Name: hypoxic preconditioning of marrow-derived progenitor cells as a source for the generation of mature schwann cells
Uploaded: 2017-06-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hypoxic Preconditioning of Marrow-derived Progenitor Cells As a Source for the Generation of Mature Schwann Cells at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Най-Су Вонга за предоставление аппаратуры для гипоксии и г-жи Алисы Луи за техническую поддержку.

Все процедуры, связанные с животными, проводились в строгом соответствии с Руководством NIH по уходу и использованию лабораторных животных и одобрены Комитетом по использованию живых животных для обучения и исследований, Медицинский факультет Ли Ка Шинг, Университет Гонконга. Образцы ...

<ol>
	<li>Wiliams, R. R., Bunge, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+transplantation:+a+repair+strategy+for+spinal+cord+injury?.">Schwann cell transplantation: a repair strategy for spinal cord injury?.</a> Prog Brain Res. 201, 295-312 (2012).</li><li>Kanno, H., Pearse, D. D., Ozawa, H., Itoi, E., Bunge, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+transplantation+for+spinal+cord+injury+repair:+its+significant+therapeutic+potential+and+prospectus.">Schwann cell transplantation for spinal cord injury repair: its significant therapeutic potential and prospectus.</a> Rev Neurosci. 26 (2), 121-128 (2015).</li><li>Lindvall, O., Kokaia, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+human+neurodegenerative+disorders--time+for+clinical+translation?.">Stem cells in human neurodegenerative disorders--time for clinical translation?.</a> J Clin Invest. 120 (1), 29-40 (2010).</li><li>Terzic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+Differentiation+of+Oligodendrocyte+Progenitor+Cells+From+Mouse+Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">Directed Differentiation of Oligodendrocyte Progenitor Cells From Mouse Induced Pluripotent Stem Cells.</a> Cell Transplant. 25 (2), 411-424 (2016).</li><li>Takashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroepithelial+cells+supply+an+initial+transient+wave+of+MSC+differentiation.">Neuroepithelial cells supply an initial transient wave of MSC differentiation.</a> Cell. 129 (7), 1377-1388 (2007).</li><li>Felling, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem/progenitor+cells+participate+in+the+regenerative+response+to+perinatal+hypoxia/ischemia.">Neural stem/progenitor cells participate in the regenerative response to perinatal hypoxia/ischemia.</a> J Neurosci. 26 (16), 4359-4369 (2006).</li><li>Shea, G. K., Tsui, A. Y., Chan, Y. S., Shum, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+Schwann+cells+achieve+fate+commitment--a+prerequisite+for+remyelination+therapy.">Bone marrow-derived Schwann cells achieve fate commitment--a prerequisite for remyelination therapy.</a> Exp Neurol. 224 (2), 448-458 (2010).</li><li>Jessen, K. R., Mirsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+development+of+glial+cells+in+peripheral+nerves.">The origin and development of glial cells in peripheral nerves.</a> Nat Rev Neurosci. 6 (9), 671-682 (2005).</li><li>Mung, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+efficient+generation+of+neural+progenitors+from+adult+bone+marrow+stromal+cells+by+hypoxic+preconditioning.">Rapid and efficient generation of neural progenitors from adult bone marrow stromal cells by hypoxic preconditioning.</a> Stem Cell Res Ther. 7 (1), 146 (2016).</li><li>Ao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regeneration+of+transected+sciatic+nerves+of+adult+rats+using+chitosan+nerve+conduits+seeded+with+bone+marrow+stromal+cell-derived+Schwann+cells.">The regeneration of transected sciatic nerves of adult rats using chitosan nerve conduits seeded with bone marrow stromal cell-derived Schwann cells.</a> Biomaterials. 32 (3), 787-796 (2011).</li><li>Tondreau, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+BM+mesenchymal+stem+cells+by+plastic+adhesion+or+negative+selection:+phenotype,+proliferation+kinetics+and+differentiation+potential.">Isolation of BM mesenchymal stem cells by plastic adhesion or negative selection: phenotype, proliferation kinetics and differentiation potential.</a> Cytotherapy. 6 (4), 372-379 (2004).</li><li>Baksh, D., Song, L., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+mesenchymal+stem+cells:+characterization,+differentiation,+and+application+in+cell+and+gene+therapy.">Adult mesenchymal stem cells: characterization, differentiation, and application in cell and gene therapy.</a> J Cell Mol Med. 8 (3), 301-316 (2004).</li><li>Jirsova, K., Sodaar, P., Mandys, V., Bar, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cold+jet:+a+method+to+obtain+pure+Schwann+cell+cultures+without+the+need+for+cytotoxic,+apoptosis-inducing+drug+treatment.">Cold jet: a method to obtain pure Schwann cell cultures without the need for cytotoxic, apoptosis-inducing drug treatment.</a> J. Neurosci. Methods. 78 (1-2), 133-137 (1997).</li></ol>

Крайне важно сохранить «стебельность» MSC до обогащения нейронных предшественников посредством гипоксической предварительной кондиции и культуры нейросферы. По нашему опыту, мультипотентные MSC могут быть надежно идентифицированы по их удлиненной фибробластоподобной морфологии. Нап...

