Name: light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development
Uploaded: 2017-06-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por la Universidad de Illinois en Urbana-Champaign (UIUC) y los Institutos Nacionales de Salud (NIGMS R01GM111816).

La investigación en animales se realizó de acuerdo con las pautas establecidas por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucionales de Illinois (IACUC) y el Departamento de Recursos Animales de la Universidad de Illinois (DAR). 1. Inducción optogenética de la localización de proteínas en BHK21 Cultura de células de mamíferos NOTA: Los pasos 1.1-1.3 proporcionan un método para ensamblar una cámara de cultivo de células para la obtención de imágen...

Cuando se construye la caja de luz, se debe medir la potencia de los LED individuales. Según la experiencia anterior, la potencia de salida puede variar entre LED individuales debido a la variación de fabricación. Seleccione un conjunto de LED que tengan una potencia de salida de 10% entre sí. El número de LEDs, la resistencia de limitación de corriente y la entrada de potencia se pueden modificar para diferentes tipos de recipientes de cultivo celular ( por ejemplo, una placa de 6 pocillos o de 24 pocill...

Los factores de crecimiento están involucrados en un amplio espectro de funciones celulares, incluyendo proliferación, diferenciación, migración y apoptosis, y juegan papeles cruciales en muchos eventos biológicos, incluyendo el desarrollo embrionario, el envejecimiento y la regulación del estado mental 1 , 2 , 3 , 4 , 5 . Muchos factores de crecimiento señalan a través de complejas cascadas de señalización intracelular. Estos eventos de señalización son a menudo operados por la fosforilación de proteínas reversible de una manera regulada con precisión 6 , 7 . Por lo tanto, una comprensión de los resultados de señalización de las proteínas quinasas, que son responsables de la fosforilación de proteínas, es fundamentalmente importante. Diferentes factores de crecimiento actúan a través de una red de señalización intracelular bastante común, aunque estimulan distInct respuestas celulares [ 8 , 9] . Los mediadores intracelulares comunes de las tirosina quinasas receptoras incluyen Ras, Raf, quinasa regulada por señal extracelular (ERK), proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK) / ERK quinasa (MEK), phosphoinositide 3-quinasa (PI3K), Akt y fosfolipasa C gamma (PLC $ γ $) 10 , 11 . La acumulación de pruebas sugiere que la señalización de la diversidad y la especificidad dependen de la regulación espacial y temporal de la actividad de señalización [ 12] . Por ejemplo, en las células de feocromocitoma de rata (PC12), estimulación del factor de crecimiento epidérmico (EGF), lo que resulta en la proliferación celular, transitoriamente activa la vía ERK [ 9] . Por otra parte, la estimulación con factor de crecimiento nervioso (NGF), que conduce a la diferenciación celular, activa la vía ERK de una manera sostenida [ 9 , 13] . En cultivo rEn las neuronas del hipocampo, la señalización transitoria por el factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) promueve el crecimiento de las neuritas primarias, mientras que la señalización sostenida conduce a una mayor ramificación de neuritas 14 . Durante el desarrollo embrionario temprano, phosphorylated ERK actividad es temporalmente dinámica y está extendida a través del embrión [ 6] . Una reciente pantalla genética durante la embriogénesis Xenopus temprana mostró que ERK y Akt cascadas de señalización, dos vías del factor de crecimiento primario aguas abajo, mostrar la etapa específica de activación perfiles [ 7] . Por lo tanto, la comprensión de los resultados de la señalización quinasa requiere de herramientas que pueden sondear las características espaciales y temporales de la actividad quinasa con suficiente resolución. Los enfoques experimentales convencionales para investigar la naturaleza dinámica de la transducción de señales durante el desarrollo carecen de la resolución espacial y temporal deseable. Por ejemplo, los enfoques farmacológicos utilizanO biológicas para estimular o suprimir la transducción de señales en células y tejidos. La naturaleza difusiva de estas pequeñas moléculas hace que sea difícil restringir su acción a una región específica de interés [ 15] . Los enfoques genéticos ( por ejemplo, la transgénesis, el sistema Cre-Lox o mutagénesis) a menudo conducen a la activación o represión irreversible de la expresión del gen diana o la actividad proteica 16 , 17 , 18 . El sistema Tet-On / Tet-Off 19 ofrece un control temporal mejorado de la transcripción de genes, pero carece de un control espacial estricto porque se basa en la difusión de la tetraciclina. Los desarrollos recientes en la dimerización de la proteína inducida químicamente 20 o la foto-descoloración 21 , 22 , 23 , 24 han mejorado enormementeControl temporal de las redes de señalización. El control espacial, sin embargo, sigue siendo un desafío debido a la naturaleza difusiva de los productos químicos enjaulados. Los recientes enfoques optogenéticos emergentes, que aprovechan la potencia de la luz para controlar las interacciones proteína-proteína, permiten la modulación de vías de señalización con una alta precisión espaciotemporal y reversibilidad. Poco después de su éxito inicial en el control de disparo neuronal 25 , 26 , 27 , optogenetics se ha extendido para controlar otros procesos celulares, tales como la transcripción de genes, la traducción, la migración celular, la diferenciación y la apoptosis 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 . Una estrategia con la pHotoactivatable proteína de parche Arabidopsis thaliana criptocromo 2 (CRY2) de proteínas y el dominio N-terminal de criptocromo de interacción de hélice-hélice-hélice (CIBN) se ha desarrollado recientemente para controlar Raf1 kinasa actividad en células de mamíferos y Xenopus embriones [ 35] . CRY2 se une a CIBN a la luz azul de estimulación, y el complejo de proteínas CRY2 / CIBN se disocia espontáneamente en la oscuridad [ 34] . La luz azul excita el cofactor CRY2, flavin adenine dinucleotide (FAD), que conduce a un cambio conformacional en CRY2 y su posterior unión a CIBN. Pueden producirse mutantes constitutivamente activos (W374A) y deficientes en flavina (D387A) de CRY2 a través de mutaciones en la bolsa de unión a FAD: el mutante W374A de CRY2 se une a CIBN independiente de la luz, mientras que el mutante CRY2 D387A no se une a CIBN bajo azul - estimulación de luz 36 , 37 . El sistema optogenético descrito iN este protocolo utiliza CRY2 de tipo salvaje y CIBN para inducir la activación de Raf1 mediada por translocación de proteínas en células vivas. Se sabe que el reclutamiento de membrana de Raf1 mejora su actividad 38 . En este sistema, un tándem CIBN módulo está anclado a la membrana plasmática y CRY2-mCherry se fusiona con el N-terminal de Raf1 35 . En ausencia de luz azul, CRY2-mCherry-Raf1 permanece en el citoplasma, y ​​Raf1 es inactivo. La estimulación con luz azul induce la unión de CRY2-CIBN y recluta Raf1 en la membrana plasmática, donde Raf1 se activa. La activación de Raf estimula una cascada de señalización Raf / MEK / ERK. Las proteínas de fusión CRY2 y CIBN están codificadas en un sistema genético bicistrónico. Esta estrategia puede ser generalizada para controlar otras quinasas, como Akt, cuyo estado de activación también puede ser activado por la translocación de proteínas en las células [ 39] . Este trabajo presenta protocolos detallados para la implementación de esta estrategia optogenética en cultu de células de mamíferosRes y organismos multicelulares.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="748">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Glass coverslip&#160;</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:188px;">48393 230</td>
			<td style="width:167px;">Substrate for live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Coverslip holder&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Newcomer Supply</td>
			<td style="width:188px;">6817B</td>
			<td style="width:167px;">Holder for coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Detergent&#160;</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16 000 104</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Boric acid&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">B6768-500G</td>
