Name: in vitro differentiation of human mesenchymal stem cells into functional cardiomyocyte-like cells
Uploaded: 2017-08-09T12:30:00
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लेखक निम्नलिखित स्टाफ के सदस्यों को धन्यवाद और अनुसंधान कर्मियों उनके योगदान के लिए: मैथ्यू Librach, लीला Maghen, तान्या a. Baretto, Shlomit Kenigsberg, और Andrée Gauthier-फिशर। यह काम ओंटारियो अनुसंधान कोष द्वारा - (ORF-फिर, दौर #7) अनुसंधान उत्कृष्टता और कार्यक्रम इंक बनाने समर्थित किया गया था

All studies involving animals were conducted and reported according to ARRIVE guidelines48. All studies were performed with institutional research ethics board approval (REB number 454-2011, Sunnybrook Research Institute; REB 29889, University of Toronto, Toronto, Canada). All animal procedures were approved by the Animal Care Committee of the University Health Network (Toronto, Canada), and all animals received humane care in compliance with the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8...

स्टेम कोशिकाओं के कार्डियक भेदभाव 2 दशकों से अधिक के लिए विकास cardiomyocyte की तरह कोशिकाओं एमएससी स्रोतों से उत्पन्न करने के लिए उपयोग किया जा रहा कई अलग अलग रणनीतियों के साथ किया गया है। इन रणनीतियों में से क?...

