Name: microfluidic imaging flow cytometry by asymmetric-detection time-stretch optical microscopy (atom)
Uploaded: 2017-06-28T15:00:00
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हमारे लिए एमसीएफ -7 की तैयारी के लिए श्री पी। यह काम आंशिक रूप से हांगकांग विशेष प्रशासन क्षेत्र, चीन (परियोजना संख्या 1725 9 316, 17207715, 17207714, 17205715, 17207714, 17205215, और एचयूयू 720112 ई) के अनुसंधान अनुदान परिषद से अनुदान द्वारा समर्थित था, इनोवेशन एंड टेक्नोलॉजी सपोर्ट प्रोग्राम (आईटीएस / 090/14 ), और HKU के विश्वविद्यालय विकास कोष

1. नमूना तैयार करना <ol><li> नमूना तैयार करना (सहायक कोशिकाओं; एमसीएफ -7 कोशिकाएं) <ol><li> इनक्यूबेटर से सेल कल्चर डिश निकालें और संस्कृति माध्यम को हटा दें। </li><li> अत्यधिक संस्कृति माध्यम को हटाने के लिए 1x फॉ?...

<ol>
	<li>Lau, A. K. S., Wong, T. T. W., Shum, H. C., Wong, K. K. Y., Tsia, K. K., Barteneva, N. S., Vorobjev, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Imaging Flow Cytometry: Methods and Protocols. , 23-45 (2016).</li><li>Goda, K., Tsia, K. K., Jalali, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+time-encoded+amplified+imaging+for+real-time+observation+of+fast+dynamic+phenomena.">Serial time-encoded amplified imaging for real-time observation of fast dynamic phenomena.</a> Nature. 458 (7242), 1145-1149 (2009).</li><li>Goda, K., Jalali, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersive+Fourier+transformation+for+fast+continuous+single-shot+measurements.">Dispersive Fourier transformation for fast continuous single-shot measurements.</a> Nat Photon. 7 (2), 102-112 (2013).</li><li>Lau, A. K., Shum, H. C., Wong, K. K., Tsia, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optofluidic+time-stretch+imaging+-+an+emerging+tool+for+high-throughput+imaging+flow+cytometry.">Optofluidic time-stretch imaging - an emerging tool for high-throughput imaging flow cytometry.</a> Lab Chip. 16 (10), 1743-1756 (2016).</li><li>Lau, A. K. S., Tang, A. H. L., Xu, J., Wong, X. W., Y, K. K., Tsia, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+Time+Stretch+for+High-Speed+and+High-Throughput+Imaging+-+From+Single-Cell+to+Tissue-Wide+Scales.">Optical Time Stretch for High-Speed and High-Throughput Imaging - From Single-Cell to Tissue-Wide Scales.</a> IEEE J. Sel. Top. in Quant. Electron. 22 (4), (2016).</li><li>Lei, C., Guo, B., Cheng, Z., Goda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+time-stretch+imaging:+Principles+and+applications.">Optical time-stretch imaging: Principles and applications.</a> Appl Phys Rev. 3 (1), 011102 (2016).</li><li>Lei, C., Guo, B., Cheng, Z., Goda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+time-stretch+imaging:+Principles+and+applications.">Optical time-stretch imaging: Principles and applications.</a> Applied Physics Reviews. 3 (011102), (2016).</li><li>Goda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+single-microparticle+imaging+flow+analyzer.">High-throughput single-microparticle imaging flow analyzer.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (29), 11630-11635 (2012).</li><li>Goda, K., Solli, D. R., Tsia, K. K., Jalali, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theory+of+amplified+dispersive+Fourier+transformation.">Theory of amplified dispersive Fourier transformation.</a> Physical Review A. 80 (4), 043821 (2009).</li><li>Goda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+single-microparticle+imaging+flow+analyzer.">High-throughput single-microparticle imaging flow analyzer.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (29), 11630-11635 (2012).</li><li>Lai, Q. T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+time-stretch+imaging+flow+cytometry+for+multi-class+classification+of+phytoplankton.">High-throughput time-stretch imaging flow cytometry for multi-class classification of phytoplankton.</a> Opt. Express. 24 (25), 28170-28184 (2016).</li><li>Chen, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+Learning+in+Label-free+Cell+Classification.">Deep Learning in Label-free Cell Classification.</a> Sci Rep. 6, 21471 (2016).</li><li>Fard, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nomarski+serial+time-encoded+amplified+microscopy+for+high-speed+contrast-enhanced+imaging+of+transparent+media.">Nomarski serial time-encoded amplified microscopy for high-speed contrast-enhanced imaging of transparent media.</a> Biomed Opt Express. 2 (12), 3387-3392 (2011).