Name: ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Detta material bygger på arbete som stöds, delvis av institutionen av veteraner frågor (VA), Veterans Health Administration, kontor för forskning och utveckling (biomedicinsk laboratorieforskning och utveckling) (VA Merit Grant 1I01BX000669). JMS är anställd, delvis som personalen läkare-forskare, oftalmologi, VA WNY; MCB är anställd, delvis av VA WNY. Studien genomfördes på, och delvis med stöd av Veterans Administration Western New York hälso-systemet (Buffalo, NY). Innehållet representerar inte åsikter Department of Veterans Affairs eller Förenta staternas regering. Stödde också, i större delen av NIH/NEI R01 bevilja EY013433 (PI: JMS), NIH/NEI R24 bevilja EY016662 (UB Vision infrastruktur Center, PI: M slakt, direktör - Biofotonik Module: JMS), ett fritt bidrag till avdelningen för oftalmologi/universitetet i Buffalo från forskning till förhindra blindhet (New York, NY), och ett bidrag från stiftelsen Oishei (Buffalo, NY). Vi erkänner gåva hC1 transgena RHOP347S linjen och exon 1 musen RHO knockout från Dr. Janis Lem (Tufts New England Medical Center, Boston, MA), och gåvan av NHR-E transgenens modellen i heterozygot staten på den mus exon 2 RHO knockout bakgrund från Drs. G. Jane Farrar och Peter Humphries (Trinity College, Dublin, Irland).

Djur protokoll var granskas och godkänns av institutionella djur vård och användning av kommittéer de VA WNY HCS och universitetet i Buffalo-SUNY. Djur användes enligt bestämmelserna i föreningen för forskning i Vision och oftalmologi (ARVO) och Helsingforsdeklarationen.
1. mus-modeller
<ol><li>Identifiera musmodeller utvärderas inklusive kontroller. Obs: Imaging utfördes för en C57BL/6(J), hC1/hC1/mWT/mWT, en delvis humaniserad näthinneförtvining musmodell h...

<ol>
	<li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses.">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li><li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations.">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li><li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1.">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li><li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12.">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li><li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration.">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li><li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+viral+vectors+for+retinal+gene+therapies.">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li><li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors.">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li><li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach.">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808 (2016).</li><li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+ocular+angiogenesis.">Gene therapy for ocular angiogenesis.</a> Clinical Science. 104, 561-575 (2003).</li><li>Igarashi, T., Miyake, K., Asakawa, N., Miyake, N., Shimada, T., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+comparison+of+administration+routes+for+AAV-8+mediated+ocular+gene+therapy.">Direct comparison of administration routes for AAV-8 mediated ocular gene therapy.</a> Curr. Eye Res. 38 (5), 569-577 (2013).</li><li>Bennett, J., Duan, D., Engelhardt, J. F., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction.">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li><li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+three-dimensional+high-resolution+imaging+of+the+rodent+retinal+with+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images.">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration.">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286 (2012).</li><li>Berger, A., al, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice.">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , (2013).</li><li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+transgene+expression+in+mouse+retina+following+subretinal+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus.">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li><li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium.">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030 (2015).</li><li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension.">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247 (2015).</li><li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+real-time,+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system.">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography.">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li><li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology.">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203 (2014).</li><li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S:+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments.">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li><li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+transducin-dependent+retinal+degeneration:+accelerated+retinal+degeneration+in+the+absence+of+rod+transducing.">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li><li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+(Pro23His):+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li><li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene.">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li><li>Hruby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+examination+of+the+vitreous+body.">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li><li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injections+in+rodent+eyes:+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina.">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li><li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+brief:+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes.">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li><li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li></ol>

HR-SD-okt ger en enkel metod för karakterisering av potentiella djurmodeller av mänskliga sjukdomar att bestämma deras användbarhet i testning potentiella therapeutics. Förmågan att snabbt och tillförlitligt karakterisera en potentiell djurmodell av mänskliga sjukdomar är avgörande för processen för terapeutiska läkemedelsutveckling (t.ex., ersättare genterapi, ribozym eller shRNA knockdown genterapi, kombinerade genterapi). HR-SD-okt ger en enkel, snabb och icke-invasiv metod för att utvärdera r...

