Name: expansion and adipogenesis induction of adipocyte progenitors from perivascular adipose tissue isolated by magnetic activated cell sorting
Uploaded: 2017-06-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expansion and Adipogenesis Induction of Adipocyte Progenitors from Perivascular Adipose Tissue Isolated by Magnetic Activated Cell Sorting at JoVE.com

Die Contreras und Watts Laboratories und Dr. William Raphael. Diese Experimente wurden von NHLBI F31 HL128035-01 (Gewebeverdauungsprotokoll-Standardisierung), NHLBI 5R01HL117847-02 und 2P01HL070687-11A1 (Tiere) und NHLBI 5R01HL117847-02 (Zellisolation und Kultur) unterstützt.

Alle in diesem Papier beschriebenen Verfahren folgen den Richtlinien des Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) der Michigan State University. Alle Puffer und Medien sollten vor Licht geschützt werden. 1. Vorbereitung von Puffern, Medien und Instrumenten <ol><li> Kocher Ringer Bicarbonat-gepufferte Lösung (KRBB): 135 mM Natriumchlorid, 5 mM Kaliumchlorid, 1 mM Magnesiumsulfat, 0,4 mM Kaliumphosphat dibasisch, 5,5 mM Glucose, 1% Antibiotikum / Antimykotikum (10.000 Einheiten ...

