Name: ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Ce matériel est basé sur le travail soutenu, en partie, par le ministère des anciens combattants (VA), le Veterans Health Administration, le Bureau de recherche et le développement (laboratoire de recherche biomédicale et le développement) (Bourse de mérite VA 1I01BX000669). JMS travaille, en partie, comme médecin-chercheur, ophtalmologie, VA WNY ; MCB est employé, en partie, par VA WNY. L’étude a été menée à et financée en partie par le système de santé des anciens combattants Administration Western New York (Buffalo, NY). Contenu ne représente pas les vues du ministère des anciens combattants ou le gouvernement des États-Unis. Également pris en charge, en majeure partie, par le NIH/NEI R01 grant EY013433 (PI : JMS), NIH/NEI R24 accorder EY016662 (UB Vision Infrastructure Center, PI : M abattage, directeur - biophotonique Module : JMS), une subvention sans restriction pour le département d’ophtalmologie/Université à Buffalo de la recherche pour prévenir la cécité (New York, NY) et une subvention de la Fondation Oishei (Buffalo, NY). Nous reconnaissons le don de la lignée transgénique desP347S RHOhC1 et la souris de l’exon 1 knockout RHO de Dr Janis Lem (Tufts New England Medical Center, Boston, MA) et le don du transgène modèle NHR-E à l’état hétérozygote sur le la souris exon 2 RHO knockout fond de Drs G. Jane Farrar et Peter Humphries (Trinity College, Dublin, Irlande).

Protocoles animaux ont été examinés et approuvés par l’animalier institutionnel et l’utilisation des comités de la VA WNY HCS et l’Université de Buffalo-SUNY. Animaux ont été utilisés selon les stipulations de l’Association for Research in Vision et Ophthalmology (ARVO) et la déclaration d’Helsinki.
1. modèles de souris
<ol><li>Identifier des modèles de souris pour être évalués, y compris les contrôles. Remarque : L’imagerie a été réalisée...

<ol>
	<li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses.">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li><li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations.">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li><li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1.">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li><li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12.">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li><li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration.">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li><li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+viral+vectors+for+retinal+gene+therapies.">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li><li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors.">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li><li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach.">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808 (2016).</li><li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+ocular+angiogenesis.">Gene therapy for ocular angiogenesis.</a> Clinical Science. 104, 561-575 (2003).</li><li>Igarashi, T., Miyake, K., Asakawa, N., Miyake, N., Shimada, T., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+comparison+of+administration+routes+for+AAV-8+mediated+ocular+gene+therapy.">Direct comparison of administration routes for AAV-8 mediated ocular gene therapy.</a> Curr. Eye Res. 38 (5), 569-577 (2013).</li><li>Bennett, J., Duan, D., Engelhardt, J. F., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction.">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li><li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+three-dimensional+high-resolution+imaging+of+the+rodent+retinal+with+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images.">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration.">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286 (2012).</li><li>Berger, A., al, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice.">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , (2013).</li><li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+transgene+expression+in+mouse+retina+following+subretinal+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus.">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li><li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium.">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030 (2015).</li><li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension.">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247 (2015).</li><li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+real-time,+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system.">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography.">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li><li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology.">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203 (2014).</li><li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S:+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments.">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li><li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+transducin-dependent+retinal+degeneration:+accelerated+retinal+degeneration+in+the+absence+of+rod+transducing.">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li><li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+(Pro23His):+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li><li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene.">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li><li>Hruby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+examination+of+the+vitreous+body.">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li><li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injections+in+rodent+eyes:+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina.">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li><li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+brief:+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes.">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li><li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li></ol>

HR-SD-OCT fournit une méthode simple pour la caractérisation des modèles animaux de maladies humaines afin de déterminer leur utilité dans l’essai thérapeutique possible. La capacité de rapidement et sûrement caractériser un modèle animal de la maladie humaine est essentielle pour le processus de découverte de médicaments thérapeutiques (par exemple, thérapie de remplacement de gène, ribozyme ou shARN défiant thérapie génique, la thérapie génique combinée). HR-SD-OCT fournit une méthode s...

