Name: light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development
Uploaded: 2017-06-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af University of Illinois i Urbana-Champaign (UIUC) og National Institutes of Health (NIGMS R01GM111816).

Animal forskning blev udført i overensstemmelse med retningslinjer fastsat af Illinois Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) og University of Illinois Department of Animal Resources (DAR). 1. Optogenetisk Induktion af Protein Lokalisering i BHK21 Mammal Cell Cell Culture BEMÆRK: Trin 1.1-1.3 giver en metode til at samle et cellekulturkammer til billeddannelse med høje forstørrelsesmål ( f.eks. 63X eller 100X), som typisk har korte arbejd...

Ved opbygning af lysboksen bør effekten af ​​de enkelte lysdioder måles. Baseret på tidligere erfaringer kan strømudgangen variere mellem individuelle lysdioder på grund af fremstillingsvarianter. Vælg et sæt lysdioder, der har en effekt inden for 10% af hinanden. Antallet af lysdioder, strømbegrænsende modstand og strømindgang kan ændres til forskellige typer cellekulturbeholdere ( f.eks. En 6-brønds eller 24-brønds plade). En 24 timer lysbelysning med en effekt på 0,2 mW / cm2 fremkalder ikk...

Vækstfaktorer er involveret i et bredt spektrum af cellefunktioner, herunder proliferation, differentiering, migration og apoptose og spiller pivotale roller i mange biologiske hændelser, herunder embryonal udvikling, aldring og regulering af mental status 1 , 2 , 3 , 4 , 5 . Mange vækstfaktorer signalerer gennem komplekse intracellulære signalkaskader. Disse signaleringshændelser drives ofte af reversibel proteinphosphorylering på en præcis reguleret måde 6 , 7 . Således er en forståelse af signaleringsresultaterne af proteinkinaser, som er ansvarlige for proteinphosphorylering, grundlæggende vigtig. Forskellige vækstfaktorer virker gennem et ret almindeligt intracellulært signalnetværk, selv om de stimulerer distInkt cellulære responser 8 , 9 . Almindelige intracellulære mediatorer af receptortyrosinkinaser indbefatter Ras, Raf, ekstracellulær signalreguleret kinase (ERK), mitogenaktiveret proteinkinase (MAPK) / ERK-kinase (MEK), phosphoinositid-3-kinase (PI3K), Akt og phospholipase C gamma (PLCy) 10 , 11 . Akkumulerende beviser tyder på, at signaleringsdiversitet og specificitet afhænger af rumlig og tidsmæssig regulering af signalaktivitet 12 . For eksempel aktiverer epidermal vækstfaktor (EGF) stimulering i rottefokromocytomceller (PC12), som resulterer i celleproliferation, transient aktiveringen af ​​ERK-pathway 9 . På den anden side aktiverer stimulering med nervevækstfaktor (NGF), som fører til celledifferentiering, aktiviteten af ​​ERK-vejen på en vedvarende måde 9 , 13 . I dyrkede rVed hippocampale neuroner fremmer transient signalering af hjerneafledt neurotrof faktor (BDNF) primær neuritudvækst, mens vedvarende signalering fører til øget neuritforgrening 14 . Under tidlig embryonal udvikling er phosphoryleret ERK-aktivitet temporalt dynamisk og er udbredt på tværs af embryoet 6 . En nylig genetisk skærm under tidlig Xenopus embryogenese viste, at ERK- og Akt-signaleringskaskader, to nedstrøms primære vækstfaktorveje, viser scenespecifikke aktiveringsprofiler 7 . En forståelse af kinasignaliseringsresultater kræver således værktøjer, der kan sonde de rumlige og tidsmæssige egenskaber ved kinaseaktivitet med tilstrækkelig opløsning. Konventionelle eksperimentelle fremgangsmåder til at undersøge den dynamiske natur af signaltransduktion under udvikling mangler den ønskelige rumlige og tidsmæssige opløsning. F.eks. Udnytter farmakologiske fremgangsmåder lille kemIcal eller biologiske molekyler til at stimulere eller undertrykke signaltransduktion i celler og væv. Disse små molekylers diffusive natur gør det udfordrende at begrænse deres handling til en bestemt region af interesse 15 . Genetiske tilgange ( fx transgenese, Cre-Lox-systemet eller mutagenese) fører ofte til den irreversible aktivering eller undertrykkelse af målgenekspression eller proteinaktivitet 16 , 17 , 18 . Tet-On / Tet-Off-systemet 19 tilbyder forbedret temporal kontrol af gentranskription, men mangler streng rumlig kontrol, fordi den er afhængig af diffusionen af ​​tetracyclin. Nylige udviklinger i kemisk induceret proteindimerisering 20 eller foto-uncaging 21 , 22 , 23 , 24 har kraftigt forbedringRedegjorde for den tidsmæssige kontrol af signalnetværk. Den rumlige kontrol forbliver dog udfordrende på grund af den diffusive karakter af de kendte kemikalier. Nyligt fremkomne optogenetiske fremgangsmåder, som udnytter lysets evne til at kontrollere protein-protein-interaktioner, muliggør modulering af signalveje med høj spatiotemporal præcision såvel som reversibilitet. Kort efter sin oprindelige succes i styringen af ​​neuronfyring 25 , 26 , 27 er optogenetikum blevet udvidet til at kontrollere andre cellulære processer, såsom gentransskription, translation, celle-migration, differentiering og apoptose 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 . En strategi der bruger pHotoaktiverbart proteinpar Arabidopsis thaliana cryptochrome 2 (CRY2) protein og det N-terminale domæne af kryptokrom-interagerende basic-helix-loop-helix (CIBN) blev for nylig udviklet til at kontrollere Rafl-kinaseaktivitet i pattedyrceller og Xenopus- embryoner 35 . CRY2 binder til CIBN ved blåt lys stimulering, og CRY2 / CIBN proteinkomplekset dissocierer spontant i mørket 34 . Blåt lys exciterer CRY2 cofactor, flavin adenin dinucleotid (FAD), hvilket fører til en konformationel ændring i CRY2 og dens efterfølgende binding til CIBN. Konstitutivt aktive (W374A) og flavin-deficiente (D387A) -mutanter af CRY2 kan fremstilles gennem mutationer i FAD-bindingslommen: CRY2 W374A- mutanten binder til CIBN uafhængig af lys, mens CRY2 D387A- mutanten ikke binder til CIBN under blå -lys stimulering 36 , 37 . Det optogenetiske system beskrevet iN denne protokol anvender vildtype CRY2 og CIBN til at inducere proteintranslokationsmedieret Raf1-aktivering i levende celler. Det er kendt, at membranrekruteringen af ​​Raf1 øger dens aktivitet 38 . I dette system er et tandem CIBN-modul forankret i plasmamembranen, og CRY2-mCherry er fusioneret til N-terminalen af ​​Raf1 35 . I mangel af blåt lys forbliver CRY2-mCherry-Raf1 i cytoplasmaet, og Raf1 er inaktivt. Blålys stimulering inducerer CRY2-CIBN binding og rekrutterer Raf1 til plasmamembranen, hvor Raf1 aktiveres. Rafaktivering stimulerer en Raf / MEK / ERK signaleringskaskade. Både CRY2- og CIBN-fusionsproteiner er kodet i et bicistronisk genetisk system. Denne strategi kan generaliseres til at kontrollere andre kinaser, såsom Akt, hvis aktiveringstilstand også kan tændes ved proteintranslokation i celler 39 . Dette arbejde præsenterer detaljerede protokoller til gennemførelse af denne optogenetiske strategi i pattedyrcellekultusRes og multicellular organismer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="748">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Glass coverslip&#160;</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:188px;">48393 230</td>
			<td style="width:167px;">Substrate for live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Coverslip holder&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Newcomer Supply</td>
			<td style="width:188px;">6817B</td>
			<td style="width:167px;">Holder for coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Detergent&#160;</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16 000 104</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Boric acid&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">B6768-500G</td>
			<td style="width:167px;">For making PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Disodium tetraborate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">71996-250G</td>
			<td style="width:167px;">For making&#160; PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plastic beaker</td>