Forskare utvecklar genterapi för en mängd olika retinala och retinala degenerativa sjukdomar med förhoppningar om att översätta roman therapeutics till behandlingar för mänskliga sjukdomar1,2,3,4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. tid domän eller spektrala domänen optisk koherenstomografi (SD-okt) har använts för att undersöka aspekter av yttre retinal degeneration i specifika musmodeller av sjukdom12,13,14 . HR-SD-okt har dock inte i stor utsträckning används i samband med optimera utvärdering av musmodeller för att bestämma hastigheten och rumsliga enhetlighet av retinal degeneration, eller i samband med preklinisk utvärdering av genen baserat therapeutics, till exempel till bedöma räddning, toxicitet eller den rumsliga utsträckning vektor leverans8,15,16. När en musmodell kännetecknas fullt, kan HR-SD-okt data fungera som en informativ och pålitlig resurs för att mäta effekten av therapeutics att utöva undsättnings- eller toxicitet i musmodeller av retinal degeneration17. Många grupper använder subretinal injektion som en metod för vektor leverans på grund av dess effektivitet på transducing fotoreceptorer och retinal pigment epitel (RPE) celler. Men detta är fortfarande en svår metod att bemästra, med tanke på att det görs vanligtvis av fri hand kirurgi från hornhinnans yta, och ofta förenat med grå starr, blödning och oavsiktliga retinala avskildhetar sker enkelt genom manipulation av bakre glaskroppen. Många grupper fortfarande försöka subretinal injektioner blint och leverera den virus användande manuell injektioner med relativt stor diameter rostfria nålar (34G)8,17,18,19 ,20,21,22, och några använder optisk koherenstomografi (ULT) imaging för att bekräfta korrekt leverans av vektor till näthinnan8,17, 20 , 22. några förbättringar i metoden har nyligen beskrivits med hur provtagningsutrustningen skall nålar drivs av en micromanipulator22.
Vi presenterar en integrerad strategi som hjälpmedel för positionering av nålen och injektionerna underlättas av en anpassad riktad stereo oftalmoskop utformad i labbet specifikt för att visualisera den små ögat av mus17, 23. de drog glas mikro nålar i samband med den stereotaxic micromanipulator ger bättre kontroll över nålen placering med inga kirurgiska skära ner krävs (dvs. genom konjunktiva och bindväv) före injektion. Användning av trycket regleras micro injektor hjälper leverera konsekvent injektionsvolymer och injektionen kan göras med mycket större stabilitet, precision och mycket långsammare än manuell injektioner utförs av en handhållen spruta, därmed minskar den förekomsten av bubbla injektion i ögat. Mindre nålen förhindrar läckage efter nålen uttag eftersom sökvägen är självtätande. För att bedöma omfattningen av injektion/leverans, många undersökande grupper förlita sig på att finna och bedöma areala omfattning förbättrade grön fluorescens-proteinuttryck (andra) i näthinnan (uttryck konstruktion levereras av vektorn) experimentella i slutet punkt (eutanasi) för att bekräfta lyckad injektioner11,19,20,24. Detta tillvägagångssätt (inte utnyttja OCT) för att verifiera kirurgiska framgång avfall en enorm mängd resurser i kirurgiska processuella tid och djur, eftersom alla djur med (okänd) kirurgiska fel behöver underhållas, följt med repetitiva åtgärder tills dödshjälp och ögat skörd (när andra mäts). Bekräftelse på platsen för injektion i näthinnan kan förbättras med hjälp av HR-SD-okt för att demonstrera att injektionen ligger mellan rätt lager av näthinnan (dvs subretinalområdet). HR-SD-okt kan också användas för att omedelbart avgränsa misslyckade försök (kirurgiska fel) att identifiera relevanta variabler i riktig kirurgisk tid att förbättra metoden. Vi hittade att HR-SD-okt ger många fördelar i prekliniska gen terapi studier genom att låta snabba kvantitativa utvärderingen av yttre retinal degeneration, möjliggör identifiering/utslaktning av studien djur som inte uppfyller experimentella kriterier ( t.ex. Felaktiga subretinal injektion), och att direkt uppföljning imaging att regionen i ögat där vector levererades (där prekliniska effekt är mest sannolikt) samt styra regioner där vektorn inte levererades. Sedan dess utveckling, användning av SD-okt har fortsatt att accepteras och används av oftalmologi forskare och anses nu standarden på retinal imaging i näthinnans vetenskapliga studier i musen eller gnagare modeller13,25. HR-SD-okt och dess programvara kapacitet utnyttjades i unika integrerade sätt att främja målet med framgångsrika kvantitativ genterapi i musmodeller vid varje steg i processen, inklusive djurmodell urval, karakterisering av degeneration i valda sjukdomsmodeller, terapeutiska leverans, kartläggning vektor leveranssätt och toxicitet/effekt utvärdering. Användning av HR-SD-okt möjliggör effektivare läkemedelsutveckling på varje nivå av processen. Här beskriver vi dessa metoder som används i vårt RNA Drug Discovery program.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">C57BL6 (J)</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:215px;">664</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">N129R-</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2HRho 1T/1T</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="78" style="height:78px;width:251px;">Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">90-R2200-U1-120.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Retinal Imaging System (RIS)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Stemi 2000C Microscope</td>