</li><li>Lau, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferometric+time-stretch+microscopy+for+ultrafast+quantitative+cellular+and+tissue+imaging+at+1+mum.">Interferometric time-stretch microscopy for ultrafast quantitative cellular and tissue imaging at 1 mum.</a> J Biomed Opt. 19 (7), 76001 (2014).</li><li>Mahjoubfar, A., Chen, C., Niazi, K. R., Rabizadeh, S., Jalali, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+high-throughput+cell+screening+in+flow.">Label-free high-throughput cell screening in flow.</a> Biomed Opt Express. 4 (9), 1618-1625 (2013).</li><li>Wong, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric-detection+time-stretch+optical+microscopy+(ATOM)+for+ultrafast+high-contrast+cellular+imaging+in+flow.">Asymmetric-detection time-stretch optical microscopy (ATOM) for ultrafast high-contrast cellular imaging in flow.</a> Sci Rep. 4, 3656 (2014).</li><li>Mata, T. M., Martins, A. A., Caetano, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microalgae+for+biodiesel+production+and+other+applications:+A+review.">Microalgae for biodiesel production and other applications: A review.</a> Renew Sustainable Energy Rev. 14 (1), 217-232 (2010).</li><li>Irigoien, X., Huisman, J., Harris, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+biodiversity+patterns+of+marine+phytoplankton+and+zooplankton.">Global biodiversity patterns of marine phytoplankton and zooplankton.</a> Nature. 429 (6994), 863-867 (2004).</li><li>Wei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coherent+Laser+Source+for+High+Frame-Rate+Optical+Time-Stretch+Microscopy+at+1.0+&#181;m.">Coherent Laser Source for High Frame-Rate Optical Time-Stretch Microscopy at 1.0 &#181;m.</a> IEEE J. Sel. Top. Quantum Electron. 20 (5), 384-389 (2014).</li><li>Wei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breathing+laser+as+an+inertia-free+swept+source+for+high-quality+ultrafast+optical+bioimaging.">Breathing laser as an inertia-free swept source for high-quality ultrafast optical bioimaging.</a> Opt. Lett. 39 (23), 6593-6596 (2014).</li><li>Xu, Y., Wei, X., Ren, Z., Wong, K. K. Y., Tsia, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrafast+measurements+of+optical+spectral+coherence+by+single-shot+time-stretch+interferometry.">Ultrafast measurements of optical spectral coherence by single-shot time-stretch interferometry.</a> Sci Rep. 6, 27937 (2016).</li><li>Tsia, K. K., Goda, K., Capewell, D., Jalali, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+serial+time-encoded+amplified+microscope.">Performance of serial time-encoded amplified microscope.</a> Opt. Express. 18 (10), 10016-10028 (2010).</li><li>Alix-Panabi&#232;res, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+in+circulating+tumour+cell+research.">Challenges in circulating tumour cell research.</a> Nat Rev Cancer. 14 (9), 623-631 (2014).</li><li>Kling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+counting+tumor+cells.">Beyond counting tumor cells.</a> Nat Biotech. 30 (7), 578-580 (2012).</li><li>Hodgkinson, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumorigenicity+and+genetic+profiling+of+circulating+tumor+cells+in+small-cell+lung+cancer.">Tumorigenicity and genetic profiling of circulating tumor cells in small-cell lung cancer.</a> Nat Med. 20 (8), 897-903 (2014).</li><li>Ozkumur, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inertial+focusing+for+tumor+antigen-dependent+and+-independent+sorting+of+rare+circulating+tumor+cells.">Inertial focusing for tumor antigen-dependent and -independent sorting of rare circulating tumor cells.</a> Sci Transl Med. 5 (179), (2013).</li><li>Hou, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+retrieval+of+circulating+tumor+cells+using+centrifugal+forces.">Isolation and retrieval of circulating tumor cells using centrifugal forces.</a> Scientific Reports. 3, 1259 (2013).</li><li>Karabacak, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=marker-free+isolation+of+circulating+tumor+cells+from+blood+samples.">marker-free isolation of circulating tumor cells from blood samples.</a> Nat. Protocols. 9 (3), 694-710 (2014).</li><li>Krebs, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+analysis+of+circulating+tumour+cells-biology+and+biomarkers.">Molecular analysis of circulating tumour cells-biology and biomarkers.</a> Nat Rev Clin Oncol. 11 (3), 129-144 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrafast+Laser-Scanning+Time-Stretch+Imaging+at+Visible+Wavelengths.">Ultrafast Laser-Scanning Time-Stretch Imaging at Visible Wavelengths.</a> Light Sci Appl. , (2016).</li></ol>

