Name: integration of miniaturized solid phase extraction and lc-ms/ms detection of 3-nitrotyrosine in human urine for clinical applications
Uploaded: 2017-07-14T12:30:00
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लेखकों ने इस कार्य के सामान्य समर्थन और समन्वय के लिए स्कॉट हावर्ड और अबीगैल मेरिनाक को स्वीकार किया होगा।

मानव मूत्र नमूनों से सम्बंधित सभी अध्ययन Pharmasan / Neuroscience संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) द्वारा अनुमोदित प्रक्रिया का पालन किया गया था। 1. मूत्र नमूना संग्रह और क्रिएटिनिन (सीआर) निर्धारण <ol><li> सीए ...

<ol>
	<li>Dalle-Donne, I., Rossi, R., Colombo, R., Giustarini, D., Milzani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+oxidative+damage+in+human+disease.">Biomarkers of oxidative damage in human disease.</a> Clin. Chem. 52 (4), 601-623 (2006).</li><li>Pacher, P., Beckman, J. S., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+and+peroxynitrite+in+health+and+disease.">Nitric oxide and peroxynitrite in health and disease.</a> Physiol. Rev. 87 (1), 315-424 (2007).</li><li>Baraldi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3-Nitrotyrosine,+a+marker+of+nitrosative+stress,+is+increased+in+breath+condensate+of+allergic+asthmatic+children.">3-Nitrotyrosine, a marker of nitrosative stress, is increased in breath condensate of allergic asthmatic children.</a> Allergy. 61 (1), 90-96 (2006).</li><li>Ischiropoulos, H., Beckman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+nitration+in+neurodegeneration:+Cause,+effect,+or+association?.">Oxidative stress and nitration in neurodegeneration: Cause, effect, or association?.</a> J. Clin. Invest. 111 (2), 163-169 (2003).</li><li>Butterfield, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+levels+of+3-nitrotyrosine+in+brain+from+subjects+with+amnestic+mild+cognitive+impairment:+implications+for+the+role+of+nitration+in+the+progression+of+Alzheimer's+disease.">Elevated levels of 3-nitrotyrosine in brain from subjects with amnestic mild cognitive impairment: implications for the role of nitration in the progression of Alzheimer's disease.</a> Brain Res. 1148, 243-248 (2007).</li><li>Hui, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+robust+LC-MS/MS+method+for+quantification+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+plasma+from+patients+receiving+on-pump+CABG+surgery.">A simple and robust LC-MS/MS method for quantification of free 3-nitrotyrosine in human plasma from patients receiving on-pump CABG surgery.</a> Electrophoresis. 33 (4), 697-704 (2012).</li><li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+modified+tyrosines+in+healthy+and+diabetic+human+urine+using+liquid+chromatography/tandem+mass+spectrometry.">Quantification of modified tyrosines in healthy and diabetic human urine using liquid chromatography/tandem mass spectrometry.</a> J. Clin. Biochem. Nutr. 44 (1), 67-78 (2009).</li><li>Duncan, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+approaches+to+the+analysis+of+3-nitrotyrosine.">A review of approaches to the analysis of 3-nitrotyrosine.</a> Amino acids. 25 (3-4), 351-361 (2003).</li><li>Ryberg, H., Caidahl, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatographic+and+mass+spectrometric+methods+for+quantitative+determination+of+3-nitrotyrosine+in+biological+samples+and+their+application+to+human+samples.">Chromatographic and mass spectrometric methods for quantitative determination of 3-nitrotyrosine in biological samples and their application to human samples.</a> J. Chromatogr. B. 851 (1-2), 160-171 (2007).</li><li>Tsikas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+methods+for+3-nitrotyrosine+quantification+in+biological+samples:+the+unique+role+of+tandem+mass+spectrometry.">Analytical methods for 3-nitrotyrosine quantification in biological samples: the unique role of tandem mass spectrometry.</a> Amino acids. 42 (1), 45-63 (2012).</li><li>Tsikas, D., Duncan, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometry+and+3-nitrotyrosine:+strategies,+controversies,+and+our+current+perspective.">Mass spectrometry and 3-nitrotyrosine: strategies, controversies, and our current perspective.</a> Mass Spectrom. Rev. 33 (4), 237-276 (2014).</li><li>Iwasaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fluorescence+reagents+for+simultaneous+determination+of+hydroxylated+phenylalanine+and+nitrated+tyrosine+by+high-performance+liquid+chromatography+with+fluorescence+detection.">Comparison of fluorescence reagents for simultaneous determination of hydroxylated phenylalanine and nitrated tyrosine by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection.</a> Biomed. Chromatogr. 26 (1), 41-50 (2012).</li><li>Saravanabhavan, G., Blais, E., Vincent, R., Kumarathasan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+performance+liquid+chromatography-electrochemical+array+method+for+the+measurement+of+oxidative/nitrative+changes+in+human+urine.">A high performance liquid chromatography-electrochemical array method for the measurement of oxidative/nitrative changes in human urine.</a> J. Chromatogr. A. 1217 (19), 3269-3274 (2010).</li><li>Mergola, L., Scorrano, S., Del Sole, ., Lazzoi, R., R, M., Vasapollo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developments+in+the+synthesis+of+a+water+compatible+molecularly+imprinted+polymer+as+artificial+receptor+for+detection+of+3-nitro-L-tyrosine+in+neurological+diseases.">Developments in the synthesis of a water compatible molecularly imprinted polymer as artificial receptor for detection of 3-nitro-L-tyrosine in neurological diseases.</a> Biosens. Bioelectron. 40 (1), 336-341 (2013).</li><li>Schwedhelm, E., Tsikas, D., Gutzki, F. M., Frolich, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas+chromatographic-tandem+mass+spectrometric+quantification+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+plasma+at+the+basal+state.">Gas chromatographic-tandem mass spectrometric quantification of free 3-nitrotyrosine in human plasma at the basal state.</a> Anal. Biochem. 276 (2), 195-203 (1999).