Name: influenza a virus studies in a mouse model of infection
Uploaded: 2017-09-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection at JoVE.com

Forskning om influensavirus i LM-S laboratorium finansieras delvis av The New York influensa Center of Excellence (NYICE), medlem av NIAID Centers of Excellence för influensa forskning och övervakning (CEIRS). Vi tackar Wendy Bates för hennes stöd i rättelserna av manuskriptet.

alla djur protokoll som beskrivs här godkändes av den institutionella Animal Care och användning kommittén (IACUC) och den institutionella biosäkerhet kommittén (IBC) vid University of Rochester School of Medicine och tandvård och överensstämmer med rekommendationer i Guide för skötsel och användning av försöksdjur i nationell forskning rådet 22. Faciliteterna och program av Vivarium och Division av försöksdjursmedicin School of Medicine och tandvård är ackrediterade av AAALAC International och följa...

<ol>
	<li>Girard, M. P., Cherian, T., Pervikov, Y., Kieny, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+vaccine+research+and+development:+human+acute+respiratory+infections.">A review of vaccine research and development: human acute respiratory infections.</a> Vaccine. 23 (50), 5708-5724 (2005).</li><li>Arnold, S., Monto, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+Virology+of+Influenza+Illness.">Epidemiology and Virology of Influenza Illness.</a> Am J Manag Care. 6, 255-264 (2000).</li><li>Palese, P., Shaw, M. L., Knipe, D. M., Howley, P. M., Griffin, D. E., Lamb, R. A., Martin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthomyxoviridae:+The+Viruses+and+Their+Replication.">Orthomyxoviridae: The Viruses and Their Replication.</a> Fields Virology. , (2007).</li><li>Li, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genesis+of+a+highly+pathogenic+and+potentially+pandemic+H5N1+influenza+virus+in+eastern+Asia.">Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia.</a> Nature. 430 (6996), 209-213 (2004).</li><li>Nogales, A., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+Genetics+Approaches+for+the+Development+of+Influenza+Vaccines.">Reverse Genetics Approaches for the Development of Influenza Vaccines.</a> Int J Mol Sci. 18 (20), (2017).</li><li>Kunisaki, K. M., Janoff, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+in+immunosuppressed+populations:+a+review+of+infection+frequency,+morbidity,+mortality,+and+vaccine+responses.">Influenza in immunosuppressed populations: a review of infection frequency, morbidity, mortality, and vaccine responses.</a> Lancet Infect Dis. 9 (8), 493-504 (2009).</li><li>Belshe, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+attenuated+versus+inactivated+influenza+vaccine+in+infants+and+young+children.">Live attenuated versus inactivated influenza vaccine in infants and young children.</a> N Engl J Med. 356 (7), 685-696 (2007).</li><li>Cox, A., Baker, S. F., Nogales, A., Martinez-Sobrido, L., Dewhurst, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+mouse-adapted+live+attenuated+influenza+virus+that+permits+in+vivo+analysis+of+enhancements+to+the+safety+of+live+attenuated+influenza+virus+vaccine.">Development of a mouse-adapted live attenuated influenza virus that permits in vivo analysis of enhancements to the safety of live attenuated influenza virus vaccine.</a> J Virol. 89 (6), 3421-3426 (2015).</li><li>Nogales, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A+Virus+Attenuation+by+Codon+Deoptimization+of+the+NS+Gene+for+Vaccine+Development.">Influenza A Virus Attenuation by Codon Deoptimization of the NS Gene for Vaccine Development.</a> J Virol. 88 (18), 10525-10540 (2014).