Name: methods for the extraction of endosymbionts from the whitefly bemisia tabaci
Uploaded: 2017-06-19T12:30:00
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El apoyo financiero para este estudio fue proporcionado por el Programa Nacional de Investigación y Desarrollo Clave (2016YFC1200601) y la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (31390421).

1. Identificación de especies blancas y de cría de moscas blancas <ol><li> Mantener las especies de mosca blanca en el algodón Gossypium hirsutum (Malvaceae) (cv. Zhe-Mian 1973) en jaulas bajo condiciones estándar de 27 ± 1 ° C, 70 ± 10% de humedad y 14 h de luz: 10 h de régimen oscuro. </li><li> Recoger una mosca blanca adulta individual y homogeneizar en 30 μl de tampón de lisis (Tris 10 mM, pH 8,4, KCl 50 mM, Tween-20 al 0,45% [p / v], gelatina al 0,2% [p / Vol] Nonidet P 40, 60 g / ml Proteinase...

<ol>
	<li>Buchner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosymbiosis+of+animals+with+plant+microorganisms.">Endosymbiosis of animals with plant microorganisms.</a> J. Basic Microbiol. 7 (2), (1967).</li><li>Sloan, D. B., Moran, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosymbiotic+bacteria+as+a+source+of+carotenoids+in+whiteflies.">Endosymbiotic bacteria as a source of carotenoids in whiteflies.</a> Biol. Letters. 8 (6), 986-989 (2012).</li><li>Stouthamer, R., Breeuwer, J. A., Hurst, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wolbachia+pipientis:+microbial+manipulator+of+arthropod+reproduction.">Wolbachia pipientis: microbial manipulator of arthropod reproduction.</a> Annu. Rev. Microbiol. 53, 71-102 (1999).</li><li>Brumin, M., Kontsedalov, S., Ghanim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rickettsia+influences+thermotolerance+in+the+whitefly+Bemisia+tabaci+B+biotype.">Rickettsia influences thermotolerance in the whitefly Bemisia tabaci B biotype.</a> Insect Sci. 18 (1), 57-66 (2011).</li><li>Hansen, A. K., Degnan, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+expression+of+conserved+small+RNAs+in+small+symbiont+genomes.">Widespread expression of conserved small RNAs in small symbiont genomes.</a> ISME J. 8, 2490-2502 (2014).</li><li>Moran, N. A., McCutcheon, J. P., Nakabachi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomics+and+evolution+of+heritable+bacterial+symbionts.">Genomics and evolution of heritable bacterial symbionts.</a> Annu. Rev. Genet. 42, 165-190 (2008).</li><li>Shigenobu, S., Watanabe, H., Hattori, M., Sakaki, Y., Ishikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+sequence+of+the+endocellular+bacterial+symbiont+of+aphids+Buchnera+sp.+APS.">Genome sequence of the endocellular bacterial symbiont of aphids Buchnera sp. APS.</a> Nature. 407, 81-86 (2000).</li><li>Nikoh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+origin+of+insect-Wolbachia+nutritional+mutualism.">Evolutionary origin of insect-Wolbachia nutritional mutualism.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (28), 10257-10262 (2014).</li><li>Sloan, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+histories+of+horizontal+gene+transfer+facilitated+extreme+reduction+of+endosymbiont+genomes+in+sap-feeding+insects.">Parallel histories of horizontal gene transfer facilitated extreme reduction of endosymbiont genomes in sap-feeding insects.</a> Mol. Biol. Evol. 31 (4), 857-871 (2014).</li><li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomes+of+the+rice+pest+brown+planthopper+and+its+endosymbionts+reveal+complex+complementary+contributions+for+host+adaptation.">Genomes of the rice pest brown planthopper and its endosymbionts reveal complex complementary contributions for host adaptation.