Name: screening assays to characterize novel endothelial regulators involved in the inflammatory response
Uploaded: 2017-09-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Screening Assays to Characterize Novel Endothelial Regulators Involved in the Inflammatory Response at JoVE.com

وأيده هذا العمل y وزارة الاقتصاد دي كومبيتيتيفيداد (مينيكو) ومعهد الصحة كارلوس الثالث (إيسسييي) (منحة رقم 1149/16 إييربي للجامعة؛ مبي 1410/09 إلى س. هورتيلانو)؛ قبل مينيكو عن طريق أون فوندو لبحوث الصحة (الجبهة الإسلامية للإنقاذ) (المنح الأرقام PI11.0036 و PI14.0055 إلى هورتيلانو س.). وأيد هيرانز س. إييربي 1149/16 من إيسسييي.

1-"غشائي خلية ثقافة" <ol><li>زراعة الأنسجة تعامل لوحات <ol><li>معطف 100 ملم زراعة الأنسجة لوحات مع الجيلاتين 2.5 مل الحل (يعقم، 0.1% الجيلاتين في الماء المقطر) لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية؛ وهذا يمكن أن يطبق بالشكل المطلوب تماما. نضح الحل الجيلاتين وترك لوحات أيردري في هود زراعة الأنسجة.</li>
	</...

<ol>
	<li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Skeoch, S., Bruce, I. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis+in+rheumatoid+arthritis:+is+it+all+about+inflammation?.">Atherosclerosis in rheumatoid arthritis: is it all about inflammation?.</a> Nat Rev Rheumatol. 11 (7), 390-400 (2015).</li><li>Gerhardt, T., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+trafficking+across+the+vessel+wall.">Monocyte trafficking across the vessel wall.</a> Cardiovasc Res. 107 (3), 321-330 (2015).</li><li>Andonegui, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+that+exclusively+express+TLR4+on+endothelial+cells+can+efficiently+clear+a+lethal+systemic+Gram-negative+bacterial+infection.">Mice that exclusively express TLR4 on endothelial cells can efficiently clear a lethal systemic Gram-negative bacterial infection.</a> J Clin Invest. 119 (7), 1921-1930 (2009).</li><li>McDonald, B., Jenne, C. N., Zhuo, L., Kimata, K., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cells+and+activation+of+endothelial+TLR4+coordinate+neutrophil+adhesion+within+liver+sinusoids+during+endotoxemia.">Kupffer cells and activation of endothelial TLR4 coordinate neutrophil adhesion within liver sinusoids during endotoxemia.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305 (11), G797-G806 (2013).</li><li>Pober, J. S., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+functions+of+endothelial+cells+in+inflammation.">Evolving functions of endothelial cells in inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 7 (10), 803-815 (2007).</li><li>Chamorro, &. #. 1. 9. 3. ;., Dirnagl, U., Urra, X., Planas, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotection+in+acute+stroke:+targeting+excitotoxicity,+oxidative+and+nitrosative+stress,+and+inflammation.">Neuroprotection in acute stroke: targeting excitotoxicity, oxidative and nitrosative stress, and inflammation.</a> Lancet Neurol. 15 (8), 869-881 (2016).</li><li>Hortelano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ILK+mediates+LPS-induced+vascular+adhesion+receptor+expression+and+subsequent+leucocyte+trans-endothelial+migration.">ILK mediates LPS-induced vascular adhesion receptor expression and subsequent leucocyte trans-endothelial migration.</a> Cardiovasc Res. 86 (2), 283-292 (2010).</li><li>Palaz&#243;n, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agonist+anti-CD137+mAb+act+on+tumor+endothelial+cells+to+enhance+recruitment+of+activated+T+lymphocytes.">Agonist anti-CD137 mAb act on tumor endothelial cells to enhance recruitment of activated T lymphocytes.</a> Cancer Res. 71 (3), 801-811 (2011).</li><li>Jim&#233;nez-Garc&#237;a, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=8,9-Dehydrohispanolone-15,16-lactol+diterpene+prevents+LPS-triggered+inflammatory+responses+by+inhibiting+endothelial+activation.">8,9-Dehydrohispanolone-15,16-lactol diterpene prevents LPS-triggered inflammatory responses by inhibiting endothelial activation.</a> Biochem J. 473 (14), 2061-2071 (2016).</li><li>. SuperScript&#174; III First-Strand Synthesis System for RT-PCR Available from: <a target="_blank" href="https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/superscriptIIIfirststrand_pps.pdf">https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/superscriptIIIfirststrand_pps.pdf</a> (2013)</li><li>Livak, K. J., Schmittge, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>. Pierce BCA Protein Assay Kit Available from: <a target="_blank" href="https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/MAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf">https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/MAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf</a> (2017)</li><li>He, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laemmli-SDS-PAGE.">Laemmli-SDS-PAGE.</a> BIO-PROTOCOL. 1 (11), (2011).</li><li>. ImageJ User Guide Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/user-guide-USbooklet.pdf">https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/user-guide-USbooklet.pdf</a> (2017)</li><li>Hohsfield, L. A., Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+infusion+of+monocytes+isolated+from+2-week-old+mice+enhances+clearance+of+Beta-amyloid+plaques+in+an+Alzheimer+mouse+model.">Intravenous infusion of monocytes isolated from 2-week-old mice enhances clearance of Beta-amyloid plaques in an Alzheimer mouse model.</a> PloS One. 10 (4), e0121930 (2015).</li><li>Hofland, R. W., Thijsen, S. F. T., Verhagen, M. A. M. T., Schenk, Y., Bossink, A. W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuberculosis+during+TNF-&#945;+inhibitor+therapy,+despite+screening.">Tuberculosis during TNF-&#945; inhibitor therapy, despite screening.</a> Thorax. 68 (11), 1079-1080 (2013).</li><li>Ley, K., Laudanna, C., Cybulsky, M. I., Nourshargh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+to+the+site+of+inflammation:+the+leukocyte+adhesion+cascade+updated.">Getting to the site of inflammation: the leukocyte adhesion cascade updated.</a> Nat Rev Immunol. 7 (9), 678-689 (2007).</li><li>Tedgui, A., Mallat, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+mechanisms+in+the+vascular+wall.">Anti-inflammatory mechanisms in the vascular wall.</a> Circ Res. 88 (9), 877-887 (2001).</li><li>Zheng, Y., Humphry, M., Maguire, J. J., Bennett, M. R., Clarke, M. C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+interleukin-1+receptor+2+binding+prevents+cleavage+and+activity+of+interleukin-1&#945;,+controlling+necrosis-induced+sterile+inflammation.">Intracellular interleukin-1 receptor 2 binding prevents cleavage and activity of interleukin-1&#945;, controlling necrosis-induced sterile inflammation.</a> Immunity. 38 (2), 285-295 (2013).</li><li>Pripp, A. H., Stani&#353;i&#263;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+pro-+and+anti-inflammatory+cytokines+in+chronic+subdural+hematoma+patients+assessed+with+factor+analysis.">The correlation between pro- and anti-inflammatory cytokines in chronic subdural hematoma patients assessed with factor analysis.</a> PloS One. 9 (2), e90149 (2014).</li><li>Guha, M., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS+induction+of+gene+expression+in+human+monocytes.">LPS induction of gene expression in human monocytes.</a> Cell Signal. 13 (2), 85-94 (2001).</li><li>Tabas, I., Glass, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+therapy+in+chronic+disease:+challenges+and+opportunities.">Anti-inflammatory therapy in chronic disease: challenges and opportunities.</a> Science. 339 (6116), 166-172 (2013).</li></ol>

ويصف هذا البروتوكول غشائي تكنولوجيا التدرجي الذي يرسي الأساس لاستكشاف الآليات الرواية التي تشارك في تنظيم الاستجابة الالتهابية. تستند إلى دراسة النشاط غشائي تحفزها لبس هذه النهج وتقييم الخطوات الحاسمة التي تشارك في تجنيد الكريات البيض خلال الاستجابة الالتهابية، على وجه التحديد: إطلاق ?...