</li><li>Nogales, A., DeDiego, M. L., Topham, D. J., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rearrangement+of+Influenza+Virus+Spliced+Segments+for+the+Development+of+Live-Attenuated+Vaccines.">Rearrangement of Influenza Virus Spliced Segments for the Development of Live-Attenuated Vaccines.</a> J Virol. 90 (14), 6291-6302 (2016).</li><li>Nogales, A., Huang, K., Chauch&#233;, C., DeDiego, M. L., Murcia, P. R., Parrish, C. R., Mart&#237;nez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canine+influenza+viruses+with+modified+NS1+proteins+for+the+development+of+live-attenuated+vaccines.">Canine influenza viruses with modified NS1 proteins for the development of live-attenuated vaccines.</a> Virology. 500 (2017), 1-10 (2016).</li><li>Garcia-Sastre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A+virus+lacking+the+NS1+gene+replicates+in+interferon-deficient+systems.">Influenza A virus lacking the NS1 gene replicates in interferon-deficient systems.</a> Virology. 252 (2), 324-330 (1998).</li><li>Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+interhost+transmission+of+influenza+virus+by+vaccination+in+the+guinea+pig+model.">Blocking interhost transmission of influenza virus by vaccination in the guinea pig model.</a> J Virol. 83 (7), 2803-2818 (2009).</li><li>Mubareka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+influenza+virus+via+aerosols+and+fomites+in+the+guinea+pig+model.">Transmission of influenza virus via aerosols and fomites in the guinea pig model.</a> J Infect Dis. 199 (6), 858-865 (2009).</li><li>Nogales, A., Baker, S. F., Martinez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-competent+influenza+A+viruses+expressing+a+red+fluorescent+protein.">Replication-competent influenza A viruses expressing a red fluorescent protein.</a> Virology. 476C, 206-216 (2014).</li><li>Margine, I., Krammer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+for+Influenza+Viruses:+Implications+for+Universal+Vaccine+Development.">Animal Models for Influenza Viruses: Implications for Universal Vaccine Development.</a> Pathogens. 3 (4), 845-874 (2014).</li><li>Bouvier, N., Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+for+Influenza+Virus+Pathogenesis+and+Transmission.">Animal Models for Influenza Virus Pathogenesis and Transmission.</a> Viruses. 2 (8), 1530-1563 (2010).</li><li>Pica, N., Iyer, A., Ramos, I., Bouvier, N. M., Fernandez-Sesma, A., Garc&#237;a-Sastre, A., Lowen, A. C., Palese, P., Steel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DBA.2+mouse+is+susceptible+to+disease+following+infection+with+a+broad,+but+limited,+range+of+influenza+A+and+B+viruses.">The DBA.2 mouse is susceptible to disease following infection with a broad, but limited, range of influenza A and B viruses.</a> J Virol. 85 (23), 12825-12829 (2011).</li><li>Watanabe, H., Numata, K., Ito, T., Takagi, K., Matsukawa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+response+in+Th1-+and+Th2-dominant+mouse+strains.">Innate immune response in Th1- and Th2-dominant mouse strains.</a> Shock. 22 (5), 460-466 (2004).</li><li>Srivastava, B., Blazejewska, P., Hessmann, M., Bruder, D., Geffers, R., Mauel, S., Gruber, A. D., Schughart, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+genetic+background+strongly+influences+the+response+to+influenza+a+virus+infections.">Host genetic background strongly influences the response to influenza a virus infections.</a> PLoS One. 4 (3), e4857 (2009).</li><li>Lowen, A. C., Bouvier, N. M., Steel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+in+the+Guinea+Pig+Model.">Transmission in the Guinea Pig Model.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 385, 157-183 (2014).