दिल विफलता (CHF) रुग्णता और मृत्यु दर दुनिया भर में एक प्रमुख कारण के रूप में बनी रहती है। CHF अक्सर cardiomyocytes के बड़े पैमाने पर नुकसान और रोग के परिणाम एक myocardial रोधगलन (MI)1के रूप में सेल मुक्त निशान ऊतक के विकास के बाद उत्पन्न होती है। जबकि एक आंशिक रूप से स्व-नवीकरण अंग दिल है, निवासी स्टेम और जनक कोशिका पूल ऊतक पुनर्जनन काफी निष्पादित करने के लिए जिम्मेदार बहुतायत और अक्सर चोट के बाद इष्टतम वसूली के लिए अपर्याप्त होता जा रहा वृद्ध रोगियों में समारोह में घटता है। इस प्रकार, वहाँ प्रयोगात्मक उपचार है कि स्वस्थ दाता कोशिकाओं का प्रत्यारोपण क्षतिग्रस्त myocardium में शामिल विकसित करने में बहुत रुचि है। यह दाता कोशिकाओं कि न केवल ऊतक की संरचना को पुनर्स्थापित करें, लेकिन भी प्रभावित myocardium के कार्यात्मक वसूली को प्राप्त करने जरूरी है।
देशी दिल दिल ऊतक-निवासी कार्यरत हैं और2,3,4अंतर्जात अस्थि मज्जा-उत्पत्ति स्टेम सेल पश्चात चोट के लिए मरम्मत। पुनर्योजी कोशिकाओं-होस्ट और दाता-व्युत्पन्न एक जैसे-चाहिए और उपयुक्त phenotype remodeling myocardium, कुशलता से और सुरक्षित रूप से खो कोशिकाओं को प्रतिस्थापित करने की क्षमता के साथ की microenvironment में समारोह को प्राप्त करने की क्षमता है। इन विट्रो में भिन्नता के तरीके बड़े पैमाने पर उच्च दक्षता, स्टेम सेल आधारित cardiomyocyte उत्पादन5,6को प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। कार्डियक वंश मार्करों की अभिव्यक्ति प्रोफाइल स्टेम सेल हृदय वंश7के प्रति भेदभाव की प्रक्रिया निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। जल्दी भेदभाव मार्करों, NKX2.5, myocyte बढ़ाने के कारक 2 C जैसे (Mef2c), और GATA48,9, cardiomyogenic प्रक्रिया की दीक्षा का एक संकेत हो सकता है। परिपक्व cardiomyocyte मार्करों भेदभाव प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया संकेत विनियामक प्रोटीन α (SIRPA)10, हृदय troponin T (cTnT)11, भारी चेन हृदय myosin (MYH6)8,12,13, और connexin 43 (Cx43)14,15,16हैं। भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (ESCs) और pluripotent स्टेम कोशिकाओं (पीएससी) का उपयोग कर तरीकों अच्छी तरह से अनुकूलित किया गया है और प्रेरक कारक, ऑक्सीजन और पोषक तत्व ग्रेडिएंट का विवरण, और क्रिया5,6,7,17,18के सही समय के बारे में चर्चा की। फिर भी, ESC और पीएससी-आधारित तकनीकों अभी भी सबऑप्टिमल electrophysiological और प्रतिरक्षाविज्ञानी सुविधाओं19,20के साथ एक से अधिक नैतिक और सुरक्षा चिंताओं, प्रस्तुत करते हैं। इन कोशिकाओं के साथ अक्सर प्रतिरोपित मेजबान immunorejection अनुभव और स्थायी प्रतिरक्षादमन की आवश्यकता होती है। यह मुख्य रूप से प्रमुख histocompatibility परिसर (MHC) अणुओं में होस्ट और दाता और परिणामस्वरूप टी-सेल प्रतिक्रिया21mismatching के कारण है। जबकि अलग-अलग MHC वर्ग मैं एक संभव समाधान है मिलान, एक और अधिक सुलभ नैदानिक अभ्यास सर्वत्र immunoprivileged अस्वीकृति की चिंता पर काबू पाने के लिए है एक सेल स्रोत की आवश्यकता होगी।
एक वैकल्पिक कक्ष उपयोग नैदानिक अनुप्रयोगों, MSCs में और विशेष रूप से, BMSCs, के लिए स्रोत के रूप में ऊतक पुनर्जनन 199522में अपने प्रारंभिक विवरण बाद में उपयोग के लिए जांच की गई है। MSCs निवासी पुनर्योजी कोशिकाओं है कि पाया जा सकता है लगभग किसी भी vascularized ऊतक23में किया जा करने के लिए माना जाता है। इच्छित स्रोत से अलगाव, पर MSCs संस्कृति में आसानी से विस्तार किया जा सकता, व्यापक paracrine की क्षमता है, और अक्सर immunoprivileged या प्रतिरक्षण निश्चायक गुण24,25अधिकारी। उनकी सुरक्षा और प्रभावकारिता पहले से ही कई पूर्व नैदानिक अध्ययन में, विशेष रूप से हृदय पुनर्जनन3,26के लिए दिखाया गया है।
कई एमएससी भेदभाव रणनीतियों औषधीय एजेंट, जैसे 5-azacytidine22 और DMSO27, और विकास या morphogenic कारकों, जैसे BMPs5,7,28,29 या एन्जियोटेन्सिन २30, साथ चर दक्षता का उपयोग करें। इन रणनीतियों, तथापि, बाधाएं है कि एक अनुभवहीन पुनर्योजी सेल होमिंग या चोट की साइट के लिए वितरित किया जा रहा के बाद मुठभेड़ की संभावना है के आधार पर कर रहे हैं नहीं vivo में. Physiologically अधिक प्रासंगिक रणनीतियों, जबकि करने के लिए और अधिक कठिन को परिभाषित और हेरफेर, आधार है कि एमएससी भेदभाव ऊतक microenvironment से संकेतों के माध्यम से प्रेरित किया जा कर सकते हैं पर आधारित कर रहे हैं। पिछले अध्ययनों कि कार्डिएक सेल lysates31 या वेंट्रिकुलर myocardium32,33को जोखिम से पता चला है, या प्रत्यक्ष संपर्क प्राथमिक cardiomyocytes इन विट्रो में15,34, साथ MSCs में कार्डियक मार्करों की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकते हैं। भाग में, BMSCs और cardiomyocytes39,40 का विलय नवजात myocardium उत्पन्न, हालांकि दूसरों MSCs35,36,37,38, साथ हृदय चोटों के इलाज के बाद सहज cardiomyogenesis दिखा दिया है। हमारे ज्ञान करने के लिए, कार्यात्मक, अनायास करार cardiomyocytes मानव MSCs (hMSCs) के किसी भी ऊतक स्रोत से अभी तक रिपोर्ट किया गया है नहीं।
वर्तमान आम सहमति कि सभी MSCs perivascular कक्ष23से उत्पन्न होती है। Pericyte गुण के साथ युवा MSCs मानव गर्भनाल ऊतक41,42,43के perivascular क्षेत्र से अलग हो सकता है। की तुलना में BMSCs, HUCPVCs अधिकारी, संभावित वृद्धि भेदभाव और अन्य कई पुनर्योजी फायदे, दोनों इन विट्रो में41,44 और vivo में45,46,47। विशेष रूप से, स्रोत, मातृ-भ्रूण इंटरफ़ेस किया जा रहा HUCPVCs MSCs के वयस्क स्रोतों की तुलना में काफी कम इम्यूनोजेनेसिटी है। जो हम पहले proliferative और उच्च multilineage में वृद्धि हुई है दिखाया है हमारे अनुसंधान के लक्षण वर्णन और FTM HUCPVCs, सबसे कम उम्र के स्रोत की जांच की, MSCs के की पूर्व-नैदानिक अनुप्रयोगों पर केंद्रित भेदभाव क्षमताओं में cardiomyogenic वंश41सहित,।