<ol>
	<li>Watts, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemerin+connects+fat+to+arterial+contraction.">Chemerin connects fat to arterial contraction.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (6), 1320-1328 (2013).</li><li>Dodson, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+depots+differ+in+cellularity,+adipokines+produced,+gene+expression,+and+cell+systems.">Adipose depots differ in cellularity, adipokines produced, gene expression, and cell systems.</a> Adipocyte. 3 (4), 236-241 (2014).</li><li>Police, S. B., Thatcher, S. E., Charnigo, R., Daugherty, A., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+promotes+inflammation+in+periaortic+adipose+tissue+and+angiotensin+II-induced+abdominal+aortic+aneurysm+formation.">Obesity promotes inflammation in periaortic adipose tissue and angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (10), 1458-1464 (2009).</li><li>Ruan, H., Zarnowski, M. J., Cushman, S. W., Lodish, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+isolation+of+primary+adipose+cells+from+mouse+epididymal+fat+pads+induces+inflammatory+mediators+and+down-regulates+adipocyte+genes.">Standard isolation of primary adipose cells from mouse epididymal fat pads induces inflammatory mediators and down-regulates adipocyte genes.</a> J Biol Chem. 278 (48), 47585-47593 (2003).</li><li>Stacey, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> in eLS. , (2001).</li><li>Swim, H. E., Parker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+characteristics+of+human+fibroblasts+propagated+serially.">Culture characteristics of human fibroblasts propagated serially.</a> Am J Hyg. 66 (2), 235-243 (1957).</li><li>Van Harmelen, V., Rohrig, K., Hauner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+proliferation+and+differentiation+capacity+of+human+adipocyte+precursor+cells+from+the+omental+and+subcutaneous+adipose+tissue+depot+of+obese+subjects.">Comparison of proliferation and differentiation capacity of human adipocyte precursor cells from the omental and subcutaneous adipose tissue depot of obese subjects.</a> Metabolism. 53 (5), 632-637 (2004).</li><li>Roncari, D. A., Lau, D. C., Kindler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exaggerated+replication+in+culture+of+adipocyte+precursors+from+massively+obese+persons.">Exaggerated replication in culture of adipocyte precursors from massively obese persons.</a> Metabolism. 30 (5), 425-427 (1981).</li><li>Church, C. D., Berry, R., Rodeheffer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+study+of+adipocyte+precursors.">Isolation and study of adipocyte precursors.</a> Methods Enzymol. 537, 31-46 (2014).</li><li>Fontana, L., Eagon, J. C., Trujillo, M. E., Scherer, P. E., Klein, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visceral+fat+adipokine+secretion+is+associated+with+systemic+inflammation+in+obese+humans.">Visceral fat adipokine secretion is associated with systemic inflammation in obese humans.</a> Diabetes. 56 (4), 1010-1013 (2007).</li><li>Tchkonia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+depot-specific+characteristics+are+retained+in+strains+derived+from+single+human+preadipocytes.">Fat depot-specific characteristics are retained in strains derived from single human preadipocytes.</a> Diabetes. 55 (9), 2571-2578 (2006).</li><li>Macotela, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+differences+in+adipocyte+precursor+cells+from+different+white+fat+depots.">Intrinsic differences in adipocyte precursor cells from different white fat depots.</a> Diabetes. 61 (7), 1691-1699 (2012).</li><li>Contreras, G. A., Thelen, K., Ayala-Lopez, N., Watts, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+and+adipogenic+potential+of+perivascular+adipose+tissue+adipocyte+progenitors+is+dependent+on+sexual+dimorphism+and+vessel+location.">The distribution and adipogenic potential of perivascular adipose tissue adipocyte progenitors is dependent on sexual dimorphism and vessel location.</a> Physiol Rep. 4 (19), (2016).</li><li>Lee, Y. H., Petkova, A. P., Granneman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+adipogenic+niche+for+adipose+tissue+remodeling+and+restoration.">Identification of an adipogenic niche for adipose tissue remodeling and restoration.</a> Cell Metab. 18 (3), 355-367 (2013).</li><li>Lee, Y. H., Petkova, A. P., Mottillo, E. P., Granneman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+identification+of+bipotential+adipocyte+progenitors+recruited+by+beta3-adrenoceptor+activation+and+high-fat+feeding.">In vivo identification of bipotential adipocyte progenitors recruited by beta3-adrenoceptor activation and high-fat feeding.</a> Cell Metab. 15 (4), 480-491 (2012).</li><li>Ahrens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+human+bone+morphogenetic+proteins-2+or+-4+in+murine+mesenchymal+progenitor+C3H10T1/2+cells+induces+differentiation+into+distinct+mesenchymal+cell+lineages.">Expression of human bone morphogenetic proteins-2 or -4 in murine mesenchymal progenitor C3H10T1/2 cells induces differentiation into distinct mesenchymal cell lineages.</a> DNA Cell Biol. 12 (10), 871-880 (1993).</li><li>Bowers, R. R., Lane, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+bone+morphogenetic+protein-4+in+adipocyte+development.">A role for bone morphogenetic protein-4 in adipocyte development.</a> Cell Cycle. 6 (4), 385-389 (2007).</li><li>Schulz, T. J., Tseng, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+role+of+bone+morphogenetic+proteins+in+adipogenesis+and+energy+metabolism.">Emerging role of bone morphogenetic proteins in adipogenesis and energy metabolism.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 20 (5-6), 523-531 (2009).</li><li>Choi, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+normoxia+enhances+survival+and+proliferation+rate+of+human+adipose+tissue-derived+stromal+cells+without+increasing+the+risk+of+tumourigenesis.">In situ normoxia enhances survival and proliferation rate of human adipose tissue-derived stromal cells without increasing the risk of tumourigenesis.</a> PLoS One. 10 (1), 0115034 (2015).</li><li>Gupta, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zfp423+expression+identifies+committed+preadipocytes+and+localizes+to+adipose+endothelial+and+perivascular+cells.">Zfp423 expression identifies committed preadipocytes and localizes to adipose endothelial and perivascular cells.</a> Cell Metab. 15 (2), 230-239 (2012).</li><li>Rodeheffer, M. S., Birsoy, K., Friedman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+white+adipocyte+progenitor+cells+in+vivo.">Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo.</a> Cell. 135 (2), 240-249 (2008).</li><li>Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+methods+of+adipogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells.">Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells Dev. 20 (10), 1793-1804 (2011).</li><li>Edmondson, R., Broglie, J. J., Adcock, A. F., Yang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cell+culture+systems+and+their+applications+in+drug+discovery+and+cell-based+biosensors.">Three-dimensional cell culture systems and their applications in drug discovery and cell-based biosensors.</a> Assay Drug Dev Technol. 12 (4), 207-218 (2014).</li></ol>

Im Mittelpunkt des vorliegenden Experiments steht die Isolierung, Expansion und adipogene Induktion von APC aus PVAT-Depots. Hier stellen wir ein Protokoll zur Isolierung von APC vor, das auf der Identifizierung von Zellen basiert, die die Oberflächenmarker CD34 und PDGFRα exprimieren. Diese Oberflächenproteine ​​wurden zuvor auf APC mit hohen Proliferationsraten und dem Potential identifiziert, in weiße oder braune Adipozyten in verschiedenen adipösen Depots 14 , <sup class="...

