Name: ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Dette materiale er baseret på arbejde delvist, understøttet af Institut for veteraner anliggender (VA), Veterans Health Administration, Office for forskning og udvikling (Biomedicinsk Laboratorium forskning og udvikling) (VA Merit Grant 1I01BX000669). JMS er ansat, dels som ansatte læge-videnskabsmand, oftalmologi, af VA WNY; MCB er delvis ansat af VA WNY. Undersøgelsen blev gennemført på, og støttet delvis af Veterans Administration Western New York Healthcare System (Buffalo, NY). Oplysningerne repræsenterer ikke synspunkter Department of veterananliggender eller de Forenede Staters regering. Støttede også, i store del, ved NIH/NEI R01 giver EY013433 (PI: JMS), NIH/NEI R24 give EY016662 (UB Vision infrastruktur Center, PI: M slagtning, direktør - Biophotonics modul: JMS), en ubegrænset tilskud til Institut for oftalmologi/Universitet på Buffalo fra forskning til at forebygge blindhed (New York, NY), og et tilskud fra Oishei Foundation (Buffalo, NY). Vi anerkender gaven af hC1 transgene RHOP347S linje og exon 1 musen RHO knockout fra Dr. Janis Lem (totter New England Medical Center, Boston, MA), og gaven af Knud-E transgen model i den heterozygous stat på den musen exon 2 RHO knockout baggrund fra Drs. G. Jane Farrar og Peter Humphries (Trinity College, Dublin, IRE).

Animalske protokoller blev gennemgået og godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalg af VA WNY HCS og Universitet på Buffalo-SUNY. Dyrene blev brugt efter bestemmelserne i foreningen for forskning i Vision og oftalmologi (ARVO) og Helsinki-erklæringen.
1. musemodeller
<ol><li>Identificere musemodeller vurderes herunder kontrolelementer. Bemærk: Imaging blev udført for et C57BL/6(J), hC1/hC1/mWT/mWT, en delvist humaniseret mus retinal degeneration model hom...

<ol>
	<li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses.">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li><li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations.">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li><li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1.">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li><li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12.">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li><li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration.">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li><li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+viral+vectors+for+retinal+gene+therapies.">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li><li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors.">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li><li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach.">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808 (2016).</li><li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+ocular+angiogenesis.">Gene therapy for ocular angiogenesis.</a> Clinical Science. 104, 561-575 (2003).</li><li>Igarashi, T., Miyake, K., Asakawa, N., Miyake, N., Shimada, T., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+comparison+of+administration+routes+for+AAV-8+mediated+ocular+gene+therapy.">Direct comparison of administration routes for AAV-8 mediated ocular gene therapy.</a> Curr. Eye Res. 38 (5), 569-577 (2013).</li><li>Bennett, J., Duan, D., Engelhardt, J. F., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction.">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li><li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+three-dimensional+high-resolution+imaging+of+the+rodent+retinal+with+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images.">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration.">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286 (2012).</li><li>Berger, A., al, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice.">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , (2013).</li><li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+transgene+expression+in+mouse+retina+following+subretinal+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus.">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li><li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium.">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030 (2015).</li><li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension.">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247 (2015).</li><li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+real-time,+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system.">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography.">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li><li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology.">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203 (2014).</li><li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S:+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments.">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li><li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+transducin-dependent+retinal+degeneration:+accelerated+retinal+degeneration+in+the+absence+of+rod+transducing.">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li><li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+(Pro23His):+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li><li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene.">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li><li>Hruby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+examination+of+the+vitreous+body.">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li><li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injections+in+rodent+eyes:+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina.">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li><li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+brief:+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes.">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li><li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li></ol>

HR-SD-okt giver en simpel metode til karakterisering af potentielle dyremodeller for sygdom hos mennesker til at bestemme deres anvendelighed i test potentielle therapeutics. Evnen til hurtigt og pålideligt karakterisere en potentiel dyremodel af human sygdom er afgørende for processen med terapeutisk drug discovery (fx, udskiftning genterapi, ribozym eller shRNA knockdown genterapi, kombinerede genterapi). HR-SD-okt giver en enkel, hurtig og ikke-invasiv metode til evaluering retinal sundhed, der kan bruges t...

Forskere udvikler genterapier for en lang række retinal og retinal degenerative sygdomme med håb om at omsætte roman therapeutics til behandlinger for human sygdom1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. tid domæne eller spektral domæne optisk kohærens tomografi (SD-OCT) er blevet brugt til at undersøge aspekter af ydre retinal degeneration i specifikke musemodeller sygdom12,13,,14 . HR-SD-OLT ikke dog været flittigt brugt i forbindelse med optimering af evaluering af musemodeller til beregning af sats og rumlige ensartethed af retinale degeneration, eller i forbindelse med præklinisk evaluering af genet baseret therapeutics, for eksempel, til vurdere redning, toksicitet, eller den rumlige udstrækning vektor levering8,15,16. Når en musemodel er fuldt karakteriseret, kan HR-SD-okt-data tjene som en informativ og pålidelig ressource til at måle virkningen af therapeutics at udøve redning eller toksicitet i musemodeller af retinale degeneration17. Mange grupper bruger subretinal injektion som en metode til vektor levering på grund af dens effektivitet på transducing fotoreceptorer og retinale pigment epitel (ÅV) celler. Dette er imidlertid en vanskelig metode til master, eftersom det gøres typisk ved fri hånd kirurgi fra hornhindens overflade, og er ofte behæftet med grå stær, blødning og utilsigtede retinal forsyningslinier opstår simpelthen ved manipulation af bageste glaslegemet. Mange grupper stadig forsøge subretinal injektioner blindt og levere den virus benytter manuel injektioner med relativt stor diameter rustfrit stål nåle (34G)8,17,18,19 ,20,21,22, og et par bruger optisk kohærens tomografi (OCT) imaging for at bekræfte korrekte levering af vektor til nethinden8,17, 20 , 22. nogle forbedringer i metoden er for nylig blevet beskrevet ved hjælp af individuel nåle drevet af en micromanipulator22.
Vi præsenterer en integreret tilgang, som hjælper i placeringen af nålen, og injektioner er lettet af en brugerdefineret styret stereo oftalmoskop designet i lab specifikt til at visualisere inde i små øjet af musen17, 23. brugen af trak glas mikro nåle sammenholdt med den stereotaxisk micromanipulator giver bedre kontrol af nålen placering med ingen kirurgisk skåret ned krævede (dvs. gennem bindehinden og bindevæv) forud for injektion. Brug af presset reguleret mikro injektor hjælper med at levere konsekvent injektionsvolumener, og injektion kan gøres med meget større stabilitet og præcision, og meget langsommere end manuel injektioner udført af en håndholdt sprøjte, dermed mindske den forekomst af boble injektion i øjet. Mindre nålen hjælper med at forhindre lækage efter nålen tilbagetrækning, fordi stien er selvstændige forsegling. For at vurdere omfanget af indsprøjtning/levering, stole mange undersøgende grupper på at finde og vurdere areal omfanget af forbedrede grønne fluorescens protein (EGFP) udtryk i nethinden (udtryk konstruere leveret af vektoren) i eksperimentel slutningen punkt (eutanasi) for at bekræfte vellykket injektioner11,19,20,24. Denne tilgang (ikke udnytte OCT) til at kontrollere kirurgisk succes spilder en enorm mængde af ressourcer i kirurgisk proceduremæssige tid og dyr, da alle dyr med (ukendt) kirurgisk fiaskoer skal bibeholdes, følges med gentagne foranstaltninger indtil aktiv dødshjælp og øjet høst (når EGFP er målt). Bekræftelse af placeringen af injektion i nethinden kan forbedres ved hjælp af HR-SD-OCT til at vise, at Indsprøjtningen er placeret mellem de korrekte lag af nethinden (dvs. den subretinal plads). HR-SD-OLT kan også bruges til straks at afgrænse mislykkede forsøg (kirurgiske fejl) at identificere relevante variabler i ægte kirurgisk tid til at forbedre tilgangen. Vi fandt, at HR-SD-okt giver adskillige fordele i prækliniske gen terapi undersøgelser ved at tillade hurtig kvantitative evaluering af ydre retinal degeneration, så identifikation/nedslagtning af undersøgelse dyr, der ikke opfylder eksperimentelle kriterier ( fx forkert subretinal injektion), og at direkte opfølgning imaging til regionen i øjet hvor vektor blev leveret (hvor prækliniske effekten er mest sandsynligt) samt styre regioner hvor vektoren ikke blev leveret. Siden sin udvikling, brugen af SD-okt fortsatte med at blive accepteret og anvendt af oftalmologi forskere og betragtes nu som standard af retinale imaging i retinal videnskabelige studier i mus eller gnavere modeller13,25. HR-SD-OCT og dens softwarefunktioner blev udnyttet i unikke integrerede måder at yderligere mål for vellykket kvantitativ genterapi i musemodeller på hvert trin i processen, herunder dyremodel udvalg, karakterisering af degeneration i valgte sygdomsmodeller, terapeutiske levering, kortlægning af vektor levering og toksicitet/effekt evaluering. Brugen af HR-SD-okt giver mulighed for mere effektiv drug discovery på alle niveauer af processen. Her beskriver vi disse metoder, der anvendes i vores RNA Drug Discovery program.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">C57BL6 (J)</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:215px;">664</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">N129R-</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2HRho 1T/1T</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="78" style="height:78px;width:251px;">Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">90-R2200-U1-120.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Retinal Imaging System (RIS)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Stemi 2000C Microscope</td>