</li><li>Tsikas, D., Mitschke, A., Suchy, M. T., Gutzki, F. M., Stichtenoth, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+3-nitrotyrosine+in+human+urine+at+the+basal+state+by+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry+and+evaluation+of+the+excretion+after+oral+intake.">Determination of 3-nitrotyrosine in human urine at the basal state by gas chromatography-tandem mass spectrometry and evaluation of the excretion after oral intake.</a> J. Chromatogr. B. 827 (1), 146-156 (2005).</li><li>Marvin, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+o,o'-dityrosine,+o-nitrotyrosine,+and+o-tyrosine+in+cat+urine+samples+by+LC/electrospray+ionization-MS/MS+using+isotope+dilution.">Quantification of o,o'-dityrosine, o-nitrotyrosine, and o-tyrosine in cat urine samples by LC/electrospray ionization-MS/MS using isotope dilution.</a> Anal. Chem. 75 (2), 261-267 (2003).</li><li>Orhan, H., Vermeulen, N. P., Tump, C., Zappey, H., Meerman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+tyrosine,+phenylalanine+and+deoxyguanosine+oxidation+products+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+as+non-invasive+biomarkers+for+oxidative+damage.">Simultaneous determination of tyrosine, phenylalanine and deoxyguanosine oxidation products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry as non-invasive biomarkers for oxidative damage.</a> J. Chromatogr. B. 799 (2), 245-254 (2004).</li><li>Chen, H. J. C., Chiu, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+detection+and+quantification+of+3-nitrotyrosine+and+3-bromotyrosine+in+human+urine+by+stable+isotope+dilution+liquid+chromatography+tandem+mass+spectrometry.">Simultaneous detection and quantification of 3-nitrotyrosine and 3-bromotyrosine in human urine by stable isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry.</a> Toxicol. Lett. 181 (1), 31-39 (2008).</li><li>Marc, D. T., Ailts, J. W., Campeau, D. C. A., Bull, M. J., Olson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotransmitters+excreted+in+the+urine+as+biomarkers+of+nervous+system+activity:+validity+and+clinical+applicability.">Neurotransmitters excreted in the urine as biomarkers of nervous system activity: validity and clinical applicability.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 35 (3), 635-644 (2011).</li><li>Li, X. G., Li, S., Wynveen, P., Mork, K., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+specific+and+sensitive+LC-MS/MS+method+for+quantification+of+urinary+catecholamines+and+application+in+biological+variation+studies.">Development and validation of a specific and sensitive LC-MS/MS method for quantification of urinary catecholamines and application in biological variation studies.</a> Anal. Bioanal. Chem. 406 (28), 7287-7297 (2014).</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-analytical+and+analytical+validations+and+clinical+applications+of+a+miniaturized,+simple+and+cost-effective+solid+phase+extraction+combined+with+LC-MS/MS+for+the+simultaneous+determination+of+catecholamines+and+metanephrines+in+spot+urine+samples.">Pre-analytical and analytical validations and clinical applications of a miniaturized, simple and cost-effective solid phase extraction combined with LC-MS/MS for the simultaneous determination of catecholamines and metanephrines in spot urine samples.</a> Talanta. 159, 238-247 (2016).</li><li>Chao, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+detection+of+3-nitrotyrosine+and+3-nitro-4-hydroxyphenylacetic+acid+in+human+urine+by+online+SPE+LC-MS/MS+and+their+association+with+oxidative+and+methylated+DNA+lesions.">Simultaneous detection of 3-nitrotyrosine and 3-nitro-4-hydroxyphenylacetic acid in human urine by online SPE LC-MS/MS and their association with oxidative and methylated DNA lesions.</a> Chem. Res. Toxicol. 28 (5), 997-1006 (2015).</li><li>Radabaugh, M. R., Nemirovskiy, O. V., Misko, T. P., Aggarwal, P., Mathews, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoaffinity+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+detection+of+nitrotyrosine+in+biological+fluids+development+of+a+clinically+translatable+biomarker.">Immunoaffinity liquid chromatography-tandem mass spectrometry detection of nitrotyrosine in biological fluids development of a clinically translatable biomarker.</a> Anal. Biochem. 380 (1), 68-76 (2008).</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tailored+96-well+&#181;Elution+solid-phase+extraction+combined+with+UFLC-MS/MS:+a+significantly+improved+approach+for+determination+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+urine.">Tailored 96-well &#181;Elution solid-phase extraction combined with UFLC-MS/MS: a significantly improved approach for determination of free 3-nitrotyrosine in human urine.</a> Anal. Bioanal. Chem. 407 (25), 7703-7712 (2015).</li><li>. Roche Creatinine Jaffé Gen.2, package insert 2011-11, V7 Available from: <a target="_blank" href="https://usdiagnostics.roche.com/products/06407137190/PARAM2083/overlay.html">https://usdiagnostics.roche.com/products/06407137190/PARAM2083/overlay.html</a> (2011)</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mixed-mode+solid+phase+extraction+coupled+with+LC-MS/MS+for+the+re-evaluation+of+free+3-nitrotyrosine+in+human+plasma+as+an+oxidative+stress+biomarker.">A novel mixed-mode solid phase extraction coupled with LC-MS/MS for the re-evaluation of free 3-nitrotyrosine in human plasma as an oxidative stress biomarker.</a> Talanta. 140, 45-51 (2015).</li><li>Li, X. G., Li, S., Kellermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrated+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+approach+for+the+ultra-sensitive+determination+of+catecholamines+in+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+to+assess+neural-immune+communication.">An integrated liquid chromatography-tandem mass spectrometry approach for the ultra-sensitive determination of catecholamines in human peripheral blood mononuclear cells to assess neural-immune communication.</a> J. Chromatogr. A. 1449, 54-61 (2016).</li></ol>

