Name: glucose uptake measurement and response to insulin stimulation in in vitro cultured human primary myotubes
Uploaded: 2017-06-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes at JoVE.com

लेखकों ने रेडियोलॉजी सेवा (लियोन-सूद अस्पताल) और उनके वित्तीय सहायता के लिए शौकीन राष्ट्रीय सुसे (एफएनएस) में ऐन चार्री को स्वीकार किया है।

1. सेल संस्कृति मीडिया और समाधान की तैयारी <ol><li> संस्कृति मीडिया की तैयारी <ol><li> ग्लूटामाइन (2 मिमी), पेनिसिलिन / स्ट्रेप्टोमाइसिन (5 माइक्रोग्राम / एमएल फाइनल), 2% फेलल कैल्फ सीरम (एफसीएस) और 2% सीरम ऑप्शन क...

ग्लूकोज तेज गति से सेल संस्कृति पर सक्रियणकर्ता या अवरोधकों के परीक्षण के लिए एक महत्वपूर्ण जैविक माप है और यह कि कैसे ग्लूकोज का इस्तेमाल करते हैं और इंसुलिन का जवाब देने के लिए सेल की क्षमता। यहां वर...

स्केलेटल मांसपेशी स्तनधारियों में सबसे बड़ा ग्लूकोज जमा है और मोटे तौर पर ग्लूकोज होमोस्टैसिस में योगदान देता है। यह इंसुलिन उत्तरदायी ऊतक ग्लूकोस तेज की प्राथमिक साइट है जो इंसुलिन उत्तेजना 1 से शुरू हो रहा है। टाइप 2 मधुमेह में, कंकाल की मांसपेशी सहित कई ऊतकों में इंसुलिन प्रतिरोध मनाया जाता है, और सामान्य रक्त शर्करा की एकाग्रता को ऊपर जाता है। इस प्रकार, इस ऊतक और उसके कोशिकाओं की इंसुलिन संवेदनशीलता के स्तर को निर्धारित करने के लिए यह एक महत्वपूर्ण प्रासंगिकता का है, चाहे उद्देश्य किसी विषय में किसी दोष को चिह्नित करना है या इसे बेहतर बनाने के इरादे से उपचार की दक्षता का मूल्यांकन करना है। मानव या पशु विषयों में, इंसुलिन संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए सोने की मानक तकनीक हाइपरिन्सिलिनेमिक-इयूग्लेसेमिक क्लैंप है। 1 9 7 9 में डेफ्रोनो द्वारा प्रस्तुत किया गया और 3 से 4 में संशोधित किया गया , तब विधि पूरे शरीर को मापने की अनुमति देता हैसामान्य रक्त ग्लूकोज एकाग्रता बनाए रखने के लिए इंसुलिन उत्तेजना के तहत ग्लूकोज की दर के रूप में मापा गया एनडी ऊतक इंसुलिन की प्रतिक्रिया। इंसुलिन संवेदनशीलता की खोज को इन विट्रो मांसपेशी मॉडल में उपयोग करके सेल स्तर पर किया जा सकता है, और ग्लूकोज तेज गति का माप इंसुलिन उत्तेजना 5 , 6 , 7 के लिए कोशिका के जैविक प्रतिक्रिया को मापने के लिए एक कुशल और विश्वसनीय उपकरण है। दरअसल, ग्लूकोज तेज गति इंसुलिन उत्तेजना को सेल जैविक प्रतिक्रिया, अपने रिसेप्टर से जीएलयूटी 4 समृद्ध vesicles के स्थानांतरण के लिए इंसुलिन की बाध्यता से, और इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग और फास्फोरायलेशन कैसकैड्स 8 सहित, मात्रा देता है। मानव नमूनों के साथ यह मुख्य रूचि है, क्योंकि विभेदित मैयोट्यूब चयापचय गुण सहित दाता phenotype के कई विशेषताएं बनाए रखते हैंमरीज 9 , 10 , 11 , 12 में देखे गए रोग और विकार म्यूट्यूबल्स कंकाल की मांसपेशी 13 , 14 के लिए संरचनात्मक, चयापचय और फेनोटाइपिक समानताएं दिखाती है जिसमें ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर 15 की अभिव्यक्ति और सेलुलर इंसुलिन सिग्नलिंग मशीनरी 16 शामिल है । इस प्रकार, प्राथमिक मैयोट्यूब में ग्लूकोज तेज की माप एक दाता की मांसपेशी फेनोटाइप को दर्शाने या मांसपेशी कोशिका में इंसुलिन संवेदनशीलता पर हस्तक्षेप (दवा, पोषण, या शारीरिक गतिविधि) के प्रभाव की जांच करने के लिए प्रासंगिकता है। इन्सुलिन संवेदनशीलता 17 , 18 को संशोधित करने वाले प्रयोग करते समय सुसंस्कृत मैयोट्यूब पर ग्लूकोज तेज की माप एक विश्वसनीय उपकरण भी है। इन विट्रो में </Em&gt; मॉडल किसी भी यौगिकों के परीक्षण के लिए उपयुक्त है जो इंसुलिन की प्रतिक्रिया में सुधार कर सकता है, या अधिग्रहीत या प्रेरित इंसुलिन प्रतिरोध 19 , 20 , 21 , 22 , 23 को रोकने या रिवर्स कर सकता है। यहां हम संस्कृति के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं और मानव मैथ्यूबस को अलग करते हैं और सेल ग्लूकोज तेज गति को मापते हैं। यह विधि मानव मांसपेशी पूर्ववर्ती कोशिकाओं के किसी भी स्रोत पर लागू होती है, चाहे वे इन-लैब की तैयारी, सहयोग या व्यावसायिक रूप से उपलब्ध आपूर्तिकर्ताओं से आते हों। क्रमशः माउस और चूहा उत्पत्ति से क्रमशः सीसी 212 और एल 6 जैसी अमर स्नायविक सेल लाइनों का उपयोग इस प्रोटोकॉल 7 के साथ ग्लूकोज तेज गति के लिए भी किया जा सकता है। हम रेडियोलैलेड [ 3 एच] 2 डीजी का उपयोग करते हुए बेसल और इंसुलिन-प्रेरित राज्यों में दरों का परिमाण के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। टीवह एक लेबल ग्लूकोज एनालॉग का उपयोग कम प्रारंभिक सामग्री के साथ ग्लूकोज प्रविष्टि के सटीक निर्धारण की अनुमति देता है, प्राथमिक कोशिकाओं के साथ काम करते समय एक सामान्य स्थिति। संशोधित ग्लूकोज अणु चयापचय मार्गों में प्रवेश करने में असमर्थ है, और इस प्रकार, सेल के भीतर जमा होता है, जो कुल सेल रेडियोधर्मिता के जरिये विश्वसनीय मात्रा का आदान-प्रदान करता है। प्रायोगिक स्थितियों में ग्लूकोज ट्रांसपोर्ट इनहिबिटर (cytochalasin B) का उपयोग शामिल है, और इंसुलिन के बिना और बिना मापन किया जाता है यह संयोजन ग्लूकोज सक्रिय प्रविष्टि दर के निर्धारण के साथ-साथ इंसुलिन प्रतिक्रिया सूचकांक के लिए गुना परिवर्तन की गणना भी देता है। विधि एक ऊष्मायन समय के दौरान इंसुलिन की एक खुराक के साथ प्रस्तुत की जाती है, लेकिन प्रोटोकॉल आसानी से खुराक प्रतिक्रिया या समय के पाठ्यक्रम प्रयोगों 12 के लिए संशोधित किया जा सकता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="868">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Human primary muscle cell</td>
