Name: ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research
Uploaded: 2018-11-02T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Bu malzeme, kısmen, Gaziler Bakanlığı işleri (VA), Gaziler Sağlık İdaresi, Office araştırma ve geliştirme (Biyomedikal Laboratuvarı araştırma ve geliştirme) tarafından desteklenen çalışma üzerine kurulmuştur (VA Merit Grant 1I01BX000669). JMS, kısmen, personel hekim-bilim adamı olarak, göz hastalıkları, VA WNY tarafından istihdam edilmektedir; MCB kısmen, VA WNY tarafından istihdam edilmektedir. Çalışma yapılan ve kısmen Gaziler yönetim Western New York sağlık sistemi, (Buffalo, NY) desteklediği. İçeriği Department of Veterans Affairs veya Amerika Birleşik Devletleri hükümetinin görüşlerini temsil etmemektedir. Ayrıca desteklenen, büyük bölümünde NIH/NEI R01 tarafından EY013433 vermek (PI: JMS), NIH/NEI R24 vermek EY016662 (UB görme altyapı Merkezi, PI: M katliam, yönetmen - Biophotonics modülü: JMS), sınırsız ödenekle için bölümü, göz hastalıkları/Üniversitesi nde Araştırma Buffalo'dan önlemek körlük (New York, NY) ve Oishei Vakfı (Buffalo, NY) hibe. Hediye hC1 transgenik RHOP347S hat ve exon 1 fare RHO nakavt Dr Janis Lem (Tufts New England Tıp Merkezi, Boston, MA) üzerinden ve NHR-E transgene modeli Heterozigoz devlet hediye üzerinde anıyoruz fare exon 2 RHO nakavt kökenli Drs. G. Jane Farrar ve Peter Humphries (Trinity College, Dublin, IRE).

Hayvan iletişim kuralları gözden geçirilmiş ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım komitelerinin VA WNY HCS ve SUNY Buffalo Üniversitesi tarafından onaylanmış. Hayvanlar dernek hükümlerine göre araştırma vizyon ve Oftalmoloji (ARVO) ve Helsinki Deklarasyonu için kullanılmıştır.
1. fare modelleri
<ol><li>Denetimleri de dahil olmak üzere değerlendirilecek fare modelleri tanımlayın. Not: Görüntüleme için bir C57BL/6(J), hC1/hC1 / / mWT gerçekleşt...

