Name: study of protein-protein interactions in autophagy research
Uploaded: 2017-09-09T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Study of Protein-protein Interactions in Autophagy Research at JoVE.com

وأيد هذا العمل العلمية والتكنولوجية أبحاث المجلس من تركيا (توبيتاك) 1001 107T153 منحة، جامعة سابانجى. سيب و NMK تدعمها توبيتاك 2211 بدب منحة دراسية لدراسات الدكتوراه.

1-الفلورة <ol><li>HEK293T الحفاظ على الكلي الجنينية البشرية الخلايا في متوسط ارتفاع الجلوكوز دميم، و N2A الماوس نيوروبلاست الخلايا في دميم منخفض متوسط الجلوكوز، في شركة 5% 2-حاضنة هوميديفيد عند 37 درجة مئوية. تكملة وسائط الثقافة مع المصل 10% معطل الحرارة الجنين من الأبقار (FBS)، المضادات الحيوية...

<ol>
	<li>Oral, O., Akkoc, Y., Bayraktar, O., Gozuacik, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+and+pathological+significance+of+the+molecular+cross-talk+between+autophagy+and+apoptosis.">Physiological and pathological significance of the molecular cross-talk between autophagy and apoptosis.</a> Histol Histopathol. 31, 479-498 (2016).</li><li>Korkmaz, G., Tekirdag, K. A., Ozturk, D. G., Kosar, A., Sezerman, O. U., Gozuacik, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MIR376A+is+a+regulator+of+starvation-induced+autophagy.">MIR376A is a regulator of starvation-induced autophagy.</a> PLoS One. 8, e82556 (2013).</li><li>Itah, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrodynamic+cavitation+kills+prostate+cells+and+ablates+benign+prostatic+hyperplasia+tissue.">Hydrodynamic cavitation kills prostate cells and ablates benign prostatic hyperplasia tissue.</a> Exp Biol Med (Maywood). 238, 1242-1250 (2013).</li><li>Gozuacik, D., Kimchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+as+a+cell+death+and+tumor+suppressor+mechanism).">Autophagy as a cell death and tumor suppressor mechanism).</a> Oncogene. 23, 2891-2906 (2004).</li><li>Erzurumlu, Y., Kose, F. A., Gozen, O., Gozuacik, D., Toth, E. A., Ballar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unique+IBMPFD-related+P97/VCP+mutation+with+differential+binding+pattern+and+subcellular+localization.">A unique IBMPFD-related P97/VCP mutation with differential binding pattern and subcellular localization.</a> Int J Biochem Cell Biol. 45, 773-782 (2013).</li><li>Kuzuoglu-Ozturk, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy-related+gene,+TdAtg8,+in+wild+emmer+wheat+plays+a+role+in+drought+and+osmotic+stress+response.">Autophagy-related gene, TdAtg8, in wild emmer wheat plays a role in drought and osmotic stress response.</a> Planta. 236, 1081-1092 (2012).</li><li>Longatti, A., Tooze, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicular+trafficking+and+autophagosome+formation.">Vesicular trafficking and autophagosome formation.</a> Cell Death Differ. 16, 956-965 (2009).</li><li>Erbil, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RACK1+Is+an+Interaction+Partner+of+ATG5+and+a+Novel+Regulator+of+Autophagy.">RACK1 Is an Interaction Partner of ATG5 and a Novel Regulator of Autophagy.</a> J Biol Chem. 291, 16753-16765 (2016).</li><li>Gozuacik, D., Yagci-Acar, H. F., Akkoc, Y., Kosar, A., Dogan-Ekici, A. I., Ekici, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticancer+use+of+nanoparticles+as+nucleic+acid+carriers.">Anticancer use of nanoparticles as nucleic acid carriers.</a> J Biomed Nanotechnol. 10, 1751-1783 (2014).</li><li>Phizicky, E. M., Fields, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein-protein+interactions:+methods+for+detection+and+analysis.">Protein-protein interactions: methods for detection and analysis.</a> Microbiol Rev. 59, 94-123 (1995).</li><li>Uetz, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+analysis+of+protein-protein+interactions+in+Saccharomyces+cerevisiae.">A comprehensive analysis of protein-protein interactions in Saccharomyces cerevisiae.</a> Nature. 403, 623-627 (2000).</li></ol>

تقنيات إيمونوبريسيبيتيشن والفلوره ذات أهمية حاسمة لدراسة تفاعلات البروتين البروتين. على الرغم من أن يشيع استخدام هذه التقنيات اثنين وراسخة، ينبغي النظر عدة معايير لتحديد نوعية التجارب أثناء استخدام هذه التقنيات.
ينبغي أن تكون أجسام أولاً، الأولية المستخدمة في هذه الاختب...