			<td style="width:171px;">In house preparation from human skeletal muscle biopsies</td>
			<td style="width:180px;">In house preparation from human skeletal muscle biopsies</td>
			<td style="width:257px;">If not available, use commercial source</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Human primary muscle cell</td>
			<td style="width:171px;">Promocell</td>
			<td>C-12530</td>
			<td style="width:257px;">Should be cultured with associated media C23060 and C23061</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">6-well plate</td>
			<td style="width:171px;">Corning</td>
			<td style="width:180px;">356400</td>
			<td style="width:257px;">BioCoat Collagen I Multiwell Plates</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Ham&#39;s F10</td>
			<td style="width:171px;">Dutscher</td>
			<td style="width:180px;">L0145-500</td>
			<td style="width:257px;">1 g/l glucose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Glutamine</td>
			<td style="width:171px;">Dutscher</td>
			<td style="width:180px;">X0551-100</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">penicilin/streptomycin 100x</td>
			<td style="width:171px;">Thermo fisher scientific</td>
			<td style="width:180px;">15140122</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Serum substitute UltroserG</td>
			<td style="width:171px;">Pall France</td>
			<td style="width:180px;">15950.017</td>
			<td style="width:257px;">serum substitute in text</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">DMEM low glucose</td>
			<td style="width:171px;">Dutscher</td>
			<td style="width:180px;">L0064-500</td>
			<td style="width:257px;">1 g/l glucose</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td style="width:171px;">Eurobio</td>
			<td style="width:180px;">CVFSVF00-01</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td style="width:171px;">Dutscher</td>
			<td style="width:180px;">L0625-500</td>
			<td style="width:257px;">Contains Mg2+ (0.5 mM) and Ca2+ (0.9 mM)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Insulin solution human</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:180px;">I9278</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">2-deoxy-D-glucose&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:180px;">D6134</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Albumin bovine</td>
			<td style="width:171px;">euromedex</td>
			<td style="width:180px;">04-100-812-E</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">fatty acid-free BSA</td>
			<td style="width:171px;">Roche</td>
			<td style="width:180px;">10,775,835,001</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">palmitate</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:180px;">P0500</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Deoxy-D-glucose, 2-[1,2-3H (N)]</td>
			<td style="width:171px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:180px;">NET328A001MC</td>
			<td style="width:257px;">Specific Activity: 5-10Ci (185-370GBq)/mmol, 1mCi (37MBq</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Cytochalasin B</td>
			<td style="width:171px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:180px;">c2743</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">PICO PRIAS VIAL 6ml</td>
			<td style="width:171px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:180px;">6000192</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">ultima gold MW CA&#160;</td>
			<td style="width:171px;">PerkinElmer</td>
			<td>6013159</td>
			<td style="width:257px;">scintillation liquid</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">b&#234;ta counter&#160;</td>
			<td style="width:171px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:180px;">2900TR</td>
			<td style="width:257px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

