Name: ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

이 자료는 학과의 재향 군인 담당 (버지니아), 재향 군인의 건강 관리, 사무실의 연구와 개발 (생물 의학 실험실 연구 및 개발)에 의해, 부분적으로, 지원 작업 기반 (VA 공로 그랜트 1I01BX000669). JMS는 고용, 부분적으로로 직원 의사-과학자, 안과, 버지니아 WNY; MCB VA WNY에 의해, 부분적으로, 채택 된다. 연구, 실시 하 고, 참전 용사 관리 서양 뉴욕 의료 시스템 (버팔로, 뉴욕)에 의해 부분적으로 지원 했다. 내용 재향 군인 담당 부서 또는 미국 정부의 의견을 대표 하지 않는다. 도 지원, 주요 부분에서 네이 NIH R01 부여 함으로써 EY013433 (PI: JMS), NIH/네이 R24 부여 EY016662 (UB 비전 인프라 센터, 파이: M 학살, 감독-Biophotonics 모듈: JMS), 무제한 부여 하는 학과의 안과/대학에서 실명 방지 (뉴욕), 연구에서 버팔로 그리고 Oishei 재단 (버팔로, 뉴욕)에서 부여. 우리 인정 hC1 유전자 변형 로P347S 선 및 exon 1 마우스의 선물 (Tufts 뉴잉글랜드 의료 센터, 보스톤, MA), 박사 제 니스 렘에서 로 녹아웃 heterozygous 상태에 NHR E transgene 모델의 선물에는 마우스 exon 2로 녹아웃 배경 박사 G. 제인 파라와 피터 험프리 (삼위일체 대학, 더블린, 분노).

동물 프로토콜 검토 하 고 기관 동물 관리 및 사용의 버지니아 WNY HCS와 버팔로 SUNY에서 대학 위원회에 의해 승인 했다. 동물 협회의 규정에 따라 연구 비전 및 안과 (ARVO)와 헬싱키의 선언에 사용 했습니다.
1. 마우스 모델
<ol><li>마우스 컨트롤을 포함 하 여 평가 모델을 식별 합니다. 참고: 이미지는 C57BL/6(J), hC1/hC1 / / mWT에 대 한 수행/mWT, 부분적으로 인간 답게 마...

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	<li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses.">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li><li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations.">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li><li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1.">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li><li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12.">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li><li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration.">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li><li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+viral+vectors+for+retinal+gene+therapies.">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li><li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors.">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li><li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach.">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808 (2016).</li><li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction.">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li><li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+three-dimensional+high-resolution+imaging+of+the+rodent+retinal+with+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images.">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration.">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286 (2012).</li><li>Berger, A., al, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice.">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , (2013).</li><li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+transgene+expression+in+mouse+retina+following+subretinal+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus.">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li><li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium.">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030 (2015).</li><li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension.">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247 (2015).</li><li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+real-time,+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system.">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography.">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li><li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology.">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203 (2014).</li><li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S:+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments.">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li><li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+transducin-dependent+retinal+degeneration:+accelerated+retinal+degeneration+in+the+absence+of+rod+transducing.">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li><li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+(Pro23His):+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li><li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene.">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li><li>Hruby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+examination+of+the+vitreous+body.">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li><li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injections+in+rodent+eyes:+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina.">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li><li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+brief:+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes.">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li><li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li></ol>

10 월 인사-SD 잠재적인 치료제 테스트에서 그들의 유용성을 결정 하는 인간 질병의 잠재적인 동물 모델의 특성에 대 한 간단한 방법을 제공 한다. 신속 하 고 안정적으로 인간 질병의 잠재적인 동물 모델의 특성 수는 (예를 들어, 교체 유전자 치료, ribozyme 또는 shRNA 최저의 유전자 치료, 결합 된 유전자 치료) 치료 약물 발견의 과정에 중요 합니다. HR-SD-10 월 특성화 및 거의 모든 마우스 모델에...

