Name: light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development
Uploaded: 2017-06-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development at JoVE.com

이 작업은 Urbana-Champaign의 일리노이 대학 (UIUC)과 국립 보건원 (NIGMS R01GM111816)의 지원을 받았다.

동물 연구는 일리노이 제도 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)와 일리노이 대학 동물 자원부 (DAR)가 정한 지침에 따라 수행되었습니다. 1. BHK21 포유 동물 세포 배양에서 단백질 국소화의 Optogenetic 유도 참고 : 1.1-1.3 단계는 일반적으로 짧은 작동 거리를 갖는 고배율 대물 렌즈 ( 예 : 63X 또는 100X)로 이미징을 위해 세포 배양 챔버를 조립하는 방법을 제공?...

조명 상자를 만들 때 개별 LED의 전원을 측정해야합니다. 이전의 경험을 바탕으로 제조 출력 차이로 인해 LED마다 전원 출력이 다를 수 있습니다. 서로 10 % 이내의 출력을 갖는 LED 세트를 선택하십시오. LED의 수, 전류 제한 저항 및 전원 입력은 다양한 유형의 세포 배양 용기 ( 예 : 6- 웰 또는 24- 웰 플레이트)에 대해 수정할 수 있습니다. 0.2mW / cm 2 의 출력에서 ​​24 시간 동안 빛을 비?...