</li><li>Schickli, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid-only+rescue+of+influenza+A+virus+vaccine+candidates.">Plasmid-only rescue of influenza A virus vaccine candidates.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 356 (1416), 1965-1973 (2001).</li><li>Martinez-Sobrido, L., Garcia-Sastre, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+recombinant+influenza+virus+from+plasmid+DNA.">Generation of recombinant influenza virus from plasmid DNA.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li><li>National Research Council (U.S.) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals., Institute for Laboratory Animal Research (U.S.). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guide for the care and use of laboratory animals. , (2011).</li><li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+of+estimating+fifty+percent+endpoints.">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> The American Journal of Hygiene. 27 (3), 493-497 (1938).</li><li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid,+simple,+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet.">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li><li>Nogales, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temperature+sensitive+live-attenuated+canine+influenza+virus+H3N8+vaccine.">A temperature sensitive live-attenuated canine influenza virus H3N8 vaccine.</a> J Virol. , (2016).</li><li>Eisfeld, A. J., Neumann, G., Kawaoka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influenza+A+virus+isolation,+culture+and+identification.">Influenza A virus isolation, culture and identification.</a> Nat Protoc. 9 (11), 2663-2681 (2014).</li><li>Guo, H., Baker, S. F., Martinez-Sobrido, L., Topham, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+CD8+T+cell+heterologous+protection+by+a+single+dose+of+single-cycle+infectious+influenza+virus.">Induction of CD8 T cell heterologous protection by a single dose of single-cycle infectious influenza virus.</a> J Virol. 88, 12006-12016 (2014).</li><li>He, W., Mullarkey, C. E., Miller, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+neutralization+potency+of+influenza+A+virus+hemagglutinin+stalk/stem-binding+antibodies+in+polyclonal+preparations+by+microneutralization+assay.">Measuring the neutralization potency of influenza A virus hemagglutinin stalk/stem-binding antibodies in polyclonal preparations by microneutralization assay.</a> Methods. , (2015).</li><li>Gulati, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+epitopes+on+the+neuraminidase+of+a+recent+H3N2+influenza+virus+(A/Memphis/31/98).">Antibody epitopes on the neuraminidase of a recent H3N2 influenza virus (A/Memphis/31/98).</a> J Virol. 76 (23), 12274-12280 (2002).</li><li>Beare, A. S., Webster, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication+of+avian+influenza+viruses+in+humans.">Replication of avian influenza viruses in humans.</a> Arch Virol. 119, 37-42 (1991).</li><li>Rowe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+antibody+to+avian+influenza+A+(H5N1)+virus+in+human+serum+by+using+a+combination+of+serologic+assays.">Detection of antibody to avian influenza A (H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assays.</a> J Clin Microbiol. 37 (4), 937-943 (1999).</li><li>Stephenson, I., Wood, J. M., Nicholson, K. G., Zambon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sialic+acid+receptor+specificity+on+erythrocytes+affects+detection+of+antibody+to+avian+influenza+haemagglutinin.">Sialic acid receptor specificity on erythrocytes affects detection of antibody to avian influenza haemagglutinin.</a> J Med Virol. 70 (3), 391-398 (2003).</li></ol>