인간의 질병1,2,,34 에 대 한 치료로 번역 하는 새로운 치료의 희망으로 망막과 망막 퇴행 성 질병의 다양 한 유전자 요법을 개발 하는 연구원 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. 시간 영역 또는 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월) 외부 망막 변성 질환12,13,14의 특정 마우스 모델의 측면을 조사 하는 데 사용 되었습니다 . 그러나 HR-SD-10 월, 되지 않았습니다 광범위 하 게 속도 망막 변성의 공간적 균일성을 결정 하기 위해 최적화 마우스 모델의 평가의 맥락에서 사용 또는 유전자의 전 임상 평가의 맥락에서 기반 치료제, 예를 구조, 독성, 또는 벡터 배달8,,1516의 공간 범위를 평가 합니다. 일단 마우스 모델 특징 완전히 HR-SD-10 월 데이터 구조 또는 망막 변성17의 마우스 모델에서 독성을 발휘 하는 치료제의 영향을 측정 하는 유익 하 고 신뢰할 수 있는 리소스로 사용할 수 있습니다. 많은 그룹은 대뇌와 망막 안료 상피 (RPE) 셀 시험에 그것의 효율성 때문에 벡터 배달의 방법으로 subretinal 주입을 사용 하 여. 그러나, 그것은 일반적으로 각 막 표면에서 직접 수술에 의해 수행 하 고 백 내장, 출혈, 그리고 뒷부분의 조작 하면 발생 하는 의도 하지 않은 망막 분리에 따른 자주 다 마스터, 어려운 방법 남아 유리. 많은 그룹은 여전히 맹목적으로 subretinal 주사를 시도 하 고 비교적 큰 직경 스테인리스 바늘 (34g)8,,1718,19와 수동 주사를 사용 하 여 바이러스를 전달 ,20,,2122, 그리고 몇 사용 광학 일관성 단층 촬영 (10 월) 망막8,17, 에 벡터의 적절 한 배달 확인을 이미징 20 , 22. 몇 가지 개선 방법에는 최근 설명 눈금 바늘 micromanipulator22에 의해 주도 사용 하 여.
우리는 바늘의 위치에서 에이즈는 통합 된 접근 방식을 제시 하 고 주사 사용자 지정 지시 스테레오 ophthalmoscope 마우스17, 의 작은 눈 내 머릿속에 맞게 실험실에서 설계에 의해 촉진 된다 23. stereotaxic micromanipulator와 함께에서 가져온된 유리 마이크로 바늘의 사용 이전에 바늘 배치 필요 (즉, conjunctivae 및 결합 조직 통해) 아래로 수술 커트의 더 나은 제어를 제공 사출입니다. 압력의 사용 규제 마이크로 인젝터 도움이 제공 일관 된 주입 볼륨, 그리고 주사 훨씬 더 중대 한 안정성, 정밀, 그리고 휴대용 주사기, 감소에 의해 수행 하는 수동 주사 보다 훨씬 더 느리게 할 수 있는 눈에 거품 주입 발생 작은 바늘 경로가 자체 봉인 때문에 바늘 철수에 따라 누설을 방지할 수 있습니다. 사출/배달의 정도 평가 하기 위해 많은 조사 그룹 찾기 및 실험 끝에 향상 된 녹색 형광 단백질 (EGFP) 식 (식 구조는 벡터에 의해 전달) 망막에서의 면적 범위를 평가에 의존 (안락사) 성공적인 주사11,19,,2024확인 가리킵니다. 이 접근 (10 월을 활용 하지) 수술 성공 이후 수술 (알 수 없음된) 오류와 함께 모든 동물 필요가 유지 될 때까지 반복 측정을 가진 뒤 수술 절차 시간에 동물, 엄청난 양의 자원 낭비 확인 안락사와 눈 추수 (때 EGFP 측정 된다). 주사 (즉 subretinal 공간) 망막의 정확한 레이어 사이 보여주는 시간-SD-10 월을 사용 하 여 망막에 주입의 위치 확인을 개선할 수 있습니다. 10 월 인사-SD 즉시 접근 향상을 실제 수술 시간 관련 변수를 식별 하기 위해 (수술 실패) 시도 실패 윤곽을 그리 다 사용할 수 있습니다. 우리는 HR-SD-10 월 이점을 제공 합니다 수많은 임상 유전자에서 치료 연구 외부 망막 변성의 급속 한 양적 평가 함으로써 식별/실험 기준 ( 에 부합 하지 않는 연구 동물의 도태 수 발견 예를 들어, 잘못 된 subretinal 주입), 직접 어디 벡터 (여기서 전 임상 효과 가장 가능성이) 배달 되었다 눈의 지역에 따라 영상으로 벡터 배달 되지 않았습니다 영역을 제어 하 고. 개발 이후 SD OCT를 사용 하 여 허용 하 고 안과 연구자에 의해 사용을 계속 하고있다 그리고 이제 마우스 또는 설치류 모델13,25에서 망막 과학적 연구에서 망막 이미징의 표준으로 간주 됩니다. 10 월 인사-SD 및 그것의 소프트웨어 기능을 동물 모델 선택, 선택에 변성의 특성을 포함 하 여 프로세스의 모든 단계에서 마우스 모델에서 성공적인 정량 유전자 치료의 목표를 추가로 독특한 통합 방식에서 이용 하였다 질병 모델, 치료 배달, 벡터를 전달 하며, 독성/효능 평가의 매핑. HR-SD-OCT를 사용 하 여 프로세스의 모든 수준에서 더 효율적인 약물 발견에 대 한 수 있습니다. 여기 우리의 RNA 약물 발견 프로그램에 사용 되는 이러한 접근 방법을 설명 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">C57BL6 (J)</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:215px;">664</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">N129R-</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2HRho 1T/1T</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="78" style="height:78px;width:251px;">Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">90-R2200-U1-120.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Retinal Imaging System (RIS)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Stemi 2000C Microscope</td>
			<td style="width:245px;">Zeiss</td>
			<td style="width:215px;">000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">P-97 Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td style="width:245px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:215px;">p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">MMN-33 micro manipulator&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Narishige USA</td>
			<td style="width:215px;">MMN-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">PLI-100&#160; micro injector</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">64-1736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Holder (Rotating)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Storage Receptacle</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments Inc.</td>
			<td style="width:215px;">E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">&#160;Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">30-0053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tert-amyl Alcohol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-215-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Goniovisc</td>
