Name: detecting estrogenic ligands in personal care products using a yeast estrogen screen optimized for the undergraduate teaching laboratory
Uploaded: 2018-01-01T12:30:00
Duration: 14 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detecting Estrogenic Ligands in Personal Care Products using a Yeast Estrogen Screen Optimized for the Undergraduate Teaching Laboratory at JoVE.com

यह परियोजना लुइसियाना टेक यूनिवर्सिटी और Furman यूनिवर्सिटी से टीएमई और AMR को क्रमशः स्टार्ट-अप फंडिंग से वित्तपोषित थी । अतिरिक्त धन AMR और टीएमई को दक्षिण के संबद्ध कॉलेजों, एक लुइसियाना EPSCoR Pfund अनुदान के लिए एक २०१५ संकाय उंनति अनुदान द्वारा प्रदान की गई थी राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन और टीएमई के लुइसियाना बोर्ड से रीजेंट्स, और एक यात्रा पुरस्कार से टीएमई को दक्षिण के विश्वविद्यालय । हम सांख्यिकीय विश्लेषण और श्री क्रिस्टोफर मूर के लिए "हमें एक हाथ दे" फिल्माने के दौरान के साथ सहायता के लिए डॉ डेविड Eubanks (Furman) धंयवाद ।

<ol>
	<li>Agradi, E., Vegeto, E., Sozzi, A., Fico, G., Regondi, S., Tome, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+healthy+Mediterranean+diet:+estrogenic+activity+of+plants+used+as+food+and+flavoring+agents.">Traditional healthy Mediterranean diet: estrogenic activity of plants used as food and flavoring agents.</a> Phytother Res. 20 (8), 670-675 (2006).</li><li>Morgan, H. E., Dillaway, D., Edwards, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogenicity+of+soybeans+(Glycine+max)+varies+by+plant+organ+and+developmental+stage.">Estrogenicity of soybeans (Glycine max) varies by plant organ and developmental stage.</a> Endocr Disruptors. 2 (1), (2014).</li><li>Myers, S. L., Yang, C. Z., Bittner, G. D., Witt, K. L., Tice, R. R., Baird, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogenic+and+anti-estrogenic+activity+of+off-the-shelf+hair+and+skin+care+products.">Estrogenic and anti-estrogenic activity of off-the-shelf hair and skin care products.</a> J Exp. Sci Environ Epidemiol. 25 (3), 271-277 (2015).</li><li>Wagner, M., Oehlmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+disruptors+in+bottled+mineral+water:+estrogenic+activity+in+the+E-Screen.">Endocrine disruptors in bottled mineral water: estrogenic activity in the E-Screen.</a> J Steroid Biochem Mol Biol. 127 (1-2), 128-135 (2011).</li><li>Arnold, S. F., Robinson, M. K., Notides, A. C., Guillette, L. J., McLachlan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+yeast+estrogen+screen+for+examining+the+relative+exposure+of+cells+to+natural+and+xenoestrogens.">A yeast estrogen screen for examining the relative exposure of cells to natural and xenoestrogens.</a> Environ Health Perspect. 104 (5), 544-548 (1996).</li><li>Odum, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rodent+uterotrophic+assay:+critical+protocol+features,+studies+with+nonyl+phenols,+and+comparison+with+a+yeast+estrogenicity+assay.">The rodent uterotrophic assay: critical protocol features, studies with nonyl phenols, and comparison with a yeast estrogenicity assay.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 25 (2), 176-188 (1997).</li><li>Mellanen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wood-derived+estrogens:+studies+in+vitro+with+breast+cancer+cell+lines+and+in+vivo+in+trout.">Wood-derived estrogens: studies in vitro with breast cancer cell lines and in vivo in trout.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 136 (2), 381-388 (1996).</li><li>Balsiger, H. A., de la Torre, R., Lee, W. Y., Cox, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+four-hour+yeast+bioassay+for+the+direct+measure+of+estrogenic+activity+in+wastewater+without+sample+extraction,+concentration,+or+sterilization.">A four-hour yeast bioassay for the direct measure of estrogenic activity in wastewater without sample extraction, concentration, or sterilization.