कई तकनीकी विवरण हैं जो ATOM सिस्टम सेटअप के दौरान विशेष ध्यान देने की आवश्यकता होती है। सबसे पहले, यह ध्यान रखना आवश्यक है कि असममित / तिरछी स्पेक्ट्रेटिक-एन्कोडेड रोशनी अवशोषण के चरण-ढाल घटकों ( यानी, ?...

ऑप्टिकल इमेजिंग एक शक्तिशाली उपकरण और सेल-आधारित परख प्रस्तुत करता है (लगभग) गैर-इनवेसिव से कई सेलुलर / सबसुलुलर घटकों के विस्तृत स्थानिक वितरण की कल्पना करता है, इस प्रकार सेल की कोशिकीय, बायोफिजिकल, और बायोमोलिकुलल हस्ताक्षरों को उजागर किया जाता है। हालांकि, एकल कोशिकाओं से उच्च-सामग्री की जानकारी निकालने की इस क्षमता को आम तौर पर समझौता किया गया है जब कोशिकाओं की एक विशाल और विषम जनसंख्या की जांच होनी होती है। यह मापन थ्रूपुट और कंटेंट के बीच सेल-आधारित एशेज में एक आम ट्रेड-ऑफ का प्रतीक है। एक उल्लेखनीय उदाहरण यह है कि cytometry प्रवाह करने के लिए इमेजिंग क्षमता जोड़ने से शास्त्रीय गैर-इमेजिंग प्रवाह साइतोमीटर की तुलना में कम से कम 1-2 आदेशों के द्वारा थ्रूपूट की डाउन-स्केलिंग हुई है। यद्यपि यह जटिल रूपात्मक एकल-कोशिका विश्लेषण की पेशकश कर सकता है जो मानक प्रवाह साइटोमीटर 1 के साथ संभव नहीं है, इमेजिंग प्रवाह cytometry आमतौर पर आईडी के लिए पर्याप्त थ्रूपुट का अभाव हैउच्च सांख्यिकीय आत्मविश्वास के साथ सेलुलर विविधता प्रदान करें यह जीव विज्ञान में नई खोजों और रोगों के रोगजनन को समझने के लिए आवश्यक है। सामान्य ऑप्टिकल इमेजिंग रणनीतियों द्वारा लगायी गई गतिमान गति सीमा में प्रमुख तकनीकी चुनौती है: लेजर बीम स्कैनिंग, ( जैसे, गैल्वेमेट्रिक दर्पण द्वारा) और / या छवि सेंसर ( जैसे, चार्ज-युग्मित डिवाइस (सीसीडी) और पूरक धातु- ऑक्साइड अर्धचालक (CMOS)) लेजर स्कैनिंग गति को स्कैनिंग दर्पण के मैकेनिकल जड़ता द्वारा आंतरिक रूप से प्रतिबंधित किया जाता है, जबकि सीसीडी या सीएमओएस का फ्रेम रेट इमेजिंग स्पीड और संवेदनशीलता के बीच मौलिक व्यापार से सीमित है ( यानी, फ़्रेम दर में वृद्धि से कम सिग्नल डिटेक्शन संवेदनशीलता , और इसके विपरीत)। ऑल-ऑप्टिकल, अल्ट्राफाइड इमेज-एन्कोडिंग तंत्र के आधार पर, ऑप्टिकल टाइम-स्ट्रेच इमेजिंग को उच्च-थ्रूपुट इमेजिंग फ्लो साइट के लिए एक आकर्षक मंच के रूप में दिखाया गया हैओमेटर, पारंपरिक छवि सेंसर या यांत्रिक लेजर स्कैनिंग की आवश्यकता के बिना 2 , 3 । समय खिंचाव इमेजिंग के कार्य सिद्धांत के विस्तृत विवरण 4 , 5 , 6 , 7 के संदर्भ में मिल सकते हैं। संक्षेप में, इसमें दो विनिमेय मैपिंग चरण होते हैं: (i) वर्णक्रमीय एन्कोडिंग (तरंगदैर्ध्य-अंतरिक्ष मानचित्रण), जिसमें इमेजेड नमूनों के स्थानिक निर्देशांक प्रकाश-स्पंदित बीम 8 , 9 के स्पेक्ट्रम में अलग-अलग तरंग दैर्ध्य के लिए मैप किए जाते हैं, और (ii) डिस्पेरिव फूरियर ट्रांसफ़ॉर्मेशन (वेवलेंथ टाइम मैपिंग) 9 , जिसमें व्यक्तिगत लेजर दालों के तरंग दैर्ध्य घटकों को समूह वैल्यू फैलाव (जीवीडी) के माध्यम से अस्थायी (तरंगदैर्ध्य-भरी) तरंगों ( चित्रा 1 ) में बदल दिया जाता है। एक महत्वपूर्णसमय-खिंचाव इमेजिंग की सुविधा ऑप्टिकल प्रवर्धन है, जो अल्ट्राफाइट फोटोडेटेशन और जीवीडी हानि के कारण संवेदनशीलता के नुकसान को सम्मिलित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, इस प्रकार तस्वीर संकेतक शोर 9 द्वारा प्रदूषित किए बिना छवि संकेत-टू-शोर अनुपात (एसएनआर) को बढ़ाता है। । चूंकि प्रत्येक लेजर पल्स ने