Name: light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development
Uploaded: 2017-06-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dall&#39;Università dell&#39;Illinois a Urbana-Champaign (UIUC) e dagli Istituti Nazionali di Salute (NIGMS R01GM111816).

La ricerca sugli animali è stata condotta in conformità con le linee guida stabilite dall&#39;Istituto per l&#39;Assicurazione e l&#39;Utilizzazione degli Animali Istituzionali (IACUC) e dall&#39;Università dell&#39;Illinois Dipartimento di Risorse Animali (DAR). 1. Induzione ottogenetica della localizzazione della proteina nella cultura cellulare delle cellule BHK21 NOTA: i passaggi 1.1-1.3 forniscono un metodo per assemblare una camera di coltura cellulare per...

Quando si costruisce la scatola luminosa, è necessario misurare la potenza dei singoli LED. Sulla base dell&#39;esperienza precedente, l&#39;uscita di potenza può variare tra i singoli LED a causa della varianza di produzione. Selezionare un gruppo di LED che hanno una potenza entro il 10% dell&#39;altro. Il numero di LED, la resistenza di limitazione corrente e l&#39;ingresso di potenza possono essere modificati per diversi tipi di contenitori per la coltura cellulare ( ad esempio, una piastra a 6 oa un pozz...

I fattori di crescita sono coinvolti in un ampio spettro di funzioni cellulari, tra cui la proliferazione, la differenziazione, la migrazione e l&#39;apoptosi e svolgono ruoli chiave in molti eventi biologici, inclusi lo sviluppo embrionale, l&#39;invecchiamento e la regolazione dello stato mentale 1 , 2 , 3 , 4 , 5 . Molti fattori di crescita segnano attraverso complesse cascate intracellulari di segnalazione. Questi eventi di segnalazione sono spesso gestiti da fosforilazione proteica reversibile in modo preciso regolato 6 , 7 . Pertanto, una comprensione dei risultati di segnalazione delle proteine ​​chinasi, che sono responsabili della fosforilazione proteica, è fondamentalmente importante. Diversi fattori di crescita agiscono attraverso una rete di segnalazione intracellulare piuttosto comune, anche se stimolano distRisposte cellulari inct 8 , 9 . I mediatori intracellulari comuni delle chinasi di tirosinici del recettore includono Ras, Raf, chinasi extracellulare-regolata (ERK), proteina chinasi attivata da mitogeni (MAPK) / ERK chinasi (MEK), fosfoinositide 3-chinasi (PI3K), Akt e gamma fosfolipasi C (PLCγ) 10 , 11 . L&#39;accumulo di prove suggerisce che la diversità di segnalazione e la specificità dipendono dalla regolazione spaziale e temporale dell&#39;attività di segnalazione 12 . Ad esempio, nelle cellule di phaocromocytoma di ratto (PC12), la stimolazione del fattore di crescita epidermico (EGF), che provoca la proliferazione cellulare, attiva temporaneamente il percorso ERK 9 . D&#39;altra parte, la stimolazione con il fattore di crescita del nervo (NGF), che porta alla differenziazione cellulare, attiva il percorso ERK in modo sostenibile 9 , 13 . In colture rNei neuroni ippocampali, la segnalazione transitoria da un fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF) favorisce la crescita primaria del neurite, mentre la segnalazione sostenuta porta ad una maggiore ramificazione del neurite 14 . Durante il primo sviluppo embrionale, l&#39;attività ERK fosforilata è temporaneamente dinamica e diffusa nell&#39;embrione 6 . Una recente schermata genetica durante l&#39;embriogenesi iniziale di Xenopus ha mostrato che le cascate di segnalazione ERK e Akt, due percorsi di fattore di crescita primario a valle, mostrano i profili di attivazione specifici di fase 7 . Così, una comprensione dei risultati di segnalazione di chinasi richiede strumenti che possono sondare le caratteristiche spaziali e temporali dell&#39;attività cinasi con una risoluzione sufficiente. Approcci sperimentali convenzionali per sondare la natura dinamica della trasduzione del segnale durante lo sviluppo non hanno la desiderabile risoluzione spaziale e temporale. Ad esempio, gli approcci farmacologici utilizzano la piccola chemMolecole ical o biologiche per stimolare o sopprimere la trasduzione del segnale nelle cellule e nei tessuti. La natura diffusa di queste piccole molecole rende difficile limitare la loro azione ad una regione specifica di interesse. Gli approcci genetici ( ad esempio, transgenesi, il sistema Cre-Lox o mutagenesi) spesso portano all&#39;attivazione o alla repressione irreversibili dell&#39;espressione genica o dell&#39;attività proteica 16 , 17 , 18 . Il sistema Tet-On / Tet-Off 19 offre un controllo temporale migliorato della trascrizione del gene, ma manca di un controllo spaziale rigoroso perché si basa sulla diffusione della tetraciclina. I recenti sviluppi nella dimerizzazione delle proteine ​​chimicamente indotti dalla chimica 20 o nella foto-scoperta 21 , 22 , 23 , 24 hanno notevolmente miglioramentiEd il controllo temporale delle reti di segnalazione. Il controllo spaziale, tuttavia, rimane impegnativo a causa della diffusione dei prodotti chimici in gabbia. Recenti approcci optogenetici emergenti, che sfruttano il potere di luce per controllare le interazioni proteine-proteine, consentono la modulazione di percorsi di segnalazione con elevata precisione spatiotemporale e reversibilità. Poco dopo il suo successo iniziale nel controllo del cervello neuronale 25 , 26 , 27 , l&#39;ottogenetica è stata estesa per controllare altri processi cellulari, come la trascrizione di geni, la traduzione, la migrazione cellulare, la differenziazione e l&#39;apoptosi 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 . Una strategia che utilizza il pProteina hotoattivatabile La proteina cripto- cromica 2 (CRY2) di Arabidopsis thaliana e il dominio N-terminale dell&#39;elica a base di elicoidale (CIBN) che interagiscono con citochrome è stato recentemente sviluppato per controllare l&#39;attività di Raf1-chinasi nelle cellule di mammiferi e negli embrioni Xenopus 35 . CRY2 si lega a CIBN su stimolazione azzurra-luce e il complesso proteico CRY2 / CIBN dissociata spontaneamente nel buio 34 . La luce blu eccita il cofattore CRY2, il dinucleotide di flavin adenina (FAD), che porta ad un cambiamento conformazionale in CRY2 e successivamente legato a CIBN. I mutanti costituenti attivamente attivi (W374A) e flavin-deficienti (D387A) di CRY2 possono essere prodotti attraverso mutazioni nella tasca di legame FAD: il mutante CRY2 W374A si lega a CIBN indipendente dalla luce, mentre il mutante CRY2 D387A non si lega a CIBN sotto l&#39;azzurro Stimolazione luminosa 36 , 37 . Il sistema ottogenetico descritto iN questo protocollo utilizza il tipo di wild-type CRY2 e CIBN per indurre l&#39;attivazione Raf1 mediata dalla traslocazione proteica in cellule vive. È noto che il reclutamento della membrana di Raf1 aumenta la sua attività 38 . In questo sistema, un modulo CIBN tandem è ancorato alla membrana plasmatica e CRY2-mCherry è fuso al terminale N di Raf1 35 . In assenza di luce blu, CRY2-mCherry-Raf1 rimane nel citoplasma, e Raf1 è inattivo. La stimolazione della luce blu induce il legame CRY2-CIBN e recluta Raf1 alla membrana plasmatica, in cui viene attivata Raf1. L&#39;attivazione Raf stimola una cascata di segnalazione Raf / MEK / ERK. Entrambe le proteine ​​di fusione CRY2 e CIBN sono codificate in un sistema genetico bicistronico. Questa strategia può essere generalizzata per controllare altre chinasi, come Akt, il cui stato di attivazione può essere attivato anche dalla traslocazione proteica nelle cellule 39 . Questo lavoro presenta protocolli dettagliati per l&#39;implementazione di questa strategia optogenetica in cultu cellule di mammiferiRes e organismi multicellulari.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="748">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Glass coverslip&#160;</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:188px;">48393 230</td>
			<td style="width:167px;">Substrate for live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Coverslip holder&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Newcomer Supply</td>
			<td style="width:188px;">6817B</td>
			<td style="width:167px;">Holder for coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Detergent&#160;</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16 000 104</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Boric acid&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">B6768-500G</td>