			<td style="width:175px;">Nalgene</td>
			<td style="width:188px;">1201-1000</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sodium hydroxide&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">221465-2.5KG</td>
			<td style="width:167px;">For adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">P1274-500MG</td>
			<td style="width:167px;">For coating coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Diethylpyrocarbonate (DEPC)-Treated Water</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">750024</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Cover Glass Forceps</td>
			<td style="width:175px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:188px;">5645</td>
			<td style="width:167px;">Cover glass handling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Tissue cutlure dish</td>
			<td style="width:175px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:188px;">12565321</td>
			<td style="width:167px;">Cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sterile centrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">12-565-271</td>
			<td style="width:167px;">Buffer storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Transfection Reagent</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">R0534</td>
			<td style="width:167px;">Transfection</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:219px;">CO2-independent medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">18045088</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td style="width:175px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:188px;">184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td style="width:167px;">Form make cell chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plasmid Maxiprep kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">12965</td>
			<td style="width:167px;">Plasmid preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">11965-084</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">F12K medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">21127022</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Horse serum</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16050122</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:175px;">Signa-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">12303C-500 mL</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">10378016</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Trypsin (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">15050065&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Agarose</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">BP1356-100</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Ficoll PM400</td>
			<td style="width:175px;">GE Heathcare Life Sciences</td>
			<td style="width:188px;">17-5442-02</td>
			<td style="width:167px;">For embryo buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">1.02839.0025</td>
			<td style="width:167px;">Oocyte preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">ApaI</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td>FD1414</td>
			<td style="width:167px;">For linearization of plasmids</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Dnase I</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM2222</td>
			<td style="width:167px;">For removing DNA template in the in vitro transcription assay</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Index-match materials (immersion oil)</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td>MOIL-20LN</td>
			<td style="width:167px;">For matching the index between sample substrate and objective</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Blue LED</td>
			<td style="width:175px;">Adafruit</td>
			<td style="width:188px;">301</td>
			<td style="width:167px;">Light source for optogenetic stimulation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Resistor kit</td>
			<td style="width:175px;">Amazon</td>
			<td style="width:188px;">EPC-103</td>
			<td style="width:167px;">current-limiting resistor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Aluminum boxes</td>
			<td style="width:175px;">BUD Industries</td>
			<td style="width:188px;">AC-401</td>
			<td style="width:167px;">light box&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">BreadBoard</td>
			<td style="width:175px;">Jekewin</td>
			<td style="width:188px;">837654333686</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Hook up Wire</td>
			<td style="width:175px;">Electronix Express</td>
			<td style="width:188px;">27WK22SLD25</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Relay Module</td>
			<td style="width:175px;">Jbtek</td>
			<td style="width:188px;">SRD-05VDC-SL-C</td>
			<td style="width:167px;">For intermittent light control</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DC Power Supply&#160;</td>
			<td style="width:175px;">TMS</td>
			<td style="width:188px;">DCPowerSupply-LW-(PS-305D)</td>
			<td style="width:167px;">Power supply for LED</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon&#160;Power&#160;Head</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">S121C</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Power meter</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">PM100D&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:188px;">DMI8</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">BioSafety Cabinet</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">1300 Series A2</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell handling</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">CO2 incubator</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">Isotemp</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:188px;">M60</td>
			<td style="width:167px;">For embryo micro-manipulation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Microinjector</td>
			<td style="width:175px;">Narishige</td>
			<td style="width:188px;">IM300</td>
			<td style="width:167px;">For embryo microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Micropipette puller</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">P87</td>
			<td style="width:167px;">Needle puller</td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:219px;">in vitro transcription kit</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For in vitro transcription. The kit includes nuclease-free water, SP6 RNA&#160; Polymerase, ribonucleotide mixture, cap analog, lithium choride precipitation solution, and spin column&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">RNA purfication kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">Silica-membrane spin column for purification of synthesized RNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Convection oven</td>
			<td style="width:175px;">MTI corporation</td>
			<td style="width:188px;">&#160;EQ-DHG-9015</td>
			<td style="width:167px;">PDMS curing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Centrifugal mixer and teflon container</td>
			<td style="width:175px;">THINKY</td>
			<td style="width:188px;">AR310</td>
			<td style="width:167px;">For mixing PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon wafer</td>
			<td style="width:175px;">UniversityWafer</td>
			<td style="width:188px;">452</td>
			<td style="width:167px;">Base for making PDMS&#160; devices</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Blade</td>
			<td style="width:175px;">Techni Edge</td>
			<td style="width:188px;">01-801</td>
			<td style="width:167px;">For cutting PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Capillary glass</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">BF100-58-10</td>
			<td style="width:167px;">For fabrication of injecting needles.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development