			<td style="width:245px;">BioVision Limited</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17238-610-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP&#160; 2%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-097-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%</td>
			<td style="width:245px;">Perigo</td>
			<td style="width:215px;">NDC 45802-046-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Systane Ultra</td>
			<td style="width:245px;">Alcon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:215px;">9006619-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tetracaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">DPBS</td>
			<td style="width:245px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:215px;">14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Virus Preparations</td>
			<td style="width:245px;">ViGene /UNC</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gold nanorods</td>
			<td style="width:245px;">NANOPARTz</td>
			<td style="width:215px;">D12M-850-1.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-250-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Coverslips</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">12-548-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Forceps</td>
			<td style="width:245px;">Milton</td>
			<td style="width:215px;">18-825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Needles 30 guage</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">W11604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Syringes</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Bioptigen software Package</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-263-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Windows Excel</td>
			<td style="width:245px;">Microsoft</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Adobe Illustrator</td>
			<td style="width:245px;">Adobe&#160;</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scale</td>
			<td style="width:245px;">Mettler</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scissors</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ear punch</td>
			<td style="width:245px;">Nat&#8217;l band</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">CL 100 Light source</td>
			<td style="width:245px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:215px;">CL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Nitrogen Gas</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Welding Supply</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heated Water bath</td>
			<td style="width:245px;">Neslab</td>
			<td style="width:215px;">RTE-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating plate</td>
			<td style="width:245px;">In House</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating mat</td>
			<td style="width:245px;">Cincinnatti Sub Zero</td>
			<td style="width:215px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Clay mouse holder</td>
			<td style="width:245px;">Plast.i.clay American Art Clay Co.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Betadine</td>
			<td style="width:245px;">MedLine&#160;</td>
			<td style="width:215px;">NDC53329-938-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:245px;">American Health Service</td>
			<td style="width:215px;">Ctag</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">EtOH 70%</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">BP2818-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gloves Nitrile</td>
			<td style="width:245px;">VWR</td>
			<td style="width:215px;">89038-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys ERG Color Dome instrument</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">D125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Contact lenses</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys Software</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Origin 6.1 software</td>
			<td style="width:245px;">OriginLab Corp.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Reference electrodes</td>
			<td style="width:245px;">Ocuscience</td>
			<td style="width:215px;">F-Thread Electrode (DTL) 24&#8221;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research