			<td style="width:167px;">For making PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Disodium tetraborate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">71996-250G</td>
			<td style="width:167px;">For making&#160; PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plastic beaker</td>
			<td style="width:175px;">Nalgene</td>
			<td style="width:188px;">1201-1000</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sodium hydroxide&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">221465-2.5KG</td>
			<td style="width:167px;">For adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">P1274-500MG</td>
			<td style="width:167px;">For coating coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Diethylpyrocarbonate (DEPC)-Treated Water</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">750024</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Cover Glass Forceps</td>
			<td style="width:175px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:188px;">5645</td>
			<td style="width:167px;">Cover glass handling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Tissue cutlure dish</td>
			<td style="width:175px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:188px;">12565321</td>
			<td style="width:167px;">Cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sterile centrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">12-565-271</td>
			<td style="width:167px;">Buffer storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Transfection Reagent</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">R0534</td>
			<td style="width:167px;">Transfection</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:219px;">CO2-independent medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">18045088</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td style="width:175px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:188px;">184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td style="width:167px;">Form make cell chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plasmid Maxiprep kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">12965</td>
			<td style="width:167px;">Plasmid preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">11965-084</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">F12K medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">21127022</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Horse serum</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16050122</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:175px;">Signa-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">12303C-500 mL</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">10378016</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Trypsin (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">15050065&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Agarose</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">BP1356-100</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Ficoll PM400</td>
			<td style="width:175px;">GE Heathcare Life Sciences</td>
			<td style="width:188px;">17-5442-02</td>
			<td style="width:167px;">For embryo buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">1.02839.0025</td>
			<td style="width:167px;">Oocyte preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">ApaI</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td>FD1414</td>
			<td style="width:167px;">For linearization of plasmids</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Dnase I</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM2222</td>
			<td style="width:167px;">For removing DNA template in the in vitro transcription assay</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Index-match materials (immersion oil)</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td>MOIL-20LN</td>
			<td style="width:167px;">For matching the index between sample substrate and objective</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Blue LED</td>
			<td style="width:175px;">Adafruit</td>
			<td style="width:188px;">301</td>
			<td style="width:167px;">Light source for optogenetic stimulation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Resistor kit</td>
			<td style="width:175px;">Amazon</td>
			<td style="width:188px;">EPC-103</td>
			<td style="width:167px;">current-limiting resistor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Aluminum boxes</td>
			<td style="width:175px;">BUD Industries</td>
			<td style="width:188px;">AC-401</td>
			<td style="width:167px;">light box&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">BreadBoard</td>
			<td style="width:175px;">Jekewin</td>
			<td style="width:188px;">837654333686</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Hook up Wire</td>
			<td style="width:175px;">Electronix Express</td>
			<td style="width:188px;">27WK22SLD25</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Relay Module</td>
			<td style="width:175px;">Jbtek</td>
			<td style="width:188px;">SRD-05VDC-SL-C</td>
			<td style="width:167px;">For intermittent light control</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DC Power Supply&#160;</td>
			<td style="width:175px;">TMS</td>
			<td style="width:188px;">DCPowerSupply-LW-(PS-305D)</td>
			<td style="width:167px;">Power supply for LED</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon&#160;Power&#160;Head</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">S121C</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Power meter</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">PM100D&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:188px;">DMI8</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">BioSafety Cabinet</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">1300 Series A2</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell handling</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">CO2 incubator</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">Isotemp</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:188px;">M60</td>
			<td style="width:167px;">For embryo micro-manipulation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Microinjector</td>
			<td style="width:175px;">Narishige</td>
			<td style="width:188px;">IM300</td>
			<td style="width:167px;">For embryo microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Micropipette puller</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">P87</td>
			<td style="width:167px;">Needle puller</td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:219px;">in vitro transcription kit</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For in vitro transcription. The kit includes nuclease-free water, SP6 RNA&#160; Polymerase, ribonucleotide mixture, cap analog, lithium choride precipitation solution, and spin column&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">RNA purfication kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">Silica-membrane spin column for purification of synthesized RNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Convection oven</td>
			<td style="width:175px;">MTI corporation</td>
			<td style="width:188px;">&#160;EQ-DHG-9015</td>
			<td style="width:167px;">PDMS curing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Centrifugal mixer and teflon container</td>
			<td style="width:175px;">THINKY</td>
			<td style="width:188px;">AR310</td>
			<td style="width:167px;">For mixing PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon wafer</td>
			<td style="width:175px;">UniversityWafer</td>
			<td style="width:188px;">452</td>
			<td style="width:167px;">Base for making PDMS&#160; devices</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Blade</td>
			<td style="width:175px;">Techni Edge</td>
			<td style="width:188px;">01-801</td>
			<td style="width:167px;">For cutting PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Capillary glass</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">BF100-58-10</td>
			<td style="width:167px;">For fabrication of injecting needles.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development