Kinaseaktivitet er afgørende for en overflod af cellulære funktioner, herunder celleproliferation, differentiering, migration og apoptose. Under tidlig embryonal udvikling er kinaseaktiviteten meget dynamisk og udbredt over embryoet. Farmakologiske og genetiske metoder anvendes almindeligt til at sonde kinaseaktiviteter. Desværre er det udfordrende at opnå en bedre rumlig og tidsmæssig opløsning ved hjælp af disse strategier. Endvidere er det ikke muligt at kontrollere kinasaktiviteten på en reversibel måde i levende celler og multicellulære organismer. En sådan begrænsning forbliver en flaskehals for at opnå en kvantitativ forståelse af kinaseaktivitet under udvikling og differentiering. Dette arbejde præsenterer en optogenetisk strategi, der udnytter et bicistronisk system, der indeholder fotoaktiverbare proteiner Arabidopsis thaliana cryptochrome 2 (CRY2) og det N-terminale domæne i Cryptochrome-interaktive basic-helix-loop-helix (CIBN). ReversiBle-aktivering af den mitogenaktiverede proteinkinase (MAPK) signalveje opnås gennem lysmedieret proteintranslokation i levende celler. Denne fremgangsmåde kan anvendes til pattedyrcellekulturer og levende hvirveldyrembryoner. Dette bicistroniske system kan generaliseres til at kontrollere aktiviteten af ​​andre kinaser med lignende aktiveringsmekanismer og kan anvendes til andre modelsystemer.