</a> Sci Total Environ. 408 (6), 1422-1429 (2010).</li><li>Coldham, N. G., Dave, M., Sivapathasundaram, S., McDonnell, D. P., Connor, C., Sauer, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+recombinant+yeast+cell+estrogen+screening+assay.">Evaluation of a recombinant yeast cell estrogen screening assay.</a> Environ Health Perspect. 105 (7), 734-742 (1997).</li><li>De Boever, P., Demar&#233;, W., Vanderperren, E., Cooreman, K., Bossier, P., Verstraete, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+a+yeast+estrogen+screen+and+its+applicability+to+study+the+release+of+estrogenic+isoflavones+from+a+soygerm+powder.">Optimization of a yeast estrogen screen and its applicability to study the release of estrogenic isoflavones from a soygerm powder.</a> Environ Health Perspect. 109 (7), 691-697 (2001).</li><li>Fox, J. E., Burow, M. E., McLachlan, J. A., Miller, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+ligands+and+dissecting+nuclear+receptor-signaling+pathways+using+recombinant+strains+of+the+yeast+Saccharomyces+cerevisiae.">Detecting ligands and dissecting nuclear receptor-signaling pathways using recombinant strains of the yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> Nat Protoc. 3 (3), 637-645 (2008).</li><li>Routledge, E. J., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogenic+activity+of+surfactants+and+some+of+their+degradation+products+assessed+using+a+recombinant+yeast+screen.">Estrogenic activity of surfactants and some of their degradation products assessed using a recombinant yeast screen.</a> Environ Toxicol Chem. 15 (3), 241-248 (1996).</li><li>Miller, C. A., Tan, X., Wilson, M., Bhattacharyya, S., Ludwig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+plasmids+expressing+human+steroid+hormone+receptors+and+a+reporter+gene+for+use+in+yeast+signaling+assays.">Single plasmids expressing human steroid hormone receptors and a reporter gene for use in yeast signaling assays.</a> Plasmid. 63 (2), 73-78 (2010).</li><li>Delfosse, V., Grimaldi, M., Cavaill&#232;s, V., Balaguer, P., Bourguet, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+profiling+of+environmental+ligands+for+estrogen+receptors.">Structural and functional profiling of environmental ligands for estrogen receptors.</a> Environ Health Perspect. 122 (12), 1306-1313 (2014).</li><li>Eustice, D. C., Feldman, P. A., Colberg-Poley, A. M., Buckery, R. M., Neubauer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+sensitive+method+for+the+detection+of+beta-galactosidase+in+transfected+mammalian+cells.">A sensitive method for the detection of beta-galactosidase in transfected mammalian cells.</a> Biotechniques. 11 (6), (1991).</li><li>Buller, C., Zang, X. P., Howard, E. W., Pento, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+beta-galactosidase+tissue+levels+in+a+tumor+cell+xenograft+model.">Measurement of beta-galactosidase tissue levels in a tumor cell xenograft model.</a> Methods Find Exp Clin Pharmacol. 25 (9), 713-716 (2003).</li><li>Pelisek, J., Armeanu, S., Nikol, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+beta-galactosidase+activity+in+tissue+in+the+presence+of+blood.">Evaluation of beta-galactosidase activity in tissue in the presence of blood.</a> J Vasc Res. 37 (6), 585-593 (2000).</li><li>Gray, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+alcohol+tolerance+of+yeasts.">Studies on the alcohol tolerance of yeasts.</a> J Bacteriol. 42 (5), 561-574 (1941).</li><li>Schug, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Designing+endocrine+disruption+out+of+the+next+generation+of+chemicals.">Designing endocrine disruption out of the next generation of chemicals.</a> Green Chem. 15 (1), 181-198 (2013).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