Perivaskuläres Fettgewebe (PVAT) ist aufgrund seiner Nähe zu den Blutgefäßen eine wichtige Parakrin-Signalisierungskomponente in der Gefäßfunktion 1 . Die Erweiterung dieses Fettgewebes hängt vom Phänotyp der Adipocyten-Progenitor-Zellen (APC) 2 , 3 ab . Die Isolierung von Zellen aus adipösen Geweben ist schwierig, da primäre Adipozyten zerbrechlich, schwimmfähig und reich an Größe sind. Bestimmte Isolationstechniken können auch den Zellphänotyp und die Morphologie verändern, indem sie die entzündliche Proteinsynthese erhöhen und die adipogene Genexpression 4 reduzieren und die Bedeutung eines Protokolls hervorheben, das die Integrität der Zellen beibehält. Die Kultur der Primärzellen und der spezifischen Präadipozyten-Subpopulationen ergibt einen reduktionistischen Ansatz für das Wachstum von In-vivo und behält das äquivalente zelluläre genetische Make-up 5 beiMich mit diesen Zellen ist begrenzt wegen der Verschlechterung mit Alterung oder Seneszenz 6 . Präadipozyten aus verschiedenen adipösen Depots, einschließlich subkutaner und omentaler Depots, zeigen auch Unterschiede in der Proliferation 7 , was die Bedeutung des Sammelns von Zellen aus spezifischen anatomischen Stellen hervorhebt. Vorläuferzellen aus nicht-PVAT-weißen adipösen Depots wurden in früheren Studien 7 , 8 , 9 charakterisiert, aber weniger ist bekannt über PVAT APC-Phänotypen. Die hier beschriebenen Techniken erlauben die Analyse spezifischer und definierter APC-Populationen mit minimaler Auswirkung auf ihre Morphologie, ihre Lebensfähigkeit und ihr Potenzial zur Proliferation und Differenzierung. Magnetisch aktivierte Zellsortierung (MCS) ist nachgeschalteten Anwendungen wie Kultur möglich, da sich die Kügelchen auflösen, ohne die Zelle zu verändern. MCS ist auch ökonomisch, und sobald der Antikörper conKonzentrationen wurden standardisiert, die Notwendigkeit für Durchflusszytometrie-Assays ist minimal. In-vitro- Studien mit PVAT-Vorläufern können auch einen Einblick in das Potenzial geben, das diese Primärzellen haben können.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="757">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:325px;">Tissue Dissection</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:156px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dissecting Dishes</td>
			<td>Handmade with Silicone</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Culture Petri Dish</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td></td>
			<td>7740 Glass</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Silicone Elastomer</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>Sylgard 170</td>
			<td>Kit</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Braided Silk Suture</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>51-7615</td>
			<td>SP104</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Stereomicroscope MZ6</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>10447254</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Source</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12562-36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vannas Scissors</td>
			<td>George Tiemann &#38; Co</td>
			<td>160-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Splinter Forceps</td>
			<td>George Tiemann &#38; Co</td>
			<td>160-55</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tissue Scissors</td>
			<td>George Tiemann &#38; Co</td>
			<td>105-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">KRBB Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7447-40-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Magnesium Sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7487-88-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7758-114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50-99-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Antibiotic/Antimicotic</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-004-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEPES</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-060-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Tissue Digestion</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Collagenase Type 1</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>LS004196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>420301</td>
			<td>1X Working Solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Water Bath</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>2876</td>
			<td>Reciprocal Shaking Bath</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Biosafety Cabinet</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>1385</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Rotisserie Incubator</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF4894C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">100 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-549</td>
			<td>Yellow</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">40 &#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-547</td>
			<td>Blue</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hemocytometer</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>UX-79001-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell Isolation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">OctoMACS Kit</td>
			<td>Miltenyi Biotech</td>
			<td>130-042-108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">(DMEM):F12 Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>90-090</td>
			<td>Medium Base</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35016CV</td>
			<td>USA Origins</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Normal Donkey Serum</td>
			<td>AbCam</td>
			<td>AB7475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-CD34</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>SC-7324</td>
			<td>FITC conjugated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-PDGFR&#945;</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>PA5-17623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Donkey Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>712-007-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">PBS 10X</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-013-CM</td>
			<td>1X Working Solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EDTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CO2 Cell Incubator</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>51030285</td>
			<td>Heracell 160i&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">6-Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td>TC-Treated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">48- Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>TC-Treated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">96-Well Plates, Black Wall</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353376</td>
			<td>TC-Treated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td>TC-Treated</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35011CV</td>
			<td>USA Origins</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ascorbic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50-81-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Biotin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>58-85-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pantothenate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>137-08-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Glutamine</td>
			<td>Corning</td>
			<td>61-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bone Morphogenic Protein 4</td>
			<td>Prospec Bio</td>
			<td>CYT-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Epidermal Growth Factor</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>400-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Leukemia Inhibitory Factor</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>250-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Platelet-derived Growth Factor BB</td>
			<td>Prospec Bio</td>
			<td>CYT-740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Basic Fibroblast Growth Factor</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>450-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Insulin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-800-CR</td>
			<td>ITS Solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">IBMX</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>28822-58-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dexamethasone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50-02-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">T3 (Triiodothyronine)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>6893-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">CyQUANT Proliferation Assay</td>
			<td>Thermo-Fisher Scientific</td>
			<td>C7026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">AdipoRed Fluorescence Assay Reagent</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>PT-7009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Oil Red O Lipid Dye Reagent</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1391</td>
			<td>In Solution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">M1000 Microplate Reader</td>
			<td>Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eclipse Inverted Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Digital Sight DS-Qil Camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