<ol>
	<li>Regus-Leidig, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vivo+knockdown+of+Piccolino+disrupts+presynaptic+ribbon+morphology+in+mouse+photoreceptor+synapses.">In-vivo knockdown of Piccolino disrupts presynaptic ribbon morphology in mouse photoreceptor synapses.</a> Front Cell Neurosci. 8 (259), 1-13 (2014).</li><li>Jiang, L., Frederick, J. M., Baehr, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+gene+therapy+in+dominant+retinitis+pigmentosa+and+cone-rod+dystrophy+mouse+models+caused+by+GCAP1+mutations.">RNA interference gene therapy in dominant retinitis pigmentosa and cone-rod dystrophy mouse models caused by GCAP1 mutations.</a> Front Mol Neurosci. 7 (25), 1-8 (2014).</li><li>Seo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+gene+therapy+of+mice+with+Bardet-Beidl+Syndrome+Type-1.">Subretinal gene therapy of mice with Bardet-Beidl Syndrome Type-1.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (9), 6118-6132 (2013).</li><li>Molday, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RD3+gene+delivery+restores+guanylate+cyclase+localization+and+rescues+photoreceptors+in+the+RD3+mouse+model+of+Leber+congenital+amaurosis+12.">RD3 gene delivery restores guanylate cyclase localization and rescues photoreceptors in the RD3 mouse model of Leber congenital amaurosis 12.</a> Hum. Mol. Genet. 22 (19), 3894-3905 (2014).</li><li>Pang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+therapy+in+mouse+models+of+recessive+retinal+degeneration.">AAV-mediated gene therapy in mouse models of recessive retinal degeneration.</a> Curr. Mol. Med. (3), 316-330 (2012).</li><li>Vandenberghe, L. H., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+adeno-associated+viral+vectors+for+retinal+gene+therapies.">Novel adeno-associated viral vectors for retinal gene therapies.</a> Gene Ther. 19 (2), 162-168 (2012).</li><li>Tenenbaum, L., Lehtonen, E., Monahan, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+risks+related+to+the+use+of+adeno-associated+virus-based+vectors.">Evaluation of risks related to the use of adeno-associated virus-based vectors.</a> Curr. Gene Ther. 3 (6), 545-565 (2003).</li><li>Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+and+validated+injection+method+for+accessing+the+subretinal+space+via+a+transcleral+posterior+approach.">An alternative and validated injection method for accessing the subretinal space via a transcleral posterior approach.</a> J. Vis. Exp. (118), e54808 (2016).</li><li>Bainbridge, J. W. B., Mistry, A. R., Thrasher, A. J., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+therapy+for+ocular+angiogenesis.">Gene therapy for ocular angiogenesis.</a> Clinical Science. 104, 561-575 (2003).</li><li>Igarashi, T., Miyake, K., Asakawa, N., Miyake, N., Shimada, T., Takahashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+comparison+of+administration+routes+for+AAV-8+mediated+ocular+gene+therapy.">Direct comparison of administration routes for AAV-8 mediated ocular gene therapy.</a> Curr. Eye Res. 38 (5), 569-577 (2013).</li><li>Bennett, J., Duan, D., Engelhardt, J. F., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+noninvasive+in+vivo.assessment+of+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction.">Real-time noninvasive in vivo.assessment of adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 38, 2857-2863 (1997).</li><li>Ruggeri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+three-dimensional+high-resolution+imaging+of+the+rodent+retinal+with+spectral-domain+optical+coherence+tomography.">In vivo three-dimensional high-resolution imaging of the rodent retinal with spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48 (4), 1808-1814 (2007).</li><li>Berger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoS One. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Dysli, C., Enzmann, V., Sznitman, R., Zinkernagel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+mouse+retinal+layers+using+automated+segmentation+of+spectral+domain+optical+coherence+tomography+images.">Quantitative analysis of mouse retinal layers using automated segmentation of spectral domain optical coherence tomography images.</a> TVST. 4 (4), 9 (2015).</li><li>Bhootada, Y., Choudhury, S., Gully, C., Gorbatyuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+caspase-12+to+preserve+vision+in+mice+with+inherited+retinal+degeneration.">Targeting caspase-12 to preserve vision in mice with inherited retinal degeneration.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56, 4725-4733 (2015).</li><li>Wert, K. J., Skeie, J. M., Davis, R. J., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injection+of+gene+therapy+vectors+and+stem+cells+in+the+perinatal+mouse+eye.">Subretinal injection of gene therapy vectors and stem cells in the perinatal mouse eye.</a> J. Vis. Exp. (69), e4286 (2012).</li><li>Berger, A., al, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral-domain+optical+coherence+tomography+of+the+rodent+eye:+highlighting+layers+of+the+outer+retina+using+signal+averaging+and+comparison+with+histology.">Spectral-domain optical coherence tomography of the rodent eye: highlighting layers of the outer retina using signal averaging and comparison with histology.</a> PLoSOne. 9 (5), 96494 (2014).</li><li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garrido, M. G., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice.">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods in Molecular Biology. , (2013).</li><li>Sarra, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+transgene+expression+in+mouse+retina+following+subretinal+injection+of+recombinant+adeno-associated+virus.">Kinetics of transgene expression in mouse retina following subretinal injection of recombinant adeno-associated virus.</a> Vision Res. 42, 541-549 (2002).</li><li>Yan, Q. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Park, S. W., Kim, J. H., Park, W. J., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbal+approach-subretinal+injection+of+viral+vectors+for+gene+therapy+in+mice+retinal+pigment+epithelium.">Limbal approach-subretinal injection of viral vectors for gene therapy in mice retinal pigment epithelium.</a> J. Vis. Exp. (102), e53030 (2015).</li><li>Westenskow, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performing+subretinal+injections+in+rodents+to+deliver+retinal+pigment+epithelium+cells+in+suspension.">Performing subretinal injections in rodents to deliver retinal pigment epithelium cells in suspension.</a> J. Vis. Exp. (95), e52247 (2015).</li><li>Butler, M. C., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+real-time,+in+vivo+mouse+retinal+imaging+system.">A novel, real-time, in vivo mouse retinal imaging system.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 56 (12), 7159-7168 (2015).</li><li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+adeno-associated+virus-mediated+gene+transfer+into+the+rat+retina+by+clinical+fluorescence+photography.">Evaluation of adeno-associated virus-mediated gene transfer into the rat retina by clinical fluorescence photography.</a> Hum. Gene Ther. 10, 641-648 (1999).</li><li>Ferguson, L. R., Grover, S., Dominguez, J. M., Balaiya, S., Chalam, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thickness+measurement+obtained+with+spectral+domain+optical+coherence+tomography+assisted+optical+biopsy+accurately+correlates+with+ex+vivo+histology.">Retinal thickness measurement obtained with spectral domain optical coherence tomography assisted optical biopsy accurately correlates with ex vivo histology.</a> PLoS One. 9 (10), 111203 (2014).</li><li>Li, T., Snyder, W. K., Olsson, J. E., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+dominant+rhodopsin+mutation+P347S:+evidence+for+defective+vectorial+transport+of+rhodopsin+to+the+outer+segments.">Transgenic mice carrying the dominant rhodopsin mutation P347S: evidence for defective vectorial transport of rhodopsin to the outer segments.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14176-14181 (1996).</li><li>Brill, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+transducin-dependent+retinal+degeneration:+accelerated+retinal+degeneration+in+the+absence+of+rod+transducing.">A novel form of transducin-dependent retinal degeneration: accelerated retinal degeneration in the absence of rod transducing.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 48, 5445-5453 (2007).</li><li>Olsson, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+with+a+rhodopsin+mutation+(Pro23His):+a+mouse+model+of+autosomal+dominant+retinitis+pigmentosa.">Transgenic mice with a rhodopsin mutation (Pro23His): a mouse model of autosomal dominant retinitis pigmentosa.</a> Neuron. 9, 815-830 (1992).</li><li>Humphries, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinopathy+induced+in+mice+by+targeted+disruption+of+the+rhodopsin+gene.">Retinopathy induced in mice by targeted disruption of the rhodopsin gene.</a> Nat. Genet. 15, 216-219 (1997).</li><li>Hruby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+examination+of+the+vitreous+body.">Clinical examination of the vitreous body.</a> Proc. Roy. Soc. Med. 47, 163-170 (1953).</li><li>Kolniak, T. A., Sullivan, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cell-based+toxicity+screen+of+potentially+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">cell-based toxicity screen of potentially therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Experimental Eye Research. 92, 328-337 (2011).</li><li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-corneal+subretinal+injection+in+mice+and+its+effect+on+the+function+and+morphology+of+the+retina.">Trans-corneal subretinal injection in mice and its effect on the function and morphology of the retina.</a> PLoS One. 10 (8), 0136523 (2015).</li><li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+injections+in+rodent+eyes:+effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina.">Subretinal injections in rodent eyes: effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol. Vis. 7, 131-137 (2000).</li><li>Johnson, C. J., Berglin, L., Chrenek, M. A., Redmond, T. M., Boatright, J. H., Nickerson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+brief:+subretinal+injection+and+electroporation+into+adult+mouse+eyes.">Technical brief: subretinal injection and electroporation into adult mouse eyes.</a> Mol. Vis. 14, 2211-2226 (2008).</li><li>Sullivan, J. M., Yau, E. H., Taggart, R. T., Butler, M. C., Kolniak, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bottlenecks+in+development+of+therapeutic+post-transcriptional+gene+silencing+agents.">Bottlenecks in development of therapeutic post-transcriptional gene silencing agents.</a> Vision Res. 48, 453-469 (2008).</li></ol>

