Name: bioengineering of humanized bone marrow microenvironments in mouse and their visualization by live imaging
Uploaded: 2017-08-01T15:00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging at JoVE.com

نشكر الموظفين في المرافق الأساسية في معهد فرانسيس كريك (مرفق البحوث البيولوجية، في فيفو التصوير والتجريبية علم التشريح) ويولاندا سافيدرا توريس ومرسيدس سانشيز-غارزون، الأطباء البيطريون في كريك و لري على التوالي، على مساعدتهم القيمة. نحن ممتنون للدكتور W. غراي لقراءة المخطوطة نقديا. تم دعم دب من قبل زمالة البحوث غير السريرية من إها. وقد تم دعم هذا العمل من قبل معهد فرانسيس كريك، الذي يتلقى تمويله الأساسي من أبحاث السرطان في المملكة المتحدة (FC001045)، ومجلس البحوث الطبية في المملكة المتحدة (FC001045)، و الترحيب الثقة (FC001045).

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

<html> أهمية فيما يتعلق بالطرق القائمة: في هذا البروتوكول، وصفنا طريقة لتوