Name: ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Este material está basado en trabajo apoyado, en parte, por el Departamento de Asuntos Veteranos (VA), Veterans Health Administration, oficina de investigación y desarrollo (Biomédica de laboratorio de investigación y desarrollo) (beca de mérito VA 1I01BX000669). JMS es empleado, en parte, como personal médico-científico, oftalmología, de por qué VA; MCB es empleado, en parte, de por qué VA. El estudio fue llevado a cabo en y apoyado en parte por el sistema sanitario veteranos administración occidental Nueva York (Buffalo, NY). Contenidos no representan las opiniones del Departamento de asuntos de veteranos o el gobierno de Estados Unidos. También apoyó, en gran parte, por NEI/NIH R01 grant EY013433 (PI: JMS), NIH/NEI R24 conceder EY016662 (UB visión infraestructura centro, PI: M sacrificio, Director - biofotónica módulo: JMS), un subsidio sin restricciones a la Departamento de Oftalmología/Universidad Búfalo de la investigación para evitar la ceguera (Nueva York) y una beca de la Fundación de Oishei (Buffalo, NY). Reconocemos el don de la líneaP347S de hC1 transgénica RHOy el ratón del exón 1 nocaut RHO de Dr. Janis Lem (Tufts New England Medical Center, Boston, MA) y el regalo del modelo transgénico NHR-E en el estado heterozigótico en la ratón exón 2 RHO nocaut en el segundo plano de los Drs. G. Jane Farrar y Peter Humphries (Trinity College, Dublín, Irlanda).

Protocolos animales fueron revisados y aprobados por institucional Animal Care y comités de uso de la HCS de por qué VA y de la Universidad SUNY Buffalo. Los animales fueron utilizados según las estipulaciones de la Asociación para la investigación en visión y Oftalmología (ARVO) y la declaración de Helsinki.
1. modelos de ratón
<ol><li>Identificar modelos de ratón para ser evaluada incluyendo los controles. Nota: Proyección de imagen fue realizada para un C57B...

<ol>
	<li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses.">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li><li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations.">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li><li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1.">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li><li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12.">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li><li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration.">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li><li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+viral+vectors+for+retinal+gene+therapies.">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li><li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors.">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li><li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach.">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808 (2016).</li><li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+ocular+angiogenesis.">Gene therapy for ocular angiogenesis.</a> Clinical Science. 104, 561-575 (2003).</li><li>Igarashi, T., Miyake, K., Asakawa, N., Miyake, N., Shimada, T., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+comparison+of+administration+routes+for+AAV-8+mediated+ocular+gene+therapy.">Direct comparison of administration routes for AAV-8 mediated ocular gene therapy.</a> Curr. Eye Res. 38 (5), 569-577 (2013).</li><li>Bennett, J., Duan, D., Engelhardt, J. F., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction.">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li><li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+three-dimensional+high-resolution+imaging+of+the+rodent+retinal+with+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images.">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration.">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286 (2012).</li><li>Berger, A., al, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice.">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , (2013).</li><li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+transgene+expression+in+mouse+retina+following+subretinal+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus.">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li><li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium.">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030 (2015).</li><li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension.">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247 (2015).</li><li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+real-time,+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system.">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography.">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li><li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology.">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203 (2014).</li><li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S:+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments.">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li><li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+transducin-dependent+retinal+degeneration:+accelerated+retinal+degeneration+in+the+absence+of+rod+transducing.">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li><li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+(Pro23His):+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li><li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene.">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li><li>Hruby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+examination+of+the+vitreous+body.">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li><li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injections+in+rodent+eyes:+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina.">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li><li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+brief:+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes.">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li><li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li></ol>

HR-SD-OCT proporciona un método simple para la caracterización de potenciales modelos animales de enfermedad en humanos para determinar su utilidad en la prueba terapéutica potencial. La capacidad de rapidez y fiabilidad caracterizar un modelo animal potencial de la enfermedad humana es fundamental para el proceso de descubrimiento de drogas terapéuticas (p. ej., terapia de recambio genética, terapia del gene precipitación ribozyme o shRNA, terapia génica combinada). HR-SD-OCT proporciona un método simpl...