Musmodell av IAV är allmänt används för in-vivo studier av IAV patogenes, immunogenicitet och skydd effekt. Små möss gör dem lätta att manipulera och lagra jämfört med andra djurmodeller som illrar eller marsvin. Dessutom av användarvänligheten när det gäller djur som kostnad, bostäder och reproduktion tillåta deras användning i prekliniska vaccination tester där stort antal djur behövs. Särskilt, eftersom möss har använts i flera forsknings discipliner, flera molekylära och immunologi mur...

IAVs är höljeförsedda virus som klassificerade i Orthomyxoviridae familj3. De innehåller åtta enkelsträngat RNA-molekyler med negativ polaritet3. I människor orsaka IAVs säsongsbetonade epidemier och enstaka pandemier av viktig konsekvens när nya virus introduceras i den mänskliga befolkning4. Dessutom överförs säsongsbetonade IAVs mycket och snabbt mellan människor producerar en förhöjd ekonomisk förlust i världen varje år2,5. IAV symtomen är hosta, nästäppa, feber, allmän sjukdomskänsla, huvudvärk, anorexi och myalgi, men viruset kan också producera en mer allvarlig sjukdom hos immunsupprimerade patienter6. I själva verket beräknar den Världshälsoorganisationen (WHO) att säsongsbunden influensavirus orsaka 300 000-500 000 dödsfall i världen varje år1. Det finns bara två klasser av läkemedel som för närvarande godkänts av Food and Drug Administration (FDA) för influensa profylax och behandling hos människa: (NA)-neuraminidashämmare (t.ex., oseltamivir) och blockerare av M2 Jonen kanaliserar (t.ex., amantadin); uppkomsten av resistenta virusvarianter är dock en ökande oro. Vaccination, därför förblir det bästa medicinska alternativet för att skydda människor mot IAVs infektioner. Hittills har tre typer av influensa vacciner licensierad av FDA för humant bruk finns tillgängliga: rekombinant viral hemagglutinin (HA) protein vacciner, inaktiverat vaccin mot influensa (IIV) och levande försvagade influensa vaccin (LAIV)5, 7. de tre vaccinerna är utformade för att inducera adaptiva immunsvaret mot viral HA proteinet, stora målet av neutraliserande antikroppar mot IAVs.
En validerad musmodell att studera IAV infektion i vivo
Djurmodeller har använts för att studera, bland annat IAV patogenes8,9,10,11, viral faktorer som bidrar till sjukdom12 eller virusöverföring13 ,14, och att testa effekten av nya vacciner eller antivirala läkemedel9,10,15. Möss (Mus musculus) är den mest omfattande används djurmodell för IAV forskning av flera skäl: 1) immunförsvaret är evolutionärt liknar som förekommer i människor; (2) låg kostnad, inklusive animaliska inköp, bostäder och fortplantning. (3) liten storlek enkelt manipulera och lagra; (4) minimal värd variabilitet att få homogena svaren och resultat. (5) en stor kunskap om möss biologi, inklusive genomsekvens; (6) många tillgängliga molekylärbiologi och immunologi reagenser. (7) tillgängliga knock-out (KO) möss att studera bidrag av en given värd protein på virusinfektion; och 8) flera mus-stammar som kan utnyttjas för att utvärdera den genetiska grunden för infektioner.
I området i närheten finns det flera mus stammar tillgängliga att studera IAV in-vivo. Ålder, immunstatus, kön, genetiska bakgrund och mus stam samt rutter av infektion, dos och viral stammar alla påverka utfallet av IAV infektion hos möss. De vanligaste mus stammar används i IAV forskning är C57BL/6, BALB/C och, mer nyligen, DBA.2 möss eftersom de är mer mottagliga för IAV sjukdom än de två tidigare stammar16,17,18, 19 , 20. allt immunsvaret kan också olika beroende på mus stam18,19,20. Det är således mycket viktigt att återvinna all tillgänglig information om musen och IAV stam att välja det bästa alternativet för experimentet ska genomföras.
Även musen är en bra djurmodell av infektion för in-vivo studier med IAV, har de flera begränsningar, som måste beaktas i experimentell design. Exempelvis är en större begränsning av med möss för in-vivo studier att IAVs inte sänder bland möss. Således för överföring accepterade studier, mer djurmodeller (t.ex., frettar eller marsvin) är begagnade16,17,21. Dessutom finns det flera skillnader mellan manifestationer av IAV i möss och människor. Till skillnad från människor utvecklar möss inte feber vid IAV infektion; omvänt närvarande de med hypotermi16,17. Hos möss, är IAV replikering koncentrerad i de nedre luftvägarna (lungor) snarare än de övre luftvägarna. IAV virulens hos möss är således inte alltid korrelerar till som ses hos människa. Helt och hållet, eftersom fördelarna överväger de begränsa nackdelarna, mus representerar den första djurmodell som används för att utvärdera influensa viral patogenes, immunogenicitet och skyddande effekt i vaccin och antivirala studier. Dessutom skulle det inte vara etiskt försvarbart att genomföra studier med IAV använder stora djurmodeller utan föregående tecken i en liten djurmodell av IAV infektion. I detta manuskript, beskriver vi hur man infekterar möss intranasalt (i.n.) med IAV, hur att övervaka svårighetsgrad och progress av virusinfektion och hur man utför de experiment som krävs för att utvärdera humorala immunsvar och skydd effekt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="656">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) epithelial cells</td>