الالتهاب استجابة بيولوجية مفيدة ضد العوامل المعدية, مع الهدف الرئيسي للقضاء على مسببات المرض وإصلاح الأنسجة التالفة. تحت ظروف معينة، مثل الالتهابات المزمنة أو أمراض المناعة الذاتية، لا حل التهاب. بدلاً من ذلك، هناك فعل شاذة مع استمرار تسلل الكريات البيضاء، أدى استجابة مناعية مطول الذي يؤدي إلى تلف الأنسجة، التليف، وفقدان الوظيفة، وعموما، والعجز، وفي بعض الحالات وفاة المريض. هذه الاضطرابات البشرية، نشرة مصورة كأمراض التهابات، كلها تنطوي على الأوعية الدموية للسيطرة على التسرب الكريات البيض1،2.
خلايا بطانية تلعب دوراً أساسيا في تنظيم الاستجابة الالتهابية بمراقبة الاتجار الكريات البيض. عندما يتعرض الطبقة البطانية لوسطاء التهابات مثل لبس، البطانة يستريح ينشط وتعرب عن السيتوكينات الموالية التحريضية (Cxcl10، Cxcl5، Cxcl1، إلخ) وجزيئات الالتصاق (سيليكتين ه، VCAM-1 والمتكاملة-1) أن صالح التجنيد لتعميم الكريات البيضاء إلى موقع العدوى. الكريات البيضاء أعدادا من السيتوكينات أطلق سراحهم ثم التوسط المتداول والتفاعل مع الطبقة غشائي من خلال النظراء لاصقة مراسل: بسجل-1 إلى سيليكتين إنتغرين α4β1 VCAM-1 و αLβ2 إنتغرين المتكاملة-1. أخيرا، الكريات البيضاء ترحيل عبر المفرج نحو تركيز التهاب3.
قد تجلى الدور الأساسي الذي تؤديه البطانة في تنظيم الاستجابة الالتهابية في الفئران التي تم تعديلها وراثيا للتعبير عن مستقبلات لبس، مثل عدد القتلى مستقبلات 4 (TLR4)، فقط في خلايا بطانية. كانت هذه الحيوانات غشائي TLR4 قادرة على الاستجابة لالتهاب بوساطة لبس والكشف عن العدوى التي تم إنشاؤها بعد تلقيح البكتيريا، وتحقيق وبناء على ذلك القرار العدوى وبقاء مستويات مماثلة ك الفئران البرية نوع4 , 5.
لمسار البطانة-وينظم الاستجابة الالتهابية، قد تم افترض أن تثبيط التفاعل البطانة الكريات البيض في بعض المراحل سيؤدي إلى الحد من الهجرة عبر-غشائي وتنبؤ أفضل الأمراض المرتبطة بالالتهابات. في الواقع، قد صممت عدة استراتيجيات تستهدف التفاعل التنشيط والكريات البيض-البطانة غشائي تعوق التسرب خلايا المناعية لعلاج أمراض التهابات6،7.
وفي هذا التقرير، يصف لنا مجموعة شاملة من تقنيات في المختبر لتوصيف كامل النشاط غشائي ردا على لبس التحفيز التحريضية ودورها في تنشيط الكريات البيض والانضمام إلى طبقة الأوعية الدموية. نموذج غشائي الخلايا المستخدمة في هذه المخطوطة كان خط الخلية غشائي الرئة الماوس (القانون النموذجي-04)، كما وصفها هورتيلانو et al. 8-تم التحقق من خط الخلية القانون النموذجي-04 في الأدب أن يكون نظاما مناسباً لدراسة تفعيل غشائي9،10. استناداً إلى الاهتمامات البحثية، هذه النهج يمكن أن تكون بسهولة استقراء أي بطانية أو نظم الكريات البيض والشخصية المثيرة. حالما يتم تعريف المعلمات غشائي في الشروط المحددة، يمكن اختبار النظام أدوية جديدة في التجربة المقترحة لتقييم تنشيط الأوعية الدموية. وفي هذا السياق التحريضية، خلايا البطانة اختبارها مع مجمع الفائدة يمكن مقارنتها بشروط مراقبة الخلايا، وأي الفروق الناتجة عن ذلك يجوز إبلاغ نتائج تشخيصية للمخدرات على التنمية والتقدم من التهاب. في الختام، نحن نقترح نظام ذات صلة لتوصيف الأهداف المخدرات الجديدة إلى خلايا بطانية، التي يمكن أن تؤثر في تصميم رواية العلاجات الخاصة بالأوعية الدموية ضد الأمراض المرتبطة بالالتهابات.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="820">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Gelatin</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;">G9391</td>
			<td style="width:256px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM-F12</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-719F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>DE17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsine</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-160E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>ED2SS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LPS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trizol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9424</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>33539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol absoluto</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,310,861,612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Pure H2O</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1017979</td>
			<td>RNAse free</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose</td>
			<td>Pronadisa</td>
			<td>8020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stain for agarose gels</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>s33102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SuperScript III First-Strand Synth</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td height="21" style="height:21px;width:116px;">18080051</td>
			<td>Reagents for RT-PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Fast SYBR Green Master Mix</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td align="left">4385610</td>
			<td>Fluorescent stain for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MicroAmp Fast Optical 96-Well</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4346906</td>
			<td>Plates for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">U-bottom 96 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytometry tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TX100</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>212314</td>
			<td>Non-ionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tris-HCl</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,319,401,211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1,064,041,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyrophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium fluoride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium orthovanadate</td>
			<td>sigma</td>
			<td>13721-39-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td>sigma</td>
			<td>P8340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Reagents for bicinchoninic acid assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td>merck</td>
			<td align="left">805,740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">PVDF Transfer Membrane, 0.45 &#181;m</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>88518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>Panreac</td>
			<td align="left">1,623,121,611</td>
			<td>Polysorbate 20</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-515Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ECL</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>WBKLS0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fibronectin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagen type I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>c8919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetic acid</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,310,081,611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methanol</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,310,911,612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Crystal violet</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT90132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 96%</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,410,851,212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-115F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SDS</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Infinite M200</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>M200</td>
			<td>Multi mode microplate reader</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gel Doc 2000</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>2000</td>
			<td>Gel documentation system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">StepOnePlus</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>StepOnePlus</td>
			<td>qPCR system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MACSQuant Analyzer 10</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>Analyzer 10</td>
			<td>Cytometry equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ChemiDoc MP</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MP</td>
			<td>Chemiluminescence detection system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">PECAM-1</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553370</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">ICAM-2</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>1054602</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">E-selectin</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553749</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">VCAM-1</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553330</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">ICAM-1</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>553250</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-rat IgG-FITC</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>112-095-006</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti armenian hamster-FITC</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>127-095-160</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG isotyope control</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:116px;">10700</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Armenian hamster IgG isotype control</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PA5-33220</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-I&#954;&#914;-&#945;</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2859</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#946;-Actin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5441</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-ERK</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9101</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-mouse HRP</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>LNXA931/AE</td>
			<td>Use at 1:10000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-rabbit HRP</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>LNA934V/AG</td>
			<td>Use at 1:10000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-rat HRP</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Sc-3823</td>
			<td>Use at 1:10000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

