Name: light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development
Uploaded: 2017-06-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development at JoVE.com

Detta arbete stöddes av University of Illinois i Urbana-Champaign (UIUC) och National Institute of Health (NIGMS R01GM111816).

Djurforskning genomfördes i enlighet med riktlinjer som fastställdes av Illinois Institutionella djurvård och användningskommitté (IACUC) och University of Illinois Department of Animal Resources (DAR). 1. Optogenetisk induktion av proteinkoncentration i BHK21-mammalcellkultur OBS! Steg 1.1-1.3 ger en metod att montera en cellodlingskammare för bildbehandling med högförstoringsmål ( t.ex. 63X eller 100X), som vanligen har korta arbetsavstånd. Des...

Vid uppbyggnad av ljuslådan bör effekten hos enskilda lysdioder mätas. Baserat på tidigare erfarenheter kan effekten variera mellan enskilda lysdioder beroende på tillverkningsvariation. Välj en uppsättning lysdioder som har en effekt ute inom 10% av varandra. Antalet lysdioder, strömbegränsningsmotståndet och effektingången kan modifieras för olika typer av cellkulturbehållare ( t.ex. en 6-brunns- eller 24-brunnsplatta). En 24 h ljusbelysning med en effekt av 0,2 mW / cm2 inducerar inte detekterba...