expansion and adipogenesis induction of adipocyte progenitors from perivascular adipose tissue isolated by magnetic activated cell sorting

Die Erweiterung des perivaskulären Adipositus (PVAT), ein wichtiger Regulator der Gefäßfunktion durch parakrine Signalisierung, steht in direktem Zusammenhang mit der Entwicklung von Hypertonie bei Adipositas. Das Ausmaß der Hypertrophie und Hyperplasie hängt von der Depotposition, dem Geschlecht und der Art der Adipocyten-Progenitor-Zelle (APC) -Phänotypen ab. Techniken, die für die APC- und Präadipozyten-Isolierung in den letzten 10 Jahren verwendet wurden, haben die Genauigkeit, mit der einzelne Zellen auf der Basis spezifischer Zelloberflächenmarker identifiziert werden können, drastisch verbessert. Allerdings kann die Isolierung von APC und Adipozyten aufgrund der Zerbrechlichkeit der Zelle eine Herausforderung sein, besonders wenn die intakte Zelle für Zellkulturanwendungen erhalten bleiben muss. Magnetisch aktivierte Zellsortierung ( MCS) stellt eine Methode zur Isolierung einer größeren Anzahl von lebensfähigen APC pro Gewichtseinheit von Fettgewebe zur Verfügung. APC, das von MCS geerntet wird, kann für in vitro Protokolle verwendet werden, um prea zu erweiternDipozyten und differenzieren sie in Adipozyten durch Verwendung von Wachstumsfaktor-Cocktails, die die Analyse des produktiven und adipogenen Potentials ermöglichen, das von den Zellen zurückgehalten wird. Dieses Experiment konzentrierte sich auf die Aorten- und Mesenterial-PVAT-Depots, die bei der Entwicklung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen bei der Expansion eine Schlüsselrolle spielen. Diese Protokolle beschreiben Methoden zur Isolierung, Erweiterung und Differenzierung einer definierten Population von APC. Dieses MCS-Protokoll ermöglicht die Isolierung in jedem Experiment, wo Zellsortierung mit minimaler Ausrüstung oder Training erforderlich ist. Diese Techniken können weitere Experimente unterstützen, um die Funktionalität bestimmter Zellpopulationen basierend auf der Anwesenheit von Zelloberflächenmarkern zu bestimmen.