मानवीय मूत्र नमूनों में अंतर्जात मुक्त 3-NT के लिए पहले साहित्य में सांद्रता में उल्लेखनीय विविधताएं उपलब्ध एनाल्स 8 , 9 , 10 , 11 के साथ जुड़ी हुई पद्धति संबंध?...

क्लिनिकल प्रस्तुति पर ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रभाव हाल के वर्षों 1 में सबसे आगे हैं। जैवमार्करों में से एक का पता लगाया जा रहा है 3-नाइट्रोटोस्सिन (3-एनटी), एक अंत स्थिर उत्पाद होता है, जब प्रतिक्रियाशील नाइट्रोजन प्रजातियां (आरएनएस) एक कैटेकोलामाइन न्यूरोट्रांसमीटर अग्रदूत के साथ बातचीत करती हैं। जबकि 3-एनटी में विवो में आरएनएस के लिए बायोमार्कर के रूप में क्लिनिकल वैल्यू हो सकता है , गुणों के गुणों में परिवर्तन और टाइरोसिन के कार्य में प्रतिकूल प्रोटीन और सेलुलर फ़ंक्शंस 1 , 2 पर प्रतिकूल प्रभाव पड़ सकता है। उभरते अनुसंधान ने सुझाव दिया है कि 3-एनटी भड़काऊ परिस्थितियों में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं 3 , न्यूरोडिगेनेरेटिव विकार 4 , 5 , हृदय रोग 6 और मधुमेह 7 और साथ ही ऑक्सीडेटिव तनाव से संबंधित स्थितियां। हालांकि, ये ऑब्ज़Rvations संवेदना और / या चयनात्मकता 8 , 9 , 10 , 11 में कमी के तरीके से परिणाम पर आधारित हैं। पहले से साहित्य में जैविक नमूनों के लिए 3-एनटी एकाग्रता श्रेणी का पता चलता है कि गंभीर विश्लेषणात्मक समस्याएं इन assays से जुड़े हैं और तकनीकी सुधार के लिए 3-एनटी के स्तर को सटीक रूप से मापने और इन स्थितियों के विकृति में इसकी भूमिका की पुष्टि करने की आवश्यकता है । जैविक मैट्रिक्स में नि: शुल्क 3-एनटी का मात्रा मनुष्य और साधन के लिए एक विशेष चुनौती प्रस्तुत करता है 8 , 9 , 10 , 11 । सबसे पहले, अंतर्जात 3-एनटी के स्तर का पता लगाने के लिए अति-संवेदनशील पहचान की आवश्यकता होती है; दूसरा, कई संरचनात्मक रूप से समान समानताएं, विशेष रूप से टायरोसिन का अस्तित्व, जो वर्तमान में मौजूद हैविशाल अतिरिक्त, एक उच्च स्तर की चयनात्मकता की आवश्यकता होती है; तीसरा, 3-एनटी का सर्वव्यापी गठन सर्वव्यापक नाइट्रेट और नाइट्राइट के साथ टाइरोसिन नाइट्रेशन द्वारा 3-एनटी के झूठी आक्षेप से बचने के लिए नमूना तैयार करने के दौरान विशेष ध्यान देने की आवश्यकता है। 3-एनटी, एमएस / एमएस को मापने के लिए नियोजित विभिन्न प्रकारों में अपनी श्रेष्ठ संवेदनशीलता और चुनिंदा 11 , 12 , 13 , 14 के कारण स्वर्ण मानक विधि माना गया है। गैस क्रोमैटोग्राफी (जीसी) युग्मित एमएस / एमएस सबसे अच्छी संवेदनशीलता प्रदान करता है, तथापि, अपरिहार्य नमूना व्युत्पन्न कदम बहुत थकाऊ होते हैं और नैदानिक ​​उपयोगिता 15 , 16 के लिए कुशल होने के लिए समय लेने वाली होती हैं। एलसी-एमएस / एमएस को जटिल नमूना व्युत्पत्ति की आवश्यकता नहीं है, जिससे यह और अधिक होनहार विकल्प बनता है। बहरहाल, इस तरह से दूर करने के लिए कई बाधाएं हैंसाहित्य में एलसी-एमएस / एमएस विधियों की संवेदनशीलता को कम प्रचुर मात्रा में 3-एनटी 7 , 17 , 18 के माप के लिए सुधार करने की जरूरत है और उच्च-थ्रुपुट अनुप्रयोगों के अपेक्षाकृत लंबा बदलाव समय 12 , 13 , 17 , 1 9 । इसके अतिरिक्त, नैदानिक ​​अनुप्रयोगों पर विचार करते समय, जैविक मैट्रिक्स का इस्तेमाल किया गया एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। यदि संभव हो तो प्राप्त करने के लिए आसान और सस्ती होना चाहिए और गैर-इनवेसिव होना चाहिए 20 , 21 , 22 । प्लाज्मा में पारंपरिक रूप से इस्तेमाल किया नमूना, एक नैदानिक ​​रूप से वांछनीय मैट्रिक्स नहीं है, इसलिए मूत्र का उपयोग करने वाला एक तरीका है जो गैर-इनवेसिव और लागत प्रभावी है। रिले को विकसित करने के कई प्रयासयोग्य और विशिष्ट एलसी-एमएस / एमएस पद्धतियां मूत्र 9 , 10 , 11 के द्वारा बनाई गई हैं। हालांकि, वे सभी नैदानिक ​​उपयोग के लिए चुनिंदा, विश्वसनीय या कुशल होने के लिए कम हो