Name: transfer of mammary gland-forming ability between mammary basal epithelial cells and mammary luminal cells via extracellular vesicles/exosomes
Uploaded: 2017-06-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transfer of Mammary Gland-forming Ability Between Mammary Basal Epithelial Cells and Mammary Luminal Cells via Extracellular Vesicles/Exosomes at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לחקר הבריאות (05A1-CSPP16-014, HJL) וממשרד המדע והטכנולוגיה (MOST 103-2320-B-400-015-MY3, HJL).

כל המחקרים העוסקים בבעלי חיים עמדו בפרוטוקולים שאושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים. 1. שלפוחית ​​תאיים / בידוד exosome ו Validation <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים NAMECs 4 , עם מדיום טרי, ללא סרו...

<ol>
	<li>Simons, M., Raposo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes--vesicular+carriers+for+intercellular+communication.">Exosomes--vesicular carriers for intercellular communication.</a> Curr Opin Cell Biol. 21 (4), 575-581 (2009).</li><li>Th&#233;ry, C., Ostrowski, M., Segura, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+vesicles+as+conveyors+of+immune+responses.">Membrane vesicles as conveyors of immune responses.</a> Nat Rev Immunol. 9 (8), 581-593 (2009).</li><li>Boelens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+Transfer+from+Stromal+to+Breast+Cancer+Cells+Regulates+Therapy+Resistance+Pathways.">Exosome Transfer from Stromal to Breast Cancer Cells Regulates Therapy Resistance Pathways.</a> Cell. 159 (3), 499-507 (2014).</li><li>Lin, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PGE2+/EP4+Signaling+Controls+the+Transfer+of+the+Mammary+Stem+Cell+State+by+Lipid+Rafts+in+Extracellular+Vesicles.">PGE2 /EP4 Signaling Controls the Transfer of the Mammary Stem Cell State by Lipid Rafts in Extracellular Vesicles.</a> Stem Cells. , (2016).</li><li>Th&#233;ry, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+exosomes+from+cell+culture+supernatants+and+biological+fluids.">Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids.</a> Curr Protoc Cell Biol. , (2006).</li><li>Gy&#246;rgy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+vesicles,+current+state-of-the-art:+emerging+role+of+extracellular+vesicles.">Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles.</a> Cell Mol Life Sci. 68 (16), 2667-2688 (2011).</li><li>Olver, C., Vidal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+secreted+exosomes.">Proteomic analysis of secreted exosomes.</a> Subcell Biochem. 43, 99-131 (2007).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>Prater, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+stem+cells+have+myoepithelial+cell+properties.">Mammary stem cells have myoepithelial cell properties.</a> Nat Cell Biol. 16 (10), 942-950 (2014).</li><li>Stingl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+unique+properties+of+mammary+epithelial+stem+cells.">Purification and unique properties of mammary epithelial stem cells.</a> Nature. 439 (7079), 993-997 (2006).</li><li>Gardiner, C., Ferreira, Y. J., Dragovic, R. A., Redman, C. W., Sargent, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle+sizing+and+enumeration+by+nanoparticle+tracking+analysis.">Extracellular vesicle sizing and enumeration by nanoparticle tracking analysis.</a> J Extracell Vesicles. 2, (2013).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem Biophys Res Commun. 28 (5), 815-820 (1967).</li><li>Riches, A., Campbell, E., Borger, E., Powis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+exosome+release+from+mammary+epithelial+and+breast+cancer+cells+-+a+new+regulatory+pathway.">Regulation of exosome release from mammary epithelial and breast cancer cells - a new regulatory pathway.</a> Eur J Cancer. 50 (5), 1025-1034 (2014).</li><li>Witwer, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+sample+collection,+isolation+and+analysis+methods+in+extracellular+vesicle+research.">Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research.</a> J Extracell Vesicles. 2, (2013).</li><li>van der Vlist, E. J., Nolte-'t Hoen, E. N., Stoorvogel, W., Arkesteijn, G. J., Wauben, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labeling+of+nano-sized+vesicles+released+by+cells+and+subsequent+quantitative+and+qualitative+analysis+by+high-resolution+flow+cytometry.">Fluorescent labeling of nano-sized vesicles released by cells and subsequent quantitative and qualitative analysis by high-resolution flow cytometry.</a> Nat Protoc. 7 (7), 1311-1326 (2012).</li><li>Kowal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+comparison+defines+novel+markers+to+characterize+heterogeneous+populations+of+extracellular+vesicle+subtypes.">Proteomic comparison defines novel markers to characterize heterogeneous populations of extracellular vesicle subtypes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), E968-E977 (2016).</li><li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADVANCED+IMAGING.+Extended-resolution+structured+illumination+imaging+of+endocytic+and+cytoskeletal+dynamics.">ADVANCED IMAGING. Extended-resolution structured illumination imaging of endocytic and cytoskeletal dynamics.</a> Science. 349 (6251), (2015).</li><li>Outzen, H. C., Custer, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+human+normal+and+neoplastic+mammary+tissues+in+the+cleared+mammary+fat+pad+of+the+nude+mouse.">Growth of human normal and neoplastic mammary tissues in the cleared mammary fat pad of the nude mouse.</a> J Natl Cancer Inst. 55 (6), 1461-1466 (1975).</li><li>Sheffield, L. G., Welsch, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+breast+epithelia+to+mammary-gland-free+fat-pads+of+athymic+nude+mice:+influence+of+mammotrophic+hormones+on+growth+of+breast+epithelia.">Transplantation of human breast epithelia to mammary-gland-free fat-pads of athymic nude mice: influence of mammotrophic hormones on growth of breast epithelia.</a> Int J Cancer. 41 (5), 713-719 (1988).</li></ol>