खमीर एस्ट्रोजन स्क्रीन (हां) व्यापक रूप से लाइगैंडों है कि एस्ट्राडियोल (E2 या 17β-एस्ट्राडियोल) मैट्रिक्स की एक किस्म में पानी, संयंत्र के ऊतकों, उपभोक्ता उत्पादों, और खाद्य पदार्थ1,2,3शामिल है, की नकल करने के लिए प्रयोग किया जाता है, 4. सामूहिक रूप से, ऐसे लाइगैंडों "पर्यावरणीय एस्ट्रोजन (ईज)" हैं । हां मूल रूप से एक कम लागत के रूप में विकसित किया गया था, इन विट्रो वैकल्पिक vivo परीक्षणों में कुतर uterotrophic परख5,6 और इंद्रधनुष ट्राउट खिला परख7की तरह । इन परीक्षणों का उद्देश्य यदि एक उत्पाद रसायनों कि उत्तेजित या एस्ट्रोजन पर निर्भर तंत्र ब्लॉक शामिल है निर्धारित करने के लिए है । ईज का पता लगाना महत्वपूर्ण है, क्योंकि वे सामांय अंतर्जात एस्ट्रोजन संकेतन, विशेष रूप से भ्रूण के विकास के दौरान हस्तक्षेप कर सकते हैं । यह हस्तक्षेप मोटापा, बांझपन, कैंसर के जोखिम को बढ़ाने के द्वारा स्वास्थ्य समझौता, और संज्ञानात्मक हानि8।
सार्वजनिक स्वास्थ्य के लिए ईज और अन्य EDCs के महत्व के बावजूद, अंत में स्रावी व्यवधान आमतौर पर स्नातक पाठ्यक्रम में शामिल नहीं है । यह कमी आंशिक रूप से गतिविधियों की कमी के कारण है कि शामिल सिद्धांतों का वर्णन करते हुए भी स्नातक छात्रों के लिए सुलभ जा रहा है । इसके अतिरिक्त, हां प्रोटोकॉल के कई रूपांतरों मौजूद9,10,11,12,13, और इस विविधता परख अनुकूलन समय के लिए लेने वाली बनाता है प्रयोगशाला समन्वयकों विशेष रूप से प्रासंगिक तकनीकों में प्रशिक्षित नहीं. अंत में, हां, परख आमतौर पर पूरा कर रहे है 1 लंबे दिन या 2 लगातार दिन एक O/ इस समय स्नातक प्रयोगशाला पाठ्यक्रम है, जो आम तौर पर एक बार मिलने के प्रारूप के साथ संगत नहीं है/
इन जरूरतों के जवाब में, इस पांडुलिपि एक अनुकूलित ९६-अच्छी तरह से हां प्रोटोकॉल है कि व्यक्तिगत देखभाल उत्पादों (PCPs) के लिए इथेनॉल निष्कर्षण तरीके शामिल है3 और एक 6 दिन प्रशीतन कदम साप्ताहिक प्रयोगशाला बैठकों को समायोजित करने के लिए रिपोर्ट । निरपेक्ष इथेनॉल एक बहुमुखी कार्बनिक विलायक कि ध्रुवीय और ध्रुवीय solutes की एक किस्म को भंग कर सकते है । इसके अलावा, यह स्नातक पाठ्यक्रमों के लिए उपयुक्त है, क्योंकि यह आसानी से उपलब्ध है, अपेक्षाकृत विषाक्त, सस्ती, और पानी के साथ मिश्रणीय; यह भी विशेष उपकरणों के बिना आसानी से वाष्पीकरण । हालांकि, इथेनॉल दृढ़ता से hydrophobic अंत-स्रावी अवरोधकों या कई तेलों और waxes, बाद दो PCPs में आम सामग्री जा रहा है निकालने के लिए आदर्श नहीं है । गरीब निष्कर्षण दक्षता झूठी नकारात्मक निष्कर्षों का खतरा बढ़ जाता है । मन में इस बाधा के साथ, जांचकर्ताओं निष्कर्षण प्रक्रियाओं का चयन करना चाहिए (उदा., इथेनॉल निष्कर्षण या ठोस चरण निष्कर्षण) कि पता नमूना विशेषताओं और अध्ययन के उद्देश्यों को पूरा (अनुसंधान बनाम स्नातक अनुदेश) ।
हां संयोजक पर निर्भर करता है Saccharomyces cerevisiae मूल रूप से Tulane विश्वविद्यालय में डॉ चार्ल्स मिलर के द्वारा बनाई गई । कृपया मिलर एट अल देखें । (२०१०) के लिए इंजीनियर प्लाज्मिड14का पूरा नक्शा । खमीर इन plasmids constitutively एक्सप्रेस मानव परमाणु ERα या ERβ (भी कहा जाता ESR1 और ESR2, क्रमशः) जब गैलेक्टोज (ERα के लिए) या तो ग्लूकोज या गैलेक्टोज (ERβ के लिए) युक्त मीडिया में हो के साथ तब्दील हो । यदि एस्ट्रोजन रसायन मीडिया में मौजूद हैं, वे रिसेप्टर्स को बांध, ligand रिसेप्टर कॉम्प्लेक्स कि सक्रिय β-galactosidase (lacZ) अभिव्यक्ति एक स्तर पर एस्ट्रोजन रसायनों की एकाग्रता के लिए आनुपातिक बनाने. खमीर कोशिकाओं तो जमा β-galactosidase जारी करने के लिए लीजड हैं । lysis बफ़र या तो ONPG या CPRG, जो β-galactosidase द्वारा पीले या लाल उत्पादों, क्रमशः उपज के लिए सट रहे हैं शामिल हैं । वर्णमिति उत्पादों एक microwell प्लेट spectrophotometer का उपयोग कर अवशोषक को मापने के द्वारा मात्रा जा सकता है । रंग बदलने की डिग्री एस्ट्रोजन लाइगैंडों जो खमीर उजागर किया गया था की एकाग्रता के लिए आनुपातिक है ।