성장 인자는 증식, 분화, 이동 및 세포 사멸을 포함하여 다양한 세포 기능에 관여하며 배아 발달, 노화 및 정신 상태 조절을 비롯한 많은 생물학적 사건에서 중추적 인 역할을한다 1 , 2 , 3 , 4 , 5 . 많은 성장 인자가 복잡한 세포 내 신호 전달 계통을 통해 신호를 보냅니다. 이러한 신호 전달 사건은 가끔 정교하게 조절 된 방식으로 가역성 단백질 인산화에 의해 작동된다. 따라서 단백질 인산화에 관여하는 단백질 키나아제의 신호 결과에 대한 이해는 근본적으로 중요합니다. 서로 다른 성장 인자가 dist를 자극하더라도 다소 일반적인 세포 내 신호 전달 네트워크를 통해 작용합니다.inct 세포 반응 8 , 9 . 수용체 티로신 키나아제의 일반적인 세포 내 매개체에는 Ras, Raf, 세포 외 신호 조절 키나아제 (MAPK) / ERK 키나제 (MEK), 포스 포이 노시 티드 3- 키나아제 (PI3K), Akt 및 포스 포 리파아제 Cγ (PLCγ) 10 , 11 . 축적 된 증거는 신호 다양성과 특이성이 신호 활동의 공간적, 시간적 조절에 달려 있음을 시사한다. 예를 들어, 쥐 갈색 세포종 세포 (PC12)에서 세포 증식을 일으키는 상피 세포 성장 인자 (EGF) 자극은 일시적으로 ERK 경로를 활성화시킵니다. 반면에, 세포 분화를 유도하는 신경 성장 인자 (NGF)로 자극하면 ERK 경로가 지속적으로 활성화됩니다 9 , 13 . 배양 된 r해마 뉴런에서 뇌 - 유도 신경영 인자 (BDNF)에 의한 일시적인 신호 전달은 1 차 신경 돌기의 성장을 촉진하는 반면, 지속적인 신호 전달은 증가 된 신경 돌기 분기를 유도한다. 초기 배아 발달 과정에서 인산화 ERK 활성은 일시적으로 역동적이며 배아 전반에 널리 퍼져있다. 초기의 Xenopus 배 발생 동안의 최근 유전자 스크린은 ERK 및 Akt 신호 전달 계류 (2 개의 다운 스트림 주 성장 인자 경로)가 단계 특이 적 활성화 프로파일을 나타내는 것으로 나타났다. 따라서, 키나아제 신호 결과의 이해는 충분한 분해능으로 키나아제 활성의 공간적 및 일시적 특징을 조사 할 수있는 도구를 필요로한다. 개발 과정에서 신호 변환의 동적 특성을 조사하기위한 기존의 실험적 접근 방법은 바람직한 공간적 및 시간적 해결책이 부족합니다. 예를 들어, 약리학 적 접근법은 작은 화학 물질세포 또는 조직에서의 신호 전달을 자극 또는 억제하기위한 생체 분자 또는 생물 분자. 이 작은 분자들의 확산 성질은 자신의 행동을 특정 관심 영역으로 제한하는 것을 어렵게 만든다. 유전자 접근법 ( 예 : 형질 전환, Cre-Lox 시스템 또는 돌연변이 유발)은 종종 표적 유전자 발현 또는 단백질 활성의 비가 역적 활성화 또는 억제를 유도합니다 16 , 17 , 18 . Tet-On / Tet-Off 시스템 19 는 유전자 전사의 향상된 시간 제어를 제공하지만 테트라 사이클린의 확산에 의존하기 때문에 엄격한 공간 제어가 부족합니다. 화학적으로 유도 된 단백질 이량 체화 (20) 또는 광 - 언 케이 징 ( uncaging ) 21 , 22 , 23 , 24의 최근 개발은 크게 향상되었다시그널링 네트워크의 시간 제어. 그러나 공간 제어는 갇힌 화학 물질의 확산 특성으로 인해 여전히 어려움을 겪고 있습니다. 단백질 - 단백질 상호 작용을 제어하기 위해 빛의 힘을 이용하는 최근 출현하는 광 생성 접근법은 높은 시공간 정밀도 및 가역성을 갖는 신호 전달 경로의 조절을 허용한다. 뉴런 사격 조절에있어 초기 성공 직후 25 , 26 , 27 , optogenetics는 유전자 전사, 번역, 세포 이동, 분화 및 세포 사멸과 같은 다른 세포 과정을 제어하기 위해 확장되었다 .28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 . p를 사용하는 전략(CRY2) 단백질과 Cryptochrome-interacting basic-helix-loop-helix (CIBN)의 N- 말단 도메인은 최근 포유류 세포와 Xenopus 배아에서 Raf1 키나아제 활성을 조절하기 위해 개발되었다. CRY2는 청색광 자극시 CIBN에 결합하고, CRY2 / CIBN 단백질 복합체는 암흑에서 자발적으로 해리한다. 청색광은 CRY2 보조 인자 인 플라 빈 아데닌 디 뉴클레오타이드 (FAD)를 자극하여 CRY2의 구조 변화와 그 후의 CIBN 결합을 유도합니다. CRY2의 구조적 활성 (W374A) 및 플라 빈 결핍 (D387A) 돌연변이는 FAD 결합 주머니의 돌연변이를 통해 생산 될 수 있습니다. CRY2 W374A 돌연변이는 빛과 무관하게 CIBN에 결합하지만 CRY2 D387A 돌연변이는 파란색으로 CIBN에 결합하지 않습니다 가벼운 자극 36 , 37 . optogenetic 시스템은 내가 설명한이 프로토콜은 야생형 CRY2와 CIBN을 사용하여 살아있는 세포에서 단백질 전좌 매개 Raf1 활성화를 유도합니다. Raf1의 멤브레인 모집은 그것의 활성을 증가시키는 것으로 알려져있다 38 . 이 시스템에서 탠덤 CIBN 모듈은 원형질막에 고정되어 있으며 CRY2-mCherry는 Raf1 35 의 N- 말단에 융합되어 있습니다. 푸른 빛이없는 경우, CRY2-mCherry-Raf1은 세포질에 머무르고, Raf1은 비활성입니다. 푸른 빛 자극은 CRY2-CIBN 결합을 유도하고 Raf1이 활성화 된 원형질막으로 Raf1을 모집합니다. Raf 활성화는 Raf / MEK / ERK 신호 전달 캐스케이드를 자극한다. CRY2 및 CIBN- 융합 단백질은 모두 바이 시스 트론 유전 시스템에서 코딩된다. 이 전략은 Akt와 같은 다른 키나아제를 조절하기 위해 일반화 될 수 있으며, 활성화 상태는 세포에서 단백질 전좌에 의해 활성화 될 수 있습니다 39 . 이 작품은 포유류 세포 cultu 에서이 optogenetic 전략을 구현하기위한 상세한 프로토콜을 제공합니다res 및 다세포 생물.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="748">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Glass coverslip&#160;</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:188px;">48393 230</td>
			<td style="width:167px;">Substrate for live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Coverslip holder&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Newcomer Supply</td>
			<td style="width:188px;">6817B</td>
			<td style="width:167px;">Holder for coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Detergent&#160;</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16 000 104</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Boric acid&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">B6768-500G</td>
			<td style="width:167px;">For making PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Disodium tetraborate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">71996-250G</td>
			<td style="width:167px;">For making&#160; PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plastic beaker</td>
			<td style="width:175px;">Nalgene</td>
			<td style="width:188px;">1201-1000</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sodium hydroxide&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">221465-2.5KG</td>
			<td style="width:167px;">For adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">P1274-500MG</td>
			<td style="width:167px;">For coating coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Diethylpyrocarbonate (DEPC)-Treated Water</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">750024</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Cover Glass Forceps</td>
			<td style="width:175px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:188px;">5645</td>
			<td style="width:167px;">Cover glass handling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Tissue cutlure dish</td>
			<td style="width:175px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:188px;">12565321</td>
			<td style="width:167px;">Cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sterile centrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">12-565-271</td>
			<td style="width:167px;">Buffer storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Transfection Reagent</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">R0534</td>
			<td style="width:167px;">Transfection</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:219px;">CO2-independent medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">18045088</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td style="width:175px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:188px;">184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td style="width:167px;">Form make cell chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plasmid Maxiprep kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">12965</td>
			<td style="width:167px;">Plasmid preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">11965-084</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">F12K medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">21127022</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Horse serum</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16050122</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:175px;">Signa-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">12303C-500 mL</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">10378016</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Trypsin (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">15050065&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Agarose</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">BP1356-100</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Ficoll PM400</td>
			<td style="width:175px;">GE Heathcare Life Sciences</td>
			<td style="width:188px;">17-5442-02</td>
			<td style="width:167px;">For embryo buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">1.02839.0025</td>
			<td style="width:167px;">Oocyte preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">ApaI</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td>FD1414</td>
			<td style="width:167px;">For linearization of plasmids</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Dnase I</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM2222</td>
			<td style="width:167px;">For removing DNA template in the in vitro transcription assay</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Index-match materials (immersion oil)</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td>MOIL-20LN</td>
			<td style="width:167px;">For matching the index between sample substrate and objective</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Blue LED</td>
			<td style="width:175px;">Adafruit</td>
			<td style="width:188px;">301</td>
			<td style="width:167px;">Light source for optogenetic stimulation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Resistor kit</td>
			<td style="width:175px;">Amazon</td>
			<td style="width:188px;">EPC-103</td>
			<td style="width:167px;">current-limiting resistor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Aluminum boxes</td>
			<td style="width:175px;">BUD Industries</td>
			<td style="width:188px;">AC-401</td>
			<td style="width:167px;">light box&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">BreadBoard</td>
			<td style="width:175px;">Jekewin</td>
			<td style="width:188px;">837654333686</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Hook up Wire</td>
			<td style="width:175px;">Electronix Express</td>
			<td style="width:188px;">27WK22SLD25</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Relay Module</td>
			<td style="width:175px;">Jbtek</td>
			<td style="width:188px;">SRD-05VDC-SL-C</td>
			<td style="width:167px;">For intermittent light control</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DC Power Supply&#160;</td>
			<td style="width:175px;">TMS</td>
			<td style="width:188px;">DCPowerSupply-LW-(PS-305D)</td>
			<td style="width:167px;">Power supply for LED</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon&#160;Power&#160;Head</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">S121C</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Power meter</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">PM100D&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:188px;">DMI8</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">BioSafety Cabinet</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">1300 Series A2</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell handling</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">CO2 incubator</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">Isotemp</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:188px;">M60</td>
			<td style="width:167px;">For embryo micro-manipulation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Microinjector</td>
			<td style="width:175px;">Narishige</td>
			<td style="width:188px;">IM300</td>
			<td style="width:167px;">For embryo microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Micropipette puller</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">P87</td>
			<td style="width:167px;">Needle puller</td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:219px;">in vitro transcription kit</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For in vitro transcription. The kit includes nuclease-free water, SP6 RNA&#160; Polymerase, ribonucleotide mixture, cap analog, lithium choride precipitation solution, and spin column&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">RNA purfication kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">Silica-membrane spin column for purification of synthesized RNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Convection oven</td>
			<td style="width:175px;">MTI corporation</td>
			<td style="width:188px;">&#160;EQ-DHG-9015</td>
			<td style="width:167px;">PDMS curing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Centrifugal mixer and teflon container</td>
			<td style="width:175px;">THINKY</td>
			<td style="width:188px;">AR310</td>
			<td style="width:167px;">For mixing PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon wafer</td>
			<td style="width:175px;">UniversityWafer</td>
			<td style="width:188px;">452</td>
			<td style="width:167px;">Base for making PDMS&#160; devices</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Blade</td>
			<td style="width:175px;">Techni Edge</td>
			<td style="width:188px;">01-801</td>
			<td style="width:167px;">For cutting PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Capillary glass</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">BF100-58-10</td>
			<td style="width:167px;">For fabrication of injecting needles.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development