यहाँ, हम एक प्रोटोकॉल है कि समग्र गठन और प्राथमिक कार्डिएक सेल फीडर परतों को जोड़ती है आगमनात्मक बलों MSCs. समुच्चय की पूरी cardiomyogenic भिन्नता प्राप्त करने के लिए एक 3 डी वातावरण, जो बेहतर करने के लिए 2D के अनुयायी संस्कृतियों की तुलना में परिस्थितियों में vivo मॉडल उपलब्ध कराने के रूप में मौजूद है। कार्डियक फीडर परतों का उपयोग MSCs के लिए परम ट्रांसप्लांटेशन साइट का प्रतिनिधि है एक वातावरण प्रदान करता है। हम प्रदर्शित करता है कि पूर्व या प्रसवोत्तर गर्भनाल से अलग MSCs के छोटे स्रोत प्रपत्र समुच्चय और कार्डिएक phenotype करने के लिए वयस्क BMSCs, की तुलना में अभी भी उनके प्रतिरक्षा-विशेषाधिकार को बनाए रखते हुए तक पहुँचने के लिए एक उच्च क्षमता है। कार्डियक वंश मार्कर जीन और intracellular की प्रेरित अभिव्यक्ति की खड़ी ऊंचाई के अलावा (यानी, cTnT और MYH6) और कोशिका-सतह प्रोटीन (यानी, SIRPA और Cx43) विशिष्ट cardiomyocytes के लिए, हम कि भेदभाव की क्षमता FTM HUCPVCs की इस विधि के साथ इस्तेमाल किया जा सकता कि वे अनायास cardiomyocyte की तरह कोशिकाओं करार को जन्म दे सकते हैं दिखाने के और।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="917">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">0.25% Trypsin/EDTA</td>
			<td style="width:203px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">25200056</td>
			<td style="width:299px;">For cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Alpha-MEM</td>
			<td style="width:203px;">Gibco</td>
			<td>12571071</td>
			<td style="width:299px;">For HUCPVC and BMSC culture media.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">PE-conjugated anti-human/mouse CD49f antibody</td>
			<td style="width:203px;">Biolegend</td>
			<td style="width:119px;">313612</td>
			<td style="width:299px;">Integrin marker for FC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">APC-conjugated human Cx43/GJA1 antibody</td>
			<td style="width:203px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">FAB7737A</td>
			<td style="width:299px;">Connexin 43 marker for FC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">FITC-conjugated HLA-A2 antibody</td>
			<td style="width:203px;">Genway Biotech Inc.</td>
			<td style="width:119px;">GWB-66FBD2</td>
			<td style="width:299px;">Immunogenicity marker for FC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">FITC-conjugated anti-HLA-G [MEM-G/9] antibody</td>
			<td style="width:203px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab7904</td>
			<td style="width:299px;">Immunogenicity marker for FC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">FITC-conjugated mouse anti-human SIRPA/CD172a antibody</td>
			<td style="width:203px;">AbD Serotec/Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">MCA2518F</td>
			<td style="width:299px;">Cardiac marker for FC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">APC-conjugated human TRA-1-85/CD147 antibody</td>
			<td style="width:203px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">FAB3195A</td>
			<td style="width:299px;">Human cell marker for FC and FACS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">FITC-conjugated human TRA-1-85/CD147 antibody</td>
			<td style="width:203px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">FAB3195F</td>
			<td style="width:299px;">Human cell marker for FC and FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Anti-connexin 43/GJA1 antibody</td>
			<td style="width:203px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab11370</td>
			<td style="width:299px;">Cx43. For ICC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Goat anti-rabbit IgG (H+L) cross-absorbed secondary antibody, Alexa Fluor 555</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">A-21428</td>
			<td style="width:299px;">For ICC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Anti-sarcomeric alpha actinin [EA-53] antibody</td>
			<td style="width:203px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab9465</td>
			<td style="width:299px;">aSARC. For ICC</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:297px;">Goat anti-mouse IgM heavy chain cross-absorbed secondary antibody, Alexa Fluor 555</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td>A-21426</td>
			<td style="width:299px;">For ICC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Mef2C (D80C1) XP rabbit antibody</td>
			<td style="width:203px;">New England BioLabs Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">5030S</td>
			<td style="width:299px;">For ICC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Donkey anti-rabbit IgG (H+L) secondary antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">A-21206</td>
			<td style="width:299px;">For ICC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Anti-nuclei (HuNu) (clone 235-1) antibody</td>
			<td style="width:203px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">MAB1281</td>
			<td style="width:299px;">For ICC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">MZ9.5 Stereomicroscope</td>
			<td style="width:203px;">Leica</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">For imaging aggregates.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">1.5 ml centrifuge microtubes</td>
			<td style="width:203px;">Axygen</td>
			<td style="width:119px;">MCT-150-C</td>
			<td style="width:299px;">For staining MSCs with fluorescent dye.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">ImageJ</td>
			<td style="width:203px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">Open source image processing software.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Aria II&#160;</td>