इमेजेड नमूनों की एक रेखा-स्कैन को एनकोड किया है, जो कोशिकाओं के यूनिडायरेक्शनल फ्लो के ऑर्थोगोनल है, एक प्रभावी लाइन स्कैन दर लेजर पुनरावृत्ति दर से निर्धारित होती है, जो आमतौर पर 10 मेगाहर्ट्ज से अधिक है। यह अल्ट्राफास्ट ऑपरेशन ब्लर-फ्री, एकल-सेल छवि कैप्चर को 10,000-100,000 कोशिकाओं / यानी ( जैसे, पारंपरिक इमेजिंग प्रवाह cytometry की तुलना में 10-100 गुना अधिक) के एक थ्रूपुट पर सक्षम बनाता है। नतीजतन, समय-विस्तार इमेजिंग उच्च-थ्रुपुट, सिंगल-सेल, इमेज-आधारित स्क्रीनिंग में अद्वितीय अनुप्रयोगों को प्राप्त कर सकता है, खासकर जब अज्ञात विविधता की पहचान की आवश्यकता होती है या बड़े पैमाने पर जनसंख्या (हजारों से लाखों सेल<html> एलएस), जैसे दुर्लभ कैंसर सेल स्क्रीनिंग 10 या माइक्रो-शैवाल वर्गीकरण 11 टाइम-स्टैंच इमेजिंग मुख्य रूप से उज्ज्वल क्षेत्र (बीएफ) छवि कैप्चर पर निर्भर करती है, जिसमें से 2 , 3 , 9 , 10 , 11 की कोशिकाओं से छवि अंतर को प्रकाश बिखरने और अवशोषण से उत्पन्न किया जाता है। इस तरह के लेबल मुक्त, एकल-कोशिका इमेजिंग क्षमताओं, फ्लोरोसेंट लेबल्स, जैसे कि साइटोटोक्सिसिटी और फोटोबलीचिंग से जुड़े हानिकारक प्रभावों को बाईपास कर सकती हैं, और फिर सेलुलर और सब-सेलुलर बनावट और आकृति विज्ञान के आधार पर सिंगल-सेल विश्लेषण के लिए बहुमूल्य जानकारी प्रदान करती हैं। इन लेबल मुक्त पैरामीटर कोशिकाओं के गहरे चित्र वर्गीकरण के लिए प्रभावी साबित होते हैं, खासकर जब एक विशाल सेल आबादी 11 उपलब्ध है ,&quot;Xref&quot;&gt; 12 हालांकि, कई अवसरों में, बीएफ इमेजिंग लेबल मुक्त पारदर्शी कोशिकाओं के विस्तृत आकारिकी को प्रकट करने के लिए पर्याप्त अंतर प्रदान करने में विफल रहता है। अल्ट्राफास्ट फ्रेम दर 13 , 14 , 15 में इमेजिंग कॉन्ट्रास्ट बढ़ाने के लिए अलग-अलग लेबल मुक्त, चरण-विपरीत, समय-विस्तार इमेजिंग विधियों को विकसित किया गया है। इन तकनीकों में, श्लेयरेन फोटोग्राफी के समान अवधारणा के आधार पर चरण-ग्रेडिएंट (अंतर-हस्तक्षेप-विपरीत- (डीआईसी) के विपरीत) उजागर करने के लिए असममित-पता लगाने का समय-विस्तार ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी (एटीओएम) विकसित किया गया था, जिससे लेबल- एक ultrahigh microfluidic गति (ऊपर 10 मीटर / एस) पर एकल कोशिकाओं के मुक्त, उच्च विपरीत इमेजिंग 16 इस प्रभाव को आंशिक रूप से छवि-एन्कोडेड बीम पथ को अवरुद्ध या फोटोडेटेक्शन से पहले किरण को झुकाव करके तिरछा पहचान या रोशनी के माध्यम से उत्पन्न किया जा सकता है। एटॉम का एक अन्य लाभ इसकी एक हैएक साथ साथ दो चरण-ग्रेडिएंट विपरीत दिशाओं के साथ विरोधाभास करने की क्षमता। तीव्रता घटाव और दो विपरीत-विपरीत छवियों का सारांश समान चरण-स्कैन से, क्रमशः अंतर-चरण-ढाल के विपरीत और अवशोषण कंट्रास्ट उत्पन्न करता है। यह काम ऑप्टिकल सेटअप, नमूना तैयार करने, और डेटा अधिग्रहण और विज़ुअलाइजेशन की स्थापना सहित एटॉम के कार्यान्वयन का वर्णन करने वाले विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। विशेष रूप से, यह काम मानव रक्त कोशिकाओं, कैंसर कोशिकाओं, और फ़ॉइट्लैंकटन (सूक्ष्मजीव) के सिंगल सेल इमेजिंग के साथ एटीओएम ऑपरेशन को दर्शाता है। यह एओटीएम की इजाजिंग फ्लो साइटोमेट्री के लिए बायोमेडिकल क्षेत्र में न केवल, बल्कि समुद्री और जैव ईंधन शोध 17 , 18 में एटॉम की प्रयोज्यता को उजागर करता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="789">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:207px;">Nikon Plan Fluorite Physiology Objectives 40X</td>