			<td style="width:245px;">Zeiss</td>
			<td style="width:215px;">000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">P-97 Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td style="width:245px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:215px;">p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">MMN-33 micro manipulator&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Narishige USA</td>
			<td style="width:215px;">MMN-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">PLI-100&#160; micro injector</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">64-1736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Holder (Rotating)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Storage Receptacle</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments Inc.</td>
			<td style="width:215px;">E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">&#160;Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">30-0053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tert-amyl Alcohol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-215-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Goniovisc</td>
			<td style="width:245px;">BioVision Limited</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17238-610-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP&#160; 2%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-097-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%</td>
			<td style="width:245px;">Perigo</td>
			<td style="width:215px;">NDC 45802-046-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Systane Ultra</td>
			<td style="width:245px;">Alcon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:215px;">9006619-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tetracaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">DPBS</td>
			<td style="width:245px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:215px;">14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Virus Preparations</td>
			<td style="width:245px;">ViGene /UNC</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gold nanorods</td>
			<td style="width:245px;">NANOPARTz</td>
			<td style="width:215px;">D12M-850-1.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-250-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Coverslips</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">12-548-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Forceps</td>
			<td style="width:245px;">Milton</td>
			<td style="width:215px;">18-825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Needles 30 guage</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">W11604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Syringes</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Bioptigen software Package</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-263-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Windows Excel</td>
			<td style="width:245px;">Microsoft</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Adobe Illustrator</td>
			<td style="width:245px;">Adobe&#160;</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scale</td>
			<td style="width:245px;">Mettler</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scissors</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ear punch</td>
			<td style="width:245px;">Nat&#8217;l band</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">CL 100 Light source</td>
			<td style="width:245px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:215px;">CL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Nitrogen Gas</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Welding Supply</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heated Water bath</td>
			<td style="width:245px;">Neslab</td>
			<td style="width:215px;">RTE-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating plate</td>
			<td style="width:245px;">In House</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating mat</td>
			<td style="width:245px;">Cincinnatti Sub Zero</td>
			<td style="width:215px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Clay mouse holder</td>
			<td style="width:245px;">Plast.i.clay American Art Clay Co.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Betadine</td>
			<td style="width:245px;">MedLine&#160;</td>
			<td style="width:215px;">NDC53329-938-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:245px;">American Health Service</td>
			<td style="width:215px;">Ctag</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">EtOH 70%</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">BP2818-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gloves Nitrile</td>
			<td style="width:245px;">VWR</td>
			<td style="width:215px;">89038-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys ERG Color Dome instrument</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">D125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Contact lenses</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys Software</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Origin 6.1 software</td>
			<td style="width:245px;">OriginLab Corp.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Reference electrodes</td>
			<td style="width:245px;">Ocuscience</td>
			<td style="width:215px;">F-Thread Electrode (DTL) 24&#8221;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research