ماكرووتوفاجي (أوتوفاجي، هنا) هو إليه إجهاد خلوية التي تتميز بعزل معظم السيتوبلازم والبروتينات والعضيات في غشاء مزدوج حويصلات تسمى الحويصلات أوتوفاجيك. من خلال انصهار الطبقة الخارجية من الغشاء مزدوجة، الحويصلات أوتوفاجيك وحمولتها يتم تسليمها إلى lysosomes والمتدهورة فيه1. أوتوفاجي يحدث في تدني المستويات القاعدية في جميع أنواع الخلايا وفي جميع الكائنات الحية، يؤدون وظائف التماثل الساكن مثل تدهور البروتين ودوران عضية (مثلاً، الميتوكوندريا). تحت الظروف التي تؤدي إلى إجهاد الخلوية، مثل الجوع، أوتوفاجي هو سرعة upregulated ويسمح للخلية للحفاظ على مستويات الطاقة والايض الأساسية1،،من23.
وقد تم استنساخ الجينات أوتوفاجي حوالي 30 من الخميرة ومنتجاتها البروتين عرضت القيام بدور في مراحل مختلفة من عملية أوتوفاجيك، بما في ذلك التنو حويصلة، التوسع، والانصهار حويصلة دخلول/يحلول الراحل، وتردي البضائع 4 , 5-أورثولوجس الأغلبية من هذه الجينات قد حددت وأكدت الدراسات في الكائنات المختلفة الحفاظ على تلك الوظائف الخلوية6. في العقد الماضي أظهرت الدراسات أن عدة متعلقة أوتوفاجي البروتين المجمعات وتفاعلات البروتين البروتين موجودة، وأنها تحكم مسارات أوتوفاجي بطريقة معقدة والتي تسيطر عليها. التقاطعات والنسخ الاحتياطية، والتغذية المرتدة، وآليات feedforward موجودة، وأنها تسمح للخلية بتنسيق أوتوفاجي مع الأحداث الأخرى ذات الصلة (مثل إفراز حويصلية، يحلول نشوء حيوي، اندوسومال الفرز والنقل7، إلخ) في شاشة غير متحيزة اثنين والخميرة هجين استخدام البروتين أوتوفاجي ATG5 كطعم، (ATG5 هو بروتين أوتوفاجي رئيسية المنخرطة في نظام التصريف مثل E2 الذي يتوسط ليبيديشن LC3 في المجاعة الناجمين عن أوتوفاجي)، حددنا "المنشط مستقبلات" ج-كيناز 1 (RACK1؛ GNB2L1) إينتيراكتور قوية و مكون أوتوفاجي رواية8. الأهم من ذلك، أظهرت الشاشة أن التفاعل ATG5-RACK1 لا غنى عنه لتحريض أوتوفاجي من أوتوفاجي الكلاسيكي مستحثات (تثبيطأيوالتجويع و mTOR).
الأساليب المستندة إلى الفلورة تستخدم عادة لرصد تفاعلات البروتين البروتين. هذه التقنيات المستندة أساسا إلى جسم، وتساعد على تصور التفاعلات وتأكيد تعريب الهاتف الخلوي. في هذا الأسلوب، علامة نيون مترافق الأجسام المضادة الخاصة بالبروتينات للفائدة تستخدم عموما لتلوين المحددة. قد يكون المسمى كل البروتين مع الأجسام المضادة بالإضافة إلى الأصباغ الفلورية مختلفة. استخدام الأجسام المضادة الخاصة بالبروتين، يشير إلى وجود تداخل في الإشارات عندما يتم دمج الصور التعريب المشارك من البروتينات تحت المجهر [كنفوكل]. هذا الأسلوب ينطبق على الخلايا أو الأنسجة حتى. تقنيات الفلورة تقديم أدلة حول ديناميات التفاعل، والمساعدة في تحديد حجم وتوزيع البروتين المجمعات، بينما تتبع التغيرات العامة في مورفولوجيا الخلوية تحت ظروف مختلفة9. إيمونوبريسيبيتيشن هي آخر تقنية تستند إلى جسم استخداماً يسمح لتحليل التفاعلات بين إعطاء البروتينات10. باستخدام هذا الأسلوب، البروتينات ذات الاهتمام معزولة من الخلايا أو تستخرج الأنسجة باستخدام أجسام مضادة محددة، أسفر هطول الأمطار البروتينات الموجودة في مجمع أو على اتصال بروتين للفائدة. Co-إيمونوبريسيبيتيشن، حيث يتم الكشف عن البروتين وبه إينتيراكتور المشارك، يكشف ليس فقط بالتفاعل بين البروتينات اثنين، ولكن يمكن قياس قوتها التفاعل تحت ظروف مختلفة11.
ويصف هذا البروتوكول بالتفصيل التقنيات الرئيسية التي استخدمت لتأكيد وتميز تفاعل ATG5-RACK1 و RACK1-LC3. يتم التركيز على تقنيات الفلورة وإيمونوبريسيبيتيشن، مع التركيز على الخطوات الحاسمة والمزالق للبحث أوتوفاجي، فضلا عن اقتراحات استكشاف الأخطاء وإصلاحها.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="716">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Trypsin EDTA Solution A</td>
			<td style="width:181px;">Biological Industries&#160;</td>
			<td style="width:133px;">BI03-050-1A</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">PBS</td>
			<td style="width:181px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:133px;">SH-30256.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">DMEM (high glucose)</td>
			<td style="width:181px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:133px;">5671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">DMEM (low glucose)</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td>5546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Hemocytometer</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td>Z359629-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">coverslides</td>
			<td>Jena Bioscience</td>
			<td>CSL-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">slides</td>
			<td style="width:181px;">Isolab</td>
			<td>I.075.02.005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Poly-L-Lysine</td>
			<td style="width:181px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:133px;">P8920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Torin</td>
			<td>Tocris</td>
			<td style="width:133px;">4247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">DMSO</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">VWRSAD2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">EBSS</td>
			<td style="width:181px;">Biological Industries&#160;</td>
			<td style="width:133px;">BI02-010-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">15812-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:133px;">&#160;A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:133px;">84510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">LC3 Antibody</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">L7543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Anti-Rabbit IgG Alexa Fluor 568</td>