Chercheurs mettent au point des thérapies géniques pour une variété de maladies dégénératives rétiniennes et rétiniennes dans l’espoir de traduire les nouvelles thérapeutiques en traitements pour les maladies humaines1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. domaine temporel ou tomographie en cohérence optique domaine spectral (SD-OCT) a été utilisée pour étudier les aspects de la dégénérescence rétinienne externe dans des modèles de souris spécifiques de maladie12,13,14 . HR-SD-OCT n’a pas, toutefois, été largement utilisé dans le contexte de l’optimisation évaluation de modèles murins pour déterminer le taux et l’uniformité spatiale de dégénérescence rétinienne, ou dans le cadre de l’évaluation préclinique du gène basé thérapeutique, par exemple, à évaluer le sauvetage, la toxicité ou l’étendue spatiale de vecteur livraison8,15,16. Une fois un modèle de souris est entièrement caractérisé, les données RH-SD-OCT peuvent servir comme une ressource informative et fiable pour mesurer l’impact de la thérapeutique à exercer de sauvetage ou toxicité dans des modèles murins de la dégénérescence rétinienne,17. Plusieurs groupes utilisent injection sous-rétinienne comme méthode de livraison de vecteur en raison de son efficacité à transduction des photorécepteurs et les cellules (pre) de l’épithélium pigmentaire rétinien. Toutefois, cela reste une méthode difficile à maîtriser, étant donné qu’il est généralement fait en chirurgie de la main-libre de la surface de la cornée et pose souvent des cataractes, des saignements et des décollements de la rétine involontaires qui se produisent par simple manipulation de la partie postérieure vitrifiée. Beaucoup de groupes encore tente des injections sous-rétinienne aveuglément et livrer le virus en utilisant des injections manuelles avec relativement de grand diamètre en acier inoxydable aiguilles (34G)8,17,18,19 ,20,21,22et quelques usages tomographie par cohérence optique (OCT) imagerie pour confirmer la livraison appropriée de vecteur à la rétine8,17, 20 , 22. quelques améliorations dans la méthode ont été récemment décrites à l’aide d’aiguilles microscale pilotées par un micromanipulateur22.
Nous présentons une approche intégrée qui facilite le positionnement de l’aiguille, et les injections sont facilitées par un ophtalmoscope stéréo dirigé personnalisé, conçu en laboratoire spécialement pour visualiser l’intérieur de le œil petit des souris17, 23. l’utilisation d’aiguilles micro verre tiré en conjonction avec le micromanipulateur stéréotaxique fournissent un meilleur contrôle du placement de l’aiguille avec aucune chirurgie coupé requis (c.-à-d., à travers la conjonctive et du tissu conjonctif) avant injection. L’utilisation de la pression régulée volumes d’injection cohérente d’injecteur micro contribue à livrer, et l’injection peut être faite avec la plus grande stabilité, précision et beaucoup plus lente que les injections manuelles effectuées par une seringue à main, réduisant ainsi la apparition de l’injection de bulles dans le œil. La plus petite aiguille permet d’éviter les fuites après retrait de l’aiguille, car le chemin est hermétique. Pour évaluer l’ampleur de l’injection/livraison, plusieurs groupes d’enquête dépendent de trouver et d’évaluer l’étendue de l’expression de protéines (EGFP) fluorescence verte améliorée dans la rétine (construction d’expression envoyée par le vecteur) à la fin expérimentale pour confirmer les injections réussies11,19,20,24, point (euthanasie). Cette approche (ne pas en utilisant OCT) pour vérifier la réussite chirurgicale gaspille une énorme quantité de ressources temps procédure chirurgicale et des animaux, puisque tous les animaux avec des échecs chirurgicaux (inconnus) doivent être maintenus, a suivi avec des mesures répétées jusqu'à ce que euthanasie et oeil de récolte (lorsque EGFP est mesurée). Confirmation de l’emplacement de l’injection dans la rétine peut être améliorée à l’aide de HR-SD-OCT pour démontrer que l’injection est située entre les couches correctes de la rétine (c'est-à-dire l’espace sous-rétinienne). HR-SD-OCT peut également être utilisé pour délimiter immédiatement les tentatives infructueuses (échecs chirurgicaux) pour déterminer les variables pertinentes en temps réel chirurgical afin d’améliorer l’approche. Nous avons trouvé que HR-SD-OCT offre nombreux avantages gène précliniques études de thérapie en autorisant rapide évaluation quantitative de la dégénérescence rétinienne externe, permettant l’identification/abattage d’animaux, étude qui ne répondent pas aux critères expérimentaux ( par exemple, injection sous-rétinienne incorrecte) et à direct suivi d’imagerie pour la région de le œil où vecteur a été livré (effet préclinique étant probablement) ainsi que le contrôle des régions où vecteur n’a pas remis. Depuis son développement, l’utilisation du SD-OCT a continué à être accepté et utilisé par les chercheurs de l’ophtalmologie et est aujourd'hui considérée comme la norme d’imagerie rétinienne dans des études scientifiques rétiniens de souris ou les rongeurs modèles13,25. HR-SD-OCT et ses capacités de logiciels ont été utilisées de manière intégrée unique pour atteindre son objectif de réussite quantitative génothérapie dans des modèles murins à chaque étape du processus, y compris la sélection de modèle animal, caractérisation de la dégénérescence dans choisie les modèles de maladies, livraison thérapeutique, cartographie des prestation de vecteur et l’évaluation de la toxicité/efficacité. L’utilisation des ressources humaines-SD-OCT permet la découverte de médicaments plus efficace à tous les niveaux du processus. Nous décrivons ici ces approches utilisées dans notre programme de découverte de médicaments de l’ARN.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">C57BL6 (J)</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:215px;">664</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">N129R-</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2HRho 1T/1T</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="78" style="height:78px;width:251px;">Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">90-R2200-U1-120.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Retinal Imaging System (RIS)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Stemi 2000C Microscope</td>