गए हैं। पारंपरिक उलट चरण कारतूस 3-NT विश्लेषण के लिए नमूना सफाई के रूप में (C18 प्रकार) का उपयोग करते हुए प्रमुख एसपीई की प्रभावशीलता पर सवाल उठाया गया है और मजबूत कटियन विनिमय के एक अनुक्रमिक एसपीई (SCX) और उलट चरण C18-OH 6 प्रस्ताव किया गया है, 7 , 1 9 हाल ही में विकसित एलसी-एमएस / एमएस पद्धति ने मैनुअल सी 18 एसपीई, तैयार करने वाले उच्च दबाव तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) की बहु-चरण शुद्धि प्रक्रिया का इस्तेमाल किया और 3-एनटी 23 के विश्लेषण के लिए ऑनलाइन एसपीई यद्यपि यह विधि क्लिनिकल प्रयोजनों के लिए पर्याप्त संवेदनशील थी, लेकिन 0.041 एनएम के एलएलओएक के साथ, सफाई प्रक्रिया गहन और थकाऊ थी और आवश्यक थीलाल मूत्र के 3 एमएल, उच्च-थ्रूपुट के लिए इसकी व्यवहार्यता को सीमित करना। शुद्धिकरण प्रक्रिया 14 की दक्षता में सुधार के लिए एक आणविक रूप से अंकित किए गए बहुलक को एसपीई sorbent के रूप में कार्यरत किया गया था, लेकिन जिसके परिणामस्वरूप एलएलयूएक्स (0.7 माइक्रोग्राम / एमएल) नैदानिक ​​नमूनों के लिए पर्याप्त नहीं था। 0.022 एनएम 24 की पहचान (एलओडी) की सीमा को प्राप्त करने के लिए नमूना सफाई के लिए दो-आयामी (2 डी) एलसी-एमएस / एमएस और इम्यूनोफाफ़िनी क्रोमैटोग्राफी की आवश्यकता है। हालांकि इन सभी विधियों ने 3-एनटी के आकलन में प्रगति की है, लेकिन कोई भी नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के लिए आवश्यक संवेदनशीलता, विश्वसनीयता और दक्षता हासिल नहीं कर पाया है। नि: शुल्क 3-एनटी और नैदानिक ​​सेटिंग्स में ऑक्सीडेटिव तनाव के बायोमार्कर के रूप में इसकी भूमिका की जांच के लिए हमने एक पद्धति विकसित की है जो सरल, कुशल, सटीक और सटीक है, जो उच्च-थ्रूप्थ नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के लिए सक्षम है 25 । एक छोटा मिश्रित मिश्रित मोड cationहेंज (एमसीएक्स) 96-अच्छी तरह से निष्कर्षण माइक्रोप्लेट को एक निष्कर्षण में 3-एनटी की सरल और प्रभावी नमूना सफाई और संवर्धन प्राप्त करने के लिए कार्यान्वित किया गया था जो कि मौजूदा विधियों में देखा जाने वाले दोष को दरकिनार करते हैं, जिन्हें व्युत्पत्ति, वाष्पीकरण और 2 डी-एलसी की आवश्यकता होती है। 0.01% एचसीयूएच के साथ तरल क्रोमैटोग्राफी मोबाइल चरण में एक योजक के रूप में तेजी से चक्र समय के साथ एक उन्नत संकेत प्रतिक्रिया की पेशकश की। 3-एनटी के चयनात्मक क्षीणन के लिए हल्के एनएच 4 ओएक एल्यूशन समाधान के उपयोग से और 3-एनटी और आंतरिक मानक (आईएस) दोनों के लिए एमआरएम संक्रमण का उपयोग करके चयन को और सुधार किया गया। मात्रा का ठहराव के लिए पसंदीदा 13 सी-लेबिलिड समस्थानिक IS के कम मात्रा का उपयोग करके मैट्रिक्स प्रभाव को मुआवजा दिया गया था। इस पद्धति के आगमन के साथ, शोधकर्ताओं और चिकित्सक 3-एनटी की नैदानिक ​​परिस्थितियों में भूमिका की पुष्टि कर सकते हैं और ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रभाव का पता लगा सकते हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="912">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">3-Nitro-L-tyrosine</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">N7389-5g</td>
			<td style="width:263px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">3-Nitro-L-tyrosine-13C9</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>652296-5.0mg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mass Spec Gold Urine</td>
			<td>Golden West Biologicals</td>
			<td>MSG 5000-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Oasis MCX 96-well &#181;Elution plate</td>
			<td style="width:161px;">Waters</td>
			<td>186001830BA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2mL 96 well collection plate</td>