Exosomes לעתים קרובות לשאת מאפיינים של התאים ששחררו אותם, ואת כמות exosomes שוחרר יכול להיגרם על ידי גירויים 4 . המדיום התרבות של תאים ניתן לאסוף ונתונה ultracentrifugation דיפרנציאלי עבור EV / אוסף exosome ( איור 1 ). אין כרגע הסכמה כללית על שיטה אידיאלית לבודד EVS...

Exosomes יכול לתווך תקשורת סלולרית על ידי העברת חלבונים ממברנה cytosolic, שומנים, ו RNAs בין התאים 1 . תקשורת Exosome בתיווך הוכח להיות מעורב בתהליכים פיזיולוגיים ופתולוגיים רבים ( כלומר, מצגת אנטיגן, התפתחות סובלנות 2 , התקדמות הגידול 3 ). Exosomes לעתים קרובות יש תוכן דומה לאלה של תאים המקור לשחרר אותם. לפיכך, exosomes יכול לשאת מאפייני תאים ספציפיים מתאי המקור ולהעביר תכונות אלה לתאים לבלוע אותם 4 . Exosomes הם 50 עד 150 ננומטר כפול שכבת קרום שלפוחית ​​ו הנוכחי סמנים ספציפיים ( למשל, CD9, CD81, CD63, HSP70, Alix, ו TSG101). לפיכך, אקסוסומים חייבים להיות מאופיינים בשיטות שונות להיבטים שונים. מיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים ניתן להשתמש כדי לדמיין את שלפוחית ​​הממברנהכגון exosomes 4 , 5 . ניתוח מעקף ננו-חלקיקים (NTA) וניתוח פיזור אור דינמי (DLS) משמשים למדידת גודל ומספר אקוסומות מטוהרות 4 . תוכן קרום השומנים של exosomes ניתן לאמת על ידי שיפוע צפיפות. סמנים Exosomal, כגון CD9, CD81, CD63, HSP70, Alix, ו TSG101 6 , 7 , ניתן למדוד על ידי סופג המערבי. תאי הבסיס החלב יש את היכולת לייצר בלוטות החלב כאשר מושתלים לתוך רפידות שומן, בעוד תאים לומינליים לא יכול 8 , 9 , 10 . לפיכך, תאי הבסיס החלב מכונים גם יחידות repopulating החלב. על ידי שימוש במודל של תאי הבסיס ותאי לומיני החלב, ניתן לבחון את היכולת של EV / exosomes להעביר מאפייני התא בין אוכלוסיות תאים שונות. העבודה הזומדגים את השיטה של ​​העברת יכולת יצירת בלוטות מן תאים אפיתל הבסיס החלב לתאי אפיתל לומינלי החלב באמצעות EVS / exosomes נגזר תאי אפיתל הבסיס החלב. תאים אפיתל החלב לומיני רכשה תכונות תא הבסיס לאחר בליעה של EVs / exosomes מופרשים מתאי הבסיס ולאחר מכן ניתן ליצור בלוטות החלב 4 .

