Name: new methods to study gustatory coding
Uploaded: 2017-06-29T15:00:00
Duration: 10 min 59 s
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Este trabajo fue apoyado por una subvención intramural de NIH-NICHD a MS Agradecemos a G. Dold y T. Talbot de la NIH-NIMH Instrumentation Core Facility para la asistencia con el diseño del sistema de suministro de saborizante.

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	<li>Chandrashekar, J., Hoon, M. A., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptors+and+cells+for+mammalian+taste.">The receptors and cells for mammalian taste.</a> Nature. 444 (7117), 288-294 (2006).</li><li>Chen, X., Gabitto, M., Peng, Y., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Gustotopic+Map+of+Taste+Qualities+in+the+Mammalian+Brain.">A Gustotopic Map of Taste Qualities in the Mammalian Brain.</a> Science. 333 (6047), (2011).</li><li>Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+Sense+about+Taste:+From+Mammals+to+Insects.">Common Sense about Taste: From Mammals to Insects.</a> Cell. 139 (2), 234-244 (2009).</li><li>Mueller, K. L., Hoon, M. A., Erlenbach, I., Chandrashekar, J., Zuker, C. S., Ryba, N. J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptors+and+coding+logic+for+bitter+taste.">The receptors and coding logic for bitter taste.</a> Nature. 434 (7030), 225-229 (2005).</li><li>Zhao, G. Q., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+receptors+for+mammalian+sweet+and+umami+taste.">The receptors for mammalian sweet and umami taste.</a> Cell. 115 (3), 255-266 (2003).</li><li>Huang, A. L., Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cells+and+logic+for+mammalian+sour+taste+detection.">The cells and logic for mammalian sour taste detection.</a> Nature. 442 (7105), 934-938 (2006).</li><li>Pfaffmann, C., Carl, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+afferent+code+for+sensory+quality.">The afferent code for sensory quality.</a> Am Psychol. 14 (5), 226-232 (1959).</li><li>Lemon, C. H., Katz, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+processing+of+taste.">The neural processing of taste.</a> BMC Neurosci. 8 (Suppl 3), (2007).</li><li>Barretto, R. P. J., Gillis-Smith, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neural+representation+of+taste+quality+at+the+periphery.">The neural representation of taste quality at the periphery.</a> Nature. 517 (7534), 373-376 (2015).</li><li>Reiter, S., Campillo Rodriguez, C., Sun, K., Stopfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+Coding+of+Individual+Chemicals+by+the+Gustatory+System.">Spatiotemporal Coding of Individual Chemicals by the Gustatory System.</a> J Neurosci. 35 (35), 12309-12321 (2015).</li><li>Wilson, D. M., Boughter, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bitter+Taste+Stimuli+Induce+Differential+Neural+Codes+in+Mouse+Brain.">Bitter Taste Stimuli Induce Differential Neural Codes in Mouse Brain.</a> PLoS ONE. 7 (7), e41597 (2012).</li><li>Glendinning, J. I., Davis, A., Ramaswamy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+different+taste+cells+and+signaling+pathways+to+the+discrimination+of+"bitter"+taste+stimuli+by+an+insect.">Contribution of different taste cells and signaling pathways to the discrimination of "bitter" taste stimuli by an insect.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 22 (16), 7281-7287 (2002).</li><li>Kay, L. M., Stopfer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Information+processing+in+the+olfactory+systems+of+insects+and+vertebrates.">Information processing in the olfactory systems of insects and vertebrates.</a> Semin Cell Dev Biol. 17 (4), 433-442 (2006).</li><li>Liman, E. R., Zhang, Y. V., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+Coding+of+Taste.">Peripheral Coding of Taste.</a> Neuron. 81 (5), 984-1000 (2014).</li><li>Carleton, A., Accolla, R., Simon, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coding+in+the+Mammalian+Gustatory+System.">Coding in the Mammalian Gustatory System.</a> Trends Neurosci. 33 (7), 326-334 (2010).</li><li>Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+organization+of+the+chemosensory+system+in+Drosophila+melanogaster:+a+rewiew.">The organization of the chemosensory system in Drosophila melanogaster: a rewiew.</a> Cell Tissue Res. 275 (1), 3-26 (1994).</li><li>Mitchell, B. K., Itagaki, H., Rivet, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+and+central+structures+involved+in+insect+gustation.">Peripheral and central structures involved in insect gustation.</a> Microsc Res Tech. 47 (6), 401-415 (1999).</li><li>Falk, R., Bleiser-Avivi, N., Atidia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labellar+taste+organs+of+Drosophila+melanogaster.">Labellar taste organs of Drosophila melanogaster.</a> J Morphol. 150 (2), 327-341 (1976).</li><li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+a+primary+chemoreceptor+unit.">Physiology of a primary chemoreceptor unit.</a> Science. 122 (3166), 417-418 (1955).</li><li>Delventhal, R., Kiely, A., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recording+from+Drosophila+labellar+taste+sensilla.">Electrophysiological recording from Drosophila labellar taste sensilla.</a> J Vis Exp. (84), e51355 (2014).