass with filament</td>
			<td style="width:129px;">Sutter Instrument / Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:139px;">BF150-86-10</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Vibration isolation table</td>
			<td style="width:129px;">TMC&#160;</td>
			<td style="width:139px;">63544</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Digital Camare</td>
			<td style="width:129px;">HAMAMASTU</td>
			<td style="width:139px;">ORCA-Flash4.0 V2 C11440-22CU</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Reagents for isolation</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">RPMI 1640 medium</td>
			<td style="width:129px;">Gibco</td>
			<td style="width:139px;">22400089</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:129px;">Gibca</td>
			<td style="width:139px;">15140112</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">IMDM</td>
			<td style="width:129px;">ATCC&#160;</td>
			<td style="width:139px;">30-2005&#160;</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">IMDM</td>
			<td height="22" style="height:22px;width:129px;">Gibco</td>
			<td style="width:139px;">C12440500BT</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Collagenase I</td>
			<td style="width:129px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">C0130</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Collagenase II</td>
			<td style="width:129px;">Sigma</td>
			<td style="width:139px;">C6885</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:149px;">5-&#945;-dihydrotestosterone</td>
			<td style="width:129px;">Medchemexpress</td>
			<td style="width:139px;">HY-A0120</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:129px;">capricorn</td>
			<td style="width:139px;">FBS-12A</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:149px;">Micropipette internal solutions (K+-based solution) (pH 7.2, 280-295 mOsm)</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">KCl, 35mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900068</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">MgCl2 &#183; 6H2O, 2mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">M2393</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">EGTA, 0.1mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">E4378</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">HEPES, 10mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900477</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">K-gluconate, 100mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">P-1847</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Mg-ATP, 3mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/Various</td>
			<td style="width:139px;">A9187</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="106">
			<td height="106" style="height:106px;width:149px;">The standard external recording physiological salt solution (PSS) (pH 7.4, 300-310 mOsm)</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">NaCl, 140mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900058</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">KCl, 4.7mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900068</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">CaCl2, 2.5mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900266</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">MgCl2 &#183; 6H2O, 1.2mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">M2393</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:149px;">NaH2PO4, 1.2mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900060</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">HEPES, 10mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900477</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">Glucose, 10mM</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900392</td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">For pH adjustment</td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:207px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">NaOH</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">V900797</td>
			<td style="width:207px;">Purity &#62;=97%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:149px;">KOH</td>
			<td style="width:129px;">Sigma/various</td>
			<td style="width:139px;">60371</td>
			<td style="width:207px;">Purity &#62;=99.99%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-cell patch-clamp recordings of isolated primary epithelial cells from the epididymis

L&#39;epididimo è un organo essenziale per la maturazione dello sperma e la salute riproduttiva. L&#39;epitelio epididimo è costituito da tipi cellulari connessi intricati e distinti non solo in termini molecolari e morfologici ma anche in proprietà fisiologiche. Queste differenze riflettono le loro diverse funzioni, che insieme stabiliscono il microambiente necessario per lo sviluppo spermatico post-testicolo nel lume epididimale. La comprensione delle proprietà biofisiche delle cellule epitidimali epiteliali è fondamentale per rivelare le loro funzioni nello sperma e nella salute riproduttiva, in condizioni sia fisiologiche che patofisiologiche. Mentre le loro proprietà funzionali devono ancora essere completamente chiarite, le cellule epitidimali epiteliali possono essere studiate usando la tecnica patch-clamp, uno strumento per misurare gli eventi cellulari e le proprietà delle membrane delle singole cellule. Qui descriviamo i metodi di isolamento delle cellule e la registrazione di patch-clamp a cellule intere a meaAssicurare le proprietà elettriche delle cellule epiteliali primarie dissociate dagli epididimidi cauda del caudali.

La procedura di digestione enzimatica descritta per l&#39;isolamento delle cellule epiteliali provenienti dai rasi di epididimide cauda è un protocollo modificato dei nostri precedenti studi 9 , 12 . Questo metodo produce una miscela di singole cellule con più di 90% di vitalità e senza blister di superficie o volume di cellule gonfie. La miscela cellulare eterogenea è costituita principalmente da cellule principali, cellule ...

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Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

Presentiamo un protocollo che combina l&#39;isolamento delle cellule e la registrazione delle patch-clamp a cellule intere per misurare le proprietà elettriche delle cellule epiteliali primarie dissociate dagli epididimidi di cauda di cauda. Questo protocollo consente di indagare le proprietà funzionali delle cellule epitidimali epididimali primarie per illustrare ulteriormente il ruolo fisiologico dell&#39;epididimo.

Registrazioni Patch-clamp intere cellule delle cellule epiteliali primarie isolate dall&#39;epididimo

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

Utilizzo di mitocondri isolati da minime quantità di muscolo scheletrico del mouse per High micropiastre rendimento respiratorie Misure

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Ricerca

Biologia dello sviluppo

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Primaria endodermico cellule epiteliali Cultura dal tuorlo Sac membrana di giapponesi Quail embrioni

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Cultivate Primary Nasal Epithelial Cells from Children and Reprogram into Induced Pluripotent Stem Cells

Coltivare cellule primarie epiteliali nasali da bambini e riprogrammare in cellule staminali pluripotenti indotte

Nasal epithelial cells (NECs) are the part of the airways that respond to air pollutants and are the first cells infected with respiratory viruses. They ...

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Sviluppo di un<em&gt; In Vitro</em&gt; Test per valutare funzione contrattile del mesenchimali Le cellule che sono stati sottoposti a transizione epitelio-mesenchimali

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

In Vitro Colony saggi per Caratterizzazione Tri-potenti cellule progenitrici isolato dal adulti murini Pancreas

Stem and progenitor cells from the adult pancreas could be a potential source of therapeutic beta-like cells for treating patients with type 1 diabetes. ...

Generation of Induced-pluripotent Stem Cells Using Fibroblast-like Synoviocytes Isolated from Joints of Rheumatoid Arthritis Patients

Generazione di cellule staminali pluripotenti indotte-Uso sinoviociti fibroblasti-come isolato da Giunti dell&#39;artrite reumatoide pazienti

Mature somatic cells can be reversed into a pluripotent stem cell-like state using a defined set of reprogramming factors. Numerous studies have generated ...

Induction of Mesenchymal-Epithelial Transitions in Sarcoma Cells

Induzione di mesenchimali-epiteliale transizioni in cellule di sarcoma

Phenotypic plasticity refers to a phenomenon in which cells transiently gain traits of another lineage. During carcinoma progression, phenotypic ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

Rapida, regia di differenziazione delle cellule epiteliali del pigmento retinico da cellule staminali pluripotenti umane embrionali o indotto

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

L'isolamento e coltura di cellule primarie dell'epicardio ricavate da campioni di cuore umano adulto e fetale

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

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Analisi computazionale della linea germinale Caenorhabditis elegans di studiare la distribuzione dei Nuclei, le proteine ed il citoscheletro

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...