</a> Genome Biol. 15 (12), 521 (2014).</li><li>Campbell, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+expansion+via+lineage+splitting+and+genomereduction+in+the+cicada+endosymbiont+Hodgkinia.">Genome expansion via lineage splitting and genomereduction in the cicada endosymbiont Hodgkinia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 112 (33), 10192-10199 (2015).</li><li>Wilson, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+insight+into+the+amino+acid+relations+of+the+pea+aphid,+Acyrthosiphon+pisum,+with+its+symbiotic+bacterium+Buchnera+aphidicola.">Genomic insight into the amino acid relations of the pea aphid, Acyrthosiphon pisum, with its symbiotic bacterium Buchnera aphidicola.</a> Insect Mol. Biol. 19, 249-258 (2010).</li><li>Degnan, P. H., Ochman, H., Moran, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+conservation+and+functional+constraint+on+intergenic+spacers+in+reduced+genomes+of+the+obligate+symbiont+Buchnera.">Sequence conservation and functional constraint on intergenic spacers in reduced genomes of the obligate symbiont Buchnera.</a> PLoS Genet. 7 (9), e1002252 (2011).</li><li>Nakabachi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+160-kilobase+genome+of+the+bacterial+endosymbiont+Carsonella.">The 160-kilobase genome of the bacterial endosymbiont Carsonella.</a> Science. 314 (5797), 267 (2006).</li><li>De Barro, P. J., Liu, S. S., Boykin, L. M., Dinsdale, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bemisia+tabaci:+a+statement+of+species+status.">Bemisia tabaci: a statement of species status.</a> Annu. Rev. Entomol. 56, 1-19 (2011).</li><li>Himler, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+spread+of+a+bacterial+symbiont+in+an+invasive+whitefly+is+driven+by+fitness+benefits+and+female+bias.">Rapid spread of a bacterial symbiont in an invasive whitefly is driven by fitness benefits and female bias.</a> Science. 332 (6026), 254-256 (2011).</li><li>Bing, X. L., Ruan, Y. M., Rao, Q., Wang, X. W., Liu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+secondary+endosymbionts+among+different+putative+species+of+the+whitefly+Bemisia+tabaci.">Diversity of secondary endosymbionts among different putative species of the whitefly Bemisia tabaci.</a> Insect Sci. 20 (2), 194-206 (2013).</li><li>Bing, X. L., Yang, J., Zchori-Fein, E., Wang, X. W., Liu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+newly+discovered+symbiont+of+the+whitefly+Bemisia+tabaci+(Hemiptera:+Aleyrodidae).">Characterization of a newly discovered symbiont of the whitefly Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae).</a> Appl. Environ. Microbiol. 79 (2), 569-575 (2013).</li><li>Kliot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+in+situ+hybridizations+(FISH)+for+the+localization+of+viruses+and+endosymbiotic+bacteria+in+plant+and+insect+tissues.">Fluorescence in situ hybridizations (FISH) for the localization of viruses and endosymbiotic bacteria in plant and insect tissues.</a> J. Vis. Exp. (84), e51030 (2014).</li><li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments.">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> J. Vis. Exp. (62), e3923 (2012).</li><li>Rao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+reduction+and+potential+metabolic+complementation+of+the+dual+endosymbionts+in+the+whitefly+Bemisia+tabaci.">Genome reduction and potential metabolic complementation of the dual endosymbionts in the whitefly Bemisia tabaci.</a> BMC Genomics. 16 (1), 226 (2015).