			<td style="width:245px;">Zeiss</td>
			<td style="width:215px;">000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">P-97 Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td style="width:245px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:215px;">p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">MMN-33 micro manipulator&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Narishige USA</td>
			<td style="width:215px;">MMN-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">PLI-100&#160; micro injector</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">64-1736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Holder (Rotating)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Storage Receptacle</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments Inc.</td>
			<td style="width:215px;">E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">&#160;Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">30-0053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tert-amyl Alcohol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-215-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Goniovisc</td>
			<td style="width:245px;">BioVision Limited</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17238-610-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP&#160; 2%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-097-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%</td>
			<td style="width:245px;">Perigo</td>
			<td style="width:215px;">NDC 45802-046-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Systane Ultra</td>
			<td style="width:245px;">Alcon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:215px;">9006619-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tetracaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">DPBS</td>
			<td style="width:245px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:215px;">14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Virus Preparations</td>
			<td style="width:245px;">ViGene /UNC</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gold nanorods</td>
			<td style="width:245px;">NANOPARTz</td>
			<td style="width:215px;">D12M-850-1.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-250-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Coverslips</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">12-548-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Forceps</td>
			<td style="width:245px;">Milton</td>
			<td style="width:215px;">18-825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Needles 30 guage</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">W11604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Syringes</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Bioptigen software Package</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-263-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Windows Excel</td>
			<td style="width:245px;">Microsoft</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Adobe Illustrator</td>
			<td style="width:245px;">Adobe&#160;</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scale</td>
			<td style="width:245px;">Mettler</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scissors</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ear punch</td>
			<td style="width:245px;">Nat&#8217;l band</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">CL 100 Light source</td>
			<td style="width:245px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:215px;">CL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Nitrogen Gas</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Welding Supply</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heated Water bath</td>
			<td style="width:245px;">Neslab</td>
			<td style="width:215px;">RTE-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating plate</td>
			<td style="width:245px;">In House</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating mat</td>
			<td style="width:245px;">Cincinnatti Sub Zero</td>
			<td style="width:215px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Clay mouse holder</td>
			<td style="width:245px;">Plast.i.clay American Art Clay Co.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Betadine</td>
			<td style="width:245px;">MedLine&#160;</td>
			<td style="width:215px;">NDC53329-938-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:245px;">American Health Service</td>
			<td style="width:215px;">Ctag</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">EtOH 70%</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">BP2818-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gloves Nitrile</td>
			<td style="width:245px;">VWR</td>
			<td style="width:215px;">89038-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys ERG Color Dome instrument</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">D125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Contact lenses</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys Software</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Origin 6.1 software</td>
			<td style="width:245px;">OriginLab Corp.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Reference electrodes</td>
			<td style="width:245px;">Ocuscience</td>
			<td style="width:215px;">F-Thread Electrode (DTL) 24&#8221;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research