			<td style="width:119px;">ATCC</td>
			<td style="width:123px;">CCL-34</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Six- to eight-week-old female C57BL/6 mice</td>
			<td style="width:119px;">National Cancer Institute (NCI)</td>
			<td>01XBE</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Turckey red blod cells</td>
			<td style="width:119px;">Biolink Inc</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:121px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td style="width:119px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:123px;">15-013-CV</td>
			<td style="width:121px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td style="width:119px;">Seradigm</td>
			<td style="width:123px;">1500-050</td>
			<td style="width:121px;">Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine (PSG) 100X</td>
			<td style="width:119px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">30-009-CI</td>
			<td style="width:121px;">Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Penicillin/Streptomycin (PS) 100X</td>
			<td style="width:119px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">30-00-CI</td>
			<td style="width:121px;">Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Bovin Albumin solution (BA)</td>
			<td style="width:119px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">A7409</td>
			<td style="width:121px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Bovin Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:119px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">A9647</td>
			<td style="width:121px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Tosylsulfonyl phenylalanyl chloromethyl ketone (TPCK)-treated trypsin</td>
			<td style="width:119px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">T8802</td>
			<td style="width:121px;">Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Neutral Buffered Formalin 10%</td>
			<td style="width:119px;">EMD</td>
			<td style="width:123px;">65346-85</td>
			<td style="width:121px;">Store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td style="width:123px;">X198-07</td>
			<td style="width:121px;">Store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Monoclonal Antibody anti-NP Influenza A Virus HB-65</td>
			<td style="width:119px;">ATTC</td>
			<td style="width:123px;">H16-L10-4R5</td>
			<td style="width:121px;">Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Polyclonal rabbit anti-mouse immunoglobulins/FITC</td>
			<td style="width:119px;">Dako</td>
			<td style="width:123px;">F0261</td>
			<td style="width:121px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:295px;">ECL Anti-mouse IgG, Horseradish Peroxidase linked whole antibody</td>
			<td style="width:119px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">LNA931V/AG</td>
			<td style="width:121px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">TMB substrate set</td>
			<td style="width:119px;">BioLegend</td>
			<td style="width:123px;">421101</td>
			<td style="width:121px;">Store at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Vmax Kinetic plate reader</td>
			<td style="width:119px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Dounce Tissue Grinders</td>
			<td style="width:119px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:123px;">7722-7</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Receptor destroying enzyme, RDE (II)</td>
			<td style="width:119px;">Denka Seiken Co.</td>
			<td style="width:123px;">370013</td>
			<td style="width:121px;">Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Crystal Violet</td>
			<td style="width:119px;">Fisher Scienctific</td>
			<td style="width:123px;">C581-100</td>
			<td style="width:121px;">Store at RT</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">96-well Cell Culture Plate</td>
			<td style="width:119px;">Greiner Bio-one</td>
			<td style="width:123px;">655-180</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Cell Culture dishes 100mm</td>
			<td style="width:119px;">Greiner Bio-one</td>
			<td style="width:123px;">664-160</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Nunc MicroWell 96-Well Microplates</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scienctific</td>
			<td style="width:123px;">269620</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:295px;">Nunc 96-Well Polystyrene Conical Bottom MicroWell Plates</td>
			<td style="width:119px;">Thermo Fisher Scienctific</td>
			<td style="width:123px;">249570</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Puralub Vet Ointment</td>
			<td style="width:119px;">Dechra</td>
			<td style="width:123px;">9N-76855</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:295px;">Fluorescent microscope</td>
			<td style="width:119px;">Olympus</td>
			<td>Olympus IX81</td>
			<td style="width:121px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