Los investigadores están desarrollando terapias genéticas para una variedad de enfermedades degenerativas retinianas y retinales con la esperanza de traducir novela terapéutica en tratamientos para la enfermedad humana1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. dominio del tiempo o la tomografía de coherencia óptica de dominio espectral (SD-OCT) se ha utilizado para investigar los aspectos de la degeneración retiniana externa en modelos de ratón específicos de enfermedad12,13,14 . HR-SD-OCT sin embargo, no ha sido ampliamente utilizado en el contexto de optimización de la evaluación de modelos de ratón para determinar la velocidad y uniformidad espacial de degeneración retiniana, o en el contexto de la evaluación preclínica de gene base terapéutica, por ejemplo, a evaluar el rescate, la toxicidad o la extensión espacial del vector entrega8,15,16. Una vez que un modelo de ratón es caracterizado completamente, los datos de HR-SD-OCT pueden servir como recurso informativo y confiable para medir el impacto de la terapéutica para ejercer el rescate o toxicidad en modelos de ratón de la degeneración retiniana17. Muchos grupos utilizan inyección subretinal como un método de entrega de vectores debido a su eficiencia en la transducción de fotorreceptores y células del epitelio (RPE) del pigmento retiniano. Sin embargo, esto sigue siendo un método difícil de dominar, dado que normalmente se hace por cirugía de la mano libre de la superficie corneal y a menudo está llena de cataratas, hemorragias y desprendimientos de retina no deseados que ocurren simplemente por la manipulación de la parte posterior vítrea. Muchos grupos todavía intentar subretinales inyecciones ciegas y entregan el virus usando inyecciones manuales con diámetro relativamente grande acero inoxidable agujas (34G)8,17,18,19 ,20,21,22y tomografía de coherencia óptica utiliza unos (OCT) la proyección de imagen para confirmar la correcta entrega de vector a la retina8,17, 20 , 22. algunas mejoras en el método se han descrito recientemente con agujas de microescala impulsadas por un micromanipulador22.
Presentamos un enfoque integrado que ayuda en la colocación de la aguja, y las inyecciones son facilitadas por un oftalmoscopio estéreo dirigido personalizado diseñado en el laboratorio para visualizar dentro del pequeño ojo de ratón17, 23. el uso de agujas micro vidrio tirado junto con el micromanipulador estereotáxicas proporcionan mejor control de la colocación de la aguja con ningún corte quirúrgico requerido (es decir, a través de conjuntiva y tejido conectivo) antes inyección. Inyector micro ayuda a entregar volúmenes de inyección constante de regular el uso de la presión y la inyección se puede hacer con mayor estabilidad, precisión y mucho más lenta que las inyecciones manual realizadas por una jeringa de mano, lo que disminuye la ocurrencia de inyección de burbuja en el ojo. La aguja más pequeña ayuda a prevenir fugas después del retiro de la aguja porque la ruta es autosellante. Para evaluar el grado de inyección/entrega, muchos grupos de investigación dependen de encontrar y evaluar la extensión areal de expresión de la proteína (EGFP) de mayor fluorescencia verde en la retina (construcción de la expresión por el vector) en el extremo experimental punto (eutanasia) para confirmar éxito inyecciones11,19,20,24. Este enfoque (no utilizando OCT) para verificar el éxito quirúrgico desperdicia una enorme cantidad de recursos en tiempo de procedimiento quirúrgico y los animales, ya que todos los animales con fracasos quirúrgicos (desconocidos) necesitan mantenimiento, con medidas repetitivas hasta eutanasia y el ojo de la cosecha (cuando se mide la EGFP). Confirmación de la localización de la inyección en la retina puede mejorarse usando HR-SD-OCT para demostrar que la inyección se encuentra entre las capas correcto de la retina (es decir, el espacio subretinal). HR-SD-OCT puede utilizarse también para delinear inmediatamente intentos (fracasos quirúrgicos) para identificar las variables relevantes en tiempo real quirúrgico para mejorar el enfoque. Encontramos que HR-SD-OCT proporciona numerosas ventajas en preclínica gene estudios de terapia permitiendo rápida evaluación cuantitativa de la degeneración retiniana externa, que permite la identificación/sacrificio de los animales de estudio que no cumplen criterios experimentales ( por ejemplo, inyección subretinal incorrecta) y a dirigir la proyección de imagen de seguimiento a la región del ojo donde vector fue entregado (donde es más probable el efecto preclínico) como controlar regiones donde vector no fue entregado. Desde su desarrollo, el uso de la SD-OCT ha continuado ser aceptada y utilizada por los investigadores de Oftalmología y ahora se considera el estándar de la proyección de imagen retiniana en retinales estudios científicos en ratón o roedor modelos13,25. HR-SD-OCT y sus capacidades de software fueron utilizados en formas únicas integradas a la meta éxito cuantitativo de terapia del gene en modelos de ratón en cada paso en el proceso, incluyendo la selección del modelo animal, caracterización de la degeneración en elegido modelos de la enfermedad, terapéutica entrega, asignación de vectores de entrega y evaluación de toxicidad/eficacia. El uso de recursos humanos-SD-OCT permite el descubrimiento de fármacos más eficiente en todos los niveles del proceso. Aquí describimos los enfoques que se utilizan en nuestro programa de descubrimiento de fármacos ARN.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">C57BL6 (J)</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:215px;">664</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">N129R-</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2HRho 1T/1T</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="78" style="height:78px;width:251px;">Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">90-R2200-U1-120.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Retinal Imaging System (RIS)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Stemi 2000C Microscope</td>
			<td style="width:245px;">Zeiss</td>
			<td style="width:215px;">000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">P-97 Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td style="width:245px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:215px;">p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">MMN-33 micro manipulator&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Narishige USA</td>
			<td style="width:215px;">MMN-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">PLI-100&#160; micro injector</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">64-1736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Holder (Rotating)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Storage Receptacle</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments Inc.</td>
			<td style="width:215px;">E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">&#160;Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">30-0053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tert-amyl Alcohol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-215-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Goniovisc</td>
			<td style="width:245px;">BioVision Limited</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17238-610-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP&#160; 2%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-097-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%</td>
			<td style="width:245px;">Perigo</td>
			<td style="width:215px;">NDC 45802-046-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Systane Ultra</td>
			<td style="width:245px;">Alcon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:215px;">9006619-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tetracaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">DPBS</td>
			<td style="width:245px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:215px;">14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Virus Preparations</td>
			<td style="width:245px;">ViGene /UNC</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gold nanorods</td>
			<td style="width:245px;">NANOPARTz</td>
			<td style="width:215px;">D12M-850-1.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-250-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Coverslips</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">12-548-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Forceps</td>
			<td style="width:245px;">Milton</td>
			<td style="width:215px;">18-825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Needles 30 guage</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">W11604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Syringes</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Bioptigen software Package</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-263-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Windows Excel</td>
			<td style="width:245px;">Microsoft</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Adobe Illustrator</td>
			<td style="width:245px;">Adobe&#160;</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scale</td>
			<td style="width:245px;">Mettler</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scissors</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ear punch</td>
			<td style="width:245px;">Nat&#8217;l band</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">CL 100 Light source</td>
			<td style="width:245px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:215px;">CL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Nitrogen Gas</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Welding Supply</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heated Water bath</td>
			<td style="width:245px;">Neslab</td>
			<td style="width:215px;">RTE-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating plate</td>
			<td style="width:245px;">In House</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating mat</td>
			<td style="width:245px;">Cincinnatti Sub Zero</td>
			<td style="width:215px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Clay mouse holder</td>
			<td style="width:245px;">Plast.i.clay American Art Clay Co.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Betadine</td>
			<td style="width:245px;">MedLine&#160;</td>
			<td style="width:215px;">NDC53329-938-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:245px;">American Health Service</td>
			<td style="width:215px;">Ctag</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">EtOH 70%</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">BP2818-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gloves Nitrile</td>
			<td style="width:245px;">VWR</td>
			<td style="width:215px;">89038-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys ERG Color Dome instrument</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">D125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Contact lenses</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys Software</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Origin 6.1 software</td>
			<td style="width:245px;">OriginLab Corp.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Reference electrodes</td>
			<td style="width:245px;">Ocuscience</td>
			<td style="width:215px;">F-Thread Electrode (DTL) 24&#8221;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research

HR-SD-OCT se utiliza para monitorizar la progresión de la degeneración de fotorreceptores en modelos de ratón vivo, evaluar la prestación de agentes terapéuticos en el espacio subretinal y para evaluar la toxicidad y la eficacia en vivo. HR-SD-OCT utiliza cerca de luz infrarroja (800-880 nm) y tiene óptica específicamente diseñado para la única óptica del ojo de ratón con una resolución axial de sub-2 micrones. Fueron imágenes de modelos de ratón transgénico de degeneración retiniana externa (fotorreceptor) y controles para evaluar la progresión de la enfermedad. Vidrio tirado microneedles fueron utilizados para entregar inyecciones retiniana sub de virus adeno-asociado (AAV) o nanopartículas (NP) a través de un enfoque trans-escleral y trans-coroides. Cuidadosa colocación de la aguja en el espacio subretinal fue requerida antes de una inyección de presión calibrada, que entrega el líquido en el espacio retiniano sub. Se realizó cirugía subretinal en tiempo real en nuestra retina imágenes de sistema (RIS). HR-SD-OCT demostró degeneración progresiva de retina uniforme debido a la expresión de una tóxico rodopsina mutante humana mutante (P347S) (RHOP347S) transgénica en ratones. HR-SD-OCT permite cuantificación rigurosa de todas las capas retinianas. Capa nuclear externa (ONL) grueso y fotorreceptores segmento externo (OSL) las mediciones de longitud se correlacionan con la vitalidad del fotorreceptor, degeneración o rescate. El sistema RIS permite la visualización en tiempo real de inyección subretinal en neonatal (~ P10-14) o ratones adultos, HR-SD-OCT inmediatamente determina el éxito de la entrega y mapas de extensión areal. HR-SD-OCT es una herramienta poderosa que puede evaluar el éxito de la cirugía subretinal en ratones, además para medir la vitalidad de fotorreceptores en vivo. HR-SD-OCT puede utilizarse también para identificar cohortes animal uniforme para evaluar el grado de degeneración retiniana, toxicidad y rescate terapéutico en estudios de investigación de terapia génica preclínica.