HR-SD-Ekim hayvan modellerinin potansiyel potansiyel therapeutics test kullanışlılığı belirlemek için insan hastalık karakterizasyonu için basit bir yöntem sağlar. Tedavi edici ilaç keşif (Örneğin, yerine gen tedavisi, ribozyme veya shRNA devirme gen tedavisi, kombine gen terapisi) işlemi için kritik hızla ve güvenle potansiyel bir hayvan model insan hastalığı karakterize etmek için yeteneğidir. HR-SD-Ekim karakterize ve hemen hemen her fare modelinde Retina dejenerasyonu ilerlemesini izl...

Araştırmacılar gen terapileri Retina ve Retina Dejeneratif hastalıkları çeşitli roman tedavi tedaviler için insan hastalık1,2,3,4 dönüştürerek httpd'ye umutları ile gelişmekte olan , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11. saat alan veya spektral etki alanı optik koherens tomografi (SD-Ekim) hastalık12,13,14 belirli fare modellerinde dış Retina dejenerasyonu yönleriyle araştırmak için kullanılmıştır . HR-SD-Ekim, ancak, henüz kapsamlı bir şekilde oranı ve Retina dejenerasyonu kayma tekdüzelik belirlemek için fare modelleri değerlendirilmesi en iyi duruma getirme bağlamında kullanılan veya gen preklinik değerlendirilmesi bağlamında therapeutics örnek, e dayalı kurtarma, toksisite veya vektör teslim8,15,16kayma ölçüde değerlendirmek. Bir kez bir fare modeli tam olarak karakterize, HR-SD-Ekim veri kurtarma veya fare modelleri Retina dejenerasyonu17toksisite uygulamak için tedavi etkisini ölçmek için bilgilendirici ve güvenilir bir kaynak olarak hizmet verebilir. Birçok grup subretinal enjeksiyon vektör teslimat photoreceptors ve retina pigment epiteli (RPE) hücreleri transducing, verimlilik nedeniyle bir yöntem olarak kullanıyorsunuz. Genellikle özgür-el cerrahi ile kornea yüzeyinden yapılır ve genellikle katarakt, kanama ve sadece arka manipülasyon tarafından meydana gelen istenmeyen Retina dekolmanı ile dolu olduğunu ancak, bu ana, zor bir yöntem kalır vitreus. Birçok grup hala subretinal enjeksiyonları körü körüne girişimi ve nispeten geniş çaplı paslanmaz çelik iğneler (34 G)8,17,18ile,19 el ile enjeksiyonlar kullanarak virüs göndermek ,20,21,22ve vektör uygun teslimat retina8,17, onaylamak için Imaging birkaç kullanır optik koherens tomografi (OCT) 20 , 22. bazı iyileştirmeler yönteminin son zamanlarda micromanipulator22tarafından tahrik microscale iğneleri kullanarak tarif edilmistir.
Biz AIDS iğne konumlandırma entegre bir yaklaşım mevcut ve enjeksiyonları laboratuarında fare17, küçük göz içinde görüntülenmesi için özel olarak tasarlanmış özel yönlendirilmiş stereo ophthalmoscope tarafından kolaylaştırdı 23. çekti cam mikro iğne stereotaksik micromanipulator ile birlikte kullanımı önce iğne yerleştirme gerekli (Yani, konjonktivayi ve bağ dokusu) hiçbir cerrahi kesme ile daha iyi kontrol sağlar enjeksiyon. Basınç kullanımı Mikro enjektör yardımcı olur teslim tutarlı enjeksiyon birimleri düzenlenmekte ve çok daha fazla istikrar, hassas ve el ile enjeksiyonlar böylece azalan bir el şırınga tarafından gerçekleştirilen daha yavaş ile enjeksiyon yapılabilir göz içine enjeksiyon kabarcık oluşumu. Daha küçük iğne iğne çekilme yolu kendinden contalı olduğundan takip kaçağı önlemek yardımcı olur. Enjeksiyon/teslimat ölçüde değerlendirmek için birçok araştırmacı grupları bulma ve retina (vektör tarafından teslim ifade yapısı) gelişmiş yeşil floresans protein (EGFP) ifade alansal ölçüde deneysel sonunda değerlendirme itimat (ötenazi) başarılı enjeksiyonları11,19,20,24onaylamak için gelin. Bütün hayvanlar (bilinmeyen) cerrahi hataları ile muhafaza edilmesi, kadar tekrarlayan önlemler takip gerekiyor beri cerrahi başarı kaynakları çok büyük miktarda cerrahi yordam zaman ve hayvanlar, atıkların doğrulamak için bu yaklaşım (OCT kullanmak değil) ötenazi ve göz hasat zaman (EGFP ölçülür). Retina yerleştirmeye konumunu teyit enjeksiyon (yani subretinal alanı) retina doğru katmanları arasında yer alır göstermek için HR-SD-Ekim kullanarak geliştirilebilir. HR-SD-Ekim hemen başarısız denemeleri (gerçek cerrahi zamanında yaklaşım geliştirmek için ilgili değişkenleri tanımlamak için cerrahi hataları) betimlemek için kullanılabilir. HR-SD-Ekim sayısız avantajı preklinik gen terapisi çalışmaları dış Retina dejenerasyonu, hızlı kantitatif değerlendirilmesi izin vererek kimlik/deneysel ( ölçütlerine uymayan çalışma hayvanların itlaf izin sağladığını bulduk Örneğin, yanlış subretinal enjeksiyon) ve nerede vektör teslim edildi (preklinik etkisi büyük olasılıkla nerede) bölgeye göz izleme görüntüleme doğrudan yanı sıra bölgeler değil teslim edildi her nerede vektör kontrol için. Gelişimi beri SD-Ekim kullanımı kabul olması ve Oftalmoloji araştırmacılar tarafından kullanılan devam etti ve şimdi fare veya kemirgen modelleri13,25Retina bilimsel çalışmalarda Retina Görüntüleme standartları olarak kabul edilir. HR-SD-Ekim ve yazılım yeteneklerini başarılı kantitatif gen tedavisi sürecinde hayvan modeli seçimi, seçilmiş dejenerasyon karakterizasyonu dahil olmak üzere her aşamada fare modellerinde amacı daha fazla için benzersiz entegre şekilde kullanılmıştır hastalık modelleri, tedavi teslim, eşleme vektör teslim ve toksisite/etkinlik değerlendirme. HR-SD-Ekim kullanımı daha etkili uyuşturucu bulma işleminin her düzeyde sağlar. Burada kullanılan bu yaklaşımlar RNA ilaç keşif programımızda açıklayın.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="774">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">C57BL6 (J)</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:215px;">664</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">N129R-</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2HRho 1T/1T</td>
			<td style="width:245px;">N/A</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="78" style="height:78px;width:251px;">Envisu R-2200 Ocular Coherence Tomography Instrument (OCT)</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">90-R2200-U1-120.&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Retinal Imaging System (RIS)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Stemi 2000C Microscope</td>
			<td style="width:245px;">Zeiss</td>
			<td style="width:215px;">000000-1106-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">P-97 Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td style="width:245px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:215px;">p-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">MMN-33 micro manipulator&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Narishige USA</td>