			<td style="width:245px;">Zeiss</td>
			<td style="width:215px;">000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">P-97 Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td style="width:245px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:215px;">p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">MMN-33 micro manipulator&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Narishige USA</td>
			<td style="width:215px;">MMN-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">PLI-100&#160; micro injector</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">64-1736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Holder (Rotating)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Storage Receptacle</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments Inc.</td>
			<td style="width:215px;">E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">&#160;Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">30-0053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tert-amyl Alcohol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-215-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Goniovisc</td>
			<td style="width:245px;">BioVision Limited</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17238-610-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP&#160; 2%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-097-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%</td>
			<td style="width:245px;">Perigo</td>
			<td style="width:215px;">NDC 45802-046-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Systane Ultra</td>
			<td style="width:245px;">Alcon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:215px;">9006619-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tetracaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">DPBS</td>
			<td style="width:245px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:215px;">14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Virus Preparations</td>
			<td style="width:245px;">ViGene /UNC</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gold nanorods</td>
			<td style="width:245px;">NANOPARTz</td>
			<td style="width:215px;">D12M-850-1.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-250-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Coverslips</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">12-548-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Forceps</td>
			<td style="width:245px;">Milton</td>
			<td style="width:215px;">18-825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Needles 30 guage</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">W11604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Syringes</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Bioptigen software Package</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-263-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Windows Excel</td>
			<td style="width:245px;">Microsoft</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Adobe Illustrator</td>
			<td style="width:245px;">Adobe&#160;</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scale</td>
			<td style="width:245px;">Mettler</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scissors</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ear punch</td>
			<td style="width:245px;">Nat&#8217;l band</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">CL 100 Light source</td>
			<td style="width:245px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:215px;">CL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Nitrogen Gas</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Welding Supply</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heated Water bath</td>
			<td style="width:245px;">Neslab</td>
			<td style="width:215px;">RTE-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating plate</td>
			<td style="width:245px;">In House</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating mat</td>
			<td style="width:245px;">Cincinnatti Sub Zero</td>
			<td style="width:215px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Clay mouse holder</td>
			<td style="width:245px;">Plast.i.clay American Art Clay Co.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Betadine</td>
			<td style="width:245px;">MedLine&#160;</td>
			<td style="width:215px;">NDC53329-938-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:245px;">American Health Service</td>
			<td style="width:215px;">Ctag</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">EtOH 70%</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">BP2818-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gloves Nitrile</td>
			<td style="width:245px;">VWR</td>
			<td style="width:215px;">89038-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys ERG Color Dome instrument</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">D125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Contact lenses</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys Software</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Origin 6.1 software</td>
			<td style="width:245px;">OriginLab Corp.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Reference electrodes</td>
			<td style="width:245px;">Ocuscience</td>
			<td style="width:215px;">F-Thread Electrode (DTL) 24&#8221;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research