Die Proliferationsfähigkeit von Präadipozyten und das adipogene Potential von Adipozytenvorläufern sind Merkmale, die in vitro beibehalten werden 11 . In vitro- Proliferation von isoliertem SVF und APC aus aPVAT wurden mPVAT und GON von männlichen Ratten bei 8, 24, 48 und 96 h nach dem Plattieren unter Verwendung eines quantitativen DNA-Assays bewertet. Es wurden keine Ortsunterschiede in der SVF-Expansionsrate zu irgendeinem Zeitpunkt beobac...

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Expansion and Adipogenesis Induction of Adipocyte Progenitors from Perivascular Adipose Tissue Isolated by Magnetic Activated Cell Sorting

Hier berichten wir über eine Methode zur Isolierung von Adipozyten-Progenitor-Zellen (APC) -Populationen aus perivaskulärem Adipositus (PVAT) mittels magnetisch-aktivierter Zellsortierung (MCS). Diese Methode ermöglicht eine erhöhte Isolierung von APC pro Gramm Fettgewebe im Vergleich zu Fluoreszenz-aktivierter Zellsortierung (FACS).

Expansion und Adipogenese Induktion von Adipozyten-Progenitoren aus perivaskulärem Fettgewebe, isoliert durch magnetisch aktivierte Zellsortierung

Expansion of Perivascular Adipose Tissue (PVAT), a major regulator of vascular function through paracrine signaling, is directly related to the ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues

Isolierung und Differenzierung von Fettgewebe gewonnenen Stammzellen aus Porcine Subkutan Fettgewebes

Obesity is an unconstrained worldwide epidemic. Unraveling molecular controls in adipose tissue development holds promise to treat obesity or diabetes. ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Isolierung und Expansion von mesenchymalen Stamm- / Stroma-Zellen aus humanen Placenta Gewebe gewonnen

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue

Isolierung von Perivaskuläre multipotenten Vorläuferzellpopulationen aus menschlichem Herzgewebe

Multipotent mesenchymal stem/stromal cells (MSC) were conventionally isolated, through their plastic adherence, from primary tissue digests whilst their ...

Induction of Acute Skeletal Muscle Regeneration by Cardiotoxin Injection

Die Induktion von Akute Skelettmuskelregeneration durch Cardio Injection

Skeletal muscle regeneration is a physiological process that occurs in adult skeletal muscles in response to injury or disease. Acute injury-induced ...

Chondrogenic Differentiation Induction of Adipose-derived Stem Cells by Centrifugal Gravity

Chondrogene Differenzierung Induktion von Fettgewebe gewonnene Stammzellen durch Zentrifugalkraft Gravity

Impaired cartilage cannot heal naturally. Currently, the most advanced therapy for defects in cartilage is the transplantation of chondrocytes ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

Identifizierung von Erythromyeloid Progenitoren und deren Nachkommen in der Maus Embryo Durch Durchflusszytometrie

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

Ganzzellige Patch-Clamp Aufnahmen von isolierten primären Epithelzellen aus dem Epididymis

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation von Gerüst-frei, dreidimensionale Insulin mit dem Ausdruck Pancreatoids vom Maus Pankreas Stammväter In-vitro-

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Efficient Generation of Pancreas/Duodenum Homeobox Protein 1+ Posterior Foregut/Pancreatic Progenitors from hPSCs in Adhesion Cultures

Efficient Generation of Pancreas/Duodenum Homeobox Protein 1+ Posterior Foregut/Pancreatic Progenitors from hPSCs in Adhesion Cultures

Effiziente Generation der Bauchspeicheldrüse/Zwölffingerdarm Homeobox Protein 1+ Posterior Foregut/Bauchspeicheldrüsen-Vorfahren aus hPSCs in Haftung Kulturen

Human pluripotent stem cell (hPSC)-derived pancreatic cells are a promising cell source for regenerative medicine and a platform to study human ...

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

Isolation, Kultur und adipogene Induktion von Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

An excessive amount of adipose tissue surrounding the blood vessels (perivascular adipose tissue, also known as PVAT) is associated with a high risk of ...