</li><li>Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+and+cellular+basis+of+bitter+taste+in+Drosophila).">The molecular and cellular basis of bitter taste in Drosophila).</a> Neuron. 69 (2), 258-272 (2011).</li><li>Descoins, C., Marion-Poll, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+responses+of+gustatory+sensilla+of+Mamestra+brassicae+(Lepidoptera,+Noctuidae)+larvae+to+three+ecdysteroids:+ecdysone,+20-hydroxyecdysone+and+ponasterone.">Electrophysiological responses of gustatory sensilla of Mamestra brassicae (Lepidoptera, Noctuidae) larvae to three ecdysteroids: ecdysone, 20-hydroxyecdysone and ponasterone.</a> A. J Insect Physiol. 45 (10), 871-876 (1999).</li><li>Popescu, A., Couton, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+central+projections+of+gustatory+receptor+neurons+on+the+antenna+of+the+noctuid+moth+Spodoptera+littoralis.">Function and central projections of gustatory receptor neurons on the antenna of the noctuid moth Spodoptera littoralis.</a> J Comp Physiol. 199 (5), 403-416 (2013).</li><li>Morita, H., Yamashita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generator+potential+of+insect+chemoreceptor.">Generator potential of insect chemoreceptor.</a> Science. 130 (3380), 922 (1959).</li><li>Davis, N. T., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroanatomy+of+the+sucking+pump+of+the+moth,+Manduca+sexta+(Sphingidae,+Lepidoptera).">Neuroanatomy of the sucking pump of the moth, Manduca sexta (Sphingidae, Lepidoptera).</a> Arthropod Struct Dev. 35 (1), 15-33 (2006).</li><li>St&#252;rckow, B., Adams, J. R., Wilcox, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Neurons+in+the+Labellar+Nerve+of+the+Blow+Fly.">The Neurons in the Labellar Nerve of the Blow Fly.</a> Z Vergl Physiol. 54, 268-289 (1967).</li><li>St&#252;rckow, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+studies+of+a+single+taste+hair+of+the+fly+during+stimulation+by+a+flowing+system.">Electrophysiological studies of a single taste hair of the fly during stimulation by a flowing system.</a> Proceed 16 Intern Contr Zool. 3 (8), 102-104 (1963).</li><li>Christensen, T. A., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male-specific,+sex+pheromone-selective+projection+neurons+in+the+antennal+lobes+of+the+moth+Manduca+sexta.">Male-specific, sex pheromone-selective projection neurons in the antennal lobes of the moth Manduca sexta.</a> J Comp Physiol A. 160, 553-569 (1987).</li><li>Reiter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gustatory Information Processing. , (2014).</li><li>Saha, D., Leong, K., Katta, N., Raman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-unit+Recording+Methods+to+Characterize+Neural+Activity+in+the+Locust+(Schistocerca+Americana)+Olfactory+Circuits.">Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits.</a> J Vis Exp. (71), (2013).</li><li>Pouzat, C., Mazor, O., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+noise+signature+to+optimize+spike-sorting+and+to+assess+neuronal+classification+quality.">Using noise signature to optimize spike-sorting and to assess neuronal classification quality.</a> J Neurosci Methods. 122 (1), 43-57 (2002).</li><li>Hill, D. N., Mehta, S. B., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+Metrics+to+Accompany+Spike+Sorting+of+Extracellular+Signals.">Quality Metrics to Accompany Spike Sorting of Extracellular Signals.</a> J Neurosci. 31 (24), 8699-8705 (2011).</li><li>Fee, M. S., Mitra, P. P., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+sorting+of+multiple+unit+neuronal+signals+in+the+presence+of+anisotropic+and+non-Gaussian+variability.">Automatic sorting of multiple unit neuronal signals in the presence of anisotropic and non-Gaussian variability.</a> J Neurosci Methods. 69 (2), 175-188 (1996).</li><li>Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mushroom+body+memoir:+from+maps+to+models.">Mushroom body memoir: from maps to models.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (4), 266-275 (2003).</li><li>Naraghi, M., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odorant-induced+oscillations+in+the+mushroom+bodies+of+the+locust.">Odorant-induced oscillations in the mushroom bodies of the locust.</a> J Neurosci. 14, 2993-3004 (1994).</li><li>Laurent, G., Wehr, M., Davidowitz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+representations+of+odors+in+an+olfactory+network.">Temporal representations of odors in an olfactory network.</a> J Neurosci. 16, 3837-3847 (1996).</li><li>Perez-Orive, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillations+and+sparsening+of+odor+representations+in+the+mushroom+body.">Oscillations and sparsening of odor representations in the mushroom body.</a> Science. 297, 359-365 (2002).</li><li>Stopfer, M., Jayaraman, V., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+identity+vs.+intensity+coding+in+an+olfactory+system.">Odor identity vs. intensity coding in an olfactory system.</a> Neuron. 39, 991-1004 (2003).</li><li>Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+network+dynamics+and+the+coding+of+multidimensional+signals.">Olfactory network dynamics and the coding of multidimensional signals.</a> Nature Re Neurosci. 3, 884-895 (2002).