			<td style="width:203px;">BD</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">UHN SickKids FC Facility. For cell sorting.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Bone marrow mesechymal stromal cells</td>
			<td style="width:203px;">Lonza</td>
			<td style="width:119px;">PT-2501</td>
			<td style="width:299px;">BMSCs</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:203px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A7030-100G</td>
			<td style="width:299px;">BSA. To prepare solutions for ICC</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:297px;">BrdU</td>
			<td style="width:203px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">MAB3424</td>
			<td style="width:299px;">Caution: BrdU is a strong teratogen and suspected mutagen. Please ensure proper training and refer to the SDS before use.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Canto II</td>
			<td style="width:203px;">BD</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">UHN SickKids FC Facility. For flow cytometry.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">cDNA EcoDry Premix</td>
			<td style="width:203px;">Clontech/Takara</td>
			<td style="width:119px;">639570</td>
			<td style="width:299px;">For preparation of cDNA for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">CellTracker Green CMFDA Dye</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">C7025</td>
			<td style="width:299px;">Fluorescent imaging of cell cytoplasm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Countess automated cell counter</td>
			<td style="width:203px;">Invitrogen Inc.</td>
			<td style="width:119px;">C10227</td>
			<td style="width:299px;">For cell counting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:203px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D6421</td>
			<td style="width:299px;">For rat primary cardiomyocyte culture medium.</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:297px;">Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:203px;">Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td style="width:299px;">D-PBS, without Ca2+, Mg2+</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">EVOS</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">In-house fluorescent microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">FACSCalibur</td>
			<td style="width:203px;">BD</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">In-house. For flow cytometry.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Fetal bovine serum (Hyclone)</td>
			<td style="width:203px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">SH3039603</td>
			<td style="width:299px;">FBS. Component of cell culture medium.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:297px;">IDT Prime Time qPCR probes</td>
			<td style="width:203px;">Integrated Data Technologies</td>
			<td style="width:119px;">FAM fluorophore</td>
			<td style="width:299px;">http://www.idtdna.com/pages/products/gene-expression/primetime-qpcr-assays-and-primers</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Lab Vision PermaFluor Aqueous Mounting Medium</td>
			<td style="width:203px;">ThermoScientific</td>
			<td style="width:119px;">TA-030-FM</td>
			<td style="width:299px;">For storage of cells to undergo ICC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">LSR II&#160;</td>
			<td style="width:203px;">BD</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">UHN SickKids FC Facility. For flow cytometry.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">MoFlo Astrios</td>
			<td style="width:203px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">UHN SickKids FC Facility. For cell sorting.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Normal goat serum</td>
			<td style="width:203px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:119px;">5425S</td>
			<td style="width:299px;">NGS. Used in blocking solution for ICC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Nunc Lab-Tek II Chamber Coverglass, 8-wells</td>
			<td style="width:203px;">Thermo Scientific Nunc</td>
			<td style="width:119px;">155409</td>
			<td style="width:299px;">To prepare samples for ICC</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:297px;">OmniPur Triton X-100 Surfactant</td>
			<td style="width:203px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">9410-OP</td>
			<td style="width:299px;">As a component of permeabilizing solution when preparing cells for ICC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Paraformaldehyde, 16% Solution, EM Grade</td>
			<td style="width:203px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">15710</td>
			<td style="width:299px;">For fixing cells for ICC.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Penicillin/streptomycin</td>
			<td style="width:203px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">15140122</td>
			<td style="width:299px;">Component of cell culture medium.</td>
		</tr>
		<tr height="110">
			<td height="110" style="height:110px;width:297px;">Primers</td>
			<td style="width:203px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">Custom Standard DNA Oligos, Desalted, 0.2 &#956;mol</td>
