Name: ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Dette materialet er basert på arbeid støttes, delvis av Institutt for Veteraner saker (VA), veteraner helse Administration, Office for forskning og utvikling (biomedisinsk laboratorium forskning og utvikling) (VA Merit Grant 1I01BX000669). JMS er ansatt, delvis som ansatte lege-forsker, Oftalmologi, VA WNY; Kalt MCB er ansatt, delvis av VA WNY. Studien ble utført på, og støttes delvis av veteraner administrasjon Western New York helse systemet (Buffalo, NY). Innholdet representerer ikke synspunktene til Department of Veterans Affairs eller myndighetene i USA. Støttes også, i stor del, ved NIH/NEI R01 gir EY013433 (PI: JMS), NIH/NEI R24 gi EY016662 (UB Vision infrastruktur Center, PI: M slakting, direktør - Biophotonics modul: JMS), en ubegrenset tilskudd til avdeling for Oftalmologi/Universitetet i Buffalo fra forskning til forhindre blindhet (New York, NY), og et stipend fra Oishei Foundation (Buffalo, NY). Vi erkjenner gave hC1 transgene RHOP347S linjen og ekson 1 musen RHO knockout fra Dr. Janis Lem (dusker New England Medical Center, Boston, MA), og gave NHR-E transgene modellen i heterozygote tilstand på den musen ekson 2 RHO knockout bakgrunn fra Dr. G. Jane Farrar og Peter Humphries (Trinity College, Dublin, IRE).

Dyr protokoller blir gjennomgått og godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteer av VA WNY HCS og Universitetet i Buffalo-SUNY. Dyrene ble brukt i henhold til reglene i Association visjon og Oftalmologi (ARVO) og erklæring i Helsinki.
1. musen modeller
<ol><li>Identifisere musen modeller evalueres inkludert kontroller. Merk: Bildebehandling ble utført for en C57BL/6(J), hC1/hC1 / / mWT/mWT, en delvis humanized mus retinal degenerasjon modell homozygous for ...

<ol>
	<li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses.">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li><li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations.">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li><li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1.">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li><li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12.">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li><li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration.">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li><li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+viral+vectors+for+retinal+gene+therapies.">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li><li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors.">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li><li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach.">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808 (2016).</li><li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+ocular+angiogenesis.">Gene therapy for ocular angiogenesis.</a> Clinical Science. 104, 561-575 (2003).</li><li>Igarashi, T., Miyake, K., Asakawa, N., Miyake, N., Shimada, T., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+comparison+of+administration+routes+for+AAV-8+mediated+ocular+gene+therapy.">Direct comparison of administration routes for AAV-8 mediated ocular gene therapy.</a> Curr. Eye Res. 38 (5), 569-577 (2013).</li><li>Bennett, J., Duan, D., Engelhardt, J. F., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction.">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li><li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+three-dimensional+high-resolution+imaging+of+the+rodent+retinal+with+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images.">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration.">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286 (2012).</li><li>Berger, A., al, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice.">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , (2013).</li><li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+transgene+expression+in+mouse+retina+following+subretinal+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus.">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li><li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium.">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030 (2015).</li><li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension.">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247 (2015).</li><li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+real-time,+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system.">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography.">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li><li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology.">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203 (2014).</li><li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S:+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments.">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li><li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+transducin-dependent+retinal+degeneration:+accelerated+retinal+degeneration+in+the+absence+of+rod+transducing.">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li><li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+(Pro23His):+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li><li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene.">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li><li>Hruby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+examination+of+the+vitreous+body.">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li><li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injections+in+rodent+eyes:+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina.">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li><li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+brief:+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes.">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li><li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li></ol>

HR-SD-oktober gir en enkel metode for karakteristikk av potensielle dyr modeller for menneskelig sykdom å fastslå nytten i testing potensielle therapeutics. Muligheten til å raskt og pålitelig karakterisere en potensiell dyr modell for menneskelig sykdom er avgjørende for prosessen med terapeutisk medikament oppdagelse (f.eks, erstatning gene terapi, ribozyme eller shRNA knockdown genterapi, kombinert genterapi). HR-SD-oktober gir en enkel, rask og ikke-invasiv metode for å vurdere retinal helse som kan br...