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Los métodos aquí descritos permiten las grabaciones in vivo de un animal relativamente simple, Manduca sexta , para caracterizar la actividad de GRNs múltiples seleccionados al azar durante largas duraciones (durante más de 2 h), antes, durante y después del parto de saborizante. Estos métodos también permiten la entrega rápida y secuencial de estímulos tastantes múltiples con control temporal preciso, ventajas que son útiles para estudiar los mecanismos neuronales subyacentes a la representación del saborizante. Este protocolo se ha utilizado para estudiar cómo las respuestas de GRNs a los tastants se transforman cuando se transmiten a sus neuronas objetivo postsinápticas ( por ejemplo, en la SEZ) mediante la monitorización de GRNs simultáneamente conectados monosinápticamente interneuronas [ 10] . Además, estos métodos pueden adaptarse a las necesidades del experimentador, permitiendo la ejecución de paradigmas complejos para estudiar aspectos fundamentales de la codificación gustativa. Cuando empieceEn nuestros estudios, un problema técnico que a veces tuvimos que solucionar fue la incapacidad de detectar las señales de clavado del nervio maxilar con los cables del tetrodo. Las posibles causas de esto son diversas, ya que el protocolo de disección es un desafío, y alguna práctica es necesaria para obtener una buena preparación. En primer lugar, durante la disección de la polilla los nervios maxilares son fáciles de dañar, especialmente durante la eliminación de la envoltura que rodea el tejido nervioso. En segundo lugar, si la vaina no se retira completamente, los cables del tetrodo pueden no ser capaces de acceder al nervio. En ambos casos, comenzar una nueva preparación es a menudo la manera más fácil de resolver estos problemas. En tercer lugar, puede haber un problema con los cables de tetrodo. Esto se puede comprobar midiendo la impedancia de los alambres que debe ser ~ 270 kΩ en 1kHz. Si el valor de la impedancia es superior a 300 kΩ, aplique los hilos metálicos con oro para obtener la impedancia deseada (véase la referencia 30 ). En cuarto lugar, un equipo puede estar mal conectadoO mal comportamiento. Otro posible problema es que se registran señales de picos, pero la (s) neurona (s) no responden a los tastantes. Esto podría ser debido a que las neuronas registradas son insensibles al conjunto de tastantes entregados. Además, es importante tener en cuenta que además de los axones de GRNs, el nervio maxilar también lleva fibras mecanosensoriales. Por lo tanto, es posible grabar de las neuronas mechanosensory en lugar de, o en adición a, GRNs. Sin embargo, el sistema de suministro de saborizante está diseñado para proporcionar un aporte mecánico constante a lo largo del experimento, haciendo improbable que las respuestas a un saborizante sean confundidas por las respuestas al componente mecánico de su suministro. Las neuronas que responden a algunos pero no a otros tastantes, o de diferentes maneras a diferentes tastantes, se pueden clasificar inequívocamente como GRNs. Recomendamos el uso de tostantes recién diluidos para evitar variaciones en la concentración o composición del saborizante debido a la degradación o evaporación del compuestoDel disolvente. También recomendamos limpiar el sistema con regularidad para evitar la contaminación del tubo y / o obstrucciones. Otro posible problema técnico es una relación señal-ruido desventajosa. Este problema puede resolverse a menudo mediante la renovación o el ajuste de la posición del electrodo de tierra del baño. Otras soluciones pueden requerir blindaje y minimizar la longitud de cada conexión eléctrica en el aparato. Por último, es importante señalar que el análisis correcto de los datos obtenidos mediante grabaciones de tetrodos requiere una cuidadosa clasificación por punta. Encontramos que los métodos completamente automatizados son generalmente inadecuados. Recomendamos familiarizarse con la literatura de clasificación de espigas antes de analizar los datos de tetrodo 10 , 29 , 31 , 32 , 33 . Alternativas a nuestra disecciónTocol puede ser utilizado. Aquí se describe una disección a través de la parte ventral de la cabeza de la polilla, que proporciona acceso a los nervios maxilares y SEZ, pero también es posible acceder a estas estructuras por disección a través del lado dorsal. Encontramos que la preparación del lado dorsal no es óptima para hacer grabaciones de estas estructuras gustativas debido a su ubicación profunda, pero esta preparación ofrece la ventaja de permitir grabaciones de estructuras de orden superior, como el cuerpo de hongo, un área que ha sido asociada con multi - integración sensorial, aprendizaje asociativo y procesamiento de la memoria 34 . Nos hemos centrado en el uso de electrodos de tetrodo para grabar desde el nervio maxilar, pero, como hemos ilustrado, también se pueden utilizar electrodos afilados intracelulares estándar para este propósito. Además, ambas técnicas se pueden combinar para realizar grabaciones simultáneas de múltiples áreas cerebrales [ 10] . La literatura de neurociencia ofrece muchos ejemplos de iNvertebrados que han demostrado ser herramientas poderosas para revelar los principios fundamentales del procesamiento sensorial, como la codificación olfativa, que se aplican tanto a los insectos como a los vertebrados 35 , 36 , 37 , 38 , 39 . Esperamos que nuestros métodos lleven a nuevos conocimientos fundamentales sobre la codificación gustativa.