			<td style="width:215px;">MMN-33</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">PLI-100&#160; micro injector</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">64-1736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Holder (Rotating)</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Micropipette Storage Receptacle</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments Inc.</td>
			<td style="width:215px;">E210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">&#160;Borosilicate glass capillary tubes 1.5-1.8 X 100mm,&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:215px;">30-0053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tert-amyl Alcohol</td>
			<td style="width:245px;">SIGMA Aldrich</td>
			<td style="width:215px;">240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Atropine Sulfate Ophthalmic Solution, USP 1%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-215-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Goniovisc</td>
			<td style="width:245px;">BioVision Limited</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17238-610-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cyclopentolate Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP&#160; 2%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-097-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gentamicin Sulfate Ointment USP, 0.1%</td>
			<td style="width:245px;">Perigo</td>
			<td style="width:215px;">NDC 45802-046-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Systane Ultra</td>
			<td style="width:245px;">Alcon Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:215px;">9006619-1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Tetracaine Hydrochloride</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Bausch and Lomb</td>
			<td style="width:215px;">NDC 24208-920-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">DPBS</td>
			<td style="width:245px;">Gibco Life Technologies</td>
			<td style="width:215px;">14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Virus Preparations</td>
			<td style="width:245px;">ViGene /UNC</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gold nanorods</td>
			<td style="width:245px;">NANOPARTz</td>
			<td style="width:215px;">D12M-850-1.75</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Fluorescein Sulfate AK-FLUOR 25%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-250-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Coverslips</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">12-548-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Forceps</td>
			<td style="width:245px;">Milton</td>
			<td style="width:215px;">18-825</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Needles 30 guage</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">W11604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Syringes</td>
			<td style="width:245px;">Beckton Dickenson&#160;&#160;</td>
			<td style="width:215px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Bioptigen software Package</td>
			<td style="width:245px;">Bioptigen</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution, USP 0.5%</td>
			<td style="width:245px;">Akorn Inc.</td>
			<td style="width:215px;">NDC 17478-263-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Windows Excel</td>
			<td style="width:245px;">Microsoft</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Adobe Illustrator</td>
			<td style="width:245px;">Adobe&#160;</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scale</td>
			<td style="width:245px;">Mettler</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Scissors</td>
			<td style="width:245px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Ear punch</td>
			<td style="width:245px;">Nat&#8217;l band</td>
			<td style="width:215px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">CL 100 Light source</td>
			<td style="width:245px;">Welch Allyn</td>
			<td style="width:215px;">CL100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Nitrogen Gas</td>
			<td style="width:245px;">Jackson Welding Supply</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heated Water bath</td>
			<td style="width:245px;">Neslab</td>
			<td style="width:215px;">RTE-140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating plate</td>
			<td style="width:245px;">In House</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Heating mat</td>
			<td style="width:245px;">Cincinnatti Sub Zero</td>
			<td style="width:215px;">273</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Clay mouse holder</td>
			<td style="width:245px;">Plast.i.clay American Art Clay Co.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Betadine</td>
			<td style="width:245px;">MedLine&#160;</td>
			<td style="width:215px;">NDC53329-938-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Cotton Tip Applicators</td>
			<td style="width:245px;">American Health Service</td>
			<td style="width:215px;">Ctag</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">EtOH 70%</td>
			<td style="width:245px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:215px;">BP2818-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Gloves Nitrile</td>
			<td style="width:245px;">VWR</td>
			<td style="width:215px;">89038-272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys ERG Color Dome instrument</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">D125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Contact lenses</td>
			<td style="width:245px;">In-house</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Diagnosys Software</td>
			<td style="width:245px;">Diagnosys Inc.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Origin 6.1 software</td>
			<td style="width:245px;">OriginLab Corp.</td>
			<td style="width:215px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="39">
			<td height="39" style="height:39px;width:251px;">Reference electrodes</td>
			<td style="width:245px;">Ocuscience</td>
			<td style="width:215px;">F-Thread Electrode (DTL) 24&#8221;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ultrahigh resolution mouse optical coherence tomography to aid intraocular injection in retinal gene therapy research