Forskere utvikler gen-terapi for en rekke netthinnen og netthinnens degenerative sykdommer med håp om å oversette romanen therapeutics til behandlinger for menneskelig sykdom1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. tid domenet eller spektrale domene optical coherence tomografi (SD-oktober) er brukt til å undersøke aspekter av ytre retinal degenerasjon i bestemte musen modeller av sykdom12,13,14 . HR-SD-oktober er ikke, men mye brukt i forbindelse med optimalisering evaluering av musen modeller for å bestemme hastigheten og romlig sıtt retinal degenerasjon, eller i forbindelse med prekliniske evaluering av genet basert therapeutics, for eksempel til vurdere redning, toksisitet eller romlige omfanget av vektor levering8,15,16. Når en musemodell er fullt preget, kan HR-SD-oktober dataene tjene som en informativ og pålitelig ressurs å måle virkningen av therapeutics å utøve redning eller toksisitet i musen modeller retinal degenerasjon17. Mange grupper bruker subretinal injeksjon som vektor levering på grunn av sin effektivitet på transducing fotoreseptorer og netthinnens pigment epitel (RPE) celler. Men dette er fortsatt en vanskelig metode å mestre, gitt at det utføres vanligvis av fri hånd kirurgi fra hornhinnen overflaten, og er ofte fylt med cataracts, blødning og utilsiktede retinal detachments forekommer ved manipulering av bakre glasslegemet. Mange grupper fremdeles prøver subretinal injeksjoner blindt og levere viruset benytter manuell injeksjoner med relativt stor diameter rustfritt stål nåler (34G)8,17,18,19 ,20,21,22og noen bruker optical coherence tomografi (OCT) for å bekrefte riktig levering av vektor netthinnen8,17, 20 , 22. noen forbedringer i metoden har nylig blitt beskrevet over Mikroskala pinner drevet av en micromanipulator22.
Vi presenterer en integrert tilnærming som hjelpemidler i plasseringen av nålen og injeksjoner er tilrettelagt av en egendefinerte instruert stereo oftalmoskop utviklet i laboratoriet for se i lille øyet mus17, 23. Bruk av trakk glass mikro nåler i forbindelse med den stereotaxic micromanipulator gir bedre kontroll med nål plassering med ingen kirurgisk kuttet ned nødvendig (dvs. gjennom conjunctivae og bindevev) før injeksjon. Bruken av trykket regulert mikro injektor hjelper levere konsistent injeksjon volumer og injeksjon kan gjøres med mye større stabilitet, presisjon og mye tregere enn manuell injeksjoner utført av en håndholdt sprøyte, og dermed redusere den forekomst av boble injeksjon i øyet. Mindre nålen hindrer lekkasje etter nålen uttak fordi banen er selvtettende. For å vurdere omfanget av injeksjon/levering, stole mange undersøkende grupper på å finne og vurdere areal omfanget av forbedret grønne fluorescens protein (EGFP) uttrykk i netthinnen (uttrykk konstruere levert av vektor) på eksperimentell slutten Velg (euthanasia) bekrefte vellykket injeksjoner11,19,20,24. Denne metoden (ikke benytte OCT) for å bekrefte kirurgisk suksess avfall en enorm mengde ressurser kirurgisk fremgangsmåter og dyr, siden alle dyr med (Ukjent) kirurgisk feil må opprettholdes, etterfulgt med repeterende tiltak til Eutanasi og øye innhøstingen (når EGFP er målt). Bekreftelse av plasseringen av injeksjon i netthinnen kan forbedres med HR-SD-oktober for å demonstrere at injeksjon ligger mellom riktig lagene av netthinnen (dvs. subretinal plass). HR-SD-oktober kan også brukes til å avgrense umiddelbart mislykkede forsøk (kirurgiske feil) til å identifisere relevante variabler i ekte kirurgisk tid til å forbedre tilnærming. Vi fant at HR-SD-oktober gir mange fordeler i preklinisk gene terapi studier ved å tillate rask kvantitativ vurdering av ytre retinal degenerasjon, slik at ID/culling av studien dyr ikke oppfyller eksperimentelle kriterier ( f.eks feil subretinal injeksjon), og å direkte oppfølging imaging til regionen øyet der vektor ble levert (der prekliniske effekten er mest sannsynlig) samt kontrollere regioner der vektor ikke ble levert. Siden sin utvikling, bruk av SD-oktober har fortsatt å bli akseptert og brukes av Oftalmologi forskere regnes nå standarden på netthinnen bildebehandling i netthinnen vitenskapelige studier i mus eller gnager modeller13,25. HR-SD-oktober og programvare egenskaper ble benyttet i unike integrert måter å fremme vellykket kvantitativ genterapi musen modeller på hvert trinn i prosessen, inkludert dyremodell utvalg, karakterisering av degenerasjon i valgte mål sykdom modeller, terapeutiske levering, kartlegging vektor leveringsmåte og toksisitet/effekt evaluering. Bruk av HR-SD-oktober gir mer effektiv stoffet funnet på alle trinn i prosessen. Her beskriver vi disse fremgangsmåtene som brukes i RNA Drug Discovery programmet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">C57BL6 (J)</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:215px;">664</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">N129R-</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2HRho 1T/1T</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="78" style="height:78px;width:251px;">Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">90-R2200-U1-120.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Retinal Imaging System (RIS)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Stemi 2000C Microscope</td>
			<td style="width:245px;">Zeiss</td>