HR-SD-okt er udnyttet til at overvåge progression af fotoreceptor degeneration i levende musemodeller, vurdere levering af terapeutiske agenter ind i subretinal rummet og evaluere toksicitet og effektivitet i vivo. HR-SD-OLT anvender nær infrarødt lys (800-880 nm) og har optik specifikt designet til unik optik af musen øjet med sub-2-micron aksial opløsning. Transgene musemodeller af ydre retinal (fotoreceptor) degeneration og kontrol blev afbildet for at vurdere sygdomsprogression. Trak glas microneedles blev brugt til at levere sub retinal injektioner af adeno-associeret virus (AAV) eller nanopartikler (NP) via en trans-scleral og trans-choroidal tilgang. Omhyggelig placering af nålen ind i subretinal rummet var påkrævet før en kalibreret trykket indsprøjtning, som leverer væske ind i sub retinal rummet. Realtid subretinal operation blev udført på vores retinal imaging system (RIS). HR-SD-okt demonstreret progressive ensartet retinal degeneration som følge af udtryk af en giftig mutant menneskelige mutant rhodopsin (P347S) (RHOP347S) transgenet i mus. HR-SD-okt tillader strenge kvantificering af alle de retinale lag. Ydre nukleare lag (ger.) tykkelse og fotoreceptor ydre segment længde (OSL) målinger korrelerer med fotoreceptor vitalitet, degeneration eller redning. RIS leveringssystem giver mulighed for real-time visualisering af subretinal injektioner i neonatal (~ P10-14) eller voksne mus og HR-SD-okt straks afgør succes af levering og kort areal omfang. HR-SD-okt er et kraftfuldt værktøj, der kan evaluere succesen af subretinal kirurgi i mus, desuden at måle vitalitet af fotoreceptorer in vivo. HR-SD-OLT kan også bruges til at identificere ensartede dyr kohorter for at vurdere omfanget af retinale degeneration, toksicitet og terapeutiske redning i prækliniske gen terapi forskningsundersøgelser.