키나아제 활성은 세포 증식, 분화, 이동 및 세포 사멸을 비롯한 과다한 세포 기능에 결정적이다. 초기 배아 발달 동안, 키나아제 활성은 매우 동적이며 배아에 널리 퍼져있다. 약리학 적 및 유전 적 접근법은 일반적으로 키나제 활동을 조사하는데 사용됩니다. 불행하게도 이러한 전략을 사용하여 우수한 공간적 및 시간적 해결책을 얻는 것은 어렵습니다. 또한, 생세포 및 다세포 생물에서 가역적 인 방식으로 키나제 활성을 조절하는 것은 현실적이지 못하다. 이러한 제한은 발달 및 분화 과정에서 키나아제 활성의 정량적 이해를 달성하기위한 병목으로 남아있다. 이 연구는 광 활성화 단백질 인 Arabidopsis thaliana cryptochrome 2 (CRY2)와 cryptochrome-interacting basic-helix-loop-helix (CIBN)의 N- 말단 도메인을 포함하는 바이 시스 트론 시스템을 이용하는 광 생성 전략을 제시한다. 리버시mitogen-activated protein kinase (MAPK) 신호 전달 경로의 활성화는 살아있는 세포에서 빛을 매개로하는 단백질 전좌를 통해 이루어진다. 이 접근법은 포유류 세포 배양 및 살아있는 척추 배아에 적용될 수 있습니다. 이 bicistronic 시스템은 유사한 활성화 메커니즘을 가진 다른 키나제의 활성을 조절하기 위해 일반화 될 수 있으며 다른 모델 시스템에도 적용될 수 있습니다.

