Name: transfer of mammary gland-forming ability between mammary basal epithelial cells and mammary luminal cells via extracellular vesicles/exosomes
Uploaded: 2017-06-03T14:00:00
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이 연구는 국립 보건 연구원 (05A1-CSPP16-014, HJL)과 과학 기술부 (MOST 103-2320-B-400-015-MY3, HJL)의 연구비 지원에 의해 뒷받침되었다.

동물과 관련된 모든 연구는 동물 관리위원회 (Institutional Animal Care Committee)가 승인 한 의정서를 준수했습니다. 1. 세포 외 소포 / 엑소 좀 격리 및 검증 <ol><li> 문화 유방 상피 기저 세포, NAMECs, 500 mL의 MCDB 170, pH 7.4 + 500 mL의 중탄산 나트륨 (0.2438 %)을 함유 한 DMEM / F12로 제조 된 신선한 무 혈청 배지; EGF (5 ng / mL); hydrocoritisone (0.5 μg / mL); 인슐린 (5 μg / mL); 소 뇌하수체 추출물 (BPE; ...

<ol>
	<li>Simons, M., Raposo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes--vesicular+carriers+for+intercellular+communication.">Exosomes--vesicular carriers for intercellular communication.</a> Curr Opin Cell Biol. 21 (4), 575-581 (2009).</li><li>Th&#233;ry, C., Ostrowski, M., Segura, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+vesicles+as+conveyors+of+immune+responses.">Membrane vesicles as conveyors of immune responses.</a> Nat Rev Immunol. 9 (8), 581-593 (2009).</li><li>Boelens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosome+Transfer+from+Stromal+to+Breast+Cancer+Cells+Regulates+Therapy+Resistance+Pathways.">Exosome Transfer from Stromal to Breast Cancer Cells Regulates Therapy Resistance Pathways.</a> Cell. 159 (3), 499-507 (2014).</li><li>Lin, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PGE2+/EP4+Signaling+Controls+the+Transfer+of+the+Mammary+Stem+Cell+State+by+Lipid+Rafts+in+Extracellular+Vesicles.">PGE2 /EP4 Signaling Controls the Transfer of the Mammary Stem Cell State by Lipid Rafts in Extracellular Vesicles.</a> Stem Cells. , (2016).</li><li>Th&#233;ry, C., Amigorena, S., Raposo, G., Clayton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+exosomes+from+cell+culture+supernatants+and+biological+fluids.">Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids.</a> Curr Protoc Cell Biol. , (2006).</li><li>Gy&#246;rgy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+vesicles,+current+state-of-the-art:+emerging+role+of+extracellular+vesicles.">Membrane vesicles, current state-of-the-art: emerging role of extracellular vesicles.</a> Cell Mol Life Sci. 68 (16), 2667-2688 (2011).</li><li>Olver, C., Vidal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+secreted+exosomes.">Proteomic analysis of secreted exosomes.</a> Subcell Biochem. 43, 99-131 (2007).</li><li>Shackleton, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell.">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).</li><li>Prater, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+stem+cells+have+myoepithelial+cell+properties.">Mammary stem cells have myoepithelial cell properties.</a> Nat Cell Biol. 16 (10), 942-950 (2014).</li><li>Stingl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+unique+properties+of+mammary+epithelial+stem+cells.">Purification and unique properties of mammary epithelial stem cells.</a> Nature. 439 (7079), 993-997 (2006).</li><li>Gardiner, C., Ferreira, Y. J., Dragovic, R. A., Redman, C. W., Sargent, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle+sizing+and+enumeration+by+nanoparticle+tracking+analysis.">Extracellular vesicle sizing and enumeration by nanoparticle tracking analysis.</a> J Extracell Vesicles. 2, (2013).</li><li>Shapiro, A. L., Vi&#241;uela, E., Maizel, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+weight+estimation+of+polypeptide+chains+by+electrophoresis+in+SDS-polyacrylamide+gels.">Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels.</a> Biochem Biophys Res Commun. 28 (5), 815-820 (1967).</li><li>Riches, A., Campbell, E., Borger, E., Powis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+exosome+release+from+mammary+epithelial+and+breast+cancer+cells+-+a+new+regulatory+pathway.">Regulation of exosome release from mammary epithelial and breast cancer cells - a new regulatory pathway.</a> Eur J Cancer. 50 (5), 1025-1034 (2014).</li><li>Witwer, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+sample+collection,+isolation+and+analysis+methods+in+extracellular+vesicle+research.">Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research.</a> J Extracell Vesicles. 2, (2013).</li><li>van der Vlist, E. J., Nolte-'t Hoen, E. N., Stoorvogel, W., Arkesteijn, G. J., Wauben, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labeling+of+nano-sized+vesicles+released+by+cells+and+subsequent+quantitative+and+qualitative+analysis+by+high-resolution+flow+cytometry.">Fluorescent labeling of nano-sized vesicles released by cells and subsequent quantitative and qualitative analysis by high-resolution flow cytometry.</a> Nat Protoc. 7 (7), 1311-1326 (2012).</li><li>Kowal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+comparison+defines+novel+markers+to+characterize+heterogeneous+populations+of+extracellular+vesicle+subtypes.">Proteomic comparison defines novel markers to characterize heterogeneous populations of extracellular vesicle subtypes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (8), E968-E977 (2016).</li><li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADVANCED+IMAGING.+Extended-resolution+structured+illumination+imaging+of+endocytic+and+cytoskeletal+dynamics.">ADVANCED IMAGING. Extended-resolution structured illumination imaging of endocytic and cytoskeletal dynamics.</a> Science. 349 (6251), (2015).</li><li>Outzen, H. C., Custer, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+human+normal+and+neoplastic+mammary+tissues+in+the+cleared+mammary+fat+pad+of+the+nude+mouse.">Growth of human normal and neoplastic mammary tissues in the cleared mammary fat pad of the nude mouse.</a> J Natl Cancer Inst. 55 (6), 1461-1466 (1975).</li><li>Sheffield, L. G., Welsch, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+breast+epithelia+to+mammary-gland-free+fat-pads+of+athymic+nude+mice:+influence+of+mammotrophic+hormones+on+growth+of+breast+epithelia.">Transplantation of human breast epithelia to mammary-gland-free fat-pads of athymic nude mice: influence of mammotrophic hormones on growth of breast epithelia.</a> Int J Cancer. 41 (5), 713-719 (1988).</li></ol>