			<td style="width:167px;">For making PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Disodium tetraborate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">71996-250G</td>
			<td style="width:167px;">For making&#160; PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plastic beaker</td>
			<td style="width:175px;">Nalgene</td>
			<td style="width:188px;">1201-1000</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sodium hydroxide&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">221465-2.5KG</td>
			<td style="width:167px;">For adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">P1274-500MG</td>
			<td style="width:167px;">For coating coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Diethylpyrocarbonate (DEPC)-Treated Water</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">750024</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Cover Glass Forceps</td>
			<td style="width:175px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:188px;">5645</td>
			<td style="width:167px;">Cover glass handling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Tissue cutlure dish</td>
			<td style="width:175px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:188px;">12565321</td>
			<td style="width:167px;">Cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sterile centrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">12-565-271</td>
			<td style="width:167px;">Buffer storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Transfection Reagent</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">R0534</td>
			<td style="width:167px;">Transfection</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:219px;">CO2-independent medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">18045088</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td style="width:175px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:188px;">184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td style="width:167px;">Form make cell chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plasmid Maxiprep kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">12965</td>
			<td style="width:167px;">Plasmid preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">11965-084</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">F12K medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">21127022</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Horse serum</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16050122</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:175px;">Signa-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">12303C-500 mL</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">10378016</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Trypsin (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">15050065&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Agarose</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">BP1356-100</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Ficoll PM400</td>
			<td style="width:175px;">GE Heathcare Life Sciences</td>
			<td style="width:188px;">17-5442-02</td>
			<td style="width:167px;">For embryo buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">1.02839.0025</td>
			<td style="width:167px;">Oocyte preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">ApaI</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td>FD1414</td>
			<td style="width:167px;">For linearization of plasmids</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Dnase I</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM2222</td>
			<td style="width:167px;">For removing DNA template in the in vitro transcription assay</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Index-match materials (immersion oil)</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td>MOIL-20LN</td>
			<td style="width:167px;">For matching the index between sample substrate and objective</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Blue LED</td>
			<td style="width:175px;">Adafruit</td>
			<td style="width:188px;">301</td>
			<td style="width:167px;">Light source for optogenetic stimulation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Resistor kit</td>
			<td style="width:175px;">Amazon</td>
			<td style="width:188px;">EPC-103</td>
			<td style="width:167px;">current-limiting resistor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Aluminum boxes</td>
			<td style="width:175px;">BUD Industries</td>
			<td style="width:188px;">AC-401</td>
			<td style="width:167px;">light box&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">BreadBoard</td>
			<td style="width:175px;">Jekewin</td>
			<td style="width:188px;">837654333686</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Hook up Wire</td>
			<td style="width:175px;">Electronix Express</td>
			<td style="width:188px;">27WK22SLD25</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Relay Module</td>
			<td style="width:175px;">Jbtek</td>
			<td style="width:188px;">SRD-05VDC-SL-C</td>
			<td style="width:167px;">For intermittent light control</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DC Power Supply&#160;</td>
			<td style="width:175px;">TMS</td>
			<td style="width:188px;">DCPowerSupply-LW-(PS-305D)</td>
			<td style="width:167px;">Power supply for LED</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon&#160;Power&#160;Head</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">S121C</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Power meter</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">PM100D&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:188px;">DMI8</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">BioSafety Cabinet</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">1300 Series A2</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell handling</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">CO2 incubator</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">Isotemp</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:188px;">M60</td>
			<td style="width:167px;">For embryo micro-manipulation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Microinjector</td>
			<td style="width:175px;">Narishige</td>
			<td style="width:188px;">IM300</td>
			<td style="width:167px;">For embryo microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Micropipette puller</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">P87</td>
			<td style="width:167px;">Needle puller</td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:219px;">in vitro transcription kit</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For in vitro transcription. The kit includes nuclease-free water, SP6 RNA&#160; Polymerase, ribonucleotide mixture, cap analog, lithium choride precipitation solution, and spin column&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">RNA purfication kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">Silica-membrane spin column for purification of synthesized RNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Convection oven</td>
			<td style="width:175px;">MTI corporation</td>
			<td style="width:188px;">&#160;EQ-DHG-9015</td>
			<td style="width:167px;">PDMS curing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Centrifugal mixer and teflon container</td>
			<td style="width:175px;">THINKY</td>
			<td style="width:188px;">AR310</td>
			<td style="width:167px;">For mixing PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon wafer</td>
			<td style="width:175px;">UniversityWafer</td>
			<td style="width:188px;">452</td>
			<td style="width:167px;">Base for making PDMS&#160; devices</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Blade</td>
			<td style="width:175px;">Techni Edge</td>
			<td style="width:188px;">01-801</td>
			<td style="width:167px;">For cutting PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Capillary glass</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">BF100-58-10</td>
			<td style="width:167px;">For fabrication of injecting needles.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development