Los sistemas gustativo y olfativo generan representaciones internas de sustancias químicas en el medio ambiente, dando lugar a percepciones de gustos y olores, respectivamente. Estos sentidos químicos son esenciales para obtener numerosos comportamientos críticos para la supervivencia del organismo, que van desde encontrar compañeros y comidas hasta evitar depredadores y toxinas. El proceso comienza cuando los químicos ambientales interactúan con los receptores situados en las membranas plasmáticas de las células sensoriales receptoras; Estas células, directamente oa través de interacciones con neuronas, transducen información sobre la identidad y concentración de sustancias químicas en señales eléctricas. Estas señales se transmiten a neuronas de orden superior ya otras estructuras cerebrales. A medida que estos pasos progresan, la señal original siempre experimenta cambios que promueven la capacidad del organismo de detectar, discriminar, clasificar, comparar y almacenar la información sensorial, y seleccionar una acción apropiada. Comprender cómo el sujetadorEn transforma la información sobre los productos químicos ambientales para realizar mejor una variedad de tareas es una pregunta básica en neurociencia. Se ha pensado que la codificación gustatoria es relativamente simple: una opinión ampliamente sostenida postula que cada molécula química que provoca un sabor (un &quot;saborizante&quot;) pertenece naturalmente a una de las aproximadamente cinco cualidades básicas de sabor ( es decir , dulce, amarga, agria , Salado y umami) 1 . En esta visión del &quot;gusto básico&quot;, el trabajo del sistema gustativo es determinar cuál de estos sabores básicos está presente. Además, los mecanismos neuronales que subyacen a la representación básica del gusto en el sistema nervioso no son claros y se piensa que están gobernados por una &quot;línea marcada&quot; 2 , 3 , 4 , 5 , 6 o un &quot;patrón transversal de fibras&quot; 7 </suP&gt; , 8 código. En un código de línea etiquetado, cada célula sensorial y cada uno de sus seguidores neurales responde a una única cualidad de sabor, formando juntos un canal directo e independiente a centros de procesamiento superiores en el sistema nervioso central dedicado a ese gusto. Por el contrario, en un código de patrón de fibra transversal, cada célula sensorial puede responder a múltiples cualidades gustativas de modo que la información sobre el saborizante está representada por la respuesta global de la población de neuronas sensoriales. Si la información gustativa está representada por gustos básicos, a través de líneas etiquetadas, oa través de algún otro mecanismo, no está claro y es el foco de la investigación reciente 3 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 . Nuestro trabajo reciente sugiere que el sistema gustativo utiliza un código de población spatiotemporal para generarRepresentaciones de tastantes individuales en lugar de categorías básicas de gusto 10 . Aquí ofrecemos 3 nuevas herramientas para ayudar en el estudio de la codificación gustativa. En primer lugar, se sugiere el uso de la hawkmoth Manduca sexta como un organismo modelo relativamente simple susceptible de estudio electrofisiológico del gusto y describir un procedimiento de disección. En segundo lugar, sugerimos el uso de &quot;tetrodos&quot; extracelulares para registrar la actividad de GRNs individuales. Y en tercer lugar, se sugiere un nuevo aparato para la entrega y el seguimiento de pulsos de tastante precisamente sincronizados al animal. Estas herramientas fueron adaptadas de las técnicas de nuestro laboratorio y otros han utilizado para estudiar el sistema olfativo. Insectos como la mosca de la fruta Drosophila melanogaster , la langosta Schistocerca americana , así como la polilla Manduca sexta, han proporcionado desde hace décadas recursos poderosos para entender los principios básicos sobre el nerIncluyendo la codificación sensorial ( p. Ej., El olfato 13 ). En los mamíferos, los receptores del gusto son células especializadas que se comunican con las neuronas a través de vías complejas de segundo mensajero 1 , 14 . Es más sencillo en los insectos: sus receptores del gusto son neuronas. Además, las vías gustativas de mamíferos cerca de la periferia son relativamente complejas, con múltiples rutas neuronales paralelas, y los componentes importantes son difíciles de acceder, contenidos dentro de estructuras óseas pequeñas [ 15] . Las vías del gusto del insecto parecen ser más simples. En los insectos, los GRN están contenidos en estructuras especializadas conocidas como sensilla, localizadas en la antena, piezas bucales, alas y patas 16 , 17 . Los GRNs se proyectan directamente a la zona subesofágica (SEZ), una estructura cuyo papel se ha pensado que es principalmente de tipo gustativo17, y que contiene un segundo ordenNeuronas gustativas 10 . A partir de ahí la información viaja al cuerpo para impulsar los reflejos, ya las áreas cerebrales superiores para ser integradas, almacenadas y, finalmente, para impulsar las elecciones conductuales 16 . Es necesario caracterizar las respuestas gustativas periféricas