Name: induction of cellular differentiation and single cell imaging of vibrio parahaemolyticus swimmer and swarmer cells
Uploaded: 2017-05-15T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells at JoVE.com

Bu çalışma Max Planck Topluluğu tarafından desteklendi.

1. Elektro-yetkili V. parahaemolyticus Hücrelerinin Hazırlanması ve Plasmid DNA&#39;nın Yüzücü Hücrelere Elektroporasyonu NOT: Protokolün aşağıdaki bölümü, elektro-yetkili hücrelerin hazırlanmasına ve ardından plazmid DNA&#39;nın yüzücüler hücrelerine elektroporasyonuna olanak tanır. Floresan proteinler bir plasmidden ektopik olarak eksprese ediliyorsa, bu adım önemlidir. <ol><li> V. parahaemolyticus hücrelerini -80 ° C gliserol stoğundan, 10...

<ol>
	<li>McCarter, L., Hilmen, M., Silverman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flagellar+dynamometer+controls+swarmer+cell+differentiation+of+V.+parahaemolyticus.">Flagellar dynamometer controls swarmer cell differentiation of V. parahaemolyticus.</a> Cell. 54 (3), 345-351 (1988).</li><li>Kawagishi, I., Imagawa, M., Imae, Y., McCarter, L., Homma, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sodium-driven+polar+flagellar+motor+of+marine+Vibrio+as+the+mechanosensor+that+regulates+lateral+flagellar+expression.">The sodium-driven polar flagellar motor of marine Vibrio as the mechanosensor that regulates lateral flagellar expression.</a> Mol. Microbiol. 20 (4), 693-699 (1996).</li><li>Ulitzur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+swarming+in+Vibrio+parahaemolyticus.">Induction of swarming in Vibrio parahaemolyticus.</a> Arch. Microbiol. 101 (4), 357-363 (1974).</li><li>Ulitzur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+temperature,+salts,+pH,+and+other+factors+on+the+development+of+peritrichous+flagella+in+Vibrio+alginolyticus.">Effect of temperature, salts, pH, and other factors on the development of peritrichous flagella in Vibrio alginolyticus.</a> Arch. Microbiol. 104 (3), 285-288 (1975).</li><li>Ulitzur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanism+of+swarming+of+Vibrio+alginolyticus.">The mechanism of swarming of Vibrio alginolyticus.</a> Arch. Microbiol. 104 (1), 67-71 (1975).</li><li>Gode-Potratz, C. J., Chodur, D. M., McCarter, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+iron+regulate+swarming+and+type+III+secretion+in+Vibrio+parahaemolyticus.">Calcium and iron regulate swarming and type III secretion in Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Bacteriol. 192 (22), 6025-6038 (2010).</li><li>McCarter, L., Silverman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iron+regulation+of+swarmer+cell+differentiation+of+Vibrio+parahaemolyticus.">Iron regulation of swarmer cell differentiation of Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Bacteriol. 171 (2), 731-736 (1989).</li><li>Gode-Potratz, C. J., Kustusch, R. J., Breheny, P. J., Weiss, D. S., McCarter, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+sensing+in+Vibrio+parahaemolyticus+triggers+a+programme+of+gene+expression+that+promotes+colonization+and+virulence.">Surface sensing in Vibrio parahaemolyticus triggers a programme of gene expression that promotes colonization and virulence.</a> Mol. Microbiol. 79 (1), 240-263 (2011).</li><li>Heering, J., Ringgaard, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+Localization+of+Chemotactic+Signaling+Arrays+during+the+Lifecycle+of+Vibrio+parahaemolyticus.">Differential Localization of Chemotactic Signaling Arrays during the Lifecycle of Vibrio parahaemolyticus.</a> Front Microbiol. 7 (November), 1-12 (2016).</li><li>Cameron, T. A., Anderson-Furgeson, J., Zupan, J. R., Zik, J. J., Zambryski, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptidoglycan+synthesis+machinery+in+Agrobacterium+tumefaciens+during+unipolar+growth+and+cell+division.">Peptidoglycan synthesis machinery in Agrobacterium tumefaciens during unipolar growth and cell division.</a> mBio. 5 (3), (2014).</li><li>Development Core Team, R. F. F. S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R:+A+Language+and+Environment+for+Statistical+Computing.">R: A Language and Environment for Statistical Computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. 1, 2673 (2008).</li><li>Ringgaard, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ParP+prevents+dissociation+of+CheA+from+chemotactic+signaling+arrays+and+tethers+them+to+a+polar+anchor.">ParP prevents dissociation of CheA from chemotactic signaling arrays and tethers them to a polar anchor.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (2), E255-E264 (2014).</li><li>Ringgaard, S., Schirner, K., Davis, B. M., Waldor, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+family+of+ParA-like+ATPases+promotes+cell+pole+maturation+by+facilitating+polar+localization+of+chemotaxis+proteins.">A family of ParA-like ATPases promotes cell pole maturation by facilitating polar localization of chemotaxis proteins.</a> Genes Dev. 25, 1544-1555 (2011).</li><li>Vischer, N. O. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+age+dependent+concentration+of+Escherichia+coli+divisome+proteins+analyzed+with+ImageJ+and+ObjectJ.">Cell age dependent concentration of Escherichia coli divisome proteins analyzed with ImageJ and ObjectJ.</a> Front Microbiol. 6 (JUN), (2015).</li><li>Schneider, C. a., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat. Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li><li>Sliusarenko, O., Heinritz, J., Emonet, T., Jacobs-Wagner, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput,+subpixel+precision+analysis+of+bacterial+morphogenesis+and+intracellular+spatio-temporal+dynamics.">High-throughput, subpixel precision analysis of bacterial morphogenesis and intracellular spatio-temporal dynamics.</a> Mol. Microbiol. 80 (3), 612-627 (2011).</li><li>Ducret, A., Quardokus, E. M., Brun, Y. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicrobeJ,+a+tool+for+high+throughput+bacterial+cell+detection+and+quantitative+analysis.">MicrobeJ, a tool for high throughput bacterial cell detection and quantitative analysis.</a> Nat. Microbiol. 1, 16077 (2016).</li><li>Carpenter, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellProfiler:+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes.">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biol. 7 (10), R100 (2006).</li><li>Morales-Soto, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+Imaging,+and+Quantification+of+Bacterial+Surface+Motility+Assays.">Preparation, Imaging, and Quantification of Bacterial Surface Motility Assays.</a> J. Vis. Exp. (98), e52338 (2015).</li><li>Paintdakhi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oufti:+An+integrated+software+package+for+high-accuracy,+high-throughput+quantitative+microscopy+analysis.">Oufti: An integrated software package for high-accuracy, high-throughput quantitative microscopy analysis.</a> Mol. Microbiol. 99 (4), 767-777 (2016).</li><li>de Jong, I. G., Beilharz, K., Kuipers, O. P., Veening, J. -. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+Cell+Imaging+of+Bacillus+subtilis+and+Streptococcus+pneumoniae+using+Automated+Time-lapse+Microscopy.">Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy.</a> J. Vis. Exp. (53), e1-e6 (2011).</li></ol>