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MCDB 170&#160;</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>M2162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>1250062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima L-100K ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>393253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW28 Ti Rotor</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>342204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW41 Rotor</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>331306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NANOSIGHT LM10</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>NANOSIGHT LM10</td>
			<td>for nanoparticle tracking analysis (NTA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optiprep&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D1556</td>
			<td>60% (w/v) solution of iodixanol in water (sterile).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD81 antibody</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX101766</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD9 antibody</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX100912</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD63 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab59479</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSG101 antibody</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX118736</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX100118</td>
			<td>1:6000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFSE (carboxyfluorescein succinimidyl diacetate ester)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>V12883</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCalibur</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>fluorescence cell analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase Type IV&#160;</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>17104019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>27250018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;ITS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I3146</td>
			<td>a mixture of recombinant human insulin, human transferrin, and sodium selenite</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>accutase</td>
			<td>ebioscience</td>
			<td>00-4555-56</td>
			<td>a natural enzyme mixture with proteolytic and collagenolytic enzyme activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dispase&#160;</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>7913</td>
			<td>5 mg/ml = 5 U/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD49f antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>313611</td>
			<td>1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-EpCAM antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>118213</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>cell sorter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>carmine alum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human mammary epithelial cells (HMLE cells, NAMECs)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>gifts from Dr. Robert Weinberg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>permount</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>SP15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium bicarbonate</td>
			<td>Zymeset&#160;</td>
			<td>BSB101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocoritisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SI-H0888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SI-I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BPE (bovine pituitary extract)</td>
			<td>Hammod Cell Tech&#160;</td>
			<td>1078-NZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GW627368X&#160;</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10009162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-cm culture dish</td>
			<td>Falcon&#160;</td>
			<td>353025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>table-top centrifuge</td>
			<td>Eppendrof&#160;</td>
			<td>Centrifuge 3415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultracentrifuge tube</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>344058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate-buffered saline)&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA Protein Assay</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>23228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission Electron Microscopy</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>HT7700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gelatin&#160;</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm culture dish</td>
			<td>Falcon&#160;</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>female C57BL/6 mice</td>
			<td>NLAC (National Laboratory Animal Center</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>BioWest&#160;</td>
			<td>S01520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentamycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>15710072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>5PRIMER</td>
			<td>2500120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isofluorane&#160;</td>
			<td>Halocarbon</td>
			<td>NPC12164-002-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formaldehyde</td>
			<td>MACRON</td>
			<td>H121-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtOH (Ethanol)</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>800605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glacial acetic acid</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>131008.1611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aluminum potassium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803665</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m membranes</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>Millex-GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUTOCLIP Wound Clips, 9 mm</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUTOCLIP Wound Clip Applier</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask&#8482; Deep Red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>C10046</td>
			<td>plasma membrane stain</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transfer of mammary gland-forming ability between mammary basal epithelial cells and mammary luminal cells via extracellular vesicles/exosomes

תאים יכולים לתקשר באמצעות אקסוסומים, ~ 100 ננומטר שלפוחית ​​תאיים (EVs) המכילים חלבונים, שומנים וחומצות גרעין. Non-חסיד / mesenchymal תא אפיתל החלב (NAMEC), שודד שלפוחית ​​תאיים יכול להיות מבודדים בינוני NAMEC באמצעות ultracentrifugation דיפרנציאלי. בהתבסס על הצפיפות שלהם, EVs ניתן לטהר באמצעות ultracentrifugation ב 110,000 x גרם. ההכנה EV מן ultracentrifugation ניתן להפריד עוד באמצעות שיפוע צפיפות מתמשכת כדי למנוע זיהום עם חלבונים מסיסים. EVs מטוהרים לאחר מכן ניתן להעריך עוד באמצעות ניתוח nanoparticle מעקב, אשר מודד את הגודל ואת מספר שלפוחית ​​בהכנה. שלפוחית ​​תאיים עם גודל הנעים בין 50 ל 150 ננומטר הם exosomes. NAMEC הנגזרות EVs / exosomes ניתן לבלוע על ידי תאים אפיתל החלב, אשר ניתן למדוד על ידי cytometry הזרימה מיקרוסקופיה confocal. כמה תכונות תא גזע החלב ( למשל, יכולת בלוטת החלב יוצרת) יכוליועברו מן NAMECs דמויי גזע לתאי אפיתל החלב באמצעות NAMEC הנגזרות EV / exosomes. מבודד EpCAM היי / CD49f לו תאים luminal החלב epithelial לא יכול ליצור בלוטות החלב לאחר השתלתם לתוך רפידות שומן העכבר, בעוד EpCAM lo / CD49f היי תאים אפיתל החלב הבסיס החלב טופס בלוטות החלב לאחר ההשתלה. ספיגה של NAMEC הנגזרות EV / exosomes על ידי EpCAM היי / CD49f Lo לומינאלי תאים אפיתל החלב מאפשר להם לייצר בלוטות החלב לאחר השתלת לתוך רפידות שומן. ה- EVS / exosomes נגזר כמו תאי גזע כמו אפיתל החלב העברת בלוטת החלב יוצרת יכולת APCAM היי / CD49f lo לומינלית תאים אפיתל החלב.

