Name: screening assays to characterize novel endothelial regulators involved in the inflammatory response
Uploaded: 2017-09-15T13:00:00
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이 작품은 정부의 드 Economía y Competitividad (MINECO) 및 Instituto de에 의해 지원 되었다 건배 카를로스 3 세 (ISCIII) (보조금 번호 IERPY 1149/16 앨 러 배 마; MPY 1410/09 S. Hortelano에); 의해 Fondo 드 Investigación en 건배 (FIS) (S. Hortelano PI11.0036-PI14.0055 번호 부여)을 통해 MINECO. S. Herranz IERPY 1149/16 ISCIII에서 지원 되었다.

1. 내 피 세포 배양 <ol><ol><li>코트 100 m m 조직 문화 접시 2.5 mL 젤라틴을 조직 배양 플레이트 취급 <li>솔루션 (증류수에 압력가 마로 소독, 0.1% 젤라틴) 37 ° C에서 30 분 동안,이 필요한 잘 형식으로 추정 될 수 있습니다. 발음 젤라틴 솔루션 및 조직 문화 후드에 건조를 접시에 두고.</li>
	</ol></li> <li>조직 배양 조건 <ol><li>(37 ° C, 습도 95%, 5% CO 2) 생물 인큐베이터 안에 ...

<ol>
	<li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Skeoch, S., Bruce, I. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis+in+rheumatoid+arthritis:+is+it+all+about+inflammation?.">Atherosclerosis in rheumatoid arthritis: is it all about inflammation?.</a> Nat Rev Rheumatol. 11 (7), 390-400 (2015).</li><li>Gerhardt, T., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+trafficking+across+the+vessel+wall.">Monocyte trafficking across the vessel wall.</a> Cardiovasc Res. 107 (3), 321-330 (2015).</li><li>Andonegui, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+that+exclusively+express+TLR4+on+endothelial+cells+can+efficiently+clear+a+lethal+systemic+Gram-negative+bacterial+infection.">Mice that exclusively express TLR4 on endothelial cells can efficiently clear a lethal systemic Gram-negative bacterial infection.</a> J Clin Invest. 119 (7), 1921-1930 (2009).</li><li>McDonald, B., Jenne, C. N., Zhuo, L., Kimata, K., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cells+and+activation+of+endothelial+TLR4+coordinate+neutrophil+adhesion+within+liver+sinusoids+during+endotoxemia.">Kupffer cells and activation of endothelial TLR4 coordinate neutrophil adhesion within liver sinusoids during endotoxemia.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 305 (11), G797-G806 (2013).</li><li>Pober, J. S., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+functions+of+endothelial+cells+in+inflammation.">Evolving functions of endothelial cells in inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 7 (10), 803-815 (2007).</li><li>Chamorro, &. #. 1. 9. 3. ;., Dirnagl, U., Urra, X., Planas, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotection+in+acute+stroke:+targeting+excitotoxicity,+oxidative+and+nitrosative+stress,+and+inflammation.">Neuroprotection in acute stroke: targeting excitotoxicity, oxidative and nitrosative stress, and inflammation.</a> Lancet Neurol. 15 (8), 869-881 (2016).</li><li>Hortelano, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ILK+mediates+LPS-induced+vascular+adhesion+receptor+expression+and+subsequent+leucocyte+trans-endothelial+migration.">ILK mediates LPS-induced vascular adhesion receptor expression and subsequent leucocyte trans-endothelial migration.</a> Cardiovasc Res. 86 (2), 283-292 (2010).</li><li>Palaz&#243;n, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agonist+anti-CD137+mAb+act+on+tumor+endothelial+cells+to+enhance+recruitment+of+activated+T+lymphocytes.">Agonist anti-CD137 mAb act on tumor endothelial cells to enhance recruitment of activated T lymphocytes.</a> Cancer Res. 71 (3), 801-811 (2011).</li><li>Jim&#233;nez-Garc&#237;a, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=8,9-Dehydrohispanolone-15,16-lactol+diterpene+prevents+LPS-triggered+inflammatory+responses+by+inhibiting+endothelial+activation.">8,9-Dehydrohispanolone-15,16-lactol diterpene prevents LPS-triggered inflammatory responses by inhibiting endothelial activation.</a> Biochem J. 473 (14), 2061-2071 (2016).