HR-SD-okt utnyttjas att övervaka utvecklingen av ljusmätare degeneration i levande musmodeller, bedöma distribution av terapeutiska medel i subretinalområdet och utvärdera toxicitet och effekt i vivo. HR-SD-okt använder nära infrarött ljus (800-880 nm) och har optik speciellt utformad för de unika optiken på möss med sub-2-micron axiella upplösning. Transgena musmodeller av yttre retinal (ljusmätare) degeneration och kontroller var avbildas för att bedöma sjukdomsförloppet. Draget glas mikronålar användes för att leverera sub retinal injektioner av adeno-associerade virus (AAV) eller nanopartiklar (NP) via en trans-skleral och trans-koroidal strategi. Noggrann positionering av nålen i subretinalområdet krävdes före en kalibrerad injektion, som levererar vätska in i sub retinal utrymme. Realtid subretinal kirurgi utfördes på våra retinal imaging system (RIS). HR-SD-okt visat progressiva enhetliga näthinneförtvining på grund av uttryck av ett giftigt muterade mänskliga mutant rhodopsin (P347S) (RHOP347S) transgenens hos möss. HR-SD-okt tillåter rigorösa kvantifiering av alla retinala lagren. Yttre nukleära lagret (Onlinekanaler) tjocklek och ljusmätare yttre segment längd (OSL) mätningar korrelerar med ljusmätare vitalitet, degeneration eller räddning. RIS leveranssystemet tillåter realtid visualisering av subretinal injektioner i neonatal (~ P10-14) eller vuxna möss, och HR-SD-okt omedelbart avgör framgången för leverans och kartor areala omfattning. HR-SD-okt är ett kraftfullt verktyg som kan utvärdera framgången av subretinal kirurgi i möss, i tillägg till att mäta vitalitet av fotoreceptorer i vivo. HR-SD-okt kan också användas för att identifiera enhetliga djur kohorter för att bedöma omfattningen av retinal degeneration, toxicitet och terapeutiska räddning i prekliniska gen terapi forskningsstudier.