HR-SD-Ekim canlı fare modelleri photoreceptor dejenerasyon ilerlemesini izlemek için terapötik ajanlar teslim subretinal boşluğa değerlendirmek ve toksisite ve etkinliği vivo içindedeğerlendirmek için kullanılmaktadır. HR-SD-Ekim kızılötesi ışık (800-880 nm) kullanılır ve özellikle optik var benzersiz optik fare göz ile alt-2-mikron Aksiyel kararlılık için tasarlanmış. Transgenik fare modelleri (photoreceptor) dış Retina dejenerasyonu ve denetimlerin hastalık ilerleme değerlendirmek için görüntüsü. Çekti cam microneedles adeno ilişkili virüs (AAV) ya da nano tanecikleri (NP) yolu ile alt retinal enjeksiyonlari trans-scleral ve trans-choroidal bir yaklaşım sağlamak için kullanılmıştır. Dikkatli iğne subretinal boşluğa konumlandırma sıvı alt retinal uzaya sunar bir kalibre edilmiş basınçlı enjeksiyona önce gerekli oldu. Gerçek zamanlı subretinal ameliyat bizim Retina görüntüleme sistemi (RIS) yapılmıştır. HR-SD-Ekim gösterdi bir toksik mutant insan mutant rhodopsin (P347S) ifadesi nedeniyle ilerici Tekdüzen Retina dejenerasyonu (RHOP347S) transgene farelerde. HR-SD-Ekim Retina katmanların sıkı miktar sağlar. Dış nükleer tabaka (yalnız) kalınlığı ve photoreceptor dış segment uzunluğu (OSL) ölçümleri photoreceptor canlılık, dejenerasyon veya kurtarma ile aralarındaki ilişkileri belirlemektir. RIS iletim sistemi gerçek zamanlı görselleştirme subretinal enjeksiyonları içinde yenidoğan sağlar (~ P10-14) ya da yetişkin fareler ve HR-SD-Ekim hemen teslim başarısını belirler ve alansal ölçüde eşler. HR-SD-Ekim subretinal cerrahi başarı farelerde, ayrıca photoreceptors içinde vivocanlılığını ölçme için değerlendirebilir güçlü bir araçtır. HR-SD-Ekim de Retina dejenerasyonu, toksisite ve preklinik gen terapisi araştırma çalışmaları tedavi kurtarma ölçüde değerlendirmek için tek tip hayvan tabur tanımlamak için kullanılabilir.