La actividad quinasa es crucial para una plétora de funciones celulares, incluyendo proliferación celular, diferenciación, migración y apoptosis. Durante el desarrollo embrionario temprano, la actividad de la quinasa es altamente dinámica y generalizada a través del embrión. Los enfoques farmacológicos y genéticos se utilizan comúnmente para investigar las actividades de la quinasa. Desafortunadamente, es difícil lograr una resolución espacial y temporal superior usando estas estrategias. Además, no es factible controlar la actividad quinasa de una manera reversible en células vivas y organismos multicelulares. Tal limitación sigue siendo un cuello de botella para lograr una comprensión cuantitativa de la actividad de quinasa durante el desarrollo y la diferenciación. Este trabajo presenta una estrategia optogenética que aprovecha un sistema bicistrónico que contiene proteínas fotoactivables Arabidopsis thaliana criptocromo 2 (CRY2) y el dominio N-terminal de la hélice bucle-hélice-base que interactúa con criptocromo. ReversiBle de la ruta de señalización de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK) se logra a través de la translocación de proteínas mediada por luz en células vivas. Este enfoque puede aplicarse a cultivos de células de mamíferos y embriones de vertebrados vivos. Este sistema bicistrónico puede generalizarse para controlar la actividad de otras quinasas con mecanismos de activación similares y puede aplicarse a otros sistemas modelo.