Att bedöma den närvaro, dosering och jämnhet vid modell yttre Retinal Degeneration Mätningar av Onlinekanaler registrerades från OPL till Almen, definiera gränserna för den Onlinekanaler verktyget bromsok i programvaran instrument. Målet var att kartlägga utvecklingen av yttre retinal degeneration i en delvis humaniserad adRP musmodell. Jämförbara bilder från en kontroll C57BL/6(J) mus och en hC1/hC1/mWT/mWT musmodell, uttrycker två kopior av muterade män...

Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

Här visar vi en ny metod att hjälpa leverans av gene therapy agenter i subretinalområdet, bedöma dess areala täckning och karakterisera ljusmätare vitalitet med hög upplösning spektral-domän optisk koherenstomografi (HR-SD-okt).

Ultrahög upplösning mus optisk koherenstomografi till stöd intraokulär injektion i näthinnans genterapi forskning

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

Det övergripande målet för denna subretinal injektion förfarande är att leverera en vektor till näthinnan på ett minimalt invasiv och reproducerbara sätt som är observerbara i realtid. Hej, denna metod kan användas för att svara på viktiga frågor i genterapi forskning om vektor leverans effekt och terapeutiska agent toxicitet. Några fördelar med denna teknik inkluderar minimal skada på näthinnan och andra ögonstrukturer, exakt injektionsställe kartläggning, och rigorösa kvantitativa in vivo mätningar som tillåter solid statistisk inferens.För intraokulära transgen injektion, placera först en sövd mus på visningsstadiet av ett retinal imaging system mikroskop och placera tips av en steril trubbig iris tänjningar vid sju och 10 klockan positioner ögonlocket samtidigt trycka tärna öppna och ner för att försiktigt inducera proptosis. Använd tärnorna för att lirka ögonlocken under ögongloben och rikta spetsen på nålen till ungefär en till 1,5 millimeter under kanten av hornhinnans limbus. Därefter applicera en droppe steril PBS-lösning på ögat och täck ögat med en steril täcksli.Kör försiktigt nålen in i ögat genom bindhinnan tills en scleral depression skapas. Använd mikro manipulatorn för att rotera ögat uppåt tills scleral depression är i fokus, sedan driva nålen framåt för att skapa en skarp topp i näthinnan med spetsen av nålen. Med hjälp av nålhållaren roterar du nålen bara tills nålspetsen borrar genom sclera och RPE, så att flourescein i nålspetsen kan synas under näthinnevävnaden i omedelbar närhet av subretinal utrymmet och näthinnans pigmentepitelcellens monolayer.Kör nålspetsen nedåt så att den är tangentiell till jordklotet, aktivera sedan insprutningspumpen med fotpedalsbrytaren. Efter 0,5 till en mikroliter av transgenlösning har levererats till subretinal utrymmet, dra tillbaka nålen och bekräfta att blodet är stabil och att vätska inte läcker ut ur injektionsstället. För att bekräfta framgången med injektionen, spela in en rektangulär volym OCT och jämföra bilderna med bilder av de olika typerna av potentiella injektionsresultat.Efter bekräftelse av korrekt injektion placering, använd den rektangulära OCT bilden för att kartlägga omfattningen av bleb på fundus bilden. För att kartlägga omfattningen av subretinal bleb, öppna en rektangulär volym OCT bild av bleb så att en igenkännbar landmärke i ögat ingår i bilden. Lägg till så många bromsok som behövs för att identifiera positionen för vänster och höger kanter av B-skanningen, liksom synnervhuvudet, ONH, om det finns, och böjningspunkten där näthinnan lossnar från RPE och koroider och sedan spara data.Sedan sammanställa sparade filer och rita data, effektivt skapa en karta över injektionen bleb på en face OCT bilden. Överlagra plottade data på fundus bilden som innehåller injektionsstället och spara den sammanslagna bilden. Använd den här bilden för att lokalisera regioner av intresse under uppföljning av OCT-avbildning.För att bedöma efterinsprutning retinal degeneration, först öppna en inspelad högupplöst spektral domän OCT eller HRSD OCT rektangulär volym bild och välj en B-skanning som ska mätas. Förstora den valda bilden tills den fyller skärmen och högerklicka på bilden. Klicka på bromsok för att välja lämpligt antal bromsok, använd sedan funktionen konfigurera bromsok för att tilldela bromsoken som vertikal i vinkelblocket kolumnen och slå på displayen bromsok plats för att underlätta enhetlig bromsok placering över näthinnan.Klicka på tillämpa och flytta varje bromsok till lämplig plats 0,1 till 0,2 millimeter isär över B-skanningen, var noga med att placera ett bromsok i mitten av synnervhuvudet när det är lämpligt. När alla av bromsok har placerats, klicka och dra varje bromsok till längden span av regionen av intresse, godtyckligt inställning av bromsok inte overlaying mätbara regioner av B-skanningen till maximal längd. För att mäta den yttre kärnlagertjocklek, placera toppen av varje bromsok vid det yttre begränsande membranet och botten av varje bromsok längst ner på det yttre plexiformskiktet vid 0,1 till 0,2 millimeters steg över näthinnan.Efter alla de bromsok har placerats och justeras till