</li><li>. SuperScript&#174; III First-Strand Synthesis System for RT-PCR Available from: <a target="_blank" href="https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/superscriptIIIfirststrand_pps.pdf">https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/superscriptIIIfirststrand_pps.pdf</a> (2013)</li><li>Livak, K. J., Schmittge, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+relative+gene+expression+data+using+real-time+quantitative+PCR+and+the+2(-Delta+Delta+C(T))+Method.">Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method.</a> Methods. 25 (4), 402-408 (2001).</li><li>. Pierce BCA Protein Assay Kit Available from: <a target="_blank" href="https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/MAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf">https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/MAN0011430_Pierce_BCA_Protein_Asy_UG.pdf</a> (2017)</li><li>He, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laemmli-SDS-PAGE.">Laemmli-SDS-PAGE.</a> BIO-PROTOCOL. 1 (11), (2011).</li><li>. ImageJ User Guide Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/user-guide-USbooklet.pdf">https://imagej.nih.gov/ij/docs/guide/user-guide-USbooklet.pdf</a> (2017)</li><li>Hohsfield, L. A., Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravenous+infusion+of+monocytes+isolated+from+2-week-old+mice+enhances+clearance+of+Beta-amyloid+plaques+in+an+Alzheimer+mouse+model.">Intravenous infusion of monocytes isolated from 2-week-old mice enhances clearance of Beta-amyloid plaques in an Alzheimer mouse model.</a> PloS One. 10 (4), e0121930 (2015).</li><li>Hofland, R. W., Thijsen, S. F. T., Verhagen, M. A. M. T., Schenk, Y., Bossink, A. W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuberculosis+during+TNF-&#945;+inhibitor+therapy,+despite+screening.">Tuberculosis during TNF-&#945; inhibitor therapy, despite screening.</a> Thorax. 68 (11), 1079-1080 (2013).</li><li>Ley, K., Laudanna, C., Cybulsky, M. I., Nourshargh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+to+the+site+of+inflammation:+the+leukocyte+adhesion+cascade+updated.">Getting to the site of inflammation: the leukocyte adhesion cascade updated.</a> Nat Rev Immunol. 7 (9), 678-689 (2007).</li><li>Tedgui, A., Mallat, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+mechanisms+in+the+vascular+wall.">Anti-inflammatory mechanisms in the vascular wall.</a> Circ Res. 88 (9), 877-887 (2001).</li><li>Zheng, Y., Humphry, M., Maguire, J. J., Bennett, M. R., Clarke, M. C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+interleukin-1+receptor+2+binding+prevents+cleavage+and+activity+of+interleukin-1&#945;,+controlling+necrosis-induced+sterile+inflammation.">Intracellular interleukin-1 receptor 2 binding prevents cleavage and activity of interleukin-1&#945;, controlling necrosis-induced sterile inflammation.</a> Immunity. 38 (2), 285-295 (2013).</li><li>Pripp, A. H., Stani&#353;i&#263;, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+pro-+and+anti-inflammatory+cytokines+in+chronic+subdural+hematoma+patients+assessed+with+factor+analysis.">The correlation between pro- and anti-inflammatory cytokines in chronic subdural hematoma patients assessed with factor analysis.</a> PloS One. 9 (2), e90149 (2014).</li><li>Guha, M., Mackman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPS+induction+of+gene+expression+in+human+monocytes.">LPS induction of gene expression in human monocytes.</a> Cell Signal. 13 (2), 85-94 (2001).</li><li>Tabas, I., Glass, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+therapy+in+chronic+disease:+challenges+and+opportunities.">Anti-inflammatory therapy in chronic disease: challenges and opportunities.</a> Science. 339 (6116), 166-172 (2013).</li></ol>

이 내 피 프로토콜 탐험 소설 메커니즘 염증 반응의 조절에 관여에 대 한 기초를 설정 하는 단계적 기술을 설명 합니다. 이러한 방식을 내 피 활동 LPS에 의해 자극된의 연구에 기초 하 고 특히 백혈구 신규 모집 선 동적인 응답 동안에 관련 된 중요 한 단계를 평가: cytokines 내 피, 내 피 접착 분자 표정 및 백혈구 접착 혈관 층에. 내 피 매개 변수가 설정 되 면 시스템 내 피 기능의 규정에 관련 된 소?...