glucose uptake measurement and response to insulin stimulation in in vitro cultured human primary myotubes

स्केलेटल मांसपेशी स्तनधारियों में सबसे बड़ा ग्लूकोज जमा है और मोटे तौर पर ग्लूकोज होमोस्टैसिस में योगदान देता है। मांसपेशी के ग्लूकोज चयापचय की खोज के लिए समर्पित सभी अध्ययनों के लिए मांसपेशियों की कोशिकाओं की इंसुलिन संवेदनशीलता का आकलन प्रमुख रूप से प्रासंगिक है और चयापचय संबंधी बदलावों को निस्र्पक करते हैं। मांसपेशियों की कोशिकाओं में ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर टाइप 4 (ग्लूटा 4) प्रोटीन इंसुलिन के जवाब में प्लाज्मा झिल्ली को स्थानांतरित करते हैं, जिससे सेल में ग्लूकोज की भारी प्रविष्टि हो सकती है। ग्लूकोज तेज की दर बढ़ाने के द्वारा पेशी कोशिकाओं की इंसुलिन का जवाब देने की क्षमता इंसुलिन की मांसपेशियों की कोशिका संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए मानक पढ़ाई है। मानव प्राथमिक मायोट्यूब इन विट्रो मॉडल में एक उपयुक्त हैं, क्योंकि कोशिकाओं में दाता phenotype की कई विशेषताएं हैं, जिनमें इंसुलिन संवेदनशीलता शामिल है। यह इन विट्रो मॉडल में भी किसी भी यौगिकों के परीक्षण के लिए उपयुक्त है जो इंसुलिन की प्रतिक्रिया को प्रभावित कर सकता है। विभेदित मायोट्यूब में ग्लूकोज तेज गति का माप प्रतिबिंबित करता हैइंसुलिन संवेदनशीलता इस पद्धति में, मानव प्राथमिक मांसपेशियों की कोशिकाओं को विभेदित मैयोट्यूब प्राप्त करने के लिए इन विट्रो में सुसंस्कृत किया जाता है, और इंसुलिन उत्तेजना के बिना ग्लूकोज की तेज दरों को मापा जाता है। हम रेडियोलैलेड [ 3 एच] 2-डीओसी-डी-ग्लूकोज ([ 3 एच] 2 डीजी) के उपयोग से निष्क्रिय और सक्रिय ग्लूकोज ट्रांसपोर्ट रेटों को मापने के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। सक्रिय बेसल और इंसुलिन से प्रेरित दरों की मात्रा के साथ-साथ उत्तेजना गुना की गणना के लिए गणना पद्धतियां प्रदान की जाती हैं।