엑소 좀은 종종 그것들을 방출 한 세포의 특성을 가지고 있으며 방출 된 엑소 좀의 양은 자극 4 에 의해 유도 될 수있다. 세포의 배양 배지를 수집하여 EV / exosome 수집을위한 차동 초 원심 분리 (differential centrifuge)에 적용 할 수 있습니다 ( 그림 1 ). 현재 EVs / exosomes를 분리하는 이상적인 방법에 대한 일반적인 합의는 없다. 여기에서 사용 된 최적의 방법은 다?...

Exosomes는 막과 세포질 단백질, 지질 및 RNA를 세포간에 전달하여 세포 간 통신을 매개 할 수 있습니다 1 . Exosome-mediated communication은 많은 생리 학적 및 병리학 적 과정 ( 즉, 항원 제시, 내성 2 의 발달 및 종양 진행 3 )에 관여하는 것으로 입증되었습니다. 엑소 좀은 종종 그것들을 방출하는 원천 세포와 비슷한 내용을 가지고있다. 따라서, exosomes은 소스 세포에서 특정 세포 속성을 수행하고 4 그들을 섭취 세포 에이 특성을 전송할 수 있습니다. Exosomes는 50 ~ 150 nm의 이중층 멤브레인 베 시클이며 특정 마커 ( 예 : CD9, CD81, CD63, HSP70, Alix 및 TSG101)를 나타냅니다. 따라서, 엑소 좀은 다양한 측면에 대한 다양한 방법으로 특징 지어 져야한다. 투과 전자 현미경으로 막 소포를 시각화 할 수 있습니다.엑소 좀 4 , 5 와 같은 나노 입자 추적 분석 (NTA)과 동적 광산란 분석 (DLS)은 정제 된 엑소 좀의 크기와 수를 측정하는 데 사용됩니다 4 . 엑소 좀의 지질막 함량은 밀도 구배로 확인할 수 있습니다. CD9, CD81, CD63, HSP70, Alix 및 TSG101 6 , 7 같은 엑소 좀 마커는 웨스턴 블 랏팅으로 측정 할 수 있습니다. 유방 기저 세포는 유방 패드에 이식 될 때 유선을 생성 할 수있는 능력이 있지만 luminal 세포는 8 , 9 , 10 일 수 없습니다. 따라서, 유방 기초 세포는 유방 재 분산 단위라고도합니다. 유방 기저 세포 및 내강 세포의 모델을 사용하여 EVs / 엑소 좀이 다른 세포 집단간에 세포 특성을 전달하는 능력을 검사 할 수 있습니다. 이 일유방 기초 상피 세포에서 유래 한 EVs / exosomes를 이용하여 유방 기초 상피 세포에서 유방 내피 세포로 유선 형성능을 전달하는 방법을 보여줍니다. 근위 유방 상피 세포는 기저 세포에서 분비 된 EV / 엑소 좀을 섭취 한 후 기저 세포 특성을 획득하고 유방 땀 샘을 형성 할 수 있습니다 4 .