influenza a virus studies in a mouse model of infection

Influensavirus orsakar över 500 000 dödsfall i världen1 och är associerade med en årlig kostnad på 12-14 miljarder USD i USA ensam fundera direkt sjukvård och sjukhusvård kostnader och arbetsfrånvaro2. Djurmodeller är avgörande för influensa A-virus (IAV) studier för att utvärdera viral patogenes, värd-patogen interaktioner, immunsvar, och effekten av nuvarande eller nya vaccin närmar sig liksom antivirala läkemedel. Möss är en fördelaktig små djurmodell eftersom deras immunförsvar är evolutionärt liknande som finns i människor, de är tillgängliga från kommersiella leverantörer som genetiskt identiska individer, det finns flera stammar som kan utnyttjas för att utvärdera den genetiska grunden för infektioner, och de är relativt billiga och lätta att manipulera. För att sammanfatta IAV infektion hos människa via luftvägarna, är möss först bedövas före intranasalt inympning med infektiös IAVs korrekt biosäkerhet inneslutna. Efter infektion bestäms patogenesen av IAVs genom att övervaka dagligen sjukligheten (viktminskning) och dödlighet (överlevnad). Dessutom kan viral patogenes också utvärderas genom att bedöma virusreplikation i övre (nässlemhinnan) eller nedre (lungor) luftvägarna hos infekterade möss. Humorala svar på IAV infektion kan utvärderas snabbt av icke-invasiva blödning och påvisande av sekundära antikroppar analyser som syftar till att påvisa förekomst av totalt eller neutraliserande antikroppar. Här beskriver vi de vanliga metoder att infektera möss intranasalt (i.n) med IAV och utvärdera patogenes, humorala immunsvar och skydd effekt.

Karakterisering av viral patogenesen hos möss
Patogenesen av IAV är relaterade till sjuklighet och dödlighet orsakad av sin infektion. Dessa två parametrar kan utvärderas i möss enkelt: IAV sjuklighet är associerad med viktminskning hos infekterade möss och andelen överlevnad visar dödligheten (figur 1). Den kroppsvikt och överlevnaden hos IAV-infekterade möss övervakas vanligtvis dagligen...

Watch this Scientific Journal Video about Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection at JoVE.com

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Influensa A virus (IAVs) är viktiga mänskliga luftvägspatogener. Att förstå patogenicitet av IAVs att utföra prekliniska tester av nya vaccin metoder och, djurmodeller härma mänsklig fysiologi krävs. Här beskriver vi tekniker för att utvärdera IAV patogenes, humorala svar och vaccinets effekt med hjälp av en musmodell av infektion.

Influensa A Virus studier på en musmodell av infektion

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Immunology and Infection

Genetics

Viruses

SCIENTISTS IN ACTION

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Använda Bioluminescent Imaging för att undersöka synergi mellan Streptococcus pneumoniae Och influensa A-virus i modersmjölksersättning Möss

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

Influensa viruspropagering i embryonerade hönsägg

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

Co-immunoprecipitation av Mouse Mx1 Protein med influensa A-virus nukleoprotein

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Nasal Wipes för influensa A-virus Upptäckt och isolering från svin

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

Mätning Attachment och Internalisering av influensa A-virus i A549-celler genom flödescytometri

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Neutrofil Isolering och analys för att fastställa deras roll i lymfom Cell Känslighet för terapeutiska medel

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

A Miniaturized Glycan Microarray Assay for Assessing Avidity and Specificity of Influenza A Virus Hemagglutinins

En miniatyriserad glykan microarray analys för bedömning Aviditet och specificitet av influensa A-virus Hemagglutinins

Influenza A virus (IAV) hemagglutinins recognize sialic acids on the cell surface as functional receptors to gain entry into cells. Wild waterfowl are the ...

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

I vitro Demontering av influensa A-virus-kapsider genom gradientcentrifugering

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

Imaging Cell interaktion i luftrör slemhinna under influensa virusinfektion med två-photon Intravital mikroskopi

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

A Luciferase-fluorescent Reporter Influenza Virus for Live Imaging and Quantification of Viral Infection

En Luciferase-fluorescerande reporter influensa virus för levande avbildning och kvantifiering av virusinfektion

Influenza A viruses (IAVs) cause human respiratory disease that is associated with significant health and economic consequences. As with other viruses, ...