Tillväxtfaktorer är involverade i ett brett spektrum av cellfunktioner, inklusive proliferation, differentiering, migration och apoptos och spelar nyckelroller i många biologiska händelser, inklusive embryonal utveckling, åldrande och reglering av mental status 1 , 2 , 3 , 4 , 5 . Många tillväxtfaktorer signalerar genom komplexa intracellulära signalkaskader. Dessa signaleringshändelser drivs ofta av reversibel proteinfosforylering på ett exakt reglerat sätt 6 , 7 . Sålunda är en förståelse för signaleringsresultaten av proteinkinaser, vilka är ansvariga för proteinfosforylering, grundläggande viktiga. Olika tillväxtfaktorer verkar genom ett ganska vanligt intracellulärt signalnätverk, trots att de stimulerar distInktcellsvar 5 , 9 . Vanliga intracellulära mediatorer av receptortyrosinkinaser innefattar Ras, Raf, extracellulärt signalreglerat kinas (ERK), mitogenaktiverat proteinkinas (MAPK) / ERK-kinas (MEK), fosfonositid-3-kinas (PI3K), Akt och fosfolipas C gamma (PLCy) 10 , 11 . Ackumulerande bevis tyder på att signaleringens mångfald och specificitet beror på den rumsliga och temporala reglering av signalaktivitet 12 . Till exempel aktiverar stimulering av epidermal tillväxtfaktor (EGF) i råttfenokromocytomceller (PC12), som resulterar i cellproliferation, transienten av ERK-vägen 9 . Å andra sidan aktiverar stimulering med nervtillväxtfaktor (NGF), som leder till celldifferentiering, aktiveringen av ERK-vägen på ett hållbart sätt 9 , 13 . I odlad rVid hippocampala nervceller främjar transient signalering med hjärnavledad neurotrofisk faktor (BDNF) primär neuritutväxt, medan upprepad signalering leder till ökad neuritgrenning 14 . Under tidig embryonal utveckling är fosforylerad ERK-aktivitet temporärt dynamisk och är utbredd över embryot 6 . En ny genetisk skärm under tidig Xenopus- embryogenes visade att ERK- och Akt-signalkaskader, två nedströms primära tillväxtfaktorvägar, visar scenspecifika aktiveringsprofiler 7 . Således kräver en förståelse av kinasignaleringsresultat verktyg som kan söka kinasaktivitetens rumliga och temporära egenskaper med tillräcklig upplösning. Konventionella experimentella tillvägagångssätt för att sondra den dynamiska naturen av signaltransduktion under utveckling saknar den önskvärda rumsliga och tidsmässiga upplösningen. Till exempel använder farmakologiska metoder småkemiskaIcal eller biologiska molekyler för att stimulera eller undertrycka signaltransduktion i celler och vävnader. Den diffusiva naturen hos dessa små molekyler gör det svårt att begränsa deras verkan till en specifik region av intresse 15 . Genetiska metoder ( t.ex. transgenes, Cre-Lox-systemet eller mutagenes) leder ofta till irreversibel aktivering eller repression av målgenuttryck eller proteinaktivitet 16 , 17 , 18 . Tet-On / Tet-Off-systemet 19 erbjuder förbättrad tidskontroll av gentranskription men saknar strikt rumslig kontroll eftersom den är beroende av diffusion av tetracyklin. Den senaste utvecklingen i kemiskt inducerad proteindimerisering 20 eller fotokoagering 21 , 22 , 23 , 24 har avsevärt förbättringRedogör för den tidsmässiga kontrollen av signaleringsnät. Den rumsliga kontrollen är emellertid fortfarande utmanande på grund av den diffusiva naturen hos de burade kemikalierna. Nyligen framväxande optogenetiska metoder, som utnyttjar ljusets kraft för att styra protein-protein-interaktioner, möjliggör modulering av signalvägar med hög spatiotemporal precision samt reversibilitet. Kort efter sin initiala framgång vid kontroll av neuronavbrott 25 , 26 , 27 har optogenetik utvidgats för att styra andra cellulära processer, såsom gentranskription, translation, cellmigration, differentiering och apoptos 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 . En strategi som använder pHotoaktiverat proteinpar Arabidopsis thaliana- kryptokrom 2 (CRY2) -protein och den N-terminala domänen för kryptokrom-interaktion-bas-helix-loop-helix (CIBN) utvecklades nyligen för att kontrollera Rafl-kinasaktivitet i däggdjursceller och Xenopus- embryon 35 . CRY2 binder till CIBN vid blått ljusstimulering och CRY2 / CIBN-proteinkomplexet dissocierar spontant i mörkret 34 . Blått ljus exciterar CRY2-kofaktorn, flavin-adenindinukleotid (FAD), vilket leder till en konformationsförändring i CRY2 och dess efterföljande bindning till CIBN. Konstitutivt aktiva (W374A) och flavin-deficenta (D387A) -mutanter av CRY2 kan framställas genom mutationer i FAD-bindningsfickan: CRY2 W374A- mutanten binder till CIBN oberoende av ljus, medan CRY2 D387A- mutanten inte binder till CIBN under blå -ljusstimulering 36 , 37 . Det optogenetiska systemet som beskrivs iN det här protokollet använder vildtyp CRY2 och CIBN för att inducera proteinkonverteringsmedierad Raf1-aktivering i levande celler. Det är känt att membranrekryteringen av Raf1 ökar sin aktivitet 38 . I detta system förankras en tandem CIBN-modul till plasmamembranet och CRY2-mCherry fusioneras till N-terminalen hos Raf1 35 . I frånvaro av blått ljus förblir CRY2-mCherry-Raf1 i cytoplasman och Raf1 är inaktiv. Blåljusstimulering inducerar CRY2-CIBN-bindning och rekryterar Raf1 till plasmamembranet, där Raf1 aktiveras. Rafaktivering stimulerar en Raf / MEK / ERK signalkaskad. Både CRY2- och CIBN-fusionsproteiner kodas i ett bicistroniskt genetiskt system. Denna strategi kan generaliseras för att styra andra kinaser, såsom Akt, vars aktiveringstillstånd kan också sättas på genom proteintranslokation i celler 39 . Detta arbete presenterar detaljerade protokoll för genomförande av denna optogenetiska strategi i däggdjurscellkultuRes och multicellulära organismer.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="748">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Glass coverslip&#160;</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:188px;">48393 230</td>
			<td style="width:167px;">Substrate for live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Coverslip holder&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Newcomer Supply</td>
			<td style="width:188px;">6817B</td>
			<td style="width:167px;">Holder for coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Detergent&#160;</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16 000 104</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Boric acid&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">B6768-500G</td>
			<td style="width:167px;">For making PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Disodium tetraborate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">71996-250G</td>
			<td style="width:167px;">For making&#160; PLL buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plastic beaker</td>
			<td style="width:175px;">Nalgene</td>
			<td style="width:188px;">1201-1000</td>
			<td style="width:167px;">For cleaning coverslips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sodium hydroxide&#160;</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">221465-2.5KG</td>
			<td style="width:167px;">For adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">P1274-500MG</td>
			<td style="width:167px;">For coating coverslip</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Diethylpyrocarbonate (DEPC)-Treated Water</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">750024</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Cover Glass Forceps</td>
			<td style="width:175px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:188px;">5645</td>
			<td style="width:167px;">Cover glass handling</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Tissue cutlure dish</td>
			<td style="width:175px;">Thermofisher</td>
			<td style="width:188px;">12565321</td>
			<td style="width:167px;">Cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Sterile centrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">12-565-271</td>
			<td style="width:167px;">Buffer storage</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Transfection Reagent</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">R0534</td>
			<td style="width:167px;">Transfection</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:219px;">CO2-independent medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">18045088</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td style="width:175px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:188px;">184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td style="width:167px;">Form make cell chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Plasmid Maxiprep kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">12965</td>
			<td style="width:167px;">Plasmid preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">11965-084</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">F12K medium</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">21127022</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Horse serum</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">16050122</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:175px;">Signa-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">12303C-500 mL</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Penicillin-Streptomycin-Glutamine</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">10378016</td>
			<td style="width:167px;">Cell culturing medium component</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Trypsin (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">15050065&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell dissociation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Agarose</td>
			<td style="width:175px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:188px;">BP1356-100</td>
			<td style="width:167px;">For DNA preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Ficoll PM400</td>
			<td style="width:175px;">GE Heathcare Life Sciences</td>
			<td style="width:188px;">17-5442-02</td>
			<td style="width:167px;">For embryo buffer</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td style="width:175px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">1.02839.0025</td>
			<td style="width:167px;">Oocyte preparation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">ApaI</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td>FD1414</td>
			<td style="width:167px;">For linearization of plasmids</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Dnase I</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM2222</td>
			<td style="width:167px;">For removing DNA template in the in vitro transcription assay</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">Index-match materials (immersion oil)</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td>MOIL-20LN</td>
			<td style="width:167px;">For matching the index between sample substrate and objective</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Blue LED</td>
			<td style="width:175px;">Adafruit</td>
			<td style="width:188px;">301</td>
			<td style="width:167px;">Light source for optogenetic stimulation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Resistor kit</td>
			<td style="width:175px;">Amazon</td>
			<td style="width:188px;">EPC-103</td>
			<td style="width:167px;">current-limiting resistor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Aluminum boxes</td>
			<td style="width:175px;">BUD Industries</td>
			<td style="width:188px;">AC-401</td>
			<td style="width:167px;">light box&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">BreadBoard</td>
			<td style="width:175px;">Jekewin</td>
			<td style="width:188px;">837654333686</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Hook up Wire</td>
			<td style="width:175px;">Electronix Express</td>
			<td style="width:188px;">27WK22SLD25</td>
			<td style="width:167px;">For making LED array</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Relay Module</td>
			<td style="width:175px;">Jbtek</td>
			<td style="width:188px;">SRD-05VDC-SL-C</td>
			<td style="width:167px;">For intermittent light control</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">DC Power Supply&#160;</td>
			<td style="width:175px;">TMS</td>
			<td style="width:188px;">DCPowerSupply-LW-(PS-305D)</td>
			<td style="width:167px;">Power supply for LED</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon&#160;Power&#160;Head</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">S121C</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Power meter</td>
			<td style="width:175px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:188px;">PM100D&#160;</td>
			<td style="width:167px;">For light intensity measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:188px;">DMI8</td>
			<td style="width:167px;">For live cell imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">BioSafety Cabinet</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">1300 Series A2</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell handling</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">CO2 incubator</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">Isotemp</td>
			<td style="width:167px;">For mammalian cell culturing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Stereo microscope</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:188px;">M60</td>
			<td style="width:167px;">For embryo micro-manipulation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Microinjector</td>
			<td style="width:175px;">Narishige</td>
			<td style="width:188px;">IM300</td>
			<td style="width:167px;">For embryo microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Micropipette puller</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">P87</td>
			<td style="width:167px;">Needle puller</td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:219px;">in vitro transcription kit</td>
			<td style="width:175px;">ThermoFisher</td>
			<td style="width:188px;">AM1340</td>
			<td style="width:167px;">For in vitro transcription. The kit includes nuclease-free water, SP6 RNA&#160; Polymerase, ribonucleotide mixture, cap analog, lithium choride precipitation solution, and spin column&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:219px;">RNA purfication kit</td>
			<td style="width:175px;">Qiagen</td>
			<td style="width:188px;">74104</td>
			<td style="width:167px;">Silica-membrane spin column for purification of synthesized RNA&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Convection oven</td>
			<td style="width:175px;">MTI corporation</td>
			<td style="width:188px;">&#160;EQ-DHG-9015</td>
			<td style="width:167px;">PDMS curing</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Centrifugal mixer and teflon container</td>
			<td style="width:175px;">THINKY</td>
			<td style="width:188px;">AR310</td>
			<td style="width:167px;">For mixing PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Silicon wafer</td>
			<td style="width:175px;">UniversityWafer</td>
			<td style="width:188px;">452</td>
			<td style="width:167px;">Base for making PDMS&#160; devices</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:219px;">Blade</td>
			<td style="width:175px;">Techni Edge</td>
			<td style="width:188px;">01-801</td>
			<td style="width:167px;">For cutting PDMS</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:219px;">Capillary glass</td>
			<td style="width:175px;">Sutter Instruments</td>
			<td style="width:188px;">BF100-58-10</td>
			<td style="width:167px;">For fabrication of injecting needles.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light-mediated reversible modulation of the mitogen-activated protein kinase pathway during cell differentiation and xenopus embryonic development