			<td style="width:161px;">Phenomenex&#160;&#160;</td>
			<td style="width:115px;">AH0-7194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">96 positive processor</td>
			<td style="width:161px;">Waters&#160;</td>
			<td style="width:115px;">186005521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LC-MS Ultra CHROMASOLV methanol&#160;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">14262-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LC-MS Ultra CHROMASOLV water</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">14263-2L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Formic acid for mass spectrometry</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td>94318-50ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ammonium hydroxide solution</td>
			<td style="width:161px;">Sigma</td>
			<td style="width:115px;">338818-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultra PFP propyl columns</td>
			<td style="width:161px;">Restek</td>
			<td style="width:115px;">9179362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5500 Triple quad</td>
			<td style="width:161px;">AB Sciex&#160;</td>
			<td style="width:115px;">/</td>
			<td style="width:263px;">Contact manufacture for more detail</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">UFLC-XR</td>
			<td style="width:161px;">Shimadzu&#160;</td>
			<td style="width:115px;">/</td>
			<td style="width:263px;">Contact manufacture for more detail</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Integra 400 Plus&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Roche</td>
			<td style="width:115px;">/</td>
			<td style="width:263px;">Urinary Creatinine Jaff&#233; Gen 2 method</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LCMS certified 12 x 32mm screw neck vial</td>
			<td style="width:161px;">Waters</td>
			<td>600000751CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LCGC certified 12 x 32mm screw neck total recovery vial</td>
			<td style="width:161px;">Waters</td>
			<td>186000384C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5 mL transport tube</td>
			<td style="width:161px;">Phenix</td>
			<td>TT-3205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">50 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:161px;">Crystalgen&#160;</td>
			<td style="width:115px;">23-2263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">15 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:161px;">Crystalgen&#160;</td>
			<td style="width:115px;">23-2266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">eLine electronic pipette</td>
			<td style="width:161px;">Sartorius</td>
			<td style="width:115px;">730391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microfuge centrifuge&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:115px;">A46474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OHAUS balance&#160;&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Kennedy Scales, inc.</td>
			<td style="width:115px;">735</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vortex mixer&#160;</td>
			<td style="width:161px;">Bernstead Thermolyne</td>
			<td style="width:115px;">M16715</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