सब्सट्रेट का चुनाव (CPRG या ONPG) परीक्षण किया जा रहा नमूनों से उत्पन्न होने वाली पृष्ठभूमि अवशोषण के लिए क्षमता पर निर्भर करता है. उदाहरण के लिए, संयंत्र निष्कर्षों अक्सर मीडिया है कि कृत्रिम रूप से estrogenicity उपायों अगर ONPG (४०५ एनएम पर मात्रा) में β-galactosidase के लिए सब्सट्रेट के रूप में प्रयोग किया जाता है फुलाने के लिए एक पीले रंग जोड़ देगा । संयंत्र निष्कर्षों के साथ, CPRG (५७४ एनएम पर मात्रा) एक अधिक उपयुक्त वर्णमिति सब्सट्रेट हो सकता है । CPRG ONPG से अधिक महंगा है, लेकिन एक दसवें molarity में प्रयोग किया जाता है । यह लेख PCP अर्क मात्रा दोनों ONPG और CPRG का उपयोग कर के estrogenicities प्रस्तुत करता है ।
ERα और ERβ दोनों का उपयोग कर पर्यावरण के नमूनों की estrogenicity बढ़ाता है इन रिसेप्टर्स में से केवल एक का उपयोग करने से एक अधिक व्यापक दृष्टिकोण है. पशुओं में, इन रिसेप्टर्स विभेदक ऊतक वितरण, विनियामक गतिविधियों, और एस्ट्रोजन और विरोधी एस्ट्रोजन लाइगैंडों के लिए बाध्यकारी समानताएं15प्रदर्शन. उदाहरण के लिए, संयंत्र आधारित phytoestrogens आमतौर पर ERβ अधिक दृढ़ता से बांध2, जबकि सिंथेटिक रसायनों या तो ERα या ERβ के लिए वरीयता दिखा सकते है या दोनों रिसेप्टर्स समान रूप से अच्छी तरह से15बांध कर सकते हैं । इसलिए, एक एस्ट्रोजन रिसेप्टर के लिए बाध्यकारी जरूरी दूसरे के लिए बाध्यकारी भविष्यवाणी नहीं करता है ।
हालांकि ईज कई उपभोक्ता उत्पादों में पाए जाते हैं (जैसे, कीटनाशक, डिटर्जेंट, चिपकने वाला, स्नेहक, प्लास्टिक, खाद्य पदार्थ, और फार्मास्यूटिकल्स) के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पौधों, प्रस्तुत डेटा PCPs के एक चयन का उपयोग कर प्राप्त किया गया । PCPs मजबूर कर रहे हैं, आसानी से उपलब्ध है, बजट के अनुकूल है, और पर्यावरण के स्नातक छात्रों के लिए प्रासंगिक । छात्रों को प्रयोगशाला में परीक्षण के लिए अपने मनपसंद PCPs को घर से लाने के लिए आमंत्रित किया जा सकता है । वे भी त्वचा को गहरी पर्यावरण कार्य समूह द्वारा विकसित डेटाबेस खोज कर सकते है16 उच्च और निंन विषाक्तता स्कोर के साथ PCPs की परिकल्पना चालित तुलना उत्पंन करने के लिए । इस तरह, छात्रों को एक साथ उन्नत प्रयोगशाला कौशल विकसित कर सकते हैं; स्वयं निर्देशित, जांच आधारित सीखने में संलग्न; और पर्यावरण विज्ञान और स्वास्थ्य में उभरते मुद्दों का पता लगाने ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Equipment</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vortex Mixer (for single or multiple tubes)</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >02-215-365</td>
			<td >Any mixer will suffice.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bucket centrifuge</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >75-063-839</td>
			<td >Any bucket centrifuge will suffice if it is capable of centrifuging conical tubes at 4000 rpm.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bunsen burner</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >17-012-823</td>
			<td >Any Bunsen burner will suffice, or an alcohol burner (Fisher Scientific 04-245-1) can be used instead.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incubator</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >50125590H</td>
			<td >Any incubator will suffice if it is capable of maintaining 30 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microplate reader</td>
			<td >BioTek (www.biotek.com)</td>
			<td >EPOCH2</td>
			<td >A different brand of plate reader will suffice if it can measure absorbance at wavelengths of 405, 574, and 610 nm.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Gen5 microplate reader and imager software</td>
			<td >BioTek (www.biotek.com)</td>
			<td >GEN5</td>
			<td >Software required depends on make and model of plate reader; GEN5 software is intended for use with BioTek plate reader.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Refrigerator</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >05LREEFSA</td>