Bu yazıda, V. parahaemolyticus swarmer hücrelerinin mikroskopik görüntülemesi için bir yöntem ve bunun ardından, çalışılan floresanla işaretlenmiş proteinlerin subselüler lokalizasyonunu ve diğer özelliklerini çözmek ve nicelleştirmek üzere akış aşağı analizler sunulmaktadır. Mikroskopi görüntü işleme ve analizi için 14 , 15 , 16 , 17 , <sup ...

Bakteriler sürekli olarak dış ortamlarında değişiklikler yaşarlar ve davranışlarını buna göre değiştirmek ve uyarlamak için çeşitli teknikler geliştirdiler. Böyle bir mekanizma, değişen çevreyi daha iyi tamamlayan farklı hücre türlerine farklılaşmayı içerir. Farklılaşma çoğunlukla hücre döngüsünün düzenlenmesinde, hücre morfolojisindeki ve hücrelerin zamansal organizasyonunda büyük değişiklikler içerir. Farklılaşabilen bir organizma Vibrio parahaemolyticus&#39;tur . V. parahaemolyticus genellikle taze veya tuzlu suda yaşayan bir proteobakteriler ailesi olan Vibrionaceae&#39;ye aittir. Vibrionaceae , çevrede yaygın olarak bulunur ve insanlarda bağırsak yolları enfeksiyonlarına neden olan çeşitli türleri içerir; ayrıca Vibrio cholerae.V de dahildir. Parahaemolyticus dimorfik bir organizmadır ve değişikliklere uyum sağlamak için iki farklı hücre tipine cevap olarak cevap verebilirDış çevre. Sulu ortamlarda, eski hücre direğine yerleştirilmiş tek bir polar flagellum ile kısa çubuk şeklinde bir yüzücü hücre bulunur. Yüzey teması üzerine, daha yapışkan bir hücrede farklılaşma tetiklenir. Swarmer hücre farklılaşması iki önemli değişiklik içerir: hücre bölünmesinin önlenmesi yoluyla swarmer hücre morfogenezi ve ikinci bir flagella sisteminin indüksiyonu. Bu, bölünmüş olayların döl hücreleri hücrelerinde sonuçlandığı veya alternatif olarak yüzücüler hücrelerine geri dönüştürebildiği, kiraz yaşam biçimine devam edebilen, peritrik ve oldukça uzatılmış uzunlamasına çubuk şeklinde bir swarmer hücresinin oluşumuyla sonuçlanır. Swarmer farklılaşmasını başlatan veya etkileyen çeşitli faktörlerin bildirildiği bildirilmiştir. Birincil uyarı, V. parahaemolyticus&#39;un , polar lekeliği, yüzey temasında rotasyonun inhibisyonunu tespit eden bir dokunmatik sensör olarak kullandığı mekanosensing tarafından yönlendirilir gibi görünür; ancak, diğer birçok faktör,Iyi 1 . Laboratuarda, polar flagellumun dönüşü, sodyum kanalına bağlı bayraker rotasyonunu bloke eden fenamil ilavesiyle yapay olarak inhibe edilebilmekte ve böylelikle swarmer diferansiyasyonunu indükleyebilmektedir 2 . Ayrıca, daha önceki bir çalışmada, hücreler berrak plastik bantlarla mühürlenmiş bir Petri kabı içindeki büyüme ortamı üzerinde çoğaldığında Vibrio alginolyticus , katı medyada sürüklenmeye teşvik edildi. Alkali doymuş filtre kağıdı, bu koşullar altında yığılmayı engelledi ve bu nedenle, bir veya daha fazla uçucu asitin, kınlama indüksiyonunda rol oynayabileceğini düşündürdü. Böylece, Petri kabını plastik bant ile sızdırmazlık, plakanın baş alanı içinde, hücresel metabolizmanın yan ürünleri olarak oluşan uçucu asitlerin birikmesine muhtemelen izin verdi. Aynı etki, ortam bileşenlerini hidrolize ederek yapay olarak uçucu asitler üretmek için H2O2 büyütülmüş ortama yapıştırılmamış Petri kaplarında ilave edildiğinde elde edilmiştir <supClass = &quot;xref&quot;&gt; 3 , 4 , 5 . Bununla birlikte, bu uçucu asitlerin kimliği hala bilinmiyor. Dahası, kalsiyumun aşırı miktarda bulunması 6 ve demir sınırlamanın 7 hem katı yüzeylerde swarmer farklılaşmasını ve çoğalmasını arttırdığı gösterilmiştir. Hücreler, pulverideki farklılaşmayı etkilediği gösterilen büyüme ortamına 2,2&#39;-Bipiridil bileşiği eklenerek demir için aç bırakılabilir 8 . Farklılaşmayı düzenleyen bilinen faktörler, artık V. parahaemolyticus&#39;un swarmer hücrelere diferansiyasyonunu ve katı agar yüzeylerinde proliferasyonunu teşvik eden bir protokolün tasarımında uygulanmaktadır. V. parahaemolyticus farklılaşması, hücre bölünmesinin düzenlenmesinde, hücresel morfolojide ve flagell gibi makromoleküler makinelerin konumlandırılmasında büyük değişiklikler içerirA ve kemotaks aparatları - bunların hepsi, proteinlerin hücre döngüsüne göre spesifik lokalizasyonunu gerektiren süreçler. Dolayısıyla, bu proteinlerin