para comprender cómo se propaga y se transforma la información del gusto de un punto a otro en todo el sistema nervioso. El método más comúnmente usado para monitorear directamente la actividad neural de GRNs en insectos es la técnica de registro de punta 12 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 . Esto implica colocar un electrodo directamente sobre un sensor, muchos de los cuales son relativamente fáciles de acceder. El saborizante se incluye dentro del electrodo, lo que permite activar y extMiden de manera raconular las respuestas neuronales de GRNs en el sensillum. Sin embargo, debido a que el saborizante está contenido en el electrodo, no es posible medir la actividad de GRN antes de que el saborizante sea suministrado o después de ser retirado, o para intercambiar tastantes sin reemplazar el electrodo 20 . Otro método, la técnica de grabación de &quot;pared lateral&quot;, también se ha usado para registrar la actividad de GRNs. Aquí, se inserta un electrodo de registro en la base de un sensor de sabor 24 , y los saborizantes se suministran a través de un capilar de vidrio separado en la punta del sensor. Ambas técnicas restringen la grabación de GRNs a un sensillum particular. Aquí, se sugiere una nueva técnica: la grabación de seleccionados aleatoriamente GRN axones de diferentes sensilla, a la vez que la entrega de secuencias de tastantes a la probóscide. Las grabaciones del axón se logran colocando electrodos de cristal afilados o haces de electrodos extracelulares (tetrodos) en el nervio que lleva los axones deGRNs en la probóscide a la SEZ 10 . En Manduca , estos axones atraviesan el nervio maxilar, que se sabe que es puramente aferente, lo que permite el registro inequívoco de las respuestas sensoriales [ 25] . Este método de registro de axones, permite, durante más de dos horas, la medición estable de GRN respuestas antes, durante y después de una serie de presentaciones de sabor. En este sentido, describimos un procedimiento de disección para exponer los nervios maxilares junto con la SEZ, lo que permite registrar simultáneamente las respuestas de múltiples GRNs y neuronas en la SEZ 10 . También se describe el uso de grabaciones extracelulares de GRNs utilizando un tetrodo de alambre retorcido de 4 canales hecho a la medida que, combinado con un método de clasificación por puntas, permite el análisis de múltiples (en nuestras manos, hasta seis) GRNs simultáneamente. Comparamos también las grabaciones realizadas con tetrodos a grabaciones realizadas conElectrodos Finalmente, describimos un nuevo aparato para la liberación de estímulos tastantes. Adaptado de equipos utilizados por muchos investigadores para suministrar odorantes en estudios de olfacción, nuestro nuevo aparato ofrece ventajas para estudiar gustation: mejorando el sistema de distribución multicanal anterior, como los desarrollados por Stürckow y colegas (ver referencias 26 , 27 ) Control sobre la temporización de la entrega de saborizante mientras proporciona una lectura de voltaje de esta temporización; Y permite la entrega rápida y secuencial de múltiples estímulos tastantes [ 10] . El aparato baña la probóscide en un flujo constante de agua limpia en el que pueden suministrarse impulsos controlados de saborizante. Cada pulso de sabor tostador pasa sobre la trompa y luego es lavado. Los saborizantes contienen una pequeña cantidad de colorante de alimentos insípido, permitiendo que un sensor de color para monitorear, con tiempo preciso, el paso de tastante ovLa probóscide.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Dissection and specimen preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tube, 15 ml -Falcon</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, Short bevel, 19G x 1-1/2&#34;&#160;</td>
			<td>&#160;MONOJET</td>
			<td>888200144</td>
			<td>For aplying air to remove the hair from the moth.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modeling Clay-Van Aken Plastalina&#160;</td>
			<td>DickBlick</td>
			<td>33268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish-100 x 15 mm&#160;</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>89000-304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip (1-200 &#181;L)</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1111-0806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Techni Edge</td>
			<td>TE05-071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 AWG standard hookup wire</td>
			<td>AlphaWire</td>
			<td>1551</td>
			<td>For inserting the proboscis into the pippete tip.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Batik wax</td>
			<td>Jacquard</td>
			<td>7946000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric waxer</td>
			<td>Almore International</td>
			<td>66000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Myscroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #1 forceps (coarse)&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500335</td>
			<td>For removing fat and non nervous tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 titanium forceps (fine)&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14096</td>
			<td>For removing fat and non nervous tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5SF forceps (super-fine)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500085</td>
			<td>For desheathing the nervious tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors (fine)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td>For removing the cuticle.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase/Dispase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11097113001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy</td>
			<td>Permatex</td>
			<td>84101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Saline perfusion system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension set with rate flow regulator</td>
			<td>&#160;B Braun Medical Inc.</td>
			<td>V5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV administration set with Y injection site</td>
			<td>&#160;B Braun Medical Inc.</td>
			<td>V1402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Tastant delivery system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Translucent Nylon Tubing OD 1/4&#34;, ID 1/8&#34;</td>
			<td>Small Parts Inc.</td>
			<td>B001JJT4SA</td>
			<td>Rigid tube that connects the four main elements of the system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soldering iron</td>
			<td>Circuit Specialists</td>
			<td>ZD200BK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary tool-Dremel</td>
			<td>Dremel</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene mesh, hole size (hole size 0.1 x 0.13 cm)&#160;</td>
			<td>Industrial Netting</td>
			<td>XN5170</td>
			<td>For ensuring that the probosises of different animals are placed in the same location.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressurized 16-Channel perfusion system&#160;</td>
			<td>Bioscience Tools</td>
			<td>PS-16H</td>
			<td>For tastant delivery. This system includes pinch valves, tubing, manifold, solution cylinders, valve controler and fitting accesories.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tubing, ID 0.034&#34;, ID 0.050&#34;</td>
			<td>Becton, Dickinson &#38; Co</td>
			<td>427421</td>
			<td>&#160;Output tube from the perfusion system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pneumatic PicoPump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>SYS-PV820</td>
			<td>For controlling the output channel of the perfusion system.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition software system, LabVIEW PCI-MIO-16E-4 DAQ card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>LabVIEW 2011</td>
			<td>To control the pico pump for tastant delivery and to record the signals from the color sensor .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compulab 3 Manostat peristaltic pump</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1366</td>
			<td>For pumping water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone tubing, ID 1/16&#34; OD 1/8&#34;</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>WU-95802-02</td>
			<td>To connect the water source to the peristaltic pump tubing, and the outlet tube of the pump to the rigid tube of the delivery system.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color sensor-digital fiber optic sensor</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>&#160;FS-V31M</td>
			<td>For monitoring tastant delivery.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Color sensor-reflective fiber unit</td>
			<td>Keyence</td>
			<td>FU35-FZ</td>
			<td>To connect the color sensor device.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental periphery Wax</td>
			<td>Henry-Schein Dental</td>
			<td>6652151</td>
			<td>To secure the proboscis into the rigid tube.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two 3.7 L containers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>To provide water to the system, and to recollect the water waste.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast green FCF&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dressing forceps 25.5 cm</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500364</td>
			<td>To introduce moths proboscis into the proboscis hole from the rigid tube.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Electrophysiology Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D.C. amplifier</td>
			<td>Brown-Lee</td>
			<td>440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lamp</td>
			<td>Schott</td>
			<td>Schott Fostec Light Source DCR 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual micromanipulator</td>
			<td>Leica</td>
			<td>micromanipulator</td>
			<td>To precicely insert the tetrodes into the animals brain. The manipulator has to allow fine and coarse movements in x, y and z axis.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibration-isolation table (MICRO-g lab table)</td>
			<td>TMC</td>
			<td>63-541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oscilloscope</td>
			<td>Tektronix&#160;</td>
			<td>TDS2014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16-channle pre-amplifier and amplifier</td>