Evaluar la presencia, velocidad y uniformidad de la degeneración retiniana externa modelo Se registraron las mediciones de la ONL de la OPL al olmo, definir los límites de la ONL con la herramienta de pinza en el software del instrumento. El objetivo era asignar la progresión de la degeneración retiniana externa en un modelo de ratón de adRP parcialmente humanizado. Imágenes comparables de un ratón C57BL/6(J) de control y una mWT hC1 y hC1/mWT modelo con ratones...

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Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

Aquí nos muestran un nuevo enfoque al uso de tomografía de coherencia óptica de dominio espectral de alta resolución (HR-SD-OCT) para facilitar la presentación de los agentes de terapia génica en el espacio subretinal, evaluar su cobertura areal y caracterizan la vitalidad del fotorreceptor.

Tomografía de coherencia óptica ultraalta resolución ratón para facilitar la inyección Intraocular en investigación de retina la terapia génica

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

El objetivo general de este procedimiento de inyección subretiniana es entregar un vector a la retina de una manera mínimamente invasiva y reproducible que sea observable en tiempo real. Hola, este método se puede utilizar para responder preguntas clave en la investigación de terapia génica sobre la eficacia de la administración de vectores y la toxicidad del agente terapéutico. Algunas ventajas de esta técnica incluyen un daño mínimo a la retina y otras estructuras oculares, mapeo preciso del lugar de inyección y rigurosas mediciones cuantitativas in vivo que permiten una inferencia estadística sólida.Para la inyección de transgenes intraoculares, coloque primero un ratón anestesiado en la etapa de visualización de un microscopio del sistema de imágenes de la retina y coloque las puntas de un iris romo estéril en las posiciones de las siete y las 10 del párpado mientras empuja los fórceps abiertos y hacia abajo para inducir suavemente proptosis. Utilice los fórceps para persuadir a los párpados debajo del globo ocular y dirija la punta de la aguja a aproximadamente uno a 1,5 milímetros por debajo del borde del limbo corneal. A continuación, aplique una gota de solución estéril de PBS en el ojo y cubra el ojo con un resbalón de cubierta estéril.Conduzca con cuidado la aguja hacia el ojo a través de la conjuntiva hasta que se cree una depresión escleral. Utilice el micro manipulador para girar el ojo hacia arriba hasta que la depresión escleral esté enfocada, luego conduzca la aguja hacia adelante para crear un pico agudo en la retina con la punta de la aguja. Usando el soporte de la aguja, gire la aguja hasta que la punta de la aguja se aburre a través de la esclerótica y el RPE, permitiendo que la flouresceína en la punta de la aguja sea visible bajo el tejido de la retina en las inmediaciones del espacio subretinal y la monocapa de células de epitelio pigmentario de la retina.Conduzca la punta de la aguja hacia abajo para que sea tangencial al globo, luego active la bomba de inyección con el interruptor del pedal. Después de 0,5 a una microlitros de solución transgéntica se ha entregado al espacio subretinal, retire la aguja y confirme que la sangre es estable y que el líquido no se escapa del sitio del tracto de inyección. Para confirmar el éxito de la inyección, grabe un OCT de volumen rectangular y compare las imágenes con imágenes de los diferentes tipos de posibles resultados de inyección.Después de la confirmación de la colocación correcta de la inyección, utilice esa imagen OCT rectangular para asignar la extensión del bleb a la imagen de fondo. Para mapear la extensión del bleb subretinal, abra una imagen OCT de volumen rectangular del bleb de modo que se incluya en la imagen un punto de referencia reconocible dentro del ojo. Agregue tantas pinzas como sea necesario para identificar la posición de los bordes izquierdo y derecho de la exploración B, así como la cabeza del nervio óptico, ONH, si está presente, y el punto de inflexión donde la retina se separa del RPE y la coroides y luego guarda los datos.A continuación, compile los archivos guardados y trace los datos, creando eficazmente un mapa del bleb de inyección en la imagen OCT en face. Superponga los datos trazados en la imagen de fondo que contiene el lugar de inyección y guarde la imagen combinada. Utilice esta imagen para localizar regiones de interés durante la toma de imágenes de OCT de seguimiento.Para evaluar la degeneración de la retina posterior a la inyección, abra primero una imagen de volumen rectangular OCT o HRSD OCT de dominio espectral de alta resolución grabada y seleccione una exploración B que se medirá. Amplíe la imagen seleccionada hasta que llene la pantalla y haga clic con el botón derecho en la imagen. Haga clic en pinzas para seleccionar el número adecuado de pinzas y, a continuación, utilice la función configurar pinzas para asignar las pinzas como verticales en la columna de bloque angular y activar la ubicación de la pinza de visualización para facilitar la colocación uniforme de la pinza en toda la retina.Haga clic en Aplicar y mueva cada pinza a la ubicación adecuada de 0,1 a 0,2 milímetros de separación a través de la exploración B, teniendo cuidado de colocar una pinza en el centro de la cabeza del nervio óptico cuando corresponda. Cuando se hayan colocado todas las pinzas, haga clic y arrastre cada pinza al intervalo de longitud de la región de interés, estableciendo arbitrariamente las pinzas que no se superponen a las regiones mensurables del escaneo B a la longitud máxima. Para medir el espesor de la capa nuclear externa, coloque la parte superior de cada pinza en la membrana limitante externa y la parte inferior de cada pinza en la parte inferior de la capa plexiforme externa en incrementos de 0,1 a 0,2 milímetros a través de la retina.Después de que todas