Трансплантация нейронных предшественников и их производных обещает быть стратегией лечения после травматического повреждения нерва 1 , 2 и нейродегенерацией 3 , 4 . Перед клиническим применением важно обеспечить: i) способ доступа и расширения на аутологичный источник клеток стебля / предшественника и ii) средство для направления их к соответствующим зрелым типам клеток 3 . Наш интерес к клеточной терапии для повреждения спинного мозга привел нас к поиску надежного, аутологичного источника клеток нервных предшественников из тканей взрослых. Субпопуляция MSC происходит от нервного гребня и легко доступна из полости костного мозга. Эти клетки представляют собой нейронные предшественники, которые могут генерировать нейроны и глии 5 . Модели животных церебральной ишемии демонстрируют, что гипоксия способствует распространению<html> Итерации и мультипотенции нейронных предшественников в мозге 6 . Это было основанием для использования гипоксического предварительного кондиционирования в качестве средства расширения на мозговых нейронных предшественниках. Трансплантация клеток Шванна в поврежденный спинной мозг способствует регенерации 2 . SCLC могут быть получены из MSC посредством добавления глиогенных факторов ( то есть β-Heregulin, bFGF и PDGF-AA), но демонстрируют фенотипическую нестабильность. После отмены факторов роста они возвращаются к фибробластоподобному фенотипу 7 . Фенотипическая нестабильность нежелательна при трансплантации клеток из-за риска аберрантной дифференциации и канцерогенеза. Поскольку предшественники клеток Шванна связаны с расслоениями аксонов внутри эмбрионального периферического нерва 8 , мы были вовлечены в SCLC с культивированием с очищенными эмбриональными нейронами DRG 7 ,Ass = &quot;xref&quot;&gt; 9. Результирующие зрелые клетки Шванна подвергаются суждению и демонстрируют функцию in vitro 7 , 9 и in vivo 10 . Наш протокол по обогащению нейронных предшественников из MSC прост и эффективен и приводит к увеличению числа клеток для последующих анализов. Вывод суицидальных клеток Шванна через платформу кокультуры позволяет изучать глиальную дифференциацию и генерировать стабильные и функциональные клетки Шванна для потенциального клинического применения.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="851">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:281px;">&#945;MEM</td>
			<td style="width:140px;">Sigmaaldrich</td>
			<td style="width:101px;">M4526</td>
			<td style="width:329px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM/F12</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>12400-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Neurobasal medium</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FBS</td>
			<td>Biosera</td>
			<td>FB-1280/500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">B27</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>17504-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Epidermal growth factor (EGF)</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>PHG0313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Basic fibroblast growth factor (bFGF)&#160;</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-18B/100UG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Nerve growth factor (NGF)&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>NC011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Platelet-derived growth factor-AA (PDGF-AA)</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-13A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heregulin beta-3, EGF domain (&#946;-Her)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>01-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Uridine</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>U3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5-Fluro-2&#39; - deoxyuridine (FDU)</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>F0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Poly-D-lysine (PDL)</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P7886-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Laminin</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>23017015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">GlutaMAX</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicillin / streptomycin (P/S)</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">TrypLE Express</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>12604-013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">10 cm plate for adherent culture</td>
			<td>TPP</td>
			<td>93100</td>
			<td>Used for selection of MSCs by tissue culture adherence</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">6-well plate for adherent culture</td>
			<td>TPP</td>
			<td>92006</td>
			<td>Used for expansion of MSCs following passaging</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">UltraLow 6-well plate for non-adherent culture</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3471</td>
			<td>Used for neural progenitor enrichment</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-human CD90(Thy-1)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-human CD73</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550256</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-human/rat STRO-1</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB1038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-human nestin</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB1259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-human CD45</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-rat CD90(Thy-1)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-rat CD73</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-rat nestin</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>MAB1259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">anti-rat CD45</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-S100&#946;</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z031101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-p75</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB5386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-GFAP</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>G3893</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-Class III-beta tubulin (Tuj-1)</td>
			<td>Covance</td>
			<td>MMS-435P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-Human nuclei</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hypoxia chamber</td>
			<td>Billups-Rothenberg</td>
			<td>MIC-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEPES buffer</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>H4034-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

hypoxic preconditioning of marrow-derived progenitor cells as a source for the generation of mature schwann cells