			<td style="width:181px;">&#160;Invitrogen</td>
			<td style="width:133px;">A11011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">RACK1 Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:133px;">&#160;sc-17754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Mouse IgG Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:181px;">&#160;Invitrogen</td>
			<td style="width:133px;">A11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">NP-40</td>
			<td style="width:181px;">Applichem</td>
			<td style="width:133px;">A16694.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Sodium Chloride</td>
			<td style="width:181px;">Applichem</td>
			<td style="width:133px;">A9242.5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium deoxycholate</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">30970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium dodecyl sulphate (SDS)</td>
			<td style="width:181px;">Biochemika</td>
			<td style="width:133px;">A2572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Trizma Base</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton-X&#160;</td>
			<td style="width:181px;">Applichem</td>
			<td style="width:133px;">4975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium orthovanadate</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">450243</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">ATG5 Antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:133px;">A0856</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td style="width:181px;">Applichem</td>
			<td style="width:133px;">A4453</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#946;-Mercaptoethanol&#160;</td>
			<td style="width:181px;">Applichem</td>
			<td style="width:133px;">A1108.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bromophenol blue&#160;</td>
			<td style="width:181px;">Applichem</td>
			<td style="width:133px;">A3640.0005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Non-Fat milk</td>
			<td style="width:181px;">Applichem</td>
			<td style="width:133px;">A0830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Tween 20</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">P5927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Sodium Azide</td>
			<td style="width:181px;">Riedel de Haen</td>
			<td style="width:133px;">13412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phenol red&#160;</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">114537-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">anti-rabbit IgG , HRP conjugated</td>
			<td>Jackson Immuno.&#160;</td>
			<td style="width:133px;">1110305144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Luminol</td>
			<td style="width:181px;">Fluka</td>
			<td style="width:133px;">9253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Coumeric Acid</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">C9008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Hydrogen Peroxide</td>
			<td style="width:181px;">Merck</td>
			<td style="width:133px;">K35522500604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti mouse IgG, HRP conjugated</td>
			<td style="width:181px;">Jackson Immuno.</td>
			<td style="width:133px;">115035003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#946;-Actin Antibody</td>
			<td style="width:181px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:133px;">A5441</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Normal rabbit serum</td>
			<td style="width:181px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:133px;">sc-2027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Rapamycin</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">&#160;R0395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Protein A-Agarose Beads</td>
			<td style="width:181px;">Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td style="width:133px;">sc-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:181px;">Biowest</td>
			<td>S1810-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">penicillin/streptomycin solution</td>
			<td style="width:181px;">Biological Industries&#160;</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine&#160;</td>
			<td style="width:181px;">Biological Industries&#160;</td>
			<td>BI03-020-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Bradford Solution</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">6916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Nitocellulose membrane</td>
			<td style="width:181px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:133px;">A10083108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:235px;">X-ray Films</td>
			<td style="width:181px;">Fujifilm</td>
			<td style="width:133px;">47410 19289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Protease inhibitor</td>
			<td style="width:181px;">Sigma</td>
			<td style="width:133px;">P8340</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