HR-SD-10 월은 라이브 마우스 모델에서 포토 리셉터 변성의 진행을 모니터링, 평가 subretinal 공간으로 치료제의 배달 독성과 효능에서 vivo에서평가 하 고 활용. HR-SD-10 월 적외선 (800-880 nm) 근처를 사용 하 고 광학 특히 하위 2 미크론 축 해상도 마우스 눈의 독특한 광학에 대 한 설계 되었습니다. 유전자 변형 마우스 모델 외부 망막 (포토 리셉터) 변성 및 컨트롤의 질병의 진행을 평가 하기 위해 몇 군데 있었다. 가져온된 유리 바늘 제공 adeno 관련 바이러스 (AAV) 또는 나노 (NP) 를 통해 하위 망막 주사 트랜스 scleral 트랜스 안 접근 하 사용 되었다. Subretinal 공간으로 바늘의 위치 주의 하위 망막 공간으로 액체를 제공 하는 보정된 압력 주입 전에 필요 했다. 실시간으로 subretinal 수술 이미징 시스템 (RIS) 우리의 망막에 실시 됐다. HR-SD-10 월 시연 한 독성 돌연변이 인간 돌연변이 rhodopsin (P347S)의 표현으로 인해 진보적인 유니폼 망막 변성 (P347S) transgene 쥐에서. HR-SD-10 월 모든 망막 층의 엄격한 정량화를 허용 한다. 외부 핵 층 (ONL) 두께 및 포토 리셉터 외부 세그먼트 길이 (OSL) 측정 포토 리셉터 활력, 변성, 또는 구조와 연관. RIS 배달 시스템 수 있습니다 subretinal 주사의 실시간 시각화 신생아 (~ P10-14) 또는 성인 쥐, 및 10 월 HR-SD 즉시 배달의 성공을 결정 하 고 지도 영역 범위. 10 월 인사-SD 대뇌 비보의 활력 측정 또한 쥐, subretinal 수술의 성공을 평가할 수 있는 강력한 도구입니다. HR-SD-10 월 망막 변성, 독성, 그리고 전 임상 유전자 치료 연구에서 치료 구조의 정도 평가 하기 위해 균일 한 동물 동료를 식별 하기 위해 사용할 수 있습니다.