			<td style="width:215px;">000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">P-97 Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td style="width:245px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:215px;">p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">MMN-33 micro manipulator&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Narishige USA</td>
			<td style="width:215px;">MMN-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">PLI-100&#160; micro injector</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">64-1736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Holder (Rotating)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Storage Receptacle</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments Inc.</td>
			<td style="width:215px;">E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">&#160;Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">30-0053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tert-amyl Alcohol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-215-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Goniovisc</td>
			<td style="width:245px;">BioVision Limited</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17238-610-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP&#160; 2%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-097-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%</td>
			<td style="width:245px;">Perigo</td>
			<td style="width:215px;">NDC 45802-046-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Systane Ultra</td>
			<td style="width:245px;">Alcon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:215px;">9006619-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tetracaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">DPBS</td>
			<td style="width:245px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:215px;">14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Virus Preparations</td>
			<td style="width:245px;">ViGene /UNC</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gold nanorods</td>
			<td style="width:245px;">NANOPARTz</td>
			<td style="width:215px;">D12M-850-1.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-250-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Coverslips</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">12-548-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Forceps</td>
			<td style="width:245px;">Milton</td>
			<td style="width:215px;">18-825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Needles 30 guage</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">W11604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Syringes</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Bioptigen software Package</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-263-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Windows Excel</td>
			<td style="width:245px;">Microsoft</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Adobe Illustrator</td>
			<td style="width:245px;">Adobe&#160;</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scale</td>
			<td style="width:245px;">Mettler</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scissors</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ear punch</td>
			<td style="width:245px;">Nat&#8217;l band</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">CL 100 Light source</td>
			<td style="width:245px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:215px;">CL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Nitrogen Gas</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Welding Supply</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heated Water bath</td>
			<td style="width:245px;">Neslab</td>
			<td style="width:215px;">RTE-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating plate</td>
			<td style="width:245px;">In House</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating mat</td>
			<td style="width:245px;">Cincinnatti Sub Zero</td>
			<td style="width:215px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Clay mouse holder</td>
			<td style="width:245px;">Plast.i.clay American Art Clay Co.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Betadine</td>
			<td style="width:245px;">MedLine&#160;</td>
			<td style="width:215px;">NDC53329-938-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:245px;">American Health Service</td>
			<td style="width:215px;">Ctag</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">EtOH 70%</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">BP2818-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gloves Nitrile</td>
			<td style="width:245px;">VWR</td>
			<td style="width:215px;">89038-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys ERG Color Dome instrument</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">D125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Contact lenses</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys Software</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Origin 6.1 software</td>
			<td style="width:245px;">OriginLab Corp.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Reference electrodes</td>
			<td style="width:245px;">Ocuscience</td>
			<td style="width:215px;">F-Thread Electrode (DTL) 24&#8221;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research