מאז הוכח כי חסימת PGE 2 / EP 4 איתות מפעילה EV / שחרור exosome מתאי גזע דמויי הבסיס החלבני 4 , עבודה זו מציגה שיטה לבידוד EVs המושרה / exosomes מתרבות תא אפיתל החלב (NAMEC) החלב. מאז NAMECs הם מתורבת בינוני ללא סרום, אין קיימים EV / exosomes נגזר 13...

Watch this Scientific Journal Video about Transfer of Mammary Gland-forming Ability Between Mammary Basal Epithelial Cells and Mammary Luminal Cells via Extracellular Vesicles/Exosomes at JoVE.com

Transfer of Mammary Gland-forming Ability Between Mammary Basal Epithelial Cells and Mammary Luminal Cells via Extracellular Vesicles/Exosomes

פרוטוקול זה מתאר שיטות לטיהור, quantitating, אפיון שלפוחית ​​תאיים (EVs) / exosomes מ שאינם חסיד / mesenchymal תאים אפיתל החלב ועל השימוש בהם כדי להעביר את בלוטת החלב יוצרי היכולת לתאי אפיתל החלב לומינל. EVS / exosomes נגזר גזע כמו תאי אפיתל החלב יכול להעביר תכונה זו התא לתאים לבלוע EVs / exosomes.

העברת בלוטת החלב ביצירת יכולת בין תאי אפיתל בסל החלב תאים לומיני החלב באמצעות שלפוחיות תאיים / אקסוסומות

Cells can communicate via exosomes, ~100-nm extracellular vesicles (EVs) that contain proteins, lipids, and nucleic acids. Non-adherent/mesenchymal ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Cultivate Primary Nasal Epithelial Cells from Children and Reprogram into Induced Pluripotent Stem Cells

טפח תאי אפיתל באף הראשי מיילד לתכנת מחדש לתאי גזע מושרים

Nasal epithelial cells (NECs) are the part of the airways that respond to air pollutants and are the first cells infected with respiratory viruses. They ...

Induction of Mesenchymal-Epithelial Transitions in Sarcoma Cells

אינדוקציה של מעברי אפיתל- mesenchymal בתאי סרקומה

Phenotypic plasticity refers to a phenomenon in which cells transiently gain traits of another lineage. During carcinoma progression, phenotypic ...

Analysis of Protein-protein Interactions and Co-localization Between Components of Gap, Tight, and Adherens Junctions in Murine Mammary Glands

ניתוח אינטראקציות חלבון חלבון שיתוף לוקליזציה בין רכיבי פערים, צמודים, ו adherens צמתים Murine בלוטות החלב

Cell-cell interactions play a pivotal role in preserving tissue integrity and the barrier between the different compartments of the mammary gland. These ...

Quantifying Branching Density in Rat Mammary Gland Whole-mounts Using the Sholl Analysis Method

כימות צפיפות הענף בבלוטת החלב עכברוש- mounts כולו באמצעות שיטת ניתוח Sholl

An increasing number of studies are utilizing the rodent mammary gland as an endpoint for assessing the developmental toxicity of a chemical exposure. The ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

רומן חדש פאט שומן טכניקת השתלת לדמיין את כלי השיט הדור של כלי הדם בתאי גזע אנדותל

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

אופקי הר שלם: עיבוד רומן פרוטוקול הדמיה על רקמה עבה, תלת מימדי חתכים של העור

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion תא בודד בהמחיה שלם דג זברה

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

זיהוי של שרירי השלד תאים הלוויין על-ידי Immunofluorescence עם Pax7 ו- Laminin נוגדנים

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

ניתוח חישובית של Germline Caenorhabditis elegans ללמוד הפצה של גרעינים, חלבונים ו את שלד התא

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

בדור חוץ גופית של Somite נגזרים מן האדם המושרה בתאי גזע Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...