			<td>16 Channel MA-800 Amplifier System&#160;</td>
			<td>B.E.S 2013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Dell</td>
			<td>optiplex 780</td>
			<td>The following are the minimum recommended requirements. RAM: 3.32GHz, 3GB. Processor: Intel Core&#160;2 Duo. Graphic card: integrated Intel GMA X4500.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition software system, LabVIEW PCI-MIO-16E-4 DAQ card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>LabVIEW 2011</td>
			<td>To control the pico pump for tastant delivery and to record the signals from the color sensor and electrode .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Tastants</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KAc</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LiCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L9650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>73575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84097</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

new methods to study gustatory coding

El sentido del gusto permite a los animales detectar los productos químicos en el medio ambiente, dando lugar a comportamientos críticos para la supervivencia. Cuando las Neuronas Receptoras Gustatorias (GRNs) detectan moléculas tastantes, codifican información sobre la identidad y concentración del saborizante como patrones de actividad eléctrica que luego se propagan a las neuronas seguidoras del cerebro. Estos patrones constituyen representaciones internas del tastante, que luego permiten al animal seleccionar acciones y formar recuerdos. El uso de modelos animales relativamente simples ha sido una poderosa herramienta para estudiar los principios básicos en la codificación sensorial. Aquí, proponemos tres nuevos métodos para estudiar la codificación gustativa utilizando la polilla Manduca sexta . En primer lugar, se presenta un procedimiento de disección para exponer los nervios maxilares y la zona subesofágica (SEZ), permitiendo registrar la actividad de GRNs desde sus axones. En segundo lugar, se describe el uso de electrodos extracelulares para registrar la actividad de múltiples GRNs colocando teTrode directamente en el nervio maxilar. En tercer lugar, se presenta un nuevo sistema de entrega y seguimiento, con alta precisión temporal, pulsos de diferentes tastantes. Estos métodos permiten la caracterización de respuestas neuronales in vivo directamente a partir de GRNs antes, durante y después de la liberación de los saborizantes. Proporcionamos ejemplos de trazas de voltaje grabadas a partir de GRN múltiples y presentamos un ejemplo de cómo una técnica de clasificación por punta puede aplicarse a los datos para identificar las respuestas de neuronas individuales. Por último, para validar nuestro enfoque de grabación, se comparan las grabaciones extracelulares obtenidas de GRN con tetrodos a las grabaciones intracelulares obtenidas con electrodos de vidrio afilado.

La actividad de los GRN se puede registrar usando un electrodo de tetrodo extracelular antes, durante y después de la liberación del saborizante ( Figura 6A y 6C ). La Figura 6A (paneles central e inferior) muestra trazas de voltaje filtradas (300-6.000 Hz) registradas por cada uno de los cuatro cables colocados en el nervio maxilar, donde se pueden observar señales de amplitudes diferentes que reflejan potenciales de acción (flechas). Se suministró un pulso de 1 s de saborizante (sacarosa 1 M) 2s después del comienzo del experimento; El inicio y el desplazamiento del estımulo fueron monitorizados por el sensor de color ( Figura 6A , panel superior). El saborizante indujo picos que se pueden observar en cada uno de los cuatro canales ( Figura 6A , panel del medio). GRNs se pueden identificar y distinguir de los mecanosensores (no se muestra aquí) cuando responden a algunos tastantes y no otros Para identificar y aislar las respuestas neuronales individuales de las grabaciones de tetrodos, se realizó la clasificación de picos fuera de línea utilizando un conjunto de funciones personalizadas basadas en los métodos de Pouzat 31 y Kleinfeld 32 , 33 (estos métodos se describen en estas citas 10 , 29 ). La Figura 6B muestra un ejemplo de clasificación por punta aplicada a los datos mostrados en la Figura 6A , en la que se encontraron tres unidades bien aisladas. Las gráficas ráster de la Figura 6C representan respuestas de las tres unidades aisladas en la Figura 6B a seis tastantes diferentes (sacarosa 1 M, maltosa y NaCl, 100 mM de cafeína y 10 mM de berberina y lobelina) entregados en secuencia (4 ensayosS / tastant se muestran). Como se muestra en la Figura 6C , los GRNs grabados tienen diferentes niveles de actividad basal, que van desde silenciosa (GRNs 1) a baja o moderada (GRN 2 y 3). Después del inicio del saborizante, los GRN muestran diversos patrones de actividad y exhiben una selectividad diferente a los saborizantes. Por ejemplo, GRN 1 respondió sólo a la sacarosa, mientras que GRN 2 respondió a la maltosa y NaCl con la explosión de picos y lobeline con spiking sólo en el inicio del estímulo. Además, algunas