Expresión Ratiométrica de pares de proteínas fotoactivables: La Figura 1A muestra el diseño de una construcción optogenética bicistrónica, CRY2-mCherry-Raf1-P2A-CIBN-CIBN-GFP-CaaX (denominada CRY2-2A-2CIBN), basada en la proteína teschovirum- 1 2A (P2A), que muestra la más alta eficiencia de omisión de ribosomas entre las líneas celulares de mamíferos [ 42] . En trabajos previos, se ha determinado que la relación óptima ...

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Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Este protocolo describe una estrategia optogenética para modular la actividad de la proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK) durante la diferenciación celular y el desarrollo embrionario de Xenopus . Este método permite la activación reversible de la vía de señalización MAPK en el cultivo de células de mamíferos y en organismos vivos multicelulares, como los embriones Xenopus , con alta resolución espacial y temporal.

Modulación reversible mediada por luz de la vía de la proteína quinasa activada por mitógeno durante la diferenciación celular y<em&gt; Xenopus</em&gt; Desarrollo embrionario

Kinase activity is crucial for a plethora of cellular functions, including cell proliferation, differentiation, migration, and apoptosis. During early ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Developmental Biology

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Unit 1

Signaling Networks of Kinase Receptors

SCIENTISTS IN ACTION

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

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The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

La diferenciación de la línea celular SH-SY5Y de neuroblastoma humano

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Celular-como Stem<em&gt; Xenopus</em&gt; Embrionarias explantes para Estudiar Características Temprana del Desarrollo Neural<em&gt; In Vitro</em&gt; Y<em&gt; En Vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptoma de perfiles de<em&gt; In-Vivo</em&gt; Productos fabricados preimplantación de embriones bovinos mediante plataforma de microarrays de dos colores

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Técnica de microinyección a Target a los países en desarrollo<em&gt; Xenopus</em&gt; riñón

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

La regulación epigenética de Cardíaca diferenciación de células madre embrionarias y Tejidos

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Prediction and Validation of Gene Regulatory Elements Activated During Retinoic Acid Induced Embryonic Stem Cell Differentiation

Predicción y validación de los elementos reguladores de genes activados durante ácido retinoico inducida por la diferenciación de células madre embrionarias

Embryonic development is a multistep process involving activation and repression of many genes. Enhancer elements in the genome are known to contribute to ...

A Simple Method to Identify Kinases That Regulate Embryonic Stem Cell Pluripotency by High-throughput Inhibitor Screening

Un método simple para identificar quinasas que regulan la pluripotencia de las células madre embrionarias mediante la detección de inhibidores de alto rendimiento

Embryonic stem cells (ESCs) can self-renew or differentiate into all cell types, a phenomenon known as pluripotency. Distinct pluripotent states have been ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualización y análisis cuantitativo de la angiogénesis embrionaria<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...