Varlığı, hızı ve Model dış Retina dejenerasyonu tekdüzelik değerlendirilmesi LNIZCA ölçümleri OPL araç yazılım sağlanan Kaliper aracını kullanarak dit sınırlarını tanımlama karaağaç için kaydedildi. Kısmen insanlaşmış adRP fare modeli dış Retina dejenerasyonu ilerlemesini eşlemek için hedefi oldu. Bir denetim C57BL/6(J) fare ve bir hC1/hC1 / / mWT karşılaştırılabilir görüntüleri/mWT fare modeli, iki kopya mutant insan çubuk op...

Watch this Scientific Journal Video about Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research at JoVE.com

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

Burada biz kendi alansal kapsama değerlendirmek ve photoreceptor canlılık karakterize subretinal boşluğa gen terapisi ajanların teslim yardımcı olmak üzere yüksek çözünürlüklü spektral alanlı optik koherens tomografi (HR-SD-Ekim) kullanarak yeni bir yaklaşım göstermek.

Ultrahigh çözünürlük fare optik koherens tomografi göz içi enjeksiyon Retina gen terapisi araştırma yardımcı olmak için

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

Bu subretinal enjeksiyon prosedürünün genel amacı retinaya gerçek zamanlı olarak gözlemlenebilen minimal invaziv ve tekrarlanabilir bir şekilde bir vektör sunmaktır. Merhaba, bu yöntem vektör iletim etkinliği ve terapötik ajan toksisitesi hakkında gen tedavisi araştırmalarında anahtar soruları cevaplamak için kullanılabilir. Bu tekniğin bazı avantajları retina ve diğer göz yapıları, hassas enjeksiyon yeri haritalama ve katı istatistiksel çıkarım sağlayan titiz kantitatif in vivo ölçümler minimal hasar içerir.Göz içi transgeni enjeksiyonu için, ilk olarak retinal görüntüleme sistemi mikroskobunun görüntüleme aşamasına anestezili bir fare yerleştirin ve forsepsleri hafifçe proptozi indüklemek için açık ve aşağı iterken göz kapağının yedi ve 10 yönünde steril bir iris forsepsin uçlarını yerleştirin. Göz küresinin altındaki göz kapaklarını ikna etmek ve iğneucunu kornea ekstremitesinin kenarının yaklaşık 1 ila 1,5 milimetre altına yönlendirmek için büşnileri kullanın. Daha sonra, göze bir damla steril PBS çözeltisi uygulayın ve gözü steril bir kapak fişiile kapatın.Skleral depresyon oluşturulana kadar dikkatle konjonktiva ile göze iğne sürücü. Skleral depresyon odak kadar yukarı göz döndürmek için mikro manipülatör kullanın, sonra iğne ucu ile retinada keskin bir tepe oluşturmak için ileri iğne sürücü. İğne tutucuyu kullanarak, iğnenin ucu sklera ve RPE'den geçene kadar iğneyi döndürün, iğnenin ucundaki flourescein'in subretinal uzayın hemen yakınında retina dokusunun altında ve retinapigment epitel hücre monokatmanının hemen yakınında görünmesini sağlar.İğnenin ucunu aşağıya doğru sürüklün, böylece küreye teğet geçer, sonra da ayak pedalı anahtarıyla enjeksiyon pompasını etkinleştirin. 0,5 ila bir mikrolitre transgen çözeltisi subretinal uzaya ulaştıktan sonra, iğneyi geri çekin ve kanın stabil olduğunu ve sıvının enjeksiyon bölgesi dışına sızmadığını doğrulayın. Enjeksiyonun başarısını doğrulamak için, dikdörtgen bir hacim OCT kaydedin ve görüntüleri farklı türde potansiyel enjeksiyon sonuçlarının görüntüleriyle karşılaştırın.Uygun enjeksiyon yerleşiminin teyidinden sonra, bleb'in kapsamını fundus görüntüsüne göre haritalamak için bu dikdörtgen OCT görüntüsünü kullanın. Subretinal bleb'in kapsamını haritalamak için, gözün içinde tanınabilir bir simgesel yapının görüntüye dahil edilebildiği şekilde bleb'in dikdörtgen hacimli OCT görüntüsünü açın. B taramasının sol ve sağ kenarlarının konumunu ve varsa optik sinir başlığı ONH'yi ve retinanın RPE ve koroidden ayrıldığı çekim noktasını belirlemek için gerektiği kadar kaliper ekleyin ve verileri kaydedin.Daha sonra kaydedilen dosyaları derleyin ve verileri çizin, en face OCT görüntüsüne enjeksiyon lekesinin bir haritasını etkin bir şekilde oluşturarak. Çizilen verileri enjeksiyon alanını içeren fundus görüntüsüne yeraltın ve birleştirilmiş görüntüyü kaydedin. Oct görüntülemesırasında ilgi çekici bölgeleri bulmak için bu görüntüyü kullanın.Enjeksiyon sonrası retinadejenerasyonu değerlendirmek için, ilk olarak kayıtlı yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı OCT veya HRSD OCT dikdörtgen hacimli görüntü açın ve ölçülecek bir B taraması seçin. Seçili görüntüyü ekranı doldurana kadar büyütün ve resmin üzerine sağ tıklayın. Uygun kaliper sayısını seçmek için kaliperleri tıklatın, ardından kaliperleri açı bloğu sütununda dikey olarak atamak için yapıkaliper özelliğini kullanın ve