			<td style="width:299px;">CTnT_F: GGC AGC GGA AGA GGA TGC TGA A; CTnT_R: GAG GCA CCA AGT TGG GCA TGA ACG A; MYH6 F: GCA AAG TAC TGG ATG ACA CGC T; MYH6 R: GTC ATT GCT GAA ACC GAG AAT G</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Quorum Spinning Disk Confocal</td>
			<td style="width:203px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">SickKids Imaging Facility</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">ReproCardio hiPS cell derived cardiomyocytes</td>
			<td style="width:203px;">ReproCell</td>
			<td style="width:119px;">RCD001N</td>
			<td style="width:299px;">Positive control for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">RNeasy mini kit</td>
			<td style="width:203px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">74106</td>
			<td style="width:299px;">To isolate RNA for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit</td>
			<td style="width:203px;">Qiagen</td>
			<td style="width:119px;">204074</td>
			<td style="width:299px;">For qPCR with master mix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">RPMI 1640</td>
			<td style="width:203px;">Gibco</td>
			<td>A1049101</td>
			<td style="width:299px;">For MSC, monocyte coculture medium.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">TaqMan qPCR primer assays</td>
			<td style="width:203px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">4444556</td>
			<td style="width:299px;">For qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:203px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">T10282</td>
			<td style="width:299px;">Staining of cells for viability and counting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Trypsin</td>
			<td style="width:203px;">Gibco</td>
			<td>272500108</td>
			<td style="width:299px;">For cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Volocity</td>
			<td style="width:203px;">Perkin-Elmer</td>
			<td style="width:119px;">Volocity 6.3</td>
			<td style="width:299px;">Imaging software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">0.2 &#956;m pore filter</td>
			<td style="width:203px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">566-0020</td>
			<td style="width:299px;">For sterilizing tissue culture media</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:297px;">HERAcell 150i CO2 Incubator</td>
			<td style="width:203px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:119px;">51026410</td>
			<td style="width:299px;">For incubating cells</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:203px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D8537</td>
			<td style="width:299px;">PBS. 1X, Without calcium chloride and magnesium chloride</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Forceps</td>
			<td style="width:203px;">Almedic</td>
			<td style="width:119px;">7727-A10-704</td>
			<td style="width:299px;">For handing rat heart. Can use any similar forceps.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Scissors</td>
			<td style="width:203px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">14059-11</td>
			<td style="width:299px;">For mincing rat heart. Curved scissors recommended.</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:297px;">50 mL tube</td>
			<td style="width:203px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">352070</td>
			<td style="width:299px;">For collection during cardiomyocyte collection and general tissue culture procedures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">15 mL tube</td>
			<td style="width:203px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">352096</td>
			<td style="width:299px;">For general tissue culture procedures</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">6-well plates</td>
			<td style="width:203px;">Thermo Scientific Nunc</td>
			<td style="width:119px;">CA73520-906</td>
			<td style="width:299px;">For tissue culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">10 cm tissue culture dishes</td>
			<td style="width:203px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">25382-428</td>
			<td style="width:299px;">For aggregate formation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Axiovert 40C Microscope</td>
			<td style="width:203px;">Zeiss</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:299px;">For bright-field imaging through out tissue culture and the rest of the protocol</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">70 &#956;m cell strainer</td>
			<td style="width:203px;">Fisherbrand</td>
			<td align="right" style="width:119px;">22363548</td>
			<td style="width:299px;">To ensure a single cell suspension before flow cytometry or sorting</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:297px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:203px;">EMD Millipore</td>
			<td style="width:119px;">9410-1L</td>
			<td style="width:299px;">Used in permeabilization solution for ICC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:297px;">Hoechst 33342</td>
			<td style="width:203px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">H1399</td>
			<td style="width:299px;">Stain used during visualization of Cx43 localization</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro differentiation of human mesenchymal stem cells into functional cardiomyocyte-like cells