3 दिन, म्यॉब्लास्ट संगम तक पहुंचते हैं ( चित्रा 1 ए )। इस स्तर पर म्यॉब्लास्ट आम तौर पर मोनोन्यूकेक्एक्चुएटेड हैं। माध्यम बदल गया था और 8 दिन, भेदभाव पूरा हुआ ( चित्रा 1 बी )...

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Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

इस पद्धति में, मानव प्राथमिक मांसपेशी कोशिकाओं को विभेदित मैयोट्यूब प्राप्त करने के लिए इन विट्रो में सुसंस्कृत किया जाता है और ग्लूकोज तेज गति मापा जाता है। हम रेडियोलैलेड [ 3 एच] 2-डीओसी-डी-ग्लूकोज का उपयोग करते हुए बेसल और इंसुलिन-उत्तेजित राज्यों में दरों का अनुमान लगाने के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं।

ग्लूकोज अपटेक मापन और इनसुलिन उत्तेजना के प्रति प्रतिक्रिया<em&gt; विट्रो में</em&gt; संवर्धित मानव प्राथमिक म्यूट्यूब्स

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle ...

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Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Cellular Processes

Metabolism

SCIENTISTS IN ACTION

Quantification of &gamma;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Quantification of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

ΓH2AX foci के Ionising विकिरण करने के लिए प्रत्युत्तर में मात्रा का ठहराव

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA ...

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

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इंसुलिन इंजेक्शन और Hemolymph निकालना वयस्क में इंसुलिन संवेदनशीलता उपाय ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

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Ribosome बाध्य नवजात polypeptides का अलगाव<em&gt; इन विट्रो में</em&gt; MRNA के साथ translational रोकें ब्लॉग की पहचान के लिए

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

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संवर्धित में organelle परिवहन<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; सेल: S2 सेल लाइन और प्राथमिक न्यूरॉन्स.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

Stimulation of Cytoplasmic DNA Sensing Pathways In Vitro and In Vivo

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Cytoplasmic डीएनए सेंसिंग रास्ते की उत्तेजना<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; इन विवो</em

In order to efficiently stimulate an innate immune response, DNA must be of sufficient length and purity. We present a method where double stranded DNA ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

हाइड्रा में glutathione प्रेरित दूध पिलाने की प्रतिक्रिया को मापने

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Silencing of BRCA2 to Identify Novel BRCA2-regulated Biological Functions in Cultured Human Cells

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का मुंह बंद<em&gt; बीआरसीए 2</em&gt; सभ्य मानव कोशिकाओं में उपन्यास बीआरसीए 2 विनियमित जैविक कार्यों को पहचानें

Silencing of the tumor suppressor protein BRCA2 and its detection by conventional biochemical analyses represent a great technical challenge owing to the ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

गैप junctional कहनेवाला संचार: एक कार्यात्मक Biomarker विषैले पदार्थ और विषाक्त पदार्थों के प्रतिकूल प्रभाव का आकलन करने के लिए, और स्वास्थ्य प्राकृतिक उत्पादों के लाभ

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Assessment of Dictyostelium discoideum Response to Acute Mechanical Stimulation

Assessment of Dictyostelium discoideum Response to Acute Mechanical Stimulation

तीव्र यांत्रिक उत्तेजना के लिए Dictyostelium discoideum प्रतिक्रिया का मूल्यांकन

Chemotaxis, or migration up a gradient of a chemoattractant, is the best understood mode of directed migration. Studies using social amoeba Dictyostelium ...

Measurement of Insulin- and Contraction-Stimulated Glucose Uptake in Isolated and Incubated Mature Skeletal Muscle from Mice

इंसुलिन का माप- और संकुचन-प्रेरित ग्लूकोज चूहों से पृथक और ऊष्मायन परिपक्व कंकाल की मांसपेशी में अपटेक

Skeletal muscle is an insulin-responsive tissue and typically takes up most of the glucose that enters the blood after a meal. Moreover, it has been ...