integration of miniaturized solid phase extraction and lc-ms/ms detection of 3-nitrotyrosine in human urine for clinical applications

मुक्त 3-नाइट्रोटोसाइन (3-एनटी) ऑक्सीडेटिव तनाव के लिए एक संभावित बायोमार्कर के रूप में बड़े पैमाने पर उपयोग किया गया है। 3-एनटी के बढ़ते स्तरों की विस्तृत विविधता में बताया गया है। हालांकि, मौजूदा तरीकों में 3 एनटी के कम अंतर्जात स्तर को मज़बूती से मापने के लिए आवश्यक पर्याप्त संवेदनशीलता और / या विशिष्टता की कमी होती है और नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के लिए बहुत बोझिल होते हैं। इसलिए, 3-एनटी के स्तर को सटीक रूप से मापने के लिए विश्लेषणात्मक सुधार की आवश्यकता होती है और 3-एनटी की स्थिति में रोग की स्थितियों की पुष्टि करता है। यह प्रोटोकॉल एक गैर-इनवेसिव बायोमार्कर के रूप में मानव-मूत्र में 3-एनटी के तीव्र और सटीक माप के लिए एक लघु ठोस तरल निष्कर्षण (एसपीई) के साथ मिलाकर एक उपन्यास तरल क्रोमैटोग्राफी अग्रानुक्रमिक स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस / एमएस) का पता लगाता है। ऑक्सीडेटिव तनाव के लिए एक 96-अच्छी तरह से प्लेट का उपयोग करके एसपीई स्पेशलाइज्ड डेरिवेटिशन और वाष्पीकरण कदमों के बिना नमूना सफाई और विश्लेषक संवर्धन को जोड़कर प्रक्रिया को सरल बनाया।, विलायक खपत को कम करने, अपशिष्ट निपटान, संदूषण का खतरा और समग्र प्रसंस्करण समय। पीएच 9 पर 25 एमएम अमोनियम एसीटेट (एनएच 4 ओएएसी) के रोजगार के रूप में एसपीई अल्यूशन समाधान ने चयन क्षमता को बढ़ाया। मास स्पेक्ट्रोमेट्री संकेत प्रतिक्रिया कई प्रतिक्रिया निगरानी (एमआरएम) संक्रमण के समायोजन के माध्यम से सुधार हुई थी। 0.01% एचसीओईएच का उपयोग पेंटाफ्लोरोफेनिल (पीएफपी) कॉलम (150 मिमी x 2.1 मिमी, 3 माइक्रोन) में जोड़कर किया गया है, जो सुधार संकेत प्रतिक्रिया 2.5 गुना और समग्र रन समय को 7 मिनट तक छोटा किया गया है। 10 पीजी / एमएल (0.044 एनएम) के क्वालिटेन (एलएलओयू) की एक सीमा कम की गई, रिपोर्ट किए गए एशेज में महत्वपूर्ण संवेदनशीलता में सुधार का प्रतिनिधित्व किया गया। यह सरलीकृत, तेज़, चयनात्मक और संवेदनशील तरीके से मूत्र नमूनों (एन = 1 9 2) के दो प्लेट्स को 24 घंटे के समय में संसाधित किया जा सकता है। स्पष्ट रूप से सुधारित विश्लेषणात्मक प्रदर्शन और गैर-आक्रामक और सस्ती मूत्र नमूना को देखते हुए प्रस्तावित परख पूर्व-नैदानिक ​​और नैदानिक ​​के लिए फायदेमंद हैअध्ययन करते हैं।