Kinasaktivitet är avgörande för en uppsjö av cellulära funktioner, inklusive cellproliferation, differentiering, migration och apoptos. Under tidig embryonal utveckling är kinasaktiviteten mycket dynamisk och utbredd över embryot. Farmakologiska och genetiska metoder används ofta för att sanna kinasaktivitet. Tyvärr är det utmanande att uppnå överlägsen rumslig och tidsmässig upplösning med hjälp av dessa strategier. Vidare är det inte möjligt att kontrollera kinasaktiviteten på ett reversibelt sätt i levande celler och multicellulära organismer. En sådan begränsning förblir en flaskhals för att uppnå en kvantitativ förståelse av kinasaktivitet under utveckling och differentiering. Detta arbete presenterar en optogenetisk strategi som utnyttjar ett bicistroniskt system som innehåller fotoaktiverbara proteiner Arabidopsis thaliana cryptochrome 2 (CRY2) och den N-terminala domänen för Cryptochrome-interagerande Basic-Helix-loop-Helix (CIBN). ReversiBle-aktivering av den mitogenaktiverade proteinkinas (MAPK) signaleringsvägen uppnås genom lättmedierad protein-translokation i levande celler. Detta tillvägagångssätt kan tillämpas på däggdjurscellkulturer och levande vertebratembryon. Detta bicistroniska system kan generaliseras för att kontrollera aktiviteten hos andra kinaser med liknande aktiveringsmekanismer och kan appliceras på andra modellsystem.