			<td >Any refrigerator will suffice if it is capable of maintaining 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pipettor or PipetAid compatible with 1-10 ml serological pipets</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >13-681-15E</td>
			<td >Any pipettors will suffice if they are compatible with 1- and 10-ml serological pipets.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >P10 micropipettor</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >F144562G</td>
			<td >Any micropipettor will suffice if it is capable of dispensing 5 &#181;l.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >P200 micropipettor</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >F144565G</td>
			<td >Any micropipettor will suffice if it is capable of dispensing up to 200 &#181;l.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >P300 multichannel pipettor</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >FBE1200300</td>
			<td >Any multichannel pipettor will suffice if it is capable of dispensing 50 to 205 &#181;l.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Repeating pipettor</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >F164001G</td>
			<td >Must be able to deliver 100-320 &#181;l; this pipettor is optional because a multichannel pipettor can be used instead.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Name</td>
			<td >Company</td>
			<td >Catalog Number</td>
			<td >Comments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Supplies</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile 15-ml conical tubes with caps</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >05-539-801</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass scintillation vials</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >03-337-4</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polystyrene 96-well, flat-bottom microplates with lid (non-sterile)</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >12565501</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Polypropylene 96-well, flat-bottom microplates without lid&#160;</td>
			<td >Cole-Parmer (www.coleparmer.com)</td>
			<td >EW-01728-81</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >100 ml glass beakers</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >02-539H</td>
			<td >Any glass beakers will suffice if they are autoclavable.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >250 ml glass Erlenmeyer flasks</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td>FB500250</td>
			<td >Any glass Erlenmeyer flasks will suffice if they are autoclavable.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile, adhesive, porous film&#160;</td>
			<td >VWR (www.vwr.com)</td>
			<td >60941-086</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Metal forceps</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >12-000-157</td>
			<td >Any metal forceps will suffice.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Reagent reservoir</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >07-200-127</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Filtration units (0.2 &#181;m)</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >09-761-52</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Squirt bottle (for ethanol)</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >02-897-10</td>
			<td >Any laboratory squirt bottles will suffice.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Autoclavable storage bottles</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >06-414-1D</td>