HR-SD-OCT est utilisé pour surveiller la progression de la dégénérescence des photorécepteurs dans des modèles de souris vivante, évaluer l’administration d’agents thérapeutiques dans l’espace sous-rétinienne et d’évaluer la toxicité et l’efficacité le in vivo. HR-SD-OCT utilise près de lumière infrarouge (800-880 nm) et a l’optique spécialement conçu pour l’unique optique de le œil de souris avec résolution axiale sub-2-micron. Modèles de souris transgéniques de dégénérescence rétinienne externe (photorécepteurs) et les contrôles ont été imagées pour évaluer la progression de la maladie. Verre tiré des micro-aiguilles servaient à administrer des injections rétinienne de sup d’adeno-associated virus (AAV) ou de nanoparticules (NP) via une approche trans-sclérale et trans-choroïdienne. Attention, positionnement de l’aiguille dans l’espace sous-rétinienne était nécessaire avant une injection pression calibrée, qui délivre le fluide dans l’espace rétinienne sub. Temps réel sous-rétinienne chirurgie a été réalisée sur notre rétine imaging system (RIS). HR-SD-OCT a démontré la dégénérescence rétinienne progressive uniforme en raison de l’expression d’un humain mutant mutante rhodopsine toxique (P347S) transgène (RHOP347S) chez la souris. HR-SD-OCT permet une quantification rigoureuse de toutes les couches des rétiniens. Couche nucléaire externe (ONL) épaisseur et photorécepteur segment externe (OSL) mesures de longueur sont corrélés avec la vitalité des photorécepteurs, dégénérescence ou de sauvetage. Le système de largage RIS permet une visualisation en temps réel des injections sous-rétinienne dans néonatale (~ P10-14) ou de souris adultes et HR-SD-OCT immédiatement détermine le succès de la livraison et cartes étendue aréale. HR-SD-OCT est un outil puissant capable d’évaluer le succès de la chirurgie sous-rétinienne chez la souris, en outre de mesurer la vitalité des photorécepteurs in vivo. HR-SD-OCT permet également d’identifier des cohortes animales uniformes pour évaluer le degré de dégénérescence rétinienne, la toxicité et sauvetage thérapeutique dans des études de recherche de thérapie génique préclinique.