Vurdering af forekomsten, sats og ensartethed af Model ydre Retinal Degeneration Målinger af ger. blev indspillet fra OPL til ELM, definere grænserne for ger. ved hjælp af caliper værktøj leveres i instrument-softwaren. Målet var at kortlægge progression af ydre retinal degeneration i en delvist humaniseret adRP musemodel. Sammenlignelige billeder fra en kontrol C57BL/6(J) mus og en hC1/hC1/mWT/mWT musemodel, udtrykker to kopier af mutant menneskelige stang opsi...

Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

Her viser vi en ny tilgang til at bruge høj opløsning spektral-domæne optisk kohærens tomografi (HR-SD-OCT) at hjælpe levering af genet terapi agenter ind i subretinal rummet, vurdere dens areal dækning og karakterisere fotoreceptor vitalitet.

Ultrahigh opløsning musen optisk kohærens tomografi til støtte intraokulært injektion i Retinal genterapi forskning

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

Det overordnede mål med denne subretinal injektion procedure er at levere en vektor til nethinden i en minimalt invasiv og reproducerbar måde, der kan observeres i realtid. Hej, denne metode kan bruges til at besvare centrale spørgsmål i genterapi forskning om vektor levering effektivitet og terapeutiske agent toksicitet. Nogle fordele ved denne teknik omfatter minimal skade på nethinden og andre øjenstrukturer, præcis kortlægning af injektionsstedet og strenge kvantitative in vivo-målinger, der tillader solid statistisk inferens.For intraokulært transgene injektion, første sted en bedøvet mus på visningsstadiet af en retinal billeddannelse system mikroskop og placere spidsen af en steril stump iris skrænt på syv og 10 klokken positioner af øjenlåget, mens skubbe de nødvendige karf åbne og ned for forsigtigt at fremkalde proptose. Brug de vicess til at lokke øjenlågene under øjet kloden og direkte spidsen af nålen til omkring en til 1,5 millimeter under kanten af hornhinden limbus. Derefter påføres en dråbe steril PBS-opløsning på øjet og dækker øjet med en steril dækselsseddel.Kør forsigtigt nålen ind i øjet gennem bindehinden, indtil der opstår en scleral depression. Brug mikromanipulatoren til at rotere øjet opad, indtil den scleraldepression er i fokus, og kør derefter nålen fremad for at skabe en skarp top i nethinden med spidsen af nålen. Brug nåleholderen til at dreje nålen, indtil spidsen af nålen borer gennem scleraen og RPE'en, så melesceinen i spidsen af nålen kan ses under retinale væv i umiddelbar nærhed af subretinale rum og retinale pigment epitelcellemonolog.Kør spidsen af nålen nedad, så den tangerer kloden, og aktivér derefter injektionspumpen med fodpedalkontakten. Efter 0,5 til en mikroliter transgene opløsning er blevet leveret til det subretinale rum, trækkes nålen tilbage og bekræftes, at blodet er stabilt, og at væsken ikke lækker ud af injektionskanalen. For at bekræfte succesen af injektionen, optage en rektangulær volumen OCT og sammenligne billederne til billeder af de forskellige former for potentielle injektion resultater.Efter bekræftelse af korrekt injektion placering, bruge denne rektangulære OCT billede til at kortlægge omfanget af bleb på fundus image. For at kortlægge omfanget af subretinal bleb, åbne en rektangulær volumen OCT billede af bleb sådan, at en genkendelig milepæl i øjet er inkluderet i billedet. Tilføj så mange calipre som nødvendigt for at identificere placeringen af venstre og højre kanter af B-scanningen, samt synsnerven hovedet, ONH, hvis til stede, og bøjning punkt, hvor nethinden løsner fra RPE og choroid og derefter gemme data.Derefter kompilere de gemte filer og plotte data, effektivt at skabe et kort over injektion bleb på en ansigt OCT billede. Overlejr de afbildede data på fundus-billedet, der indeholder injektionsstedet, og gem det flettede billede. Brug dette billede til at finde områder af interesse under opfølgende OLT-billedbehandling.For at vurdere post injektion retinal degeneration, først åbne en registreret høj opløsning spektral domæne OCT eller HRSD OCT rektangulære volumen billede og vælge en B-scanning, der skal måles. Forstørre det valgte billede, indtil det fylder skærmen og højreklik på billedet. Klik calipre at vælge det relevante antal calipre, derefter bruge konfigurere caliper funktion til at tildele calipre som lodret i vinklen blok kolonne og tænde displayet caliper placering for at lette ensartet caliper placering på tværs af nethinden.Klik anvende og flytte hver caliper til den relevante placering 0,1 til 0,2 millimeter fra hinanden på tværs af B-scanning, idet der skal foretages en caliper i midten af synsnerven hovedet, når det er relevant. Når alle de calipre er blevet placeret, skal du klikke og trække hver caliper til længden span af regionen af interesse, vilkårligt indstilling calipre ikke overlejre målbare regioner af B-scanning til maksimal længde. For at måle den ydre nukleare lag