			<td >Any autoclavable glass storage bottles will suffice.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 ml glass serological pipets (sterile)</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >13-678-27F</td>
			<td >Any glass serological pipets will suffice.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 ml glass serological pipets (sterile)</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >13-678-27C</td>
			<td >Any glass serological pipets will suffice.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >P10 micropipettor tips</td>
			<td >USA Scientific (www.usascientific.com)</td>
			<td >1120-3810</td>
			<td >Any tips will suffice if they are compatible with the micropipettor above.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >P200 micropipettor tips</td>
			<td >USA Scientific (www.usascientific.com)</td>
			<td >1120-8810</td>
			<td >Any tips will suffice if they are compatible with the micropipettor above.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >P300 micropipettor tips</td>
			<td >USA Scientific (www.usascientific.com)</td>
			<td >1120-9810</td>
			<td >Any tips will suffice if they are compatible with the micropipettor above.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syringe tips for repeating pipettor</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >F164150G</td>
			<td >Only required if a repeating pipettor is used.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile petri dishes</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >FB0875712</td>
			<td >Any sterile petri dishes will suffice.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Parafilm</td>
			<td >Fisher Scientific (www.fishersci.com)</td>
			<td >S37440</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Name</td>
			<td >Company</td>
			<td >Catalog Number</td>
			<td >Comments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Yeast&#160;</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Saccharomyces cerevisiae strains that lack the TRP1 gene product (e.g. W303a)</td>
			<td >American Type Culture Company (ATCC) (www.ATCC.org)</td>
			<td >MYA-151</td>
			<td >Recombinant yeast are also available upon request from the authors.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Receptor/reporter plasmid for ER&#945;</td>
			<td >Addgene (www.addgene.org)</td>
			<td >pRR-ERalpha-5Z (Plasmid #23061)&#160;</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Receptor/reporter plasmid for ER&#946;</td>
			<td >Addgene (www.addgene.org)</td>
			<td >pRR-ERbeta-5Z (Plasmid #23062)&#160;</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Name</td>
			<td >Company</td>
			<td >Catalog Number</td>
			<td >Comments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chemicals</td>
			<td ></td>
			<td></td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Difco agar</td>
			<td >BD (www.bd.com)</td>
			<td >214530</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dithiothreitol</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >D0632</td>
			<td >CAUTION:&#160; Dithiothreitol is an acute skin and eye irritant.&#160; Use appropriate personal protection equipment (gloves, fume hood, dust mask) to avoid skin and eye contact, inhalation and ingestion.