चित्रा 1 चित्रा 1 दिखाता है कि 3-एनटी पूरी तरह से क्रोमैटोग्राफ़िक रूप से अन्य संरचनात्मक रूप से इसी तरह के टाइरोसिन एनालॉग्स से अनुकूलित एलसी हालत के तहत अलग है, जो इन बेहद अत्यधि...

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Integration of Miniaturized Solid Phase Extraction and LC-MS/MS Detection of 3-Nitrotyrosine in Human Urine for Clinical Applications

मिश्रित-मोड केशन-एक्सचेंज (एमसीएक्स) 96-अच्छी तरह से माइक्रोप्रेट पर एक कुशल ठोस चरण निष्कर्षण के साथ मिलकर एक चयनात्मक और संवेदनशील तरल क्रोमैटोग्राफी अग्रानुक्रमित स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस / एमएस) विधि मुक्त 3-नाइट्रोटोसाइन की माप के लिए विकसित की गई थी 3-एनटी) मानव मूत्र में उच्च थ्रूपूट के साथ, जो नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त है।

नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के लिए मानव मूत्र में 3-नाइट्रोटोसाइन की लघुकृत चरण के निष्कर्षण और एलसी-एमएस / एमएस की जांच का एकीकरण

Free 3-nitrotyrosine (3-NT) has been extensively used as a possible biomarker for oxidative stress. Increased levels of 3-NT have been reported in a wide ...

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प्लाज्मा के माध्यम से हाइड्रोफोबिक धातु कार्बनिक चौखटे की तैयारी अमोनिया के लिए निकालना Perfluoroalkanes के रासायनिक वाष्प जमाव बढ़ी

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गतिशील लाइट छितराया माइक्रोस्कोपी द्वारा Turbid समाधान में कण आकार के वितरण का मापन

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Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

Protocol for the Solid-phase Synthesis of Oligomers of RNA Containing a 2'-O-thiophenylmethyl Modification and Characterization via Circular Dichroism

आरएनए के ओलिगोमर्स के ठोस चरण संश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल जिसमें 2&#39;-<em&gt; हे</em&gt; - थिफ़ेनिलमिथिल संशोधन और परिपत्र के माध्यम से परिपत्र दिब्रूवाद

Solid-phase synthesis has been used to obtain canonical and modified polymers of nucleic acids, specifically of DNA or RNA, which has made it a popular ...

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निष्कर्षण और Catecholamine न्यूरोट्रांसमीटर और उनके चयापचयों के उच्च दबाव तरल क्रोमैटोग्राफी के साथ विश्लेषण के लिए एक सुविधाजनक तरीका

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Surface Properties of Synthesized Nanoporous Carbon and Silica Matrices

संश्लेषित Nanoporous कार्बन और सिलिका मैट्रिक्स के भूतल गुण

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