</li><li>Thao, L. L., Baumann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+relationships+of+primary+prokaryotic+endosymbionts+of+whiteflies+and+their+hosts.">Evolutionary relationships of primary prokaryotic endosymbionts of whiteflies and their hosts.</a> Appl. Environ. Microbiol. 70 (6), 3401-3406 (2004).</li><li>Zhu, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequencing+and+comparison+of+the+Rickettsia+genomes+from+the+whitefly+Bemisia+tabaci+Middle+East+Asia+Minor+I.">Sequencing and comparison of the Rickettsia genomes from the whitefly Bemisia tabaci Middle East Asia Minor I.</a> Insect Sci. 23 (4), 531-542 (2016).</li><li>Gottlieb, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+a+Rickettsia+sp.+in+Bemisia+tabaci+(HomopteraAleyrodidae).">Identification and localization of a Rickettsia sp. in Bemisia tabaci (HomopteraAleyrodidae).</a> Appl. Environ. Microbiol. 72 (5), 3646-3652 (2006).</li><li>Zhang, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+temporal+changes+of+primary+and+secondary+bacterial+symbionts+and+whitefly+host+fitness+following+antibiotic+treatments.">Differential temporal changes of primary and secondary bacterial symbionts and whitefly host fitness following antibiotic treatments.</a> Sci. Rep. 5, 15898 (2015).</li><li>Shan, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+changes+of+symbiont+density+and+host+fitness+after+rifampicin+treatment+in+a+whitefly+of+the+Bemisia+tabaci+species+complex.">Temporal changes of symbiont density and host fitness after rifampicin treatment in a whitefly of the Bemisia tabaci species complex.</a> Insect Sci. 23 (2), 200-214 (2016).</li><li>Zchori-Fein, E., Brown, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+of+prokaryotes+asscociated+with+Bemisia+tabaci+(Gennadius)+(Hemiptera:+Aleyrodidae).">Diversity of prokaryotes asscociated with Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera: Aleyrodidae).</a> Ann. Entomol. Soc. Am. 95 (6), 711-718 (2002).</li><li>Thao, M. L., Baumann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+relationships+of+primary+prokaryotic+endosymbionts+of+whiteflies+and+their+hosts.">Evolutionary relationships of primary prokaryotic endosymbionts of whiteflies and their hosts.</a> Appl. Environ. Microbiol. 70 (6), 3401-3406 (2004).</li><li>Zchori-Fein, E., Perlman, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+the+bacterial+symbiont+Cardinium+in+arthropods.">Distribution of the bacterial symbiont Cardinium in arthropods.</a> Mol. Ecol. 13 (7), 2009-2016 (2004).</li><li>O'Neill, S. L., Giordano, R., Colbert, A. M., Karr, T. L., Robertson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=116S+rRNA+phylogenetic+analysis+of+the+bacterial+endosymbionts+associated+with+cytoplasmic+incompatibility+in+insects.">116S rRNA phylogenetic analysis of the bacterial endosymbionts associated with cytoplasmic incompatibility in insects.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89 (7), 2699-2702 (1992).</li><li>Nirgianaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wolbachia+infections+of+the+whitefly+Bemisia+tabaci.">Wolbachia infections of the whitefly Bemisia tabaci.</a> Curr. Microbiol. 47 (2), 93-101 (2003).</li><li>Everett, K. D., Thao, M. L., Horn, M., Dyszynski, G. E., Baumann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+chlamydiae+in+whiteflies+and+scale+insects:+endosymbionts+'Candidatus+Fritschea+bemisiae'+strain+Falk+and+'Candidatus+Fritschea+eriococci'+strain+Elm.">Novel chlamydiae in whiteflies and scale insects: endosymbionts 'Candidatus Fritschea bemisiae' strain Falk and 'Candidatus Fritschea eriococci' strain Elm.</a> Int. J. Syst. Evol. Micr. 55, 1581-1587 (2005).</li></ol>