Myocardial रोधगलन और बाद ischemic झरना cardiomyocytes, दिल विफलता के लिए, दुनिया भर में मृत्यु का प्रमुख कारण प्रमुख के व्यापक नुकसान में परिणाम। Mesenchymal स्टेम सेल (MSCs) वर्तमान, इनवेसिव तकनीकों को प्रतिस्थापित करने के लिए कोशिका आधारित चिकित्सा के लिए एक आशाजनक विकल्प हैं। MSCs कार्डिएक सेल प्रकार, सहित mesenchymal प्रजातियों में अंतर कर सकते हैं, लेकिन कार्यात्मक कक्षों में पूरी भेदभाव अभी तक हासिल नहीं किया गया है। भेदभाव के पिछले विधियों औषधीय एजेंट या विकास कारकों पर आधारित थे। हालांकि, अधिक physiologically प्रासंगिक रणनीतियों भी MSCs cardiomyogenic परिवर्तन से गुजरना करने के लिए सक्षम कर सकते हैं। यहाँ, हम एक भेदभाव एमएससी समुच्चय cardiomyocyte फीडर की परतों पर cardiomyocyte की तरह करार कोशिकाओं का उत्पादन करने के लिए का उपयोग कर पद्धति मौजूद है।
मानव गर्भनाल perivascular कोशिकाओं (HUCPVCs) करने के लिए एक अधिक से अधिक भेदभाव से संभावित दिखाया गया है आमतौर पर अस्थि मज्जा MSCs (BMSCs) जैसे, एमएससी प्रकार की जांच की। एक ontogenetically छोटे स्रोत के रूप में, हम करने के लिए पुराने स्रोतों की तुलना में पहली तिमाही (FTM) HUCPVCs की cardiomyogenic क्षमता की जांच की। FTM HUCPVCs MSCs कि उनकी इसमें में immunoprivileged गुण जब सभ्य बनाए रखने का एक उपन्यास, अमीर स्रोत हैं इन विट्रो में। इस भेदभाव प्रोटोकॉल, FTM और शब्द का उपयोग HUCPVCs BMSCs करने के लिए, की तुलना में काफी वृद्धि हुई cardiomyogenic भेदभाव cardiomyocyte मार्कर (यानी, myocyte बढ़ाने के कारक 2 C, हृदय troponin T, भारी चेन हृदय myosin, सिग्नल विनियामक प्रोटीन α और connexin 43) की वृद्धि हुई अभिव्यक्ति के द्वारा दर्शाई के रूप में प्राप्त किया। वे भी काफी कम इम्यूनोजेनेसिटी, उनके कम एचएलए-ए अभिव्यक्ति और उच्च एचएलए-जी अभिव्यक्ति द्वारा प्रदर्शन के रूप में बनाए रखा। कुल-आधारित भेदभाव लागू करने, FTM HUCPVCs वृद्धि समग्र गठन संभावित और कार्डिएक फीडर परतों पर सह संस्कृति के 1 सप्ताह के भीतर कक्षों क्लस्टर्स करार, ऐसा करने के लिए पहले एमएससी प्रकार बनने उत्पन्न दिखाया।
हमारे परिणाम प्रदर्शित करता है कि इस भेदभाव की रणनीति कारगर ढंग से युवा MSCs, FTM HUCPVCs, जैसे की cardiomyogenic क्षमता का दोहन कर सकते हैं और पता चलता है कि इन विट्रो में पूर्व भेदभाव में vivoअपने पुनर्योजी प्रभावकारिता को बढ़ाने के लिए एक संभावित रणनीति हो सकता है।