В этой рукописи описывается средство обогащения для нейронных предшественников из популяции стромальных клеток костного мозга (MSC), а затем для направления их в зрелую судьбу клеток Шванна. Мы подвергли крысам и человеческим MSCs переходные гипоксические условия (1% кислорода в течение 16 часов), а затем расширение в виде нейросферов на субстрате с низкой степенью присоединения с добавлением фактора роста эпидермального фактора роста (EGF) / основного фибробласта (bFGF). Нейросферы высевали на поликультурный пластик, покрытый поли-D-лизином / ламинином, и культивировали в глиогенном коктейле, содержащем β-Heregulin, bFGF и тромбоцитарный фактор роста (PDGF) для генерации клеточных клеток Schwann (SCLC). SCLC были направлены на участие судьбы через сокультуру в течение 2 недель с очищенными нейронами дорзальных корневых ганглиев (DRG), полученными от E14-15 беременных крыс Sprague Dawley. Зрелые клетки Шванна демонстрируют стойкость в экспрессии S100β / p75 и могут образовывать миелиновые сегменты. Клетки, генерируемые таким образом, имеют потенциалПри трансплантации аутологичных клеток после травмы спинного мозга, а также при моделировании заболеваний.

Обзор основных этапов нашего протокола показан на рисунке 1 . Таким образом, крысиные и человеческие MSC выбираются путем прилипания к пластике тканевой культуры. Расширенные MSC предопределены гипоксией и затем подвержены условиям формирования нейросф...

Watch this Scientific Journal Video about Hypoxic Preconditioning of Marrow-derived Progenitor Cells As a Source for the Generation of Mature Schwann Cells at JoVE.com

Hypoxic Preconditioning of Marrow-derived Progenitor Cells As a Source for the Generation of Mature Schwann Cells

Стромальные клетки костного мозга (MSC) с нейронным потенциалом существуют в костном мозге. Наш протокол обогащает эту популяцию клеток посредством гипоксической предварительной кондиции и после этого направляет их на зрелые клетки Шванна.

Гипоксическое предварительное кондиционирование клеток-предшественников, полученных из костного мозга, в качестве источника для генерации зрелых клеток Шванна

This manuscript describes a means to enrich for neural progenitors from the marrow stromal cell (MSC) population and thereafter to direct them to the ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells

Вывод сердца клеток-предшественников из эмбриональных стволовых клеток

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great ...

Direct Induction of Human Neural Stem Cells from Peripheral Blood Hematopoietic Progenitor Cells

Прямая индукция человеческих нервных стволовых клеток из периферической крови гемопоэтических клеток-предшественников

Human disease specific neuronal cultures are essential for generating in vitro models for human neurological diseases. However, the lack of access to ...

Generation of Human Adipose Stem Cells through Dedifferentiation of Mature Adipocytes in Ceiling Cultures

Генерация жировой стволовых клеток через дедифференцировка зрелые адипоциты в потолочных культур

Mature adipocytes have been shown to reverse their phenotype into fibroblast-like cells in vitro through a technique called ceiling culture. Mature ...

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

In Vitro Colony Assays for Characterizing Tri-potent Progenitor Cells Isolated from the Adult Murine Pancreas

In Vitro Колонии Assays Характеризуя Tri-сильнодействующие прогениторных клеток , выделенных из мышиной поджелудочной железы для взрослых

Stem and progenitor cells from the adult pancreas could be a potential source of therapeutic beta-like cells for treating patients with type 1 diabetes. ...

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Определено и масштабируемая Генерация гепатоцитов-подобных клеток из человеческих плюрипотентные стволовые клетки

Human pluripotent stem cells (hPSCs) possess great value for biomedical research. hPSCs can be scaled and differentiated to all cell types found in the ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

Горизонтальная целая гора: новый протокол обработки и обработки изображений для толстых, трехмерных поперечных сечений кожи

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Photoconversion одноклеточных в живых нетронутыми данио рерио

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Вычислительный анализ микрофлорой Caenorhabditis elegans для изучения распределения ядер, белки и Цитоскелет

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

В Vitro поколения Сомит производных от человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

In Vitro Generation of Heart Field-specific Cardiac Progenitor Cells

В vitro Поколение мыши сердце поле конкретных сердечных клеток-прародителей

Pluripotent stem cells offer great potential for understanding heart development and disease and for regenerative medicine. While recent advances in ...