Since the endosymbionts within whiteflies cannot be cultured in vitro, dissection and assembling bacteriocytes is an effective way to obtain enough genetic material of endosymbionts. Before dissection, the species of whitefly and endosymbionts involved should be explicitly confirmed. The whitefly B. tabaci is a species complex with more than 35 morphologically indistinguishable species and different cryptic species may contain different endosymbionts. Portiera is uniformly harbored as an obliga...

Las bacterias que forman una relación simbiótica íntima con huéspedes relativos están muy extendidas en los artrópodos 1 . Se ha demostrado que los endosimbiontes afectan aspectos de los huéspedes, como el metabolismo nutricional, la reproducción, las respuestas a las tensiones ambientales 2 , 3 , 4 , etc. , en casi todas las etapas del desarrollo 5 . Sin embargo, el mecanismo que sustenta a las asociaciones sigue siendo en gran parte desconocido. La genómica es de prioridad e importancia al estudiar las posibles funciones y funciones de las bacterias. Algunos datos fundamentales, es decir , el estado taxonómico, los genes funcionales, las vías del metabolismo, los sistemas de secreción, se puede inferir a partir de las secuencias del genoma, que arroja luces sobre el papel potencial de los simbiontes en la simbiosis. Con el desarrollo de secuenciación de alto rendimiento, un gran número de genomas bacterianos han sido secuenciados wCon diversas funciones reveladas 6 . Los endosimbiontes son de vital importancia en los hemípteros, como los áfidos 7 , las chinches 8 , los psílidos 9 , los saltamontes marrones 10 y las cigarras 11 . Por ejemplo, se ha demostrado que Buchnera en áfidos, como el simbionte obligado, está implicado en la biosíntesis de aminoácidos esenciales, junto con los genes del genoma de áfidos 12 . Además, la regulación transcripcional de Buchnera también se revela [ 13] . En los psílidos , Carsonella es secuenciado y clasificado como el genoma bacteriano más pequeño jamás encontrado 14 . Todas estas características de endosymbionts se basan e inferir a partir de las secuencias del genoma. Debido a que estos endosimbiontes no pueden cultivarse in vitro , se han aplicado varios métodos para aislar bacterias adecuadas para seqCión. En los áfidos, endosymbionts se extraen a través de la centrifugación y la filtración, y sometidos a más genómica y transcriptomic análisis [ 5] . En los saltamontes marrones, los endosimbiontes se secuencian junto con el genoma del insecto 10 . Whitefly B. tabaci es un complejo de especies que contiene más de 35 especies morfológicamente indistinguibles (especies crípticas), entre las cuales, dos especies invasoras han invadido todo el mundo y causado un daño tremendo a la producción agrícola 15 . De nota, endosimbiontes dentro de la especie B. tabaci han demostrado importancia en el desarrollo de las plagas [ 16] . Hasta la fecha, se han identificado ocho endosimbiontes en la mosca blanca, incluyendo el simbionte obligado, Candidatus Portiera aleyrodidarum y siete simbiontes secundarios Hamiltonella , Rickettsia , Arsenophonus , Cardinium ,Em&gt; Wolbachia, Fritschea y Hemipteriphilus definidos 17 , 18 . A diferencia de los hemípteros descritos anteriormente, la mosca blanca B. tabaci es un insecto extremadamente pequeño de sólo 1 mm de longitud. La mayoría de los endosimbiontes están confinados a bacteriocitos 19 (células especializadas que contienen simbiontes, que forman bacteriomas en B. tabaci ). Además, estos endosimbiontes no pueden cultivarse in vitro . La única forma de obtener endosimbiontes de B. tabaci es diseccionar la bacterioma. Sin embargo, hay dificultad en la disección. En primer lugar, el bacterioma frágil siempre se vincula con otros tejidos de la mosca blanca, que es difícil de separar. En segundo lugar, el pequeño tamaño de la mosca blanca limita el aislamiento de bacteriomas suficientes. En tercer lugar, endosymbionts cluster en la bacterioma, por lo que es extremadamente complicado para adquirir una sola especie de bacteria. <p clAsfa = &quot;jove_content&quot;&gt; Aquí, informamos de un protocolo simple y barato para aislar whitefly endosymbionts para subsiguiente secuenciación metagenome. A través de la disección, la purificación y la amplificación, se pudo obtener ADN endosimbionto adecuado y se pudo confirmar la especie de bacteria. El protocolo descrito se puede utilizar de manera similar en otros artrópodos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="775">
	<tbody>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Taq DNA polymerase</td>
			<td style="width:107px;">Takara</td>
			<td style="width:129px;">R001A</td>
			<td style="width:296px;">including rTaq, 10&#215;Buffer and dNTP</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Gel DNA extraction kit</td>
			<td style="width:107px;">Qiagen</td>
			<td style="width:129px;">28704</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">DNA sample sequencing system</td>
			<td style="width:107px;">ABI</td>
			<td style="width:129px;">ABI-3730XL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Microtome</td>
			<td style="width:107px;">Leica</td>
			<td style="width:129px;">EM UC7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Transmission electron microscopy</td>
			<td style="width:107px;">Hitachi</td>
			<td style="width:129px;">H-7650 TEM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:107px;">Zeiss</td>
			<td style="width:129px;">Stemi 2000-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">20 &#956;L microloader</td>
			<td style="width:107px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:129px;">F2771951</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Filter holder</td>
			<td style="width:107px;">Millipore</td>
			<td style="width:129px;">SX0001300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Filter membrane filter</td>
			<td style="width:107px;">Millipore</td>
			<td style="width:129px;">SMWP001300</td>
			<td>5.0 &#956;m SMWP</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">REPLI-g UltraFast Mini Kit</td>
			<td style="width:107px;">Qiagen</td>
			<td style="width:129px;">150033</td>
			<td>DNA amlification kit</td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">NanoDrop</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:129px;">NanoDrop 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;">Qubit Fluorometer</td>
			<td style="width:107px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:129px;">Q33216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:243px;">Genome Sequencer</td>
			<td style="width:107px;">Illumina</td>
			<td style="width:129px;">Hiseq 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for the extraction of endosymbionts from the whitefly bemisia tabaci