photoactivatable 단백질 쌍의 비례 발현 : 그림 1A 는 bicistronic optogenetic 구조물, CRY2-mCherry-Raf1-P2A-CIBN-CIBN-GFP-CaaX (CRY2-2A-2CIBN라고 함) 1 2A (P2A) 펩타이드는 포유류 세포주 중 가장 높은 리보좀 건너 뛰기 효율을 보여줍니다 42 . 이전 연구에서 CIBN-GFP-CaaX : CRY2-mCherry-Raf1의 최적 비율은 2 : 1로 결정되었다. 이 구성은 CRY2-mCherry-Raf1 ( <strong class="xfi...

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Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

이 프로토콜은 세포 분화 및 Xenopus 배아 발달 동안 mitogen - 활성화 단백질 키니 아제 (MAPK) 활동을 조절하는 optogenetic 전략을 설명합니다. 이 방법은 포유류 세포 배양 및 높은 공간적 및 시간적 해상도를 갖는 Xenopus 태아와 같은 다세포 생균에서 MAPK 신호 전달 경로의 가역적 활성화를 허용한다.

세포 분화 동안 미토 겐 활성 단백질 키나아제 경로의 광 매개 가역적 변조<em&gt; Xenopus</em&gt; 배아 발달

Kinase activity is crucial for a plethora of cellular functions, including cell proliferation, differentiation, migration, and apoptosis. During early ...

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Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Unit 1

Signaling Networks of Kinase Receptors

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Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

조작 및<em&gt; 체외</em의&gt; 성숙<em&gt; 아프리카 발톱 개구리 laevis의</em세포질 내 정자 주입에 이어&gt; 난 모세포, 배아 발달을 연구하는

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during ...

연구

발생학

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

에반스 블루 염료와 Zebrafish의 애벌레 골격 근육 무결성 분석

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

SH-SY5Y 인간 신경 모세포종 세포 라인의 차별화

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

줄기 세포처럼<em&gt; Xenopus의</em&gt; 배아의 Explants는 초기 신경 발달의 특징을 연구하는<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

의 사체 프로파일 링<em&gt; 생체</em2 색의 마이크로 어레이 플랫폼을 사용하여&gt; 제작 소 착상 전 배아

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

개발에 미세 주입을 대상으로 기술<em&gt; Xenopus의</em&gt; 신장

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

배아 줄기 세포와 조직의 심장 차별화의 성적인 규정

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Prediction and Validation of Gene Regulatory Elements Activated During Retinoic Acid Induced Embryonic Stem Cell Differentiation

예측 및 유전자 규제 요소의 검증은 레티노 산 유도 배아 동안 활성화 된 세포 분화 줄기

Embryonic development is a multistep process involving activation and repression of many genes. Enhancer elements in the genome are known to contribute to ...

A Simple Method to Identify Kinases That Regulate Embryonic Stem Cell Pluripotency by High-throughput Inhibitor Screening

높은 처리량 억제제 스크리닝에 의한 배아 줄기 세포의 다 능성을 조절하는 키나제를 확인하는 간단한 방법

Embryonic stem cells (ESCs) can self-renew or differentiate into all cell types, a phenomenon known as pluripotency. Distinct pluripotent states have been ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

의 배아 혈관 신생에 대한 시각화 및 정량 분석<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...