HUCPVCs Display Higher Aggregate-formation Potential and CD49f Expression Levels Compared to BMSCs:
To induce the differentiation of hMSCs (i.e., FTM HUCPVCs, term HUCPVCs, and BMSCs), single-cell suspensions of undifferentiated MSCs or MSC-containing hanging drops (Table 1) were transferred onto rat primary cardiomyocyte monolayers to establish direct co-cultures or aggregate co-cultur...

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In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

यहाँ, हम कुशलतापूर्वक कार्यात्मक, करार, cardiomyocyte की तरह कोशिकाओं को उत्पन्न करने के लिए हृदय भेदभाव की क्षमता मानव mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के युवा स्रोतों का दोहन करने के लिए एक विधि प्रस्तुत इन विट्रो.

इन विट्रो में कार्यात्मक Cardiomyocyte की तरह कोशिकाओं में मानव Mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव

Myocardial infarction and the subsequent ischemic cascade result in the extensive loss of cardiomyocytes, leading to congestive heart failure, the leading ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

In Vitro Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells into Functional Cardiomyocyte-like Cells

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

मानव Pluripotent स्टेम सेल से आदिम और निश्चित टेम Progenitors के विभेद का निर्देशन

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

In Vitro Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Trophoblastic Cells

मानव pluripotent की इन विट्रो भेदभाव में स्टेम कोशिकाओं Trophoblastic में कोशिकाओं

The placenta is the first organ to develop during embryogenesis and is required for the survival of the developing embryo. The placenta is comprised of ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

क्षैतिज पूरे माउंट: मोटा, तीन आयामी ऊतक के लिए एक उपन्यास प्रसंस्करण और इमेजिंग प्रोटोकॉल

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Rapid, Directed Differentiation of Retinal Pigment Epithelial Cells from Human Embryonic or Induced Pluripotent Stem Cells

मानव भ्रूण या प्रेरित Pluripotent स्टेम कोशिकाओं से रेटिना वर्णक उपकला कोशिकाओं के तेजी से, निर्देशित भेदभाव

We describe a robust method to direct the differentiation of pluripotent stem cells into retinal pigment epithelial cells (RPE). The purpose of providing ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

सिंगल सेल Photoconversion में रह Zebrafish बरकरार

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

नाभिक, प्रोटीन, और Cytoskeleton के वितरण का अध्ययन करने के लिए Caenorhabditis एलिगेंस Germline का अभिकलनी विश्लेषण

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells

व्युत्पत्ति और कुत्ते डिम्बग्रंथि Mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव

Interest in mesenchymal stem cells (MSCs) has increased over the past decade due to their ease of isolation, expansion, and culture. Recently, studies ...

Efficient Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Liver Cells

लिवर सेल में मानव Pluripotent स्टेम सेल के कुशल भेदभाव

The liver detoxifies harmful substances, secretes vital proteins, and executes key metabolic activities, thus sustaining life. Consequently, liver ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल से Somite डेरिवेटिव के विट्रो पीढ़ी में

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Directed Differentiation of Hemogenic Endothelial Cells from Human Pluripotent Stem Cells

मानव प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाओं से हेमोजेनिक एंडोथेलियल कोशिकाओं का निर्देशित भेदभाव

Blood vessels are ubiquitously distributed within all tissues of the body and perform diverse functions. Thus, derivation of mature vascular endothelial ...