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MCDB 170&#160;</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>M2162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>1250062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optima L-100K ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>393253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW28 Ti Rotor</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>342204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW41 Rotor</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>331306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NANOSIGHT LM10</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>NANOSIGHT LM10</td>
			<td>for nanoparticle tracking analysis (NTA)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optiprep&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D1556</td>
			<td>60% (w/v) solution of iodixanol in water (sterile).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD81 antibody</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX101766</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD9 antibody</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX100912</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD63 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab59479</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSG101 antibody</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX118736</td>
			<td>1:1000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH</td>
			<td>GeneTex</td>
			<td>GTX100118</td>
			<td>1:6000 in 5% w/v nonfat dry milk, 1X TBS, 0.1% Tween 20 at 4&#176;C, overnight&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFSE (carboxyfluorescein succinimidyl diacetate ester)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>V12883</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCalibur</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>fluorescence cell analyzer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>collagenase Type IV&#160;</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>17104019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>27250018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;ITS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I3146</td>
			<td>a mixture of recombinant human insulin, human transferrin, and sodium selenite</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>accutase</td>
			<td>ebioscience</td>
			<td>00-4555-56</td>
			<td>a natural enzyme mixture with proteolytic and collagenolytic enzyme activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dispase&#160;</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>7913</td>
			<td>5 mg/ml = 5 U/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD49f antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>313611</td>
			<td>1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-EpCAM antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>118213</td>
			<td>1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>cell sorter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>carmine alum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>human mammary epithelial cells (HMLE cells, NAMECs)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>gifts from Dr. Robert Weinberg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>permount</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>SP15-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium bicarbonate</td>
			<td>Zymeset&#160;</td>
			<td>BSB101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocoritisone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SI-H0888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SI-I9278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BPE (bovine pituitary extract)</td>
			<td>Hammod Cell Tech&#160;</td>
			<td>1078-NZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GW627368X&#160;</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10009162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15-cm culture dish</td>
			<td>Falcon&#160;</td>
			<td>353025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>table-top centrifuge</td>
			<td>Eppendrof&#160;</td>
			<td>Centrifuge 3415R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultracentrifuge tube</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>344058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (Phosphate-buffered saline)&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCA Protein Assay</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>23228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission Electron Microscopy</td>
			<td>Hitachi</td>
			<td>HT7700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gelatin&#160;</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10-cm culture dish</td>
			<td>Falcon&#160;</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>female C57BL/6 mice</td>
			<td>NLAC (National Laboratory Animal Center</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal Bovine Serum)</td>
			<td>BioWest&#160;</td>
			<td>S01520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gentamycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>15710072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-Cl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>5PRIMER</td>
			<td>2500120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isofluorane&#160;</td>
			<td>Halocarbon</td>
			<td>NPC12164-002-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formaldehyde</td>
			<td>MACRON</td>
			<td>H121-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EtOH (Ethanol)</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td>800605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glacial acetic acid</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>131008.1611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aluminum potassium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>12625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803665</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m membranes</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>Millex-GP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUTOCLIP Wound Clips, 9 mm</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUTOCLIP Wound Clip Applier</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellMask&#8482; Deep Red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>C10046</td>
			<td>plasma membrane stain</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transfer of mammary gland-forming ability between mammary basal epithelial cells and mammary luminal cells via extracellular vesicles/exosomes