hücre içi lokalizasyonunu inceleme kabiliyeti, yukarıda sözü edilen hücresel süreçlerin anlaşılması için gereklidir. Bu tür çalışmaları yapmak için tekli hücrelerde flüoresan mikroskobu gereklidir. Swarmer hücrelerinde olduğu gibi, yoğun bakteri popülasyonlarında bulunan hücreleri görüntülerken bu özellikle zorlayıcı olabilir. Mikroskopi çalışmaları için potansiyel olarak tek hücreler üretebilen sıvı ortamda swarmer farklılaşmasına neden olan girişimler yapılmıştır. Transkripsiyonel bir seviyede bu hücreler kısmen swarmer-differentiation programını başlatmış olsalar da, katı ortam 8 üzerinde yetiştirilen tam olarak ayırt edilmiş swarmer hücreleri gibi aynı morfolojik değişikliklere maruz kalmazlar. Bu makale, swarmer ce&#39;yi indüklemek için sağlam ve tekrarlanabilir bir protokol sunmaktadır.Bir agar yüzeyinde farklılaşma. Protokol, tek hücreli mikroskopi ve takip eden analiz için kolaylıkla erişilebilen bir swarmer hücreleri popülasyonu hazırlar. Ayrıca, protokol hem yüzücü hem de swarmer hücre türlerinde (bölüm 1, 2, 3, 4) floresan etiketli proteinlerin yerini belirleme çalışmalarını mümkün kılar. Ek olarak, protokol, bakteri toplumlarının demografik analizine olanak tanıyan flüoresan mikroskopi deneylerinden elde edilen verilerin nasıl işleneceği ve analiz edileceği üzerine sonraki iş akışını tanımlamaktadır (bölüm 5).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Media components</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB-medium</td>
			<td>Roth</td>
			<td>X968.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Agar, granulated</td>
			<td>BD</td>
			<td>214510</td>
			<td>For preparation of LB agar with LB-medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Heart Infusion Agar</td>
			<td>BD</td>
			<td>244400</td>
			<td>For preparation of HI agar swarming plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose NEEO, ultra quality</td>
			<td>Roth</td>
			<td>2267.3</td>
			<td>For preparation of microscopy agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Additives</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-arabinose</td>
			<td>Roth</td>
			<td>5118.3</td>
			<td>Used to induce pBAD derivatives</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2`-Bipyridyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D216305-25G</td>
			<td>For preparation of HI agar swarming plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Roth</td>
			<td>5239.1</td>
			<td>For preparation of HI agar swarming plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin sodium salt</td>
			<td>Roth</td>
			<td>K029.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloramphenicol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>3886.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Standard recipe for Phosphate-buffered saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+) Sucrose</td>
			<td>Roth</td>
			<td>4621.1</td>
			<td>For preparation of electrocompetent cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Roth</td>
			<td>3783.5</td>
			<td>For preparation of electrocompetent cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardware</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 150x20mm with cams</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>82.1184.500</td>
			<td>For preparation of HI agar swarming plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>kelvitron t (B 6420)</td>
			<td>Heraeus</td>
			<td>-</td>
			<td>Used for drying HI agar swarming plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gene Pulser Xcell Microbial System</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1652662</td>
			<td>Used for elctroporation of plasmid DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph Offline (version 7.7.5.0)</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>-</td>
			<td>Used for microscopy image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>-</td>
			<td>Used for microscopy data analsis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of cellular differentiation and single cell imaging of vibrio parahaemolyticus swimmer and swarmer cells