respuestas están bloqueadas al momento del estímulo ( por ejemplo, la respuesta GRN 1 a la sacarosa), mientras que otras respuestas duran más que la duración del estímulo ( por ejemplo, la respuesta GRN 3 a la berberina) o contienen tanto componentes excitadores como inhibidores GRN 2 respuestas a NaCl y sacarosa). Para más información sobre las diversas sensibilidades y los patrones de actividad de los GRN, véase la referencia 10 . <p class="jove_content" fo:keep-together.within-pagePara validar el uso de las técnicas de tetrodo y clasificación de puntas para registrar GRNs del nervio maxilar, realizamos grabaciones intracelulares de axones GRN en otros animales usando electrodos de vidrio afilados convencionales (resistencia de 80-120 MΩ). Se encontró que los patrones de actividad obtenidos mediante el uso de registros intracelulares fueron similares a las respuestas observadas mediante el uso de la técnica de tetrodo ( Figura 7 ]. Los trazos de voltaje en la caja verde en el Panel A se registraron intracelularmente a partir de GRN 1 durante 5 ensayos consecutivos de presentación de sacarosa y las mismas respuestas se muestran como tramas ráster en el panel B. (Obsérvese que este tipo de respuesta coincide con el obtenido con tetródos y Mostrado en la Figura 6C ). GRN 2, registrado con electrodos intracelulares afilados, muestra un patrón de respuesta más amplio. <img alt="Figura 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55868/55868fig6v2.jpg"/&gt; Figura 6: Resultados representativos de las grabaciones del nervio maxilar con tetródos extracelulares. ( A ) Se muestran trazas de voltaje filtradas (300-6.000 Hz) registradas por cada uno de los cuatro alambres en el nervio maxilar (panel del medio). Se aplicó un pulso de 1 s de saborizante durante el periodo de tiempo indicado por sombreado rojo en el panel central. El inicio y el desplazamiento del estímulo fueron monitorizados por el sensor de color como se indica por la traza de voltaje rojo en el panel superior, y se indica en el panel central por el área sombreada en rojo. Las líneas horizontales punteadas indican +50 (arriba), 0 (medio) y -50 (parte inferior) μV. Se muestra una ampliación de las trazas de voltaje bruto correspondientes al área dentro de las líneas punteadas verticales (panel inferior). Ejemplos de picos están indicados por las flechas. ( B ) Ejemplo de clasificación por punta aplicada a los datos mostrados en el panel A. Las formas de onda registradas en cada uno de los cuatro hilos extracelulares (1-4) arE identificado con tres GRN diferentes (unidades 1-3) que contribuyen a las señales grabadas. Se muestran eventos individuales (líneas finas coloreadas) y la media (línea negra gruesa) para las tres unidades. Hay que tener en cuenta una serie de criterios estadísticos para identificar con fiabilidad las unidades independientes utilizando el método de clasificación por punta (véanse las referencias 10 , 29 ). ( C ) Gráficos ráster que representan respuestas de las tres unidades aisladas a una secuencia de seis tastantes diferentes (se muestran 4 ensayos / saborizante). El periodo de tiempo de suministro de saborizante (1 s) se indica por el área sombreada en rojo. Las concentraciones de társidos fueron 1 M (sacarosa, maltosa, NaCl), 100 mM (cafeína) y 10 mM (berberina y lobelina). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55868/55868fig6v2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 7" c<html> Lass = &quot;xfigimg&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 55868 / 55868fig7.jpg&quot; /&gt; Figura 7 : Grabaciones intracelulares de los axones de GRN. ( A , panel de la caja verde) Trazas de voltaje registradas de un GRN con electrodos intracelulares de cristal afilado (resistencia de 80 - 120 MΩ) colocados en el nervio maxilar, provocados por 5 estímulos consecutivos con 1 M de sacarosa (Suc). ( B ) Gráficos ráster de las respuestas de dos GRNs, incluyendo las respuestas mostradas en el panel A (panel de caja verde), a dos tastantes diferentes entregados secuencialmente (color de fuente gris 100 mM, 1 M de color de fuente negro) registrados con electrodos intracelulares de vidrio afilado Colocado en el nervio maxilar (se muestran 7 ensayos / saborizante y 3 ensayos / agua). El tiempo de entrega de Tastant está indicado por zonas con sombra roja en ambos paneles. El inicio y el desplazamiento del estímulo fueron monitorizados por el sensor de color, como se indica por los trazos de voltaje rojo en la parte inferior de cada panel.Es / ftp_upload / 55868 / 55868fig7large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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New Methods to Study Gustatory Coding

Presentamos tres nuevos métodos para estudiar la codificación gustativa . Utilizando un animal simple, la polilla Manduca sexta ( Manduca ) , describimos un protocolo de disección, el uso de tetródos extracelulares para registrar la actividad de múltiples neuronas receptoras gustativas y un sistema para administrar y controlar pulsos de tastantes precisamente sincronizados.

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