screening assays to characterize novel endothelial regulators involved in the inflammatory response

الطبقة غشائي أمر ضروري للحفاظ على التوازن في الجسم من خلال السيطرة على العديد من الوظائف المختلفة. تنظيم استجابة التهاب الطبقة غشائي أمر حاسم لمكافحة كفاءة المدخلات الضارة والمساعدة في إنعاش المناطق المتضررة. عندما تتعرض خلايا بطانية لبيئة تحريضية، مثل العنصر الخارجي لغشاء بكتيريا سلبية الغرام، lipopolysaccharide (LPS)، أنها التعبير عن السيتوكينات برو الملتهبة القابلة للذوبان، مثل Ccl5، Cxcl1، و Cxcl10، وتؤدي تفعيل تعميم الكريات البيضاء. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن التعبير عن جزيئات التصاق سيليكتين ه، VCAM-1 والمتكاملة-1 على سطح غشائي التفاعل والتصاق الكريات البيضاء تنشيط الطبقة غشائي، وفي نهاية المطاف التسرب نحو الأنسجة الملتهبة. في هذا السيناريو، الدالة غشائي يجب أحكام تنظيم لأن التنشيط المفرط أو عيب في تجنيد الكريات البيض يمكن أن تؤدي إلى الاضطرابات المتصلة بالتهابات. نظراً للعديد من هذه الاضطرابات لم يكن علاج فعال، يجب التحقيق في استراتيجيات جديدة مع تركيز على طبقة الأوعية الدموية. ونحن نقترح فحوصات شاملة مفيدة للبحث عن المنظمين غشائي الرواية التي تعدل وظيفة الكريات البيض. نحن نحلل غشائي التنشيط باستخدام تعبير محددة الأهداف المتورطين في تجنيد الكريات البيض (مثل، السيتوكينات، المستقطبات، وجزيئات الالتصاق) مع العديد من التقنيات، بما في ذلك: (سلسلة من ردود الفعل بوليميريز الكمية في الوقت الحقيقي رتقبكر)، ووصمة عار الغربية، تدفق فحوصات الخلوي والالتصاق. تحديد وظيفة غشائي في سياق التهاب هذه النهج وهي مفيدة جداً لإجراء فحوصات الكشف لتوصيف المنظمين التهاب غشائي الرواية التي يحتمل أن تكون قيماً لتصميم استراتيجيات علاجية جديدة.