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ortho-nitrophenyl-&#946;-D-galactopyranoside</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >N1127</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Chlorophenol red-&#946;-D-galactopyranoside</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >10884308001</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Yeast nitrogen base</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td>Y0626</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glucose</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >G8270</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Galactose</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >G5388</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Adenine sulfate</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >A9126</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Uracil</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >U0750</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leucine</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >L8000</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Histidine</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >H8000</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >17 &#946;-Estradiol&#160;</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; MP Biomedicals&#160;</td>
			<td >E8875-250 mg&#160;&#160;&#160;&#160; 0219456401 - 1 mg</td>
			<td >CAUTION:&#160; Estradiol is a suspected carcinogen and reproductive toxicant.&#160; It is harmful if inhaled, swallowed, or absorbed through skin.&#160; Estradiol may cause harm to breast-fed children and fetuses.&#160; Estradiol is very toxic to aquatic life.&#160; Use appropriate personal protection (gloves, fume hood, dust mask) and avoid exposure during pregnancy and lactation.&#160; Estradiol should be disposed of as hazardous waste and not released to the environment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >100% ethanol</td>
			<td >Pharmco-Aaper (www.pharmcoaaper.com)</td>
			<td >111000200</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >S9638</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium phosphate dibasic (anhydrous)</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >S0876</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Magnesium chloride</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >M8266</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Potassium chloride</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >P9333</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sarkosyl (N-lauroylsarcosine sodium salt)</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >L5125</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium carbonate</td>
			<td >Sigma (www.sigmaaldrich.com)</td>
			<td >S7795</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Name</td>
			<td >Company</td>
			<td >Catalog Number</td>
			<td >Comments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Software</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Excel spreadsheet software</td>
			<td >Microsoft&#160;</td>
			<td ></td>
			<td >Excel is convenient spreadsheet software for managing data outputs and generating .csv files for R analysis.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Java software (required for Appendix 1 application)&#160;</td>
			<td >Oracle Corporation</td>
			<td ></td>
			<td >To calculate LacZ values using the application in Appendix 1, first download free Java software (https://www.java.com/en/download/), then open the LacZ application in Appendix 1.&#160; LacZ results created by the application can be copied by pressing &#34;control (ctrl) + c&#34; on PC keyboards, or &#34;command + c&#34; on Mac keyboards.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >JMP statistical software version 13.0.0</td>
			<td>SAS Institute</td>
			<td ></td>
			<td >Appendix 2 includes directions on using JMP to fit LacZ data to a four-parameter logistic regression curve.&#160; The curve is used to interpolate test sample estradiol equivalents (EEQs), relative to the estradiol standard curve.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >R statistical computing and graphics software</td>