study of protein-protein interactions in autophagy research

تفاعلات البروتين البروتين مهمان للشلالات فهم الإشارات الخلوية وتحديد مسار الرواية عناصر وديناميات البروتين. تتطلب معظم الأنشطة الخلوية التفاعلات الفيزيائية بين البروتينات. لتحليل ورسم خريطة لهذه التفاعلات، وضعت مختلف التقنيات التجريبية، فضلا عن أدوات المعلوماتية الحيوية. أوتوفاجي هو هاتف خلوي إعادة تدوير إليه تسمح للخلايا للتعامل مع الضغوطات المختلفة، بما في ذلك الحرمان المغذيات والمواد الكيميائية، ونقص. من أجل فهم أفضل لإحداث إشارات متعلقة أوتوفاجي واكتشاف العوامل الرواية التي تنظم البروتين المجمعات في أوتوفاجي، نحن أداء شاشات التفاعل البروتين-بروتين. التحقق من هذه النتائج الفرز يتطلب استخدام الفلورة والتقنيات إيمونوبريسيبيتيشن. في هذا النظام، تم اختبار محددة تتعلق أوتوفاجي البروتين-بروتين التفاعلات التي اكتشفنا في Neuro2A (N2A) وخطوط الخلايا HEK293T. وأوضح تفاصيل الإجراءات التقنية المستخدمة في هذه الورقة تجربة تصور.

ويرد في الشكل 1 مثال الترجمة المشارك النتيجة التي تم الحصول عليها باستخدام هذا البروتوكول. ويرد هذا رقم من ورقتنا الأخيرة8. هنا، كان الذاتية RACK1 البروتين الملون باللون الأخضر، بينما LC3 الذاتية كان الملون باللون الأحمر. تشير النقاط الصفراء التي تلاحظ في الصور ال...

Watch this Scientific Journal Video about Study of Protein-protein Interactions in Autophagy Research at JoVE.com

Study of Protein-protein Interactions in Autophagy Research

المعروضة هنا تقنيات بحوث التفاعل القائم على جسم البروتين-بروتين اثنين: الفلورة وإيمونوبريسيبيتيشن. وتصلح هذه التقنيات لدراسة التفاعلات الفيزيائية بين البروتينات لاكتشاف عناصر جديدة من مسارات الإشارات الخلوية وفهم ديناميات البروتين.

دراسة لتفاعلات البروتين البروتين في البحوث أوتوفاجي

Protein-protein interactions are important for understanding cellular signaling cascades and identifying novel pathway components and protein dynamics. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

اختبار الحساسية البصرية للسرعة واتجاه الحركة في السحالي

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid (MYTH) System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

Split-Ubiquitin Based Membrane Yeast Two-Hybrid MYTH System: A Powerful Tool For Identifying Protein-Protein Interactions

انقسام اليوبيكويتين الخميرة يستند الغشاء الهجين ثنائي (الأسطورة) النظام : أداة قوية لتحديد البروتين البروتين التفاعلات

The fundamental biological and clinical importance of integral membrane proteins prompted the development of a yeast-based system for the high-throughput ...

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

في الجسم الحي ، الكشف عن البروتين البروتين التفاعلات على مايكرو نقوش السطوح

Unraveling the interaction network of molecules in-vivo is key to understanding the mechanisms that regulate cell function and metabolism. A multitude of ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

التصوير البروتين البروتين التفاعلات في الجسم الحي</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

افعل ذلك بنفسك جهاز لاستخراج العينات Cryopreserved سقطت سهوا في صهاريج التخزين المبردة

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

تقارب المرحلة السائلة الفحص التقاطها باستخدام الخرز المغناطيسي لدراسة البروتين البروتين التفاعل: المثال فيروس شلل الأطفال، Nanobody

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

البروتين البروتين التفاعلات تصور من قبل ثنائي الجزيء الإسفار التكملة في Protoplasts التبغ وأوراق

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

التحقيق البروتين البروتين التفاعلات في الخلايا الحية باستخدام الرنين ضوء بارد نقل الطاقة

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

الجمع بين التلاعب جزيء واحدة والتصوير لدراسة التفاعلات-DNA البروتين

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

Probing High-density Functional Protein Microarrays to Detect Protein-protein Interactions

التحقيق عالية الكثافة ميكروأرس البروتين وظيفية لكشف البروتين البروتين التفاعلات

High-density functional protein microarrays containing ~4,200 recombinant yeast proteins are examined for kinase protein-protein interactions using an ...