Ratiometrisk ekspression af fotoaktiverbare proteinpar: Figur 1A viser designet af en bicistronisk optogenetisk konstruktion, CRY2-mCherry-Raf1-P2A-CIBN-CIBN-GFP-CaaX (betegnet CRY2-2A-2CIBN) baseret på porcine teschovirum- 1 2A (P2A) peptid, som viser den højeste ribosom-skipping effektivitet blandt pattedyrcellelinier 42 . I tidligere arbejde er det blevet fastslået, at det optimale forhold for CIBN-GFP-CaaX: CRY2-mCherry-Raf1 er...

Watch this Scientific Journal Video about Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development at JoVE.com

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Denne protokol beskriver en optogenetisk strategi til modulering af mitogenaktiveret proteinkinase (MAPK) aktivitet under celledifferentiering og Xenopus embryonal udvikling. Denne metode muliggør reversibel aktivering af MAPK-signalvejen i pattedyrcellekultur og i multicellulære levende organismer, som Xenopus- embryoner, med høj rumlig og tidsmæssig opløsning.

Lysmedieret reversibel modulering af den mitogenaktiverede proteinkinasevej under celledifferentiering og<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonudvikling

Kinase activity is crucial for a plethora of cellular functions, including cell proliferation, differentiation, migration, and apoptosis. During early ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Developmental Biology

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Unit 1

Signaling Networks of Kinase Receptors

SCIENTISTS IN ACTION

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulation og<em&gt; In vitro</em&gt; Modning af<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Oocytter, efterfulgt af ICSI, for at studere fosterudviklingen

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analyse af zebrafisk Larver Skeletmuskel Integritet med Evans blå farvestof

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

Differentiering af SH-SY5Y human neuroblastomcellelinje

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stamcelle-lignende<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonale Eksplantater at studere Tidlig Neural Udviklingsmæssige Egenskaber<em&gt; In vitro</em&gt; Og<em&gt; In vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transkriptom profilering<em&gt; In-vivo</em&gt; Produceret Bovine præimplantationsembryoner Brug To farve Microarray Platform

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Teknik Target Mikroinjektion til udviklingslandene<em&gt; Xenopus</em&gt; Nyre

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

Epigenetisk forordning af Cardiac Differentiering af embryonale stamceller og væv

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Prediction and Validation of Gene Regulatory Elements Activated During Retinoic Acid Induced Embryonic Stem Cell Differentiation

Forudsigelse og Validering af Gene Regulatory Elements Aktiveret Under retinoidsyre induceret embryonale stamceller Differentiering

Embryonic development is a multistep process involving activation and repression of many genes. Enhancer elements in the genome are known to contribute to ...

A Simple Method to Identify Kinases That Regulate Embryonic Stem Cell Pluripotency by High-throughput Inhibitor Screening

En simpel metode til at identificere kinaser, der regulerer embryonisk stamcellepluripotens ved høj gennemstrømningshæmmende screening

Embryonic stem cells (ESCs) can self-renew or differentiate into all cell types, a phenomenon known as pluripotency. Distinct pluripotent states have been ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualisering og kvantitativ analyse af embryonisk angiogenese i<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...