tykkelse, placere toppen af hver caliper på den eksterne begrænsende membran og bunden af hver caliper i bunden af den ydre plexiform lag på 0,1 til 0,2 millimeter intervaller på tværs af nethinden.Efter alle de calipre er blevet placeret og justeret til størrelse, højreklik på billedet og klik gemme caliper data"derefter gentage målingerne som netop vist for hver tiende B-scanning, holde calipre åben og på samme sted på x-aksen og justere længder af calipre efter behov, uden at flytte dem i x-retning. Når alle scanninger er blevet målt, skal du åbne de gemte datafiler og klikke dato ændret "for at arrangere filerne efter sparet tid. Åbn alle filerne for hver målt B-scanning, og kompiler de rå data fra hver B-scanning i en enkelt fil fra laveste til højeste rammenummer, og vælg kolonnerne med data, herunder calipernavn, længde og center X-kolonner.Sørg for, at center X er den samme for alle de B-scanninger, der måles for hvert rektangulært volumen OCT-billede behandlet, og slet alle data fra de calipre, der ikke blev brugt til at registrere målinger. Indstil caliper placeret i midten af synsnerven hovedet til nul og plot data for X versus flere Y datasæt for at få en 3D-plot funktion for tykkelsen af det ydre nukleare lag eller enhver anden målt retinale lag. Derefter sammenlignes de ydre atomlagsmålinger mellem kontroldyr og forsøgsdyr med tilsvarende aldre for at bestemme hastigheden og ensartetheden af eventuel retinal degeneration.For 3D kortlægning af retinale målinger, gennemgå post-injektion OCT billeder og bemærk eventuelle identificerbare vartegn, derefter placere dyret for at opnå en opfølgning SDO CT billede fra samme region, idet man skal passe på at medtage de samme identificerbare landemærker, og behandle de optagede billeder som netop påvist. Det er meget vigtigt at opnå høj kvalitet OCT billeder, der omfatter identificerbare vartegn for at lette reimaging af de tidligere injicerede retinale regioner. For at måle ændringerne i OS længde, calipre blev placeret fra den eksterne begrænsende membran til Brooks membran, giver mulighed for pålidelige målinger, da disse lag er let identificeres i OLT billeder.Forskelle i målingerne mellem disse lag fra forskellige muselinjer blev tilskrevet kortere ydre segmentlængder. Hvis den subretinale injektion udføres med succes, åbningen af det subretinale rum inducerer produktionen af en bleb, der tydeligt kan visualiseres både i en ansigtsvisning af HRSD OCT imager og i B-scanningen. Ved at overlejre grænsekortet på injektionsstedet kan segmentering af retinale vævsmålinger og caliperpositionsdatasæt muliggøre efterfølgende statistisk testning af specifikke terapeutiske midlers virkninger på retinale degeneration.Når mastered, kan denne teknik afsluttes i ti minutter, hvis de udføres korrekt. Mens du forsøger denne procedure er det vigtigt at huske at holde det kirurgiske miljø rent og sterilt. Efter sin udvikling, denne teknik banede vejen for forskere inden for genterapi til at overvåge hele subretinal kirurgisk injektion proces i realtid og skabt en måde til straks at bestemme kirurgisk succes in vivo.Efter denne injektion procedure, OLT og andre metoder som elektro retinografi kan udføres for at besvare yderligere spørgsmål om transgene funktionelle redning og / eller toksicitet. Efter at have set denne video, bør du have en forståelse af, hvordan man udfører transscleral og transchoroidal subretinal injektioner, hvordan man kortlægger omfanget af injektionsblødstoffet på OLT fra dette billede og opnår strenge målinger af de ydre retinale lag. Glem ikke, at arbejde med genterapi vektorer kan være farligt, og at forholdsregler, såsom at bære de relevante personlige værnemidler bør altid anvendes, mens du udfører denne procedure.

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Produktion og Påvisning af Reactive Oxygen Species (ROS) i kræft

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Doppler Optical Coherence Tomography af Retinal cirkulation

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Subretinal injektion af genterapivektorer og stamceller i mus Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Vurderinger af β-celle Mass Distribution i Diabetes Research

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Generation og 3-Dimensional Kvantificering af Arteriel Læsioner i mus Brug Optisk Projection Tomography

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In vivo, perkutan, Needle Based, Optisk kohærenstomografi af Nyrer Masses

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Udvikling af en Alpha-synuclein Based rottemodel for Parkinsons sygdom via Stereotaktisk injektion af et Rekombinant adenoassocieret viral vektor

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En mus Model of retinaiskæmi-reperfusionsskade Gennem Elevation af intraokulært tryk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...