존재, 속도 모델 외부 망막 변성의 균일성 평가 측정은 ONL의 느릅나무, ONL 악기 소프트웨어에서 제공 하는 캘리퍼스 도구를 사용 하 여의 한계를 정의 하는 OPL에서 기록 되었다. 목표는 부분적으로 인간 답게 adRP 마우스 모델에서 외부 망막 변성의 진행을 지도 했다. 제어 C57BL/6(J) 마우스를 hC1/hC1 / / mWT 비교 이미지/mWT 마우스 모델, 돌연변이 인간 막대 opsin (<e...

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Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

여기를 사용 하 여 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (HR-SD-10 월) subretinal 공간으로 유전자 치료 대리인의 납품을 지원, 그 영역 범위를 평가 하 고 포토 리셉터 활력을 특성화 새로운 접근 방식을 설명 합니다.

초고 해상도 마우스 광학 일관성 단층 촬영 망막 유전자 치료 연구에서 안 구내 주사를 돕기 위해

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

이 subretinal 주입 절차의 전반적인 목표는 실시간으로 관찰할 수 있는 최소 침습적이고 재현 가능한 방식으로 망막에 벡터를 전달하는 것입니다. 안녕하세요, 이 방법은 벡터 전달 효능 및 치료제 독성에 대한 유전자 치료 연구에서 주요 질문에 답하는 데 사용할 수 있다. 이 기술의 몇 가지 장점은 망막 및 기타 눈 구조에 최소한의 손상, 정밀 한 사출 사이트 매핑 및 고체 통계 추론을 허용하는 엄격한 정량적 생체 내 측정을 포함한다.안구 간 유전자 주입의 경우, 먼저 망막 이미징 시스템 현미경의 시야 단계에 마취 마우스를 배치하고 집약을 열고 아래로 밀어 내는 동안 눈꺼풀의 7 시 및 10 시 위치에 멸균 무딘 홍채 집게의 팁을 배치하여 부드럽게 프강전증을 유도합니다. 집게를 사용하여 눈꺼풀을 눈꺼풀을 동축시키고 바늘 끝을 각막 림푸스 가장자리 아래 약 1~1.5밀리미터로 향합니다. 다음으로, 멸균 PBS 용액 한 방울을 눈에 바르고 멸균 커버 슬립으로 눈을 가립니다.경내 우울증이 생성 될 때까지 조심스럽게 결막을 통해 눈으로 바늘을 운전. 마이크로 조작기를 사용하여 경피성 우울증이 초점을 맞출 때까지 눈을 위쪽으로 회전한 다음 바늘을 앞으로 몰아 바늘 끝으로 망막에 날카로운 피크를 만듭니다. 바늘 홀더를 사용하여, 바늘의 끝이 클라와 RPE를 통해 지루해질 때까지 바늘을 회전시켜, 바늘 의 끝에 있는 밀가루가 피하 공간 및 망막 안료 상피 세포 단층의 바로 부근에 있는 망막 조직 하에서 볼 수 있도록 합니다.바늘의 끝을 아래로 운전하여 전 세계에 접선한 다음 발 페달 스위치로 사출 펌프를 활성화하십시오. 0.5~1마이크로리터의 트랜스진 용액이 체증 공간으로 전달된 후, 바늘을 철회하고 혈액이 안정되고 그 액체가 주입관 부위에서 누출되지 않는지 확인한다. 주입의 성공을 확인하려면 직사각형 볼륨 OCT를 기록하고 이미지를 다양한 종류의 잠재적 인 주입 결과의 이미지와 비교합니다.적절한 주입 배치를 확인한 후 직사각형 OCT 이미지를 사용하여 블B의 정도를 fundus 이미지에 매핑합니다. 피망 의 정도를 매핑하기 위해 눈 안에 인식 가능한 랜드마크가 이미지에 포함되는 것과 같은 Bleb의 직사각형 볼륨 OCT 이미지를 엽니다. 필요에 따라 B 스캔의 왼쪽 및 오른쪽 가장자리의 위치를 식별하고 시신경 헤드, ONH, 존재하는 경우 및 망막이 RPE 및 choroid에서 분리된 변곡점을 식별한 다음 데이터를 저장합니다.그런 다음 저장된 파일을 컴파일하고 데이터를 플롯하여 EN FACE OCT 이미지에 주입 블B맵을 효과적으로 만듭니다. 플롯된 데이터를 주입 부위를 포함하는 fundus 이미지에 오버레이하고 병합된 이미지를 저장합니다. 이 이미지를 사용하여 후속 OCT 이미징 중에 관심 영역을 찾습니다.사출 망막 변성을 평가하기 위해 먼저 기록된 고해상도 스펙트럼 도메인 OCT 또는 HRSD OCT 직사각형 볼륨 이미지를 열고 측정할 B 스캔을 선택합니다. 선택한 이미지가 화면을 채울 때까지 확대하고 이미지를 마우스 오른쪽 단추로 클릭합니다. 캘리퍼를 클릭하여 적절한 수의 캘리퍼를 선택한 다음 구성 캘리퍼 기능을 사용하여 캘리퍼를 각도 블록 열에서 수직으로 할당하고 디스플레이 캘리퍼 위치를 켜서 망막 전체에 균일한 캘리퍼 배치를 용이하게 합니다.적용을 클릭하고 적절한 위치에 각 캘리퍼를 이동 0.1 받는 사람 0.2 B 스캔을 통해 밀리미터 떨어져, 적절 한 경우 시신경 헤드의 중심에 하나의 캘리퍼를 배치 하는 주의. 모든 캘리퍼가 배치되면 각 캘리퍼를 관심 지역의 길이 범위로 클릭하고 드래그하여 임의로 B 스캔의 측정 가능한 영역을 최대 길이로 오버레이하지 않도록 설정합니다. 외부 핵층 두께를 측정하려면 각 캘리퍼의 상단을 외부 제한 멤브레인에 놓고 각 캘리퍼의 바닥을 외부 플렉시폼 층의 바닥에 0.1~ 0.2밀리미터 단위로 배치합니다.모든 캘리퍼를 배치하고 크기로 조정한 후, 이미지를 마우스 오른쪽 단추로 클릭하고 캘리퍼 데이터를 저장합니다"라고 적시면 캘리퍼를 X 축의 동일한 위치에 열고 필요에 따라 캘리퍼의 길이를 x 방향으로 이동하지 않고 측정을 반복합니다. 모든 검사를 측정한 경우 저장된 데이터 파일을 열고 수정된 날짜를 클릭하여 저장된 시간에 따라 파일을 정렬합니다. 