storlek, högerklicka på bilden och klicka på Spara bromsok data "sedan upprepa mätningarna som just visat för var tionde B scan, hålla bromsoken öppna och på samma plats på x-axeln och justera längderna av bromsoken vid behov, utan att flytta dem i x-riktning. När alla av avsökningarna har mätts, öppnar de sparade datafilerna och klickar dater ändrat"för att ordna spararna enligt sparad tid. Öppna alla filer för varje B-sökning mätt och kompilera rådata från varje B-skanning i en enda fil från lägsta till högsta bildrutenummer och välj kolumnerna med data, inklusive okets namn, längd och center X-kolumner.Se till att mitten X är samma för alla de B-skanningar som mäts för varje rektangulär volym OCT-bild som bearbetas och radera eventuella data från de bromsok som inte användes för att registrera mätningar. Ställ in det bromsok som ligger i mitten av synnerven huvudet till noll och rita data för X kontra flera Y datamängder för att få en 3D-plot funktion för tjockleken på det yttre nukleära lagret eller någon annan uppmätt näthinneskikt. Jämför sedan de yttre kärnskiktsmätningarna mellan kontrollen och försöksdjuren med motsvarande åldrar för att bestämma hastigheten och enhetligheten hos eventuell potentiell retinal degeneration.För 3D-kartläggning av retinalmätningarna, granska efterinjektionen OCT-bilder och notera eventuella identifierbara landmärken, placera sedan djuret för att få en uppföljd SDO CT-bild från samma region, var noga med att inkludera samma identifierbara landmärken och bearbeta de inspelade bilderna som just visats. Det är mycket viktigt att få oct-bilder av hög kvalitet som innehåller identifierbara landmärken för att underlätta reimaging av de tidigare injicerade retinala regionerna. För att mäta förändringarna i OS-längd placerades bromsok från det yttre begränsande membranet till Brooks-membranet, vilket möjliggör tillförlitliga mätningar eftersom dessa lager lätt identifieras i OCT-bilder.Skillnader i mätningarna mellan dessa lager från olika muslinjer hänfördes till kortare yttre segmentlängder. Om subretinal injektionen utförs framgångsrikt, framkallar öppnandet av subretinal utrymmet produktionen av en bleb som tydligt kan visualiseras både i en face view av HRSD OCT imager och i B scan bilder. Överlagra gränsen karta av injektionsstället gör segmentering av retinal vävnad mätningar och bromsok position dataset för att möjliggöra efterföljande statistiska tester av effekterna av specifika terapeutiska medel på retinal degeneration.När behärskar, kan denna teknik slutföras i tio minuter om de utförs på rätt sätt. Samtidigt försöker detta förfarande är det viktigt att komma ihåg att hålla den kirurgiska miljön ren och steril. Efter dess utveckling banade denna teknik vägen för forskare inom genterapi för att övervaka hela subretinal kirurgisk injektion processen i realtid och skapade ett sätt att omedelbart bestämma kirurgisk framgång in vivo.Efter denna injektion förfarande, OCT och andra metoder som elektro retinografi kan utföras för att svara på ytterligare frågor om transgene funktionell räddning och/eller toxicitet. Efter att ha sett den här videon, bör du ha en förståelse för hur man utför transscleral och transchoroidal subretinal injektioner, hur man kan kartlägga omfattningen av injektionen bleb på OKT från denna bild, och få rigorösa mätningar av de yttre näthinnans lager. Glöm inte att arbeta med genterapi vektorer kan vara farligt och att försiktighetsåtgärder, såsom att bära lämplig personlig skyddsutrustning bör alltid användas när du utför denna procedur.

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Fastställande och spridning av mänskliga Retinoblastom Tumörer i Immune deficienta möss

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Produktion och Detektering av reaktiva syreradikaler (ROS) i cancer

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Doppler optisk koherens tomografi av retinal Cirkulation

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

A Novel kirurgisk metod för intratrakeal administrering av bioaktiva ämnen i fosterställning musmodell

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Subretinal Injektion av genterapivektorer och stamceller i musen ögat

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared optisk projektionstomografi för bedömningar av β-cells massdistribution i diabetesforskning

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Generation och 3-dimensionell kvantifiering av arteriell Skador i möss med användning av optisk Projection Tomography

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, perkutan, Needle Based, optisk koherens tomografi av Renal Masses

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Utveckling av en Alpha-synuklein Based råttmodell för Parkinsons sjukdom via stereotaktisk injektion av en rekombinant adeno-associerad viral vektor

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En musmodell av retinal ischemi-reperfusion skada genom Elevation av det intraokulära trycket

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...