L&#39;attività cinasi è fondamentale per una pletora di funzioni cellulari, tra cui la proliferazione cellulare, la differenziazione, la migrazione e l&#39;apoptosi. Durante il primo sviluppo embrionale, l&#39;attività della chinasi è altamente dinamica e diffusa nell&#39;embrione. Gli approcci farmacologici e genetici sono comunemente usati per sondare le attività di chinasi. Purtroppo, è difficile raggiungere una risoluzione spaziale e temporale superiore utilizzando queste strategie. Inoltre, non è possibile controllare l&#39;attività cinasi in modo reversibile in cellule vive e organismi multicellulari. Tale limitazione rimane un collo di bottiglia per ottenere una comprensione quantitativa dell&#39;attività cinasi durante lo sviluppo e la differenziazione. Questo lavoro presenta una strategia optogenetica che sfrutta un sistema bicistronic contenente proteine fotoattivatabili Arabidopsis thaliana cryptochrome 2 (CRY2) e il dominio N-terminale di citochrome-interazione di base elica-loop-elica (CIBN). ReversiL&#39;attivazione del percorso di segnalazione della proteina chinasi attivata da mitogeni (MAPK) è ottenuta attraverso la traslocazione proteica mediata dalla luce in cellule vive. Questo approccio può essere applicato alle colture di cellule di mammiferi e agli embrioni di vertebrati vivi. Questo sistema bicistronic può essere generalizzato per controllare l&#39;attività di altre chinasi con meccanismi di attivazione similari e può essere applicata ad altri sistemi di modello.