측정된 각 B 스캔에 대한 모든 파일을 열고 각 B 스캔의 원시 데이터를 가장 낮은 프레임 번호에서 가장 높은 프레임 번호로 단일 파일로 컴파일하고 캘리퍼 이름, 길이 및 중앙 X 열을 포함한 데이터 열을 선택합니다.처리된 각 직사각형 볼륨 OCT 이미지에 대해 측정된 모든 B 스캔에 대해 가운데 X가 동일한지 확인하고 측정을 기록하는 데 사용되지 않은 캘리퍼의 데이터를 삭제합니다. 시신경 헤드의 중앙에 위치한 캘리퍼를 0으로 설정하고 X 대 다중 Y 데이터 세트에 대한 데이터를 플롯하여 외부 핵층 또는 기타 측정망막 층의 두께에 대한 3D 플롯 함수를 얻습니다. 그런 다음 제어 및 실험 동물 간의 외부 핵층 측정값을 해당 연령과 비교하여 잠재적망막 변성의 속도와 균일성을 결정합니다.망막 측정의 3D 매핑의 경우, 주입 후 OCT 이미지를 검토하고 식별 가능한 랜드마크를 기록한 다음 동물을 동일한 영역에서 후속 SDO CT 이미지를 획득하도록 배치하고 동일한 식별 가능한 랜드마크를 포함하고 기록된 이미지를 방금 입증한 대로 처리합니다. 이전에 주입된 망막 영역의 재이미징을 용이하게 하기 위해 식별 가능한 랜드마크를 포함하는 고품질 OCT 이미지를 얻는 것이 매우 중요합니다. OS 길이의 변화를 측정하기 위해 캘리퍼는 외부 제한 멤브레인에서 브룩스 멤브레인으로 배치되어 이러한 층이 OCT 이미지에서 쉽게 식별되기 때문에 신뢰할 수 있는 측정을 가능하게 했습니다.서로 다른 마우스 줄에서 이러한 레이어 사이의 측정의 차이는 짧은 외부 세그먼트 길이에 기인했다. 피하 주사가 성공적으로 수행되는 경우, 하수 공간의 개방은 HRSD OCT 이미저 및 B 스캔 이미지의 en 얼굴 뷰에서 모두 명확하게 시각화될 수 있는 블의 생성을 유도한다. 사출 부위의 경계 맵을 겹쳐서 망막 조직 측정 및 캘리퍼 위치 데이터 세트의 세분화를 통해 망막 변성에 대한 특정 치료제의 효과에 대한 후속 통계 적 테스트를 허용합니다.일단 마스터되면 제대로 수행하면 이 기술을 10분 만에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 외과 환경을 깨끗하고 멸균하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 개발 후, 이 기술은 유전자 치료 분야의 연구원들이 전체 subretinal 수술 주사 과정을 실시간으로 모니터링할 수 있는 길을 열어주었으며 생체 내에서 즉시 수술 성공을 결정하는 방법을 만들었습니다.이 주입 절차에 따라, OCT 및 전기 망열과 같은 다른 방법은 유전자 기능 구조 및 / 또는 독성에 대한 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다. 이 비디오를 시청한 후, 당신은 이 이미지에서 10월에 주입 블B의 정도를 매핑하고, 외부 망막 층의 엄격한 측정을 얻는 방법, 경피성 및 경부 피하 주사를 수행하는 방법을 이해해야 한다. 유전자 치료 벡터로 작업하는 것은 위험할 수 있으며 적절한 개인 보호 장비를 착용하는 것과 같은 예방 조치는 항상 이 절차를 수행하는 동안 사용해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

면역 결함 마우스의 확립과 인간 Retinoblastoma 종양의 전파

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

연구

의학

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

암의 생산 및 반응 산소 종의 감지 (ROS)

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

망막 순환 도플러 광 결맞음 단층 촬영 장치

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

태아 마우스 모델에서 Bioactive 에이전트의 Intratracheal 관리를위한 소설 외과 접근

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

마우스 눈에 유전자 치료 벡터와 줄기 세포의 Subretinal 주입

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

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당뇨병 연구에서 β-세포 질량 분포의 평가를위한 적외선 광학 프로젝션 단층 촬영 부근

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

생성 및 마우스의 동맥 병변의 3 차원 정량 광학 프로젝션 단층 촬영을 사용하여

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

비보, 경피적, 니들 기반, 신장 질량의 빛 간섭 단층 촬영에서

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

재조합 아데노 - 관련 바이러스 성 벡터의 정위 주사를 통해 파킨슨 병에 대한 알파 - 시누 클레인 기반 쥐 모델 개발

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

안압 상승을 통해 망막 허혈 - 재관류 손상의 마우스 모델

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...