Los simbiontes bacterianos forman una relación íntima con sus huéspedes y otorgan ventajas a los huéspedes en la mayoría de los casos. La información genómica es fundamental para estudiar las funciones y la evolución de los simbiontes bacterianos en su huésped. Como la mayoría de los simbiontes no pueden cultivarse in vitro , los métodos para aislar una cantidad adecuada de bacterias para la secuenciación del genoma son muy importantes. En la mosca blanca Bemisia tabaci , se ha identificado una serie de endosimbiontes y se prevé que sean importantes en el desarrollo y la reproducción de las plagas mediante múltiples enfoques. Sin embargo, el mecanismo que sustenta a las asociaciones sigue siendo en gran parte desconocido. El obstáculo proviene parcialmente del hecho de que los endosimbiontes en la mosca blanca, en su mayoría restringidos en bacteriocitos, son difíciles de separar de las células huésped. Aquí presentamos un protocolo paso a paso para la identificación, extracción y purificación de endosimbiontes de la mosca blanca B. tabaci principalmente por disectiY filtración. Las muestras de endosymbiont preparadas por este método, aunque todavía son una mezcla de diferentes especies endosymbiont, son adecuadas para secuenciación subsecuente del genoma y análisis de las posibles funciones de los endosimbiontes en B. tabaci . Este método también puede usarse para aislar endosimbiontes de otros insectos.

La especie de Asia Menor 1 de Oriente Medio (MEAM1) del complejo de B. tabaci se tomó como ejemplo aquí para descripción. El algodón para la cría de la mosca blanca y varias etapas de desarrollo de la mosca blanca se muestran en la Figura 1, incluyendo una planta de algodón, mosca blanca adulta y las ninfas 1ª, 2ª y 4ª instar de mosca blanca (la ninfa de 3ª instar se ve similarmente a la ninfa de...

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Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

En este sentido, se presenta un protocolo para aislar endosimbiontes de la mosca blanca Bemisia tabaci a través de la disección y la filtración. Después de la amplificación, las muestras de ADN son adecuadas para la posterior secuenciación y estudio del mutualismo entre los endosimbiontes y la mosca blanca.

Métodos para la extracción de endosimbiontes de la mosca blanca<em&gt; Bemisia tabaci</em

Bacterial symbionts form an intimate relationship with their hosts and confer advantages to the hosts in most cases. Genomic information is critical to ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

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We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Investigación

Biología

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-disección de cerebro de rata para el ARN o la extracción de proteínas a partir de región específica del cerebro

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates ...

Electrophysiological Methods for Recording Synaptic Potentials from the NMJ of Drosophila Larvae

Los métodos electrofisiológicos para la grabación de los potenciales sinápticos de la UNM de larvas de Drosophila

In this video, we describe the electrophysiological methods for recording synaptic transmission at the neuromuscular junction (NMJ) of Drosophila larva. ...

Methods for the Study of the Zebrafish Maxillary Barbel

Métodos para el Estudio de la barbo pez cebra maxilar

Barbels are skin sensory appendages found in fishes, reptiles and amphibians.  The zebrafish, Danio rerio, develops two pairs of barbels- a short nasal ...

Extraction of the EPP Component from the Surface EMG

La extracción de los componentes del PPE de la EMG de superficie

A surface electromyogram (EMG), especially when recorded near the neuromuscular junction, is expected to contain the endplate potential (EPP) component ...

Budding Yeast Protein Extraction and Purification for the Study of Function, Interactions, and Post-translational Modifications

Florecimiento extracción de proteínas de levadura y purificación para el Estudio de la función, las interacciones y modificaciones post-traduccionales

Homogenization by bead beating is a fast and efficient way to release DNA, RNA, proteins, and metabolites from budding yeast cells, which are notoriously ...

The Infiltration-centrifugation Technique for Extraction of Apoplastic Fluid from Plant Leaves Using Phaseolus vulgaris as an Example

The Infiltration-centrifugation Technique for Extraction of Apoplastic Fluid from Plant Leaves Using Phaseolus vulgaris as an Example

La técnica de infiltración-centrifugación para extracción de apoplástico fluido procedente de hojas de la planta Uso<em&gt; Phaseolus vulgaris</em&gt; Como ejemplo

The apoplast is a distinct extracellular compartment in plant tissues that lies outside the plasma membrane and includes the cell wall. The apoplastic ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

El aislamiento de filtración de ácidos nucleicos: A Extracción de ADN método sencillo y rápido

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Los métodos para el aislamiento, cultivo y caracterización funcional de los miocitos del nodo sinusal ratones adultos

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Modified Methods for Loading of High-Throughput DNA Extraction Plates Reduce Potential for Contamination

Los métodos modificados para la carga de placas de extracción de ADN de alto rendimiento reducen el potencial de contaminación

High-throughput DNA sequencing techniques have contributed substantially to advances in our understanding of relationships among microbial communities, ...