염증은 병원 체를 제거 하 고 손상 된 조직을 복구 하는 주요 목적으로 전염 성 요원에 대 한 유익한 생물학 응답 이다. 만성 감염 또는 면역 질환과 같은 특정 조건에서 염증이 해결 되지 않습니다. 대신, 백혈구, 조직 손상, 섬유 증, 기능, 및 전반적인 손실, 장애 및 환자 일부의 경우 죽음에 리드 장기간된 면역 반응의 결과로의 지속적인 침투와 탈 선 반응이입니다. 이러한 인간의 장애, 염증 성 질환으로 카탈로그 모든 백혈구 넘쳐 흐름1,2의 컨트롤에 대 한 혈관 포함.
내 피 세포 백혈구 밀매를 제어 하 여 염증 반응의 규칙에 있는 근본적인 역할을 재생 합니다. 내 피 레이어 LPS 등 염증 성 중재자에 노출은, 휴식 endothelium 활성화 하 고 프로 염증 성 cytokines (Cxcl10 Cxcl5, Cxcl1, 등)와 접착 분자 (전자 selectin VCAM-1, ICAM-1)를 표현 하 고 그 은혜 순환 하는 백혈구는 감염의 사이트에 모집 다음 릴리스 cytokines에 의해 액 백혈구 중재 압 연 및 특 파 원 접착제 대응을 통해 내 피 레이어와 상호 작용: selectin, α4β1 integrin VCAM-1 및 αLβ2 integrin ICAM-1 PSGL-1. 마지막으로, 백혈구는 염증3의 초점으로 맥 관 구조에 걸쳐 마이그레이션합니다.
염증 반응 조절에 피 내 막의 필수적인 역할 유전자 LPS 수용 체, 통행세 같이 수용 체 4 (TLR4), 내 피 세포에만 표현 하기 위해 수정 된 쥐에 증명 되었습니다. 이 내 피 TLR4 동물 LPS 중재 염증 박테리아 접종 후 발생 하는 감염을 감지 하 고 대응 하 고 따라서 감염 확인 및 강포한 유형 쥐4 으로 비슷한 수준에서 생존을 달성할 수 있었다 , 5.
피 규제 염증 반응 통로 대 한 그것은 되었습니다 가정 하는 백혈구 내 피 상호 작용의 어떤 단계에서 저해 트랜스 내 피 마이그레이션에 대 한 더 나은 예 지의 감소 귀 착될 것입니다. 염증 관련 된 질병입니다. 사실, 내 피 활성화 및 백혈구 endothelium 상호 작용을 대상으로 하는 여러 전략 염증 성 장애6,7에 대 한 치료로 면역 세포의 넘쳐 흐름을 방해 하기 위하여 설계 되었습니다.
이 보고서에서 우리는 생체 외에서 기술 완벽 하 게 특성화 염증 성 자극 LPS에 내 피 활동 및 백혈구 활성화 및 혈관 층에 접착의 역할의 철저 한 그룹을 설명 합니다. 이 원고에 사용 되는 내 피 세포 모델은 마우스 폐 내 피 세포 라인 (MLEC-04), Hortelano 그 외 여러분 에 의해 설명 된 대로 8. 내 피 활성화9,10공부 하는 적절 한 시스템 문학에는 MLEC-04 셀 라인 검증 되었습니다. 연구 관심 분야에 따라, 이러한 접근 수 있습니다 쉽게 추정 될 어떤 내 피에 백혈구 시스템 및 염증 성 프로필 또는. 선택한 조건에 내 피 매개 변수를 정의한 후 시스템 혈관 활성화를 평가 하기 위해 제안 된 실험에 대 한 새로운 약물을 테스트할 수 있습니다. 이 염증 성 맥락에서 관심의 화합물과 테스트 내 피 세포는 세포의 제어 조건에 비교 될 수 있다 하 고 결과 차이 약물의 개발 및 염증의 진행에 전조 결과 알릴 수 있습니다. 결론, 우리는 염증 관련 질병에 대 한 소설 관련 혈관 치료의 디자인에 영향을 미칠 수 있는 내 피 세포에 새로운 약물 표적을 특성화 하기 위해 관련 시스템을 제안 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="820">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Gelatin</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:116px;">G9391</td>
			<td style="width:256px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM-F12</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-719F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>DE17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsine</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-160E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>ED2SS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LPS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trizol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9424</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isopropanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>33539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol absoluto</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,310,861,612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Pure H2O</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1017979</td>
			<td>RNAse free</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose</td>
			<td>Pronadisa</td>
			<td>8020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stain for agarose gels</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>s33102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SuperScript III First-Strand Synth</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td height="21" style="height:21px;width:116px;">18080051</td>
			<td>Reagents for RT-PCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Fast SYBR Green Master Mix</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td align="left">4385610</td>
			<td>Fluorescent stain for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MicroAmp Fast Optical 96-Well</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4346906</td>
			<td>Plates for qPCR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">U-bottom 96 well plates</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytometry tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TX100</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>212314</td>
			<td>Non-ionic surfactant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tris-HCl</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,319,401,211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1,064,041,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium pyrophosphate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium fluoride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium orthovanadate</td>
			<td>sigma</td>
			<td>13721-39-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td>sigma</td>
			<td>P8340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Reagents for bicinchoninic acid assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#946;-mercaptoethanol</td>
			<td>merck</td>
			<td align="left">805,740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td align="left" height="21" style="height:21px;">PVDF Transfer Membrane, 0.45 &#181;m</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>88518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>Panreac</td>
			<td align="left">1,623,121,611</td>
			<td>Polysorbate 20</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-515Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ECL</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>WBKLS0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fibronectin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F1141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Collagen type I</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>c8919</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acetic acid</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,310,081,611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methanol</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,310,911,612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Crystal violet</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT90132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 96%</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>1,410,851,212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CFSE</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-115F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SDS</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>161-0418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Infinite M200</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>M200</td>
			<td>Multi mode microplate reader</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gel Doc 2000</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>2000</td>
			<td>Gel documentation system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">StepOnePlus</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>StepOnePlus</td>
			<td>qPCR system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MACSQuant Analyzer 10</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>Analyzer 10</td>
			<td>Cytometry equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ChemiDoc MP</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>MP</td>
			<td>Chemiluminescence detection system</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">PECAM-1</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553370</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">ICAM-2</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>1054602</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">E-selectin</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553749</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">VCAM-1</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>553330</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">ICAM-1</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>553250</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-rat IgG-FITC</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>112-095-006</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti armenian hamster-FITC</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>127-095-160</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat IgG isotyope control</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:116px;">10700</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Armenian hamster IgG isotype control</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PA5-33220</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-I&#954;&#914;-&#945;</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>2859</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#946;-Actin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5441</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P-ERK</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9101</td>
			<td>Use at 10 &#181;g/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-mouse HRP</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>LNXA931/AE</td>
			<td>Use at 1:10000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-rabbit HRP</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>LNA934V/AG</td>
			<td>Use at 1:10000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-rat HRP</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>Sc-3823</td>
			<td>Use at 1:10000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