			<td style="width:71px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">MRF07420</td>
			<td style="width:393px;">Objective lens (Obj2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Olympus Plan Fluorite Objective, 0.75 NA, 0.51 mm WD, 40X</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td>RMS40X-PF</td>
			<td>Objective lens (Obj1)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">N-BK7 Plano-Convex Lenses</td>
			<td style="width:71px;">Thorlabs</td>
			<td>LA1145-C</td>
			<td>For relaying spectral shower</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:207px;">FC/APC Fiber Collimation Package</td>
			<td style="width:71px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:119px;">F220APC-1064</td>
			<td>For outputing and collecting laser pulses</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Pellicle beamsplitter</td>
			<td style="width:71px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:119px;">BP145B3</td>
			<td>For making beam replica</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Protected silver mirror</td>
			<td style="width:71px;">Thorlabs</td>
			<td style="width:119px;">PF10-03-P01</td>
			<td>For reflecting light</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:207px;">800-1650nm 12GHz single mode DC-coupled NIR Photoreceiver</td>
			<td style="width:71px;">Newport</td>
			<td style="width:119px;">1544-B</td>
			<td>For converting light into electrical signal</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:207px;">Infiniium High-Performance Oscilloscope</td>
			<td style="width:71px;">Agilent</td>
			<td style="width:119px;">DSOX91604A</td>
			<td>To save the light-converted electrical signals</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">HI1060 optical fiber</td>
			<td style="width:71px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">HI1060</td>
			<td>Optical fiber for time-stretch</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:207px;">YTTERBIUM DOPED FIBER AMPLIFIER</td>
			<td style="width:71px;">Keopsys</td>
			<td style="width:119px;">KPS-STD-BT-YFA-37-BO-SM-111-FA-FA</td>
			<td>Optical in-line amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:207px;">Holographic grating</td>
			<td style="width:71px;">Wasatch Photonics</td>
			<td style="width:119px;">020305-6</td>
			<td>Grating</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:207px;">Infuse/Withdraw Syringe Pumps</td>
			<td style="width:71px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">PHD 2000</td>
			<td>Syringe pump for sample loading in micro-fluidic channels</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microfluidic imaging flow cytometry by asymmetric-detection time-stretch optical microscopy (atom)