تقييم المستحثة بلبس غشائي خلية التنشيط بواسطة RT-قبكر
الخلايا القانون النموذجي-04 المصل جوعاً كانت تحفزها 100 نانوغرام/مليلتر من لبس ح 6، وتم تقييم التعبير الجيني غشائي استخدام الرايت قبكر بمقارنة التعبير عن علامات التنشيط إلى حالة الراحة. كم...

Watch this Scientific Journal Video about Screening Assays to Characterize Novel Endothelial Regulators Involved in the Inflammatory Response at JoVE.com

Screening Assays to Characterize Novel Endothelial Regulators Involved in the Inflammatory Response

أحكام الضوابط البطانة الوعائية التوظيف الكريات البيض. ويساهم التسرب الكريات البيض غير كافية أمراض التهابات البشرية. ولذلك، تبحث عن رواية العناصر التنظيمية لتفعيل غشائي ضروري لتصميم تحسين العلاج لأمراض التهابات. وهنا يصف لنا منهجية شاملة لتوصيف المنظمين غشائي الرواية التي يمكن تعديلها الكريات البيض الاتجار أثناء التهاب.

فحص فحوصات لوصف رواية غشائي المنظمين المتورطين في الاستجابة الالتهابية

The endothelial layer is essential for maintaining homeostasis in the body by controlling many different functions. Regulation of the inflammatory ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

فحوص للكشف عن العوامل رني المضيفة المعنية في الوقس عدوى فيروس باستخدام ذبابة الفاكهة خلايا

Viral pathogens represent a significant public health threat; not only can viruses cause natural epidemics of human disease, but their potential use in ...

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

مقدمة لالدبابير الطفيلية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; والاستجابة المناعية Antiparasite

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Use of Interferon-&gamma; Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

Use of Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

استخدام مضاد للفيروسات، γ الإنزيم المرتبط الفحص Immunospot لوصف الرواية تي خلية الحواتم من فيروس الورم الحليمي البشري

A protocol has been developed to overcome the difficulties of isolating and characterizing rare T cells specific for pathogens, such as human ...

Assays for the Identification of Novel Antivirals against Bluetongue Virus

فحوصات لتحديد رواية الأدوية المضادة للفيروسات ضد فيروس اللسان الأزرق

To identify potential antivirals against BTV, we have  developed, optimized and validated three assays presented here. The CPE-based  assay was the first ...

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Neuroinflammation is a complex innate immune response vital to the healthy function of the central nervous system (CNS). Under normal conditions, an ...

VIGS-Mediated Forward Genetics Screening for Identification of Genes Involved in Nonhost Resistance


	Nonhost disease resistance of plants against bacterial pathogens is controlled by complex defense pathways. Understanding this mechanism is important ...

Viral Concentration Determination Through Plaque Assays: Using Traditional and Novel Overlay Systems

تحديد تركيز الفيروسي من خلال البلاك فحوصات: نظم تراكب عن طريق التقليدية والرواية

Plaque assays remain one of the most accurate methods for the direct quantification of infectious virons and antiviral substances through the counting of ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

في تحليل المختبر من الاستجابة المناعية الخلوية بوساطة Myd88 لفيروس غرب النيل المسخ سلالة العدوى

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Phage Phenomics: Physiological Approaches to Characterize Novel Viral Proteins

Phenomics فج: مقاربات الفسيولوجية لتوصيف رواية الفيروسية البروتينات

Current investigations into phage-host interactions are dependent on extrapolating knowledge from (meta)genomes. Interestingly, 60 - 95% of all phage ...

Biomimetic Materials to Characterize Bacteria-host Interactions

المواد الجزيئية الحيوية لوصف التفاعلات البكتيريا في استضافة

Bacterial attachment to host cells is one of the earliest events during bacterial colonization of host tissues and thus a key step during infection. The ...