HR-SD-oktober benyttes å overvåke utviklingen av photoreceptor degenerasjon i levende mus modeller, vurdere levering av terapeutiske agenter i subretinal plass, og å vurdere toksisitet og effekt i vivo. HR-SD-oktober bruker nær infrarødt lys (800-880 nm) og har optikk spesielt utviklet for unike optikk musen øyet med sub-2-mikron aksial oppløsning. Transgene musen modeller av ytre retinal (photoreceptor) degenerasjon og kontroller ble fotografert for å vurdere sykdomsprogresjon. Trakk glass microneedles ble brukt til å levere sub retinal injeksjoner av adeno-assosiert virus (AAV) eller nanopartikler (NP) via en trans-Innbukking og trans-choroidal tilnærming. Nøye plassering av nålen i subretinal plass var nødvendig før en kalibrert trykk injeksjon, som leverer væske inn i sub retinal plass. Sanntid subretinal operasjonen ble utført på vår retinal imaging system (RIS). HR-SD-oktober vist progressiv uniform retinal degenerasjon på grunn av uttrykk for en giftig mutant menneskelige mutant rhodopsin (P347S) (RHOP347S) transgene i mus. HR-SD-oktober kan strenge kvantifisering av alle retinal lagene. Ytre kjernefysiske lag (bare) tykkelse og photoreceptor ytre segmentet (OSL) lengdemål korrelerer med photoreceptor vitalitet, degenerasjon eller redning. RIS leveringssystemet gir sanntids visualisering av subretinal injeksjoner i neonatal (~ P10-14) eller voksen mus og HR-SD-oktober umiddelbart avgjør suksessen til levering og kart areal grad. HR-SD-oktober er et kraftig verktøy som kan evaluere hvor vellykket subretinal kirurgi i mus, i tillegg til å måle vitalitet av fotoreseptorer i vivo. HR-SD-oktober kan også brukes til å identifisere uniform dyr kohorter å vurdere omfanget av retinal degenerasjon, giftighet og terapeutiske redning i preklinisk gene terapi forskningsstudier.