Ratiometrisk uttryck av fotoaktiverbara proteinpar: Figur 1A visar konstruktionen av en bicistronisk optogenetisk konstruktion, CRY2-mCherry-Raf1-P2A-CIBN-CIBN-GFP-CaaX (refererad till som CRY2-2A-2CIBN), baserat på porcine teschovirum- 1 2A (P2A) -peptiden, vilken visar den högsta ribosomhoppningseffektiviteten bland däggdjurscellinjer 42 . I tidigare arbete har det fastställts att det optimala förhållandet för CIBN-GFP-CaaX: ...

Watch this Scientific Journal Video about Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development at JoVE.com

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Detta protokoll beskriver en optogenetisk strategi för att modulera mitogenaktiverad proteinkinas (MAPK) aktivitet under celldifferentiering och Xenopus embryonal utveckling. Denna metod möjliggör reversibel aktivering av MAPK-signalvägen i däggdjurscellkulturen och i multicellulära levande organismer, som Xenopus- embryon, med hög rumlig och tidsmässig upplösning.

Ljusmedierad reversibel modulering av den mitogenaktiverade proteinkinasvägen under celldifferentiering och<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonisk utveckling

Kinase activity is crucial for a plethora of cellular functions, including cell proliferation, differentiation, migration, and apoptosis. During early ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Developmental Biology

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Unit 1

Signaling Networks of Kinase Receptors

SCIENTISTS IN ACTION

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulering och<em&gt; In Vitro</em&gt; Mognad av<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Oocyter, följt av intracytoplasmatisk spermieinjektion, att studera embryonal utveckling

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during ...

Analysis of Zebrafish Larvae Skeletal Muscle Integrity with Evans Blue Dye

Analys av Zebrafish Larver skelettmuskulatur Integrity med Evans Blue Dye

The zebrafish model is an emerging system for the study of neuromuscular disorders.  In the study of neuromuscular diseases, the integrity of the muscle ...

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

Differentiering av SH-SY5Y humana neuroblastom cellinje

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and ...

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stem cell-like Xenopus Embryonic Explants to Study Early Neural Developmental Features In Vitro and In Vivo

Stamcellsliknande<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonala Explantat att studera tidig Neural Utvecklings funktioner<em&gt; In Vitro</em&gt; Och<em&gt; In Vivo</em

Understanding the genetic programs underlying neural development is an important goal of developmental and stem cell biology. In the amphibian blastula, ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transkriptom Profilering av<em&gt; In-Vivo</em&gt; Producerad Bovina Preimplantatorisk embryon med hjälp av två-färg microarray plattform

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Teknik till Target mikroinjektion till utvecklings<em&gt; Xenopus</em&gt; Njure

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

Epigenetisk reglering av hjärt Differentiering av embryonala stamceller och vävnader

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Prediction and Validation of Gene Regulatory Elements Activated During Retinoic Acid Induced Embryonic Stem Cell Differentiation

Förutsägelse och validering av Gene reglerande element aktiveras under retinsyra Induced embryonala stamceller Differentiering

Embryonic development is a multistep process involving activation and repression of many genes. Enhancer elements in the genome are known to contribute to ...

A Simple Method to Identify Kinases That Regulate Embryonic Stem Cell Pluripotency by High-throughput Inhibitor Screening

En enkel metod för att identifiera kinaser som reglerar embryonisk stamcellspluripotens genom genomströmningshämmande screening

Embryonic stem cells (ESCs) can self-renew or differentiate into all cell types, a phenomenon known as pluripotency. Distinct pluripotent states have been ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualisering och kvantitativ analys av embryonisk angiogenes i<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...