Évaluer la présence, la taux et l’homogénéité de dégénérescence rétinienne externe modèle Mesures de l’ONL ont été enregistrés entre l’OPL et l’orme, définissant les limites de l’ONL en utilisant l’outil de l’étrier fourni dans le logiciel de l’instrument. Le but était de cartographier la progression de la dégénérescence rétinienne externe dans un modèle murin de PACA partiellement humanisés. Des images comparables d’un contrôle...

Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

Nous démontrons une nouvelle approche à l’utilisation de tomographie à cohérence optique domaine spectral haute résolution (HR-SD-OCT) pour aider l’administration d’agents de thérapie génique dans l’espace sous-rétinienne, évaluer sa couverture areal et caractériser la vitalité des photorécepteurs.

Tomographie à cohérence optique souris ultra haute résolution pour faciliter l’Injection intraoculaire dans la recherche de la thérapie génique rétinienne

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

L’objectif global de cette procédure d’injection subrétinienne est de délivrer un vecteur à la rétine d’une manière mini-invasive et reproductible qui est observable en temps réel. Bonjour, cette méthode peut être utilisée pour répondre à des questions clés dans la recherche en thérapie génique sur l’efficacité de la livraison vectorielle et la toxicité des agents thérapeutiques. Certains avantages de cette technique incluent des dommages minimes à la rétine et à d’autres structures oculaires, une cartographie précise du site d’injection et des mesures quantitatives rigoureuses in vivo qui permettent une inférence statistique solide.Pour l’injection transgénique intraoculaire, placez d’abord une souris anesthésiée sur le stade d’observation d’un microscope du système d’imagerie rétinienne et placez les extrémités d’un iris émoussé stérile aux positions de sept et dix heures de la paupière tout en poussant les forceps ouverts et vers le bas pour induire doucement la proptose. Utilisez les forceps pour amadouer les paupières sous le globe oculaire et diriger la pointe de l’aiguille à environ un à 1,5 millimètre sous le bord du limbe cornéen. Ensuite, appliquez une goutte de solution stérile PBS à l’œil et couvrez l’œil avec un glissement stérile de couverture.Conduisez soigneusement l’aiguille dans l’œil à travers la conjonctive jusqu’à ce qu’une dépression scléricaale soit créée. Utilisez le micro manipulateur pour faire pivoter l’œil vers le haut jusqu’à ce que la dépression scléricane soit au point, puis conduisez l’aiguille vers l’avant pour créer un pic pointu dans la rétine avec le bout de l’aiguille. À l’aide du porte-aiguille, faire pivoter l’aiguille jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille passe par la sclère et l’EPR, ce qui permet à la farine dans le bout de l’aiguille d’être visible sous le tissu rétinien à proximité immédiate de l’espace subrétinien et du monocouche cellulaire d’épithélium pigmentaire rétinien.Conduisez la pointe de l’aiguille vers le bas de sorte qu’elle soit tangentielle au globe, puis activez la pompe d’injection avec l’interrupteur de pédale de pied. Après que 0,5 à un microlitres de solution transgénique a été livré à l’espace subretinal, retirez l’aiguille et confirmez que le sang est stable et que le fluide ne fuit pas hors du site du tractus d’injection. Pour confirmer le succès de l’injection, enregistrez un oct volume rectangulaire et comparez les images aux images des différents types de résultats d’injection potentiels.Après confirmation du placement approprié d’injection, utilisez cette image rectangulaire d’OCT pour cartographier l’étendue du bleb sur l’image de fundus. Pour cartographier l’étendue du bleb subretinal, ouvrez une image oct de volume rectangulaire de la bleb de telle sorte qu’un repère reconnaissable dans l’oeil soit inclus dans l’image. Ajoutez autant d’étriers que nécessaire pour identifier la position des bords gauche et droit du balayage B, ainsi que la tête du nerf optique, ONH, si elle est présente, et le point d’inflexion où la rétine se détache de l’EPR et choroïde, puis enregistrer les données.Compilez ensuite les fichiers enregistrés et tracez les données, créant efficacement une carte de l’injection bleb sur l’image OCT en face. Superposez les données tracées sur l’image fundus contenant le site d’injection et enregistrez l’image fusionnée. Utilisez cette image pour localiser les régions d’intérêt lors de l’imagerie OCT de suivi.Pour évaluer la dégénérescence rétinienne post-injection, ouvrez d’abord une image de volume rectangulaire à haute résolution enregistrée oct ou HRSD OCT et sélectionnez un balayage B à mesurer. Magnifiez l’image sélectionnée jusqu’à ce qu’elle remplisse l’écran et cliquez à droite sur l’image. Cliquez sur les étriers pour sélectionner le nombre approprié d’étriers, puis utilisez la fonction d’étrier de configuration pour assigner les étriers comme verticale dans la colonne de bloc d’angle et activer l’emplacement de l’étrier d’affichage pour faciliter le placement uniforme de l’étrier sur la rétine.Cliquez sur appliquer et déplacer chaque étrier à l’endroit approprié 0,1 à 0,2 millimètres de distance à travers le balayage B, en prenant soin de placer un étrier dans le centre de la tête du nerf optique, le cas échéant. Lorsque tous les étriers ont été placés, cliquez et faites glisser chaque étrier sur la longueur de la région d’intérêt, en fixant arbitrairement les étriers qui ne superposent pas les régions mesurables de l’analyse B à la longueur maximale. Pour mesurer l’épaisseur extérieure de la couche nucléaire, placez le dessus de chaque étrier à la membrane limite externe et le fond de chaque étrier au bas de la couche plexiforme externe à des incréments de 0,1 à 0,2 millimètre sur la rétine.Après que tous les étriers ont été placés et ajustés à la taille, cliquez à droite sur l’image et cliquez enregistrer les données de l’étrier » puis