retina boyunca düzgün kaliper yerleşimini kolaylaştırmak için ekran kaliper konumunu açın.Her kaliperi uygulayın ve b tonu boyunca 0,1 ila 0,2 milimetre arayla uygun konuma taşıyın ve uygun olduğunda optik sinir kafasının ortasına bir kaliper yerleştirmeye özen gösteriyor. Tüm kaliperler yerleştirildiğinde, her kaliperi ilgi alanının uzunluk aralığına tıklayıp sürükleyin ve b talanının ölçülebilir bölgelerini maksimum uzunluğa kadar rasgele ayarlayın. Dış nükleer tabaka kalınlığını ölçmek için, her kaliperin üst kısmını dış sınırlayıcı membrana, her kaliperin altını da dış pleksi form tabakasının alt kısmında, retina boyunca 0,1 ila 0,2 milimetrelik artışlarla yerleştirin.Tüm kaliperler yerleştirildikten ve boyuta göre ayarlandıktan sonra, resme sağ tıklayın ve kaliper verilerini kaydet"i tıklayın, ardından her onuncu B tararmasını gösterdiği gibi ölçümleri tekrarlayın, kaliperleri açık ve x ekseninde aynı konumda tutarak ve kaliperlerin uzunluklarını x yönünde hareket ettirmeden gerektiği gibi ayarlayın. Tüm taramalar ölçüldüğünde, kaydedilen veri dosyalarını açın ve kaydedilen zamana göre dosyaları düzenlemek için tarih değiştirilsin" seçeneğini tıklatın. Ölçülen her B tarar için tüm dosyaları açın ve her B tarar'ın ham verilerini en düşükten en yüksek kare numarasına tek bir dosyaya derleyin ve kaliper adı, uzunluk ve x sütunları merkezi de dahil olmak üzere veri sütunlarını seçin.X merkezinin, işlenen her dikdörtgen hacimli OCT görüntü için ölçülen B taramalarının tümü için aynı olduğundan emin olun ve ölçümleri kaydetmek için kullanılmayan kaliperlerden gelen verileri silin. Optik sinir kafasının merkezinde bulunan kaliper'i sıfıra ayarlayın ve dış nükleer tabakanın veya ölçülen başka bir retina tabakasının kalınlığı için 3B çizim işlevi almak için X'e karşı birden fazla Y veri seti için veri çizin. Daha sonra kontrol ve deneysel hayvanlar arasındaki dış nükleer tabaka ölçümlerini, olası retina dejenerasyonunun oranını ve tekdüzeliğini belirlemek için ilgili yaşlarla karşılaştırın.Retina ölçümleri 3D haritalama için, enjeksiyon sonrası OCT görüntüleri gözden geçirin ve herhangi bir tanımlanabilir yerler not, sonra aynı bölgeden bir takip SDO CT görüntü elde etmek için hayvan konumlandırmak, aynı tanımlanabilir yerler eklemek için özen, ve sadece gösterildiği gibi kaydedilen görüntüleri işlemek. Daha önce enjekte edilen retina bölgelerinin yeniden görüntülenmesini kolaylaştırmak için tanımlanabilir yerler içeren yüksek kaliteli OCT görüntüleri elde etmek çok önemlidir. Os uzunluğundaki değişiklikleri ölçmek için, kaliperler dış sınırlayıcı membrandan Brooks membranına yerleştirildi ve bu tabakalar OCT görüntülerinde kolayca tanımlanadığından güvenilir ölçümler için izin verildi.Farklı fare çizgilerinden bu katmanlar arasındaki ölçümlerdeki farklılıklar daha kısa dış segment uzunluklarına atfedilmiştir. Subretinal enjeksiyon başarılı bir şekilde yapılırsa, subretinal alanın açılması, hem HRSD OCT görüntüleyicinin en yüz görünümünde hem de B taraması görüntülerinde açıkça görüntülenebilen bir bleb üretimini tetikler. Enjeksiyon bölgesinin sınır haritasının üst üste bindirilmesi, retina doku ölçümlerinin ve kaliper pozisyonu veri setlerinin segmentasyonuna izin vererek spesifik terapötik ajanların retina dejenerasyonu üzerindeki etkilerinin daha sonra istatistiksel olarak test edilmesine olanak tanır.Bir kez hakim, bu teknik düzgün yapılırsa on dakika içinde tamamlanabilir. Bu işlemi denerken cerrahi ortamı temiz ve steril tutmayı unutmamak önemlidir. Bu teknik, geliştirildikten sonra gen terapisi alanında araştırmacıların tüm subretinal cerrahi enjeksiyon sürecini gerçek zamanlı olarak izlemelerinin önünü açmış ve in vivo'daki cerrahi başarıyı hemen belirlemenin bir yolunu oluşturmuştur.Bu enjeksiyon prosedüründen sonra, transjen fonksiyonel kurtarma ve/veya toksisite ile ilgili ek soruları yanıtlamak için OKT ve elektro retinografi gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra transsklerel ve transkonoidal subretinal enjeksiyonların nasıl yapılacağını, enjeksiyon lekesinin kapsamını bu görüntüden OKT'ye nasıl görebilirsiniz ve dış retina tabakalarının sıkı ölçümlerini elde edebilirsiniz. Gen terapisi vektörleri ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman uygun kişisel koruyucu ekipman takma gibi önlemlerin kullanılması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Bağışıklık Eksik Fare Kuruluş ve İnsan Retinoblastom Tümörler yayılımı