screening assays to characterize novel endothelial regulators involved in the inflammatory response

내 피 층은 여러 가지 기능을 제어 하 여 신체의 항상성 유지 하기 위한 필수적입니다. 내 피 층에 의해 염증 반응의 규칙은 효율적으로 유해한 입력에 대 한 싸움과 손상 된 지역의 복구에 도움이 중요 합니다. 내 피 세포는 선 동적인 환경, 그람 음성 세균 막, lipopolysaccharide (LPS)의 외부 구성 요소에 노출 되 면 그들은 Ccl5, Cxcl1 등 Cxcl10, 수용 성 프로 염증 성 cytokines를 표현 하 고 방 아 쇠는 순환 하는 백혈구의 활성화입니다. 또한, 내 피 표면에 접착 분자 전자 selectin VCAM-1, ICAM-1의 식 상호 작용 및 접착 내 피 레이어, 그리고 결국 염증된 조직 향해 넘쳐 흐름을 활성화 된 백혈구의 수 있습니다. 이 시나리오에서는 내 피 기능 해야 합니다 엄격 하 게 규제 되어야 백혈구 신규 모집에 과도 한 또는 결함이 활성화 염증 관련 질환으로 이어질 수 있기 때문에. 이후 많은 이러한 장애의 효과적인 치료를 하지 않아도, 혈관 층에 초점을 맞춘 새로운 전략을 조사 해야 합니다. 우리 소설 내 피 레 귤 레이 터 백혈구 기능을 수정 하는 검색에 유용한 종합적인 분석 제안 합니다. 우리를 포함 한 여러 가지 기술로 특정 식 대상 (예: cytokines, 발산, 및 접착 분자) 백혈구 신규 모집에 참여를 사용 하 여 내 피 활성화 분석: 실시간 정량 중 합 효소 연쇄 반응 ( RT-qPCR), 서쪽 오 점, cytometry 및 접착 분석 흐름. 이러한 접근 염증 맥락에서 내 피 기능을 결정 하 고 소설 내 피 염증 성 레 귤 레이 터 설계 새로운 치료 전략에 대 한 잠재적으로 가치 있는 특징을 심사 분석을 수행 하는 매우 유용 합니다.