répéter les mesures comme juste démontré pour chaque dixième de balayage B, en gardant les étriers ouverts et au même endroit sur l’axe x et ajuster les longueurs des étriers si nécessaire, sans les déplacer dans la x-direction. Lorsque toutes les analyses ont été mesurées, ouvrez les fichiers de données enregistrés et cliquez sur la date modifiée « pour organiser les fichiers en fonction du temps gagné. Ouvrez tous les fichiers pour chaque analyse B mesurée et compilez les données brutes de chaque analyse B dans un seul fichier du nombre d’images le plus bas au plus élevé et sélectionnez les colonnes de données, y compris le nom de l’étrier, la longueur et les colonnes X centrale.Assurez-vous que le centre X est le même pour toutes les analyses B mesurées pour chaque image OCT de volume rectangulaire traitée et supprimez toutes les données des étriers qui n’ont pas été utilisés pour enregistrer les mesures. Réglez l’étrier situé au centre de la tête du nerf optique à zéro et tracez les données pour X par rapport à plusieurs ensembles de données Y pour obtenir une fonction de parcelle 3D pour l’épaisseur de la couche nucléaire externe ou toute autre couche rétinienne mesurée. Comparez ensuite les mesures externes de la couche nucléaire entre les animaux de contrôle et les animaux expérimentaux avec les âges correspondants afin de déterminer le taux et l’uniformité de toute dégénérescence rétinienne potentielle.Pour la cartographie 3D des mesures rétiniennes, examinez les images oct post-injection et notez les repères identifiables, puis positionnez l’animal pour obtenir une image SDO CT de suivi de la même région, en prenant soin d’inclure les mêmes repères identifiables, et de traiter les images enregistrées comme nous venons de le démontrer. Il est très important d’obtenir des images oct de haute qualité qui comprennent des repères identifiables pour faciliter la réinvention des régions rétiniennes précédemment injectées. Afin de mesurer les changements dans la longueur du système d’exploitation, des étriers ont été placés de la membrane limite externe à la membrane Brooks, ce qui permet des mesures fiables puisque ces couches sont facilement identifiables dans les images OCT.Les différences dans les mesures entre ces couches de différentes lignées de souris ont été attribuées à des longueurs de segment externes plus courtes. Si l’injection subretinale est effectuée avec succès, l’ouverture de l’espace subretinal induit la production d’un bleb qui peut être clairement visualisé à la fois dans la vue en face de l’imageur HRSD OCT et dans les images de balayage B. La superposation de la carte frontalière du site d’injection permet la segmentation des mesures des tissus rétiniens et des ensembles de données sur la position de l’étrier afin de permettre des tests statistiques ultérieurs des effets d’agents thérapeutiques spécifiques sur la dégénérescence rétinienne.Une fois maîtrisée, cette technique peut être complétée en dix minutes si elle est effectuée correctement. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de garder l’environnement chirurgical propre et stérile. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la thérapie génique pour surveiller l’ensemble du processus d’injection chirurgicale subrétinent en temps réel et a créé un moyen de déterminer immédiatement le succès chirurgical in vivo.À la suite de cette procédure d’injection, l’OCT et d’autres méthodes comme la rétinographie électro peuvent être effectuées pour répondre à d’autres questions sur le sauvetage fonctionnel transgénique et/ou la toxicité. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une compréhension comment effectuer des injections subrétiniennes transscleral et transchoroidal, comment cartographier l’étendue de la bêle d’injection sur l’OCT à partir de cette image, et obtenir des mesures rigoureuses des couches rétiniennes externes. N’oubliez pas que travailler avec des vecteurs de thérapie génique peut être dangereux et que des précautions, comme le port de l’équipement de protection individuelle approprié, doivent toujours être utilisées lors de l’exécution de cette procédure.

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Création et propagation des tumeurs de l&#39;homme en rétinoblastome immunitaire chez les souris déficientes

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Recherche

Médecine

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Production et détection d&#39;espèces réactives de l&#39;oxygène (ROS) dans les cancers

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Tomographie par cohérence optique Doppler de la circulation rétinienne

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Une nouvelle approche chirurgicale pour l&#39;administration intratrachéale d&#39;agents bioactifs dans un modèle de souris fœtale

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Injection sous-rétinien de vecteurs de thérapie génique et les cellules souches dans l&#39;œil de la souris

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Près de tomographie optique de projection infrarouge pour l&#39;évaluation de la distribution de masse β-cellulaire en recherche sur le diabète

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Génération et quantification 3-Dimensional des lésions artérielles chez la souris utilisant la tomographie optique de projection

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, percutanée, Aiguille Based, tomographie par cohérence optique des masses rénales

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Élaboration d&#39;un modèle de rat à base alpha-synucléine pour la maladie de Parkinson par injection stéréotaxique d&#39;un vecteur viral adéno-associé recombinant

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Un modèle de souris de Retinal Ischémie-reperfusion Grâce à une élévation de la pression intraoculaire

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...