Proteinlerin hücre içi lokalizasyonunu inceleme kabiliyeti birçok hücresel sürecin anlaşılması için gereklidir. Buna karşılık, bu, bakteri toplulukları içinde varolan hücreleri görüntülerken özellikle zorlayıcı olabilen floresan mikroskopisi için tekli hücreler elde etme yeteneğini gerektirir. Örneğin, insan patojeni Vibrio parahaemolyticus sıvı koşullar altında kısa çubuk şeklindeki yüzücü hücreler olarak bulunur ve yüzey teması üzerine katı yüzeyler üzerinde büyümek için uzmanlaşmış oldukça genişlemiş swarmer hücrelerin bir alt popülasyonuna ayrılır. Bu yazıda V. parahaemolyticus&#39;un iki farklı durumundaki tek hücreli floresans mikroskobu analizini gerçekleştirmek için bir yöntem sunulmaktadır. Bu protokol, V. parahaemolyticus&#39;un daha canlı bir hücre yaşam döngüsüne çok reproducibly farklılaşmasına neden olur ve katı yüzeyler üzerindeki proliferasyonunu kolaylaştırır. Metod, t lekelerinden uzanan farklı swarmer hücrelerinin fişeklerini üretir.O sürü koloni kenarında. Özellikle, sürü alevlerinin ucunda, daha sürükleyici hücreler, tek bir hücrenin katmanında bulunur; bu da, bir mikroskop lamına kolay aktarılmalarına ve daha sonra tek hücrelerin izlenmesi için flüoresans mikroskobu görüntülemelerine olanak tanır. Ek olarak, bakteri toplumlarının demografik temsili için görüntü analizinin iş akışı sunulmaktadır. Prensip olarak, V. parahaemolyticus&#39;un yüzücü ve swarmer hücrelerindeki kemotaksis sinyal dizilerinin hücre içi lokalizasyonunun analizi açıklanmaktadır.