세포는 단백질, 지질 및 핵산을 포함하는 ~ 100-nm 세포 외 소포 (EVs) 인 엑소 좀을 통해 전달할 수 있습니다. Non-adherent / mesenchymal mammary epithelial cell (NAMEC) 유래 세포 외 소포는 차별적 인 초 원심 분리를 통해 NAMEC 배지에서 분리 할 수 ​​있습니다. 밀도에 따라 EV는 110,000 x g에서 초 원심 분리를 통해 정제 할 수 있습니다. 초 원심 분리로 얻은 EV 준비물은 가용성 단백질에 의한 오염을 방지하기 위해 연속 밀도 구배를 사용하여 더욱 분리 할 수 ​​있습니다. 그런 다음 정화 된 EVs는 나노 입자 추적 분석을 사용하여 추가로 평가할 수 있으며, 이는 준비 과정에서 소포의 크기와 수를 측정합니다. 50 내지 150 nm 범위의 세포 외 소포가 엑소 좀이다. NAMEC에서 추출한 EVs / exosomes는 유선 상피 세포에서 섭취 할 수 있는데, 이는 유동 세포 계측법과 공 촛점 현미경으로 측정 할 수 있습니다. 일부 유방 줄기 세포 특성 ( 예 : 유선 형성 능력)은줄기 모양의 NAMEC에서 NAMEC 유래 EVs / 엑소 좀을 통해 유방 상피 세포로 전달 될 수있다. 격리 된 일차 성 EpCAM hi / CD49f lo 내시경 상피 ​​세포는 마우스 지방 패드에 이식 된 후 유방 땀샘을 형성 할 수 없으며, EpCAM lo / CD49f hi 기저 유방 상피 세포는 이식 후 유방 땀샘을 형성합니다. EpCAM hi / CD49f lo luminal mammary 상피 세포에 의한 NAMEC 유래 EVs / 엑소 좀의 섭취는 지방 패드에 이식 된 후 유방 땀샘을 생성하게한다. 줄기 모양의 유방 상피 세포로부터 유래 된 EVs / 엑소 좀은 유방 내 형성 능력을 EpCAM hi / CD49f lo 내강 유방 상피 세포로 전달한다.

PGE 2 / EP 4 신호 전달을 막음으로써 유방 기초 형 줄기 세포 4 에서 EV / 엑소 좀 방출을 유발한다는 것이 보여지기 때문에,이 연구는 유방 상피 기저 세포 (NAMEC) 배양으로부터 유도 된 EVs / 엑소 좀을 분리하는 방법을 제시한다. NAMEC은 혈청이없는 배지에서 배양되기 때문에 혈청에서 유래 된 EV / 엑소 좀은 존재하지 않는다. 혈청 함유 배지?...

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Transfer of Mammary Gland-forming Ability Between Mammary Basal Epithelial Cells and Mammary Luminal Cells via Extracellular Vesicles/Exosomes

이 프로토콜은 non-adherent / mesenchymal 유방 상피 세포에서 세포 외 소포 (EVs) / 엑소 좀을 정화, 정량화 및 특성화하고 유선 형성능을 내유성 상피 세포로 전달하는 방법을 설명합니다. 줄기 모양의 유방 상피 세포로부터 유래 된 EVs / 엑소 좀은이 세포 특성을 EVs / 엑소 좀을 섭취하는 세포로 전달할 수있다.

extracellular vesicles / exosomes를 통한 유방 기초 상피 세포와 유방 Luminal 세포 사이 유선 형성 능력의 이전

Cells can communicate via exosomes, ~100-nm extracellular vesicles (EVs) that contain proteins, lipids, and nucleic acids. Non-adherent/mesenchymal ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

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연구

발생학

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Phenotypic plasticity refers to a phenomenon in which cells transiently gain traits of another lineage. During carcinoma progression, phenotypic ...

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Quantifying Branching Density in Rat Mammary Gland Whole-mounts Using the Sholl Analysis Method

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Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Pax7 Laminin 항 체와 면역 형광에 의해 골격 근육 인공위성 세포의 식별

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

꼬마 선 충 생식 핵의 분포, 단백질, 및 골격을 전산 분석

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

인간 유도에서 Somite 파생 상품의 체 외 발생에서 만능 줄기 세포

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...