실시간 정량 Pcr에 의해 LPS 유발 내 피 세포 활성화의 평가
굶 어 혈 청 MLEC-04 셀 100 ng/mL LPS의 6 h에 의해 자극 되었다 그리고 내 피 유전자 발현 비교 활성화 마커 휴식 상태를 표현 하 여 실시간 정량 Pcr를 사용 하 여 평가 했다. 그림 1A같이 LPS incubated MLEC-04 세포 염증 반응 (전자 selectin VCAM-1, ICAM-1) 동안 백혈?...

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Screening Assays to Characterize Novel Endothelial Regulators Involved in the Inflammatory Response

혈관 내 피는 단단히 백혈구 신규 모집을 제어합니다. 부적당 한 백혈구 넘쳐 흐름 인간의 염증 성 질병에 기여 한다. 따라서, 내 피 활성화의 새로운 규제 요소에 대 한 검색은 염증 성 질환에 대 한 향상 된 치료를 디자인 해야 합니다. 여기, 우리는 포괄적인 방법론 소설 내 피 레 귤 레이 터 백혈구 중 염증 매매 하는 것을 수정할 수 있는 특성을 설명 합니다.

심사 분석 실험 소설 내 피 레 귤 레이 터 염증 반응에 관여 하

The endothelial layer is essential for maintaining homeostasis in the body by controlling many different functions. Regulation of the inflammatory ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

에 관련된 호스트 요인에 대한 RNAi 심사 우두</em사용하기> 바이러스 감염 Drosophila 전지

Viral pathogens represent a significant public health threat; not only can viruses cause natural epidemics of human disease, but their potential use in ...

연구

면역학 및 감염병학

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

의 기생충 말벌에 대한 소개<em&gt; Drosophila</em&gt; 그리고 Antiparasite 면역 반응

Most known parasitoid wasp species attack the larval or pupal stages of Drosophila. While Trichopria drosophilae infect the pupal stages of the host (Fig. ...

Use of Interferon-&gamma; Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

Use of Interferon-ÃƒÅ½Ã‚Â³ Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

인간 Papillomavirus의 소설 T-세포 Epitopes를 특성화하기 위해 인터페론-γ 효소 연결된 Immunospot 분석의 이용

A protocol has been developed to overcome the difficulties of isolating and characterizing rare T cells specific for pathogens, such as human ...

Assays for the Identification of Novel Antivirals against Bluetongue Virus

Bluetongue 바이러스에 대한 항 바이러스제 소설의 식별에 대한 분석

To identify potential antivirals against BTV, we have  developed, optimized and validated three assays presented here. The CPE-based  assay was the first ...

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Neuroinflammation is a complex innate immune response vital to the healthy function of the central nervous system (CNS). Under normal conditions, an ...

VIGS-Mediated Forward Genetics Screening for Identification of Genes Involved in Nonhost Resistance

유전자의 식별을위한 VIGS - 중재 앞으로 유전학 검사는 Nonhost 저항에 참여


	Nonhost disease resistance of plants against bacterial pathogens is controlled by complex defense pathways. Understanding this mechanism is important ...

Viral Concentration Determination Through Plaque Assays: Using Traditional and Novel Overlay Systems

사용하여 전통과 소설 오버레이 시스템 : 플라크 분석 실험을 통해 바이러스 농도 결정

Plaque assays remain one of the most accurate methods for the direct quantification of infectious virons and antiviral substances through the counting of ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

웨스트 나일 바이러스 돌연변이 균주의 감염에에서 MyD88 매개 세포 면역 반응의 생체 외 분석

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Phage Phenomics: Physiological Approaches to Characterize Novel Viral Proteins

파지 Phenomics : 생리 학적 접근 방법은 소설 바이러스 성 단백질의 특성을

Current investigations into phage-host interactions are dependent on extrapolating knowledge from (meta)genomes. Interestingly, 60 - 95% of all phage ...

Biomimetic Materials to Characterize Bacteria-host Interactions

박테리아 - 호스트 상호 작용의 특성을 생체 모방 재료

Bacterial attachment to host cells is one of the earliest events during bacterial colonization of host tissues and thus a key step during infection. The ...