Farklılaşma ve toplayıcı koloni üretiminin teşvik edilmesi Şekil 1 , V. parahaemolyticus&#39;un toplayıcı kolonilerinin üretilmesiyle ilgili önemli adımların bir şemasını sunmaktadır ( Şekil 1A-C ). Sürücüler kültürü sürü-agar üzerinde gözlendi ve 24 o C&#39;de inkübe edildi, katı agar yüzeyi üzerinde swarmer farklılaşması ve çoğal...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells at JoVE.com

Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells

Bu protokol, farklı olarak farklı Vibrio parahaemolyticus yüzücü ve swarmer hücrelerinin tek hücreli mikroskobu sağlar. Yöntem, tek hücreli analiz için kolayca bulunabilen bir swarmer hücreleri popülasyonu üretir ve hücre kültürlerinin hazırlanmasını, swarmer farklılaşmasının indüksiyonunu, numunenin hazırlanmasını ve görüntü analizini kapsar.

Hücresel Farklılaşma ve Tek Hücreli Görüntüleme İndüksiyonu<emVibrio parahaemolyticus</em&gt; Yüzücü ve Swarmer Hücreleri

The ability to study the intracellular localization of proteins is essential for the understanding of many cellular processes. In turn, this requires the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Kolonizasyon Euprymna scolopes Squid tarafından Vibrio fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

T Hücreleri İçin Kantitatif Yüksek throughput Tek hücreli Sitotoksisite Testi

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Klinik Uygulama<em&gt; Sleeping Beauty</emGenetiği Periferik ve Göbek Kordon Kanı alınan T hücreleri Değiştir Sunan Hücreler&gt; ve Yapay Antijen

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

İzolasyon ve naif CD4 T Lenfositler Th17 Farklılaşma

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Cortical Actin Flow in T Cells Quantified by Spatio-temporal Image Correlation Spectroscopy of Structured Illumination Microscopy Data

Yapılandırılmış Aydınlatma Mikroskopi Verilerinin uzay-zamansal Görüntü Korelasyon Spektroskopisi nicel T Hücreleri kortikal Aktin Akışı

Filamentous-actin plays a crucial role in a majority of cell processes including motility and, in immune cells, the formation of a key cell-cell ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Tespiti için daha duyarlı ve özgül Chromogenic Agar Orta Gelişimi<em&gt; Vibrio parahaemolyticus</em&gt; Ve Diğer<em&gt; Vibrio</em&gt; Türler

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

Highly Multiplexed, Super-resolution Imaging of T Cells Using madSTORM

Madstorm kullanarak T hücrelerinin çok yönlü, süper çözünürlüklü görüntüsü

Imaging heterogeneous cellular structures using single molecule localization microscopy has been hindered by inadequate localization precision and ...

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-&#945;

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â±

Geliştirme ve doğrulama vericiyi bir tek molekül dijital enzim bağlı Immunosorbent Assay insan Interferon-α için dizi

The main aim of this protocol is to describe the development and validation of an interferon (IFN)-&#945; single molecule array digital Enzyme-Linked ...

Assessing Cellular Stress and Inflammation in Discrete Oxytocin-secreting Brain Nuclei in the Neonatal Rat Before and After First Colostrum Feeding

Hücresel stres ve ayrık oksitosin salgılayan beyin çekirdekleri içinde yenidoğan sıçan iltihabı önce ve sonra ilk kolostrum besleme değerlendirilmesi

The goal of this protocol is to isolate oxytocin-receptor rich brain nuclei in the neonatal brain before and after first colostrum feeding. The expression ...

Functionalization of Atomic Force Microscope Cantilevers with Single-T Cells or Single-Particle for Immunological Single-Cell Force Spectroscopy

Tek-T hücreleri veya tek parçacık Immünolojik tek hücreli kuvvet spektroskopisi ile Atomic Force mikroskop Cantilevers functionalization

Atomic force microscopy based single cell force spectroscopy (AFM-SCFS) is a powerful tool for studying biophysical properties of living cells. This ...