Vurdere tilstedeværelse, Rate og enhetlig modell ytre Retinal degenerasjon Målinger av bare innspilt fra OPL til ELM, definere grensene av bare bruke verktøyet caliper i Maskinprogramvar. Målet var å kartlegge progresjon av ytre retinal degenerasjon i en delvis humanized adRP musemodell. Sammenlignbare bilder fra en kontroll C57BL/6(J) mus og en hC1/hC1 / / mWT/mWT musemodell, uttrykke to kopier av mutant menneskelige stang opsin (RHOP347S) gen...

Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

Her viser vi en ny tilnærming til å bruke høy oppløsning spectral domener optical coherence tomografi (HR-SD-oktober) å hjelpe levering av gene terapi agenter i subretinal plass, vurdere dekningen areal og karakteriserer photoreceptor vitalitet.

Av beryllium oppløsning mus Optical Coherence tomografi å hjelpe intraokulært injeksjon i netthinnen genterapi forskning

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

Det overordnede målet med denne subretinale injeksjonsprosedyren er å levere en vektor til netthinnen på en minimal invasiv og reproduserbar måte som kan observeres i sanntid. Hei, denne metoden kan brukes til å svare på viktige spørsmål i genterapi forskning om vektor levering effekt og terapeutiskmiddel toksisitet. Noen fordeler med denne teknikken inkluderer minimal skade på netthinnen og andre øyestrukturer, presis kartlegging på injeksjonsstedet og strenge kvantitative in vivomålinger som tillater solid statistisk slutning.For intraokulær transgeninjeksjon, plasser først en bedøvet mus på visningsstadiet av et retinal bildesystemmikroskop og plasser tuppene av en steril, stump iris tang på syv og 10 o'clock posisjoner av øyelokket mens du skyver tang åpne og ned for å forsiktig indusere proptose. Bruk tangen til å koaksial øyelokkene under øyekloden og rett spissen av nålen til omtrent en til 1,5 millimeter under kanten av hornhinnen limbus. Deretter påfør en dråpe steril PBS-løsning på øyet og dekk øyet med en steril dekselslip.Kjør nålen forsiktig inn i øyet gjennom conjunctiva til en skleral depresjon er opprettet. Bruk mikromanipulatoren til å rotere øyet oppover til den skleraldepresjonen er i fokus, og kjør deretter nålen fremover for å skape en skarp topp i netthinnen med spissen av nålen. Bruk nåleholderen til å rotere nålen bare til spissen av nåleborene gjennom sclera og RPE, slik at melescein i spissen av nålen kan være synlig under netthinnen vev i umiddelbar nærhet av subretinal plass og retinal pigment epitel celle monolayer.Kjør tuppen av nålen nedover slik at den er tangential til kloden, og aktiver deretter injeksjonspumpen med fotpedalbryteren. Etter at 0,5 til én mikroliter transgeneoppløsning er levert til subretinalrommet, trekk nålen tilbake og bekreft at blodet er stabilt og at væsken ikke lekker ut av injeksjonsstedet. For å bekrefte injeksjonens suksess, registrer et rektangulært volum OCT og sammenlign bildene med bilder av de ulike typer potensielle injeksjonsresultater.Etter bekreftelse av riktig injeksjon plassering, bruk det rektangulære OCT bildet for å kartlegge omfanget av bleb på fundus bildet. For å kartlegge omfanget av subretinal bleb, åpne et rektangulært volum OCT bilde av bleb slik at et gjenkjennelig landemerke i øyet er inkludert i bildet. Legg til så mange kalipere som nødvendig for å identifisere posisjonen til venstre og høyre kant av B-skanningen, samt synsnervehodet, ONH, hvis det finnes, og bøyningspunktet der netthinnen løsner fra RPE og choroid og deretter lagre dataene.Deretter kompilere de lagrede filene og plotte dataene, effektivt lage et kart over injeksjon bleb på en ansikt OCT bilde. Overlegg de plottede dataene på fundusbildet som inneholder injeksjonsstedet og lagre det sammenslåtte bildet. Bruk dette bildet til å finne områder av interesse under oppfølging oct imaging.For å vurdere netthinnedegenerasjon etter injeksjon, må du først åpne et registrert spektraldomene MED høy oppløsning OCT eller HRSD OCT rektangulært volumbilde og velge en B-skanning som skal måles. Forstørre det valgte bildet til det fyller skjermen og høyreklikk på bildet. Klikk kalipere for å velge riktig antall kalipere, og bruk deretter konfigurer kaliperfunksjonen til å tilordne kaliperne som vertikale i vinkelblokkkolonnen og slå på skjermkaliberplasseringen for å forenkle ensartet kaliperplassering over netthinnen.Klikk påfør og flytt hver kaliper til riktig sted 0,1 til 0,2 millimeter fra hverandre over B-skanningen, og ta vare på å plassere en kaliper i midten av synsnervehodet når det er hensiktsmessig. Når alle kaliperne er plassert, klikker og drar du hvert kaliper til lengden på interesseområdet, og setter vilkårlig kalipere som ikke overlegger målbare områder av B-skanningen til maksimal lengde. For å måle den ytre kjernefysiske lagtykkelsen, plasser toppen av hvert kaliper på den eksterne begrensende membranen og bunnen av hver kaliper nederst på det ytre pleksiformlaget ved 0,1 til 0,2 millimeter trinn over netthinnen.Etter at alle kaliperne er plassert og justert til størrelse, høyreklikker du på bildet og klikker lagre kaliperdata"og gjentar deretter målingene som bare demonstrert for hver tiende B-skanning, holder kaliperne åpne og på samme sted på x-aksen og justerer lengdene på kaliperne etter behov, uten å flytte dem i x-retningen. Når alle skanningene er målt, åpner du de lagrede datafilene og klikker datoen endret"for å ordne filene i henhold til tid lagret. Åpne alle filene for hver B-skanning som måles, og kompiler rådatane fra hver B-skanning til én enkelt fil fra laveste til høyeste rammenummer, og velg kolonnene med data, inkludert kalipernavn, lengde og midtstilt X-kolonner.Kontroller at den midtre X er den samme for alle B-skanningene som måles for hvert rektangulært volum OCT-bilde som behandles, og slett data fra kaliperne som ikke ble brukt til å registrere målinger. Sett kaliperen plassert i midten av synsnerven til null og plott dataene for X versus flere Y-datasett for å få en 3D-plottfunksjon for tykkelsen på det ytre kjernefysiske laget eller andre målte retinale lag. Sammenlign deretter de ytre kjernefysiske lagmålingene mellom kontroll og eksperimentelle dyr med tilsvarende aldre for å bestemme hastigheten og ensartetheten til potensiell retinal degenerasjon.For 3D-kartlegging av retinale målinger, gjennomgå post-injeksjon OCT bilder og merk eventuelle identifiserbare landemerker, deretter plassere dyret for å få en oppfølging SDO CT bilde fra samme region, ta vare på å inkludere de samme identifiserbare landemerker, og behandle de innspilte bildene som nettopp demonstrert. Det er svært viktig å få høy kvalitet OCT bilder som inkluderer identifiserbare landemerker for å lette reimaging av tidligere injisert retinal regioner. For å måle endringene i OS-lengde ble kalipere plassert fra den eksterne begrensende membranen til Brooks-membranen, noe som åpner for pålitelige målinger siden disse lagene lett identifiseres i OCT-bilder.Forskjeller i målingene mellom disse lagene fra forskjellige muselinjer ble tilskrevet kortere ytre segmentlengder. Hvis subretinal injeksjonen utføres med hell, induserer åpningen av det subretinale rommet produksjonen av en bleb som tydelig kan visualiseres både i en ansiktsvisning av HRSD OCT-bildeleren og i B-skannebildene. Overlaging av grensekartet til injeksjonsstedet tillater segmentering av retinal vevsmålinger og kaliperposisjonsdatasett for å tillate påfølgende statistisk testing av effekten av spesifikke terapeutiske midler på retinal degenerasjon.Når mestret, kan denne teknikken fullføres i ti minutter hvis den utføres riktig. Mens du prøver denne prosedyren er det viktig å huske å holde det kirurgiske miljøet rent og sterilt. Etter utviklingen banet denne teknikken vei for forskere innen genterapi for å overvåke hele subretinal kirurgisk injeksjonsprosess i sanntid og skapte en måte å umiddelbart bestemme kirurgisk suksess in vivo.Etter denne injeksjonsprosedyren kan OCT og andre metoder som elektroretinografi utføres for å svare på flere spørsmål om transgen funksjonell redning og/eller toksisitet. Etter å ha sett denne videoen, bør du ha en forståelse av hvordan du utfører transsklerale og transchoroidale subretinale injeksjoner, hvordan du kartlegger omfanget av injeksjonen bleb på OCT fra dette bildet, og få strenge målinger av de ytre retinale lagene. Ikke glem at det å arbeide med genterapivektorer kan være farlig, og at forholdsregler, for eksempel bruk av riktig personlig verneutstyr, alltid bør brukes mens du utfører denne prosedyren.

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Produksjon og Påvisning av reaktive oksygen arter (ROS) i Kreft

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Doppler optisk koherens tomografi av Retinal Circulation

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Subretinal Injeksjon av Gene Therapy Vektorer og stamceller i mus Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared optisk projeksjon Tomography for vurderinger av β-celle Mass Distribusjon i Diabetes Research

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Generasjon og 3-dimensjonal Kvantifisering av arteriell lesjoner i Mus Bruke optisk projeksjon tomografi

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

I Vivo, Percutaneous, Needle Basert, Optical Coherence Tomography av nyre Masses

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Utvikling av en Alpha-synuclein Based Rat Modell for Parkinsons sykdom via Stereo Injeksjon av en rekombinant adenoassosiert Viral Vector

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En musemodell av retinal iskemi-reperfusjonsskade Gjennom Heving av intraokulært trykk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...