			<td >R Foundation</td>
			<td ></td>
			<td >Free R software can be downloaded from https://www.r-project.org/.&#160; Directions and code for using R to fit LacZ data to a four-parameter logistic regression curve are given in Appendix 2.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detecting estrogenic ligands in personal care products using a yeast estrogen screen optimized for the undergraduate teaching laboratory

खमीर एस्ट्रोजन स्क्रीन (हां) पर्यावरण के नमूनों में एस्ट्रोजन लाइगैंडों का पता लगाने के लिए प्रयोग किया जाता है और मोटे तौर पर अंत में स्रावी व्यवधान के अध्ययन में लागू किया गया है । एस्ट्रोजन लाइगैंडों दोनों प्राकृतिक और मानव निर्मित "पर्यावरणीय एस्ट्रोजन" (ईज) पर्सनल केयर उत्पाद (PCPs), प्लास्टिक, कीटनाशकों, और खाद्य पदार्थों सहित कई उपभोक्ता वस्तुओं में पाया शामिल हैं । मानव और अन्य जानवरों में ईज बाधित हार्मोन संकेत, संभावित प्रजनन क्षमता को कम करने और रोग जोखिम में वृद्धि. सार्वजनिक स्वास्थ्य के लिए ईज और अन्य अंत में खलल डालने वाले रसायनों (EDCs) के महत्व के बावजूद, अंत में स्रावी व्यवधान आमतौर पर स्नातक पाठ्यक्रम में शामिल नहीं है । यह कमिया आंशिक रूप से प्रासंगिक प्रयोगशाला गतिविधियों की कमी के कारण है जो शामिल सिद्धांतों का वर्णन करते हुए भी स्नातक छात्रों के लिए सुलभ है । यह लेख एक अनुकूलित हां व्यक्तिगत देखभाल उत्पादों कि बाइंड एस्ट्रोजन रिसेप्टर्स अल्फा (ERα) और/या बीटा (ERβ) में लाइगैंडों को बढ़ाता है के लिए प्रस्तुत करता है । विधि दो वर्णमिति सब्सट्रेट (ऑर्थो-nitrophenyl-β-d-galactopyranoside (ONPG) या chlorophenol लाल-β-d-galactopyranoside (CPRG)) है कि β-galactosidase, एक 6 दिन प्रशीतित गर्मी कदम से सट रहे हैं में से एक को शामिल स्नातक प्रयोगशाला पाठ्यक्रमों में उपयोग की सुविधा, LacZ गणना के लिए एक स्वचालित अनुप्रयोग, और संबद्ध 4-पैरामीटर उपस्कर प्रतिगमन विश्लेषण के लिए R कोड. प्रोटोकॉल के लिए स्नातक छात्रों को विकसित करने और प्रयोग जिसमें वे एस्ट्रोजन के लिए अपने को चुनने के उत्पादों के स्क्रीन नकल की अनुमति के लिए डिजाइन किया गया है । इस प्रक्रिया में, वे अंत में स्रावी व्यवधान, कोशिका संस्कृति, रिसेप्टर बाइंडिंग, एंजाइम गतिविधि, आनुवंशिक इंजीनियरिंग, सांख्यिकी, और प्रयोगात्मक डिजाइन के बारे में सीखते हैं । इसके साथ ही, वे मौलिक और मोटे तौर पर लागू प्रयोगशाला कौशल का अभ्यास करते हैं, जैसे: सांद्रता की गणना; समाधान बनाना; बाँझ तकनीक का प्रदर्शन; प्रश्नपत्र कमजोर मानक; निर्माण और interpolating मानक घटता; चर और नियंत्रण की पहचान; डेटा एकत्रित करना, व्यवस्थित करना और उसका विश्लेषण करना; निर्माण और रेखांकन की व्याख्या; और micropipettors और spectrophotometers के रूप में आम प्रयोगशाला उपकरणों का उपयोग । इस प्रकार, इस परख को लागू करने के छात्रों को जांच में संलग्न करने के लिए प्रोत्साहित करते हुए पर्यावरण विज्ञान और स्वास्थ्य में उभरते मुद्दों की खोज आधारित है ।

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Detecting Estrogenic Ligands in Personal Care Products using a Yeast Estrogen Screen Optimized for the Undergraduate Teaching Laboratory

यह लेख व्यक्तिगत देखभाल उत्पादों (PCPs) कि बांध एस्ट्रोजन रिसेप्टर्स अल्फा (ERα) और/या बीटा (ERβ) में लाइगैंडों को बढ़ाता है के लिए एक अनुकूलित खमीर एस्ट्रोजन स्क्रीन प्रस्तुत करता है । विधि दो वर्णमिति सब्सट्रेट विकल्प शामिल हैं, स्नातक पाठ्यक्रमों में उपयोग के लिए एक छह दिन प्रशीतित मशीन, और डेटा विश्लेषण के लिए सांख्यिकीय उपकरण ।

एक खमीर एस्ट्रोजन स्क्रीन स्नातक शिक्षण प्रयोगशाला के लिए अनुकूलित का उपयोग कर व्यक्तिगत देखभाल उत्पादों में एस्ट्रोजन लाइगैंडों का पता लगाने

The Yeast Estrogen Screen (YES) is used to detect estrogenic ligands in environmental samples and has been broadly applied in studies of endocrine ...

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