मापणीय मापदंडों की संख्या को स्केलिंग, जो बहुआयामी डेटा विश्लेषण और इस प्रकार उच्च-आत्मविश्वास सांख्यिकीय परिणामों की अनुमति देता है, प्रवाह साइटोमेट्री के उन्नत विकास में मुख्य प्रवृत्ति रही है। विशेषकर, उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग क्षमताओं को जोड़ने से सेलुलर / सब-सेलुलर संरचनाओं के जटिल आकारिकी विश्लेषण की अनुमति मिलती है। यह मानक प्रवाह के साथ संभव नहीं है cytometers। हालांकि, यह सेलुलर फ़ंक्शंस के हमारे ज्ञान को आगे बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण है और जीवन विज्ञान अनुसंधान, नैदानिक ​​निदान, और पर्यावरण निगरानी को लाभान्वित कर सकता है। फ्लो साइटमैट्री में इमेजिंग क्षमताओं को शामिल करने से परख प्रवाह को समझौता होता है, मुख्य रूप से कैमरे प्रौद्योगिकियों में गति और संवेदनशीलता की सीमाओं के कारण। छवि की गुणवत्ता को संरक्षित करते समय इमेजिंग प्रवाह cytometry का सामना करने वाली इस स्पीड या थ्रूपुट चैलेंज पर काबू पाने के लिए, असममित-पता लगाने के समय-विस्तार ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी (एटीओएम) को उच्च-विपरीत, एक-सेल इमेज को सक्षम करने के लिए दिखाया गया हैउप-सेलुलर संकल्प के साथ, एक इमेजिंग थ्रूपुट पर 100,000 से अधिक कोशिकाओं / एस के रूप में पारंपरिक समय-खंड इमेजिंग की इमेजिंग अवधारणा के आधार पर, जो अल्ट्राफाइड ब्रॉडबैंड लेजर दालों के इस्तेमाल से ऑल ऑप्टिकल इमेज एन्कोडिंग और पुनर्प्राप्ति पर निर्भर करता है, एटीओएम अनब्लेलैड / अस्थिर कोशिकाओं की छवि कंट्रास्ट को बढ़ाकर अग्रिम इमेजिंग प्रदर्शन को बढ़ाता है। कोशिकाओं की चरण-ढालगत जानकारी तक पहुंचने से यह हासिल किया जा सकता है, जिसे एक शॉट ब्रॉडबैंड दालों में दिखाया गया है। इसलिए, एटॉम एकल-सेल आकारिकी और बनावट के उच्च-थ्रुपुट माप में विशेष रूप से फायदेमंद है - सेल प्रकार, राज्यों, और यहां तक ​​कि फ़ंक्शन के सूचना संकेतक। अंततः, यह कोशिकाओं के बायोफिजिकल फेनोटाइपिंग के लिए एक शक्तिशाली इमेजिंग प्रवाह cytometry प्लेटफ़ॉर्म बन सकता है, जो कि वर्तमान राज्य के अत्याधुनिक जैव-रासायनिक-मार्कर-आधारित सेलुलर परख का समर्थन करता है। यह काम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है जो एटीओएम प्रणाली के मुख्य मॉड्यूल स्थापित करता है (ऑप्टिकल फ्रंटएंड से डेटा पी मेंRocessing और विज़ुअलाइज़ेशन बैकएंड), साथ ही एटम पर आधारित इमेजिंग प्रवाह cytometry के कार्यप्रवाह, उदाहरण के तौर पर मानव कोशिकाओं और सूक्ष्म-शैवाल का उपयोग करते हुए।

<html> यह काम एटॉम द्वारा दो सिंगल-सेल इमेजिंग प्रदर्शनों को दर्शाता है: एक स्तनधारी कोशिकाओं (मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर सेल (पीबीएमसी) और स्तन कैंसर कोशिकाओं (एमसीएफ -7)) और दूसरा एक फाइप्...

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Microfluidic Imaging Flow Cytometry by Asymmetric-detection Time-stretch Optical Microscopy ATOM

इस प्रोटोकॉल में अल्ट्राफाइड माइक्रोफ्लिडिक प्रवाह में एक सेल इमेजिंग के लिए एक असममित-पहचान समय-खंड ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी सिस्टम के कार्यान्वयन और इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री में उसके अनुप्रयोगों का वर्णन है।

असममित-पहचान द्वारा माइक्रोफ़्लुइड इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री समय-विस्तार ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी (एटीओएम)

Scaling the number of measurable parameters, which allows for multidimensional data analysis and thus higher-confidence statistical results, has been the ...

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Microfluidic Imaging Flow Cytometry by Asymmetric-detection Time-stretch Optical Microscopy (ATOM)

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Uniform and size-controllable poly (ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) droplets could be produced via the flow focusing process in a microfluidic device. ...