Espressione ratiometrica di coppie di proteine ​​fotoattivatabili: la figura 1A mostra la progettazione di un costrutto ottogenetico bicistronico, CRY2-mCherry-Raf1-P2A-CIBN-CIBN-GFP-CaaX (denominato CRY2-2A-2CIBN), basato sulla teschovirum- 1 2A (P2A), che mostra la più alta efficacia di riduzione dei ribosomi tra le linee cellulari mammiferi 42 . Nel lavoro precedente, è stato stabilito che il rapporto ottimale per CIBN-GFP-Ca...

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Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Questo protocollo descrive una strategia optogenetica per modulare l&#39;attivazione della proteina chinasi attivata dal mitogeno (MAPK) durante la differenziazione cellulare e lo sviluppo embrionale di Xenopus . Questo metodo consente l&#39;attivazione reversibile del percorso di segnalazione MAPK nella coltura di cellule di mammiferi e negli organismi vivi multicellulari, come gli embrioni di Xenopus , con elevata risoluzione spaziale e temporale.

Modulazione reversibile mediata dalla luce del percorso proteico di kinasi attivato da Mitogen durante la differenziazione cellulare e<em&gt; Xenopus</em&gt; Sviluppo embrionale

Kinase activity is crucial for a plethora of cellular functions, including cell proliferation, differentiation, migration, and apoptosis. During early ...

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Cell Biology

Developmental Biology

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Unit 1

Signaling Networks of Kinase Receptors

SCIENTISTS IN ACTION

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipolazione e<em&gt; In Vitro</em&gt; Maturazione di<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; ovociti, seguito da Iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi, per studiare lo sviluppo embrionale

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during ...

Ricerca

Biologia dello sviluppo

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analisi delle larve Zebrafish muscolo scheletrico Integrità con Blu di Evans Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

La differenziazione del SH-SY5Y neuroblastoma umano linea cellulare

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Cellule staminali simil-<em&gt; Xenopus</em&gt; Embrionali espianti di studiare Caratteristiche precoce dello sviluppo neurale<em&gt; In Vitro</em&gt; E<em&gt; In Vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Trascrittoma Profiling di<em&gt; In-Vivo</em&gt; Embrioni bovini pre-impianto prodotto con piattaforma microarray a due colori

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Tecnica a Target microiniezione per lo sviluppo<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

Regolazione epigenetica del Cardiac differenziazione delle cellule staminali embrionali e Tessuti

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Prediction and Validation of Gene Regulatory Elements Activated During Retinoic Acid Induced Embryonic Stem Cell Differentiation

Previsione e Validazione del gene regolatore elementi attivato durante retinoico Acid Induced embrionali cellule staminali Differenziazione

Embryonic development is a multistep process involving activation and repression of many genes. Enhancer elements in the genome are known to contribute to ...

A Simple Method to Identify Kinases That Regulate Embryonic Stem Cell Pluripotency by High-throughput Inhibitor Screening

Un metodo semplice per identificare le cinasi che regolano la pluripotenza delle cellule staminali embrionali mediante screening di inibitori ad alta percentuale

Embryonic stem cells (ESCs) can self-renew or differentiate into all cell types, a phenomenon known as pluripotency. Distinct pluripotent states have been ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualizzazione e analisi quantitativa di angiogenesi embrionale in<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...