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Kanserler Üretim ve reaktif oksijen türlerinin (ROS Algılama)

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Doppler Optical Coherence Tomography of Retinal Circulation

Retina Sirkülasyon Doppler Optik Koherens Tomografi

Noncontact retinal blood flow measurements are performed with a Fourier domain optical coherence tomography (OCT) system using a circumpapillary double ...

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Bir Fetal Fare Modelinde Biyoaktif Ajan intratrakeal Yönetimi İçin Yeni Bir Cerrahi Yaklaşım

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

Fare Göz içine Gen Terapisi Vektörler ve Kök Hücre Subretinal Enjeksiyon

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of &beta;-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Near Infrared Optical Projection Tomography for Assessments of ÃƒÅ½Ã‚Â²-cell Mass Distribution in Diabetes Research

Diyabet Araştırma β-hücre Kütle Dağılımı değerlendirmelerinde Kızılötesi Optik Projeksiyon Tomografi civarında

By adapting OPT to include the capability of imaging in the near infrared (NIR) spectrum, we here illustrate the possibility to image larger bodies of ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

Üretim ve Farelerde arteriyel Lezyonlarının 3-Boyutlu kantitasyonu Optik Projeksiyon Tomografi ile

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

In Vivo, Percutaneous, Needle Based, Optical Coherence Tomography of Renal Masses

Vivo, Perkütan, İğne Tabanlı, Böbrek Kitlelerin Optik Koherens Tomografi

Optical coherence tomography (OCT) is the optical equivalent of ultrasound imaging, based on the backscattering of near infrared light. OCT provides real ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Bir rekombinant adeno-ilişkili viral vektörün stereotaktik enjeksiyon yoluyla Parkinson Hastalığı için bir alfa-sinüklein Bazlı Fare Modeli Geliştirme

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...