las pinzas se han colocado y ajustado al tamaño, haga clic con el botón derecho en la imagen y haga clic en Guardar datos de pinza", luego repita las medidas como se acaba de demostrar para cada décimo escaneo B, manteniendo las pinzas abiertas y en la misma ubicación en el eje X y ajuste las longitudes de las pinzas según sea necesario, sin moverlas en la dirección x. Cuando se hayan medido todos los análisis, abra los archivos de datos guardados y haga clic en la fecha modificada "para organizar los archivos según el tiempo guardado. Abra todos los archivos para cada análisis B medido y compile los datos sin procesar de cada escaneo B en un único archivo desde el número de fotograma más bajo al más alto y seleccione las columnas de datos, incluido el nombre de la pinza, la longitud y las columnas X centrales.Asegúrese de que el centro X es el mismo para todos los escaneos B medidos para cada imagen OCT de volumen rectangular procesada y elimine los datos de las pinzas que no se utilizaron para registrar mediciones. Establezca la pinza situada en el centro de la cabeza del nervio óptico en cero y trace los datos de los conjuntos de datos X frente a varios Y para obtener una función de trazado 3D para el grosor de la capa nuclear externa o cualquier otra capa de retina medida. A continuación, compare las mediciones de la capa nuclear externa entre el control y los animales experimentales con las edades correspondientes para determinar la velocidad y uniformidad de cualquier posible degeneración de la retina.Para el mapeo 3D de las mediciones de la retina, revise las imágenes de OCT posteriores a la inyección y observe cualquier punto de referencia identificable, luego coloque al animal para obtener una imagen de CT SDO de seguimiento de la misma región, teniendo cuidado de incluir los mismos puntos de referencia identificables, y procesar las imágenes grabadas como acaba de demostrar. Es muy importante obtener imágenes de OCT de alta calidad que incluyan puntos de referencia identificables para facilitar la reimaginación de las regiones retinantes previamente inyectadas. Con el fin de medir los cambios en la longitud del sistema operativo, se colocaron pinzas desde la membrana limitante externa a la membrana Brooks, lo que permite mediciones confiables ya que estas capas se identifican fácilmente en imágenes OCT.Las diferencias en las mediciones entre estas capas de diferentes líneas de ratón se atribuyeron a longitudes de segmento exterior más cortas. Si la inyección subretiniana se realiza con éxito, la apertura del espacio subretinal induce la producción de un bleb que se puede visualizar claramente tanto en la vista en cara del imager HRSD OCT como en las imágenes de escaneo B. La superposición del mapa fronterizo del lugar de inyección permite la segmentación de las mediciones del tejido de la retina y los datasets de posición de la pinza para permitir pruebas estadísticas posteriores de los efectos de agentes terapéuticos específicos en la degeneración de la retina.Una vez masterada, esta técnica se puede completar en diez minutos si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento es importante recordar mantener el ambiente quirúrgico limpio y estéril. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la terapia génica monitorearan todo el proceso de inyección quirúrgica subretiniana en tiempo real y crearon una manera de determinar inmediatamente el éxito quirúrgico in vivo.Después de este procedimiento de inyección, se pueden realizar OCT y otros métodos como la electro-retinografía para responder preguntas adicionales sobre el rescate funcional transgén y / o toxicidad. Después de ver este video, usted debe tener una comprensión de cómo realizar inyecciones subretinales transesclerales y transcoroidales, cómo mapear la extensión de la inyección bleb en el OCT de esta imagen, y obtener mediciones rigurosas de las capas externas de la retina. No olvides que trabajar con vectores de terapia génica puede ser peligroso y que las precauciones, como usar el equipo de protección personal adecuado, siempre deben usarse durante la realización de este procedimiento.

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Establecimiento y propagación de los tumores del retinoblastoma humanos en ratones con deficiencia inmune

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Investigación

Medicina

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Producción y la detección de especies reactivas del oxígeno (ROS) en los cánceres

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Doppler tomografía de coherencia óptica de la circulación retiniana

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Un nuevo enfoque quirúrgico para la administración intratraqueal de agentes bioactivos en un modelo de ratón fetal

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Inyección subretiniana de vectores de terapia génica y células madre en el ojo del ratón

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Cerca de la tomografía de proyección óptica por infrarrojos para las Evaluaciones de distribución de la masa de células β en Investigación de la Diabetes

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Generación y cuantificación de 3 dimensiones de las lesiones arteriales en ratones mediante tomografía óptica de proyección

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

En Vivo, percutánea, Aguja Based, tomografía de coherencia óptica de las masas renales

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Desarrollo de un modelo basado en la rata alfa-sinucleína para la enfermedad de Parkinson mediante inyección estereotáctica de un vector viral adeno-asociado recombinante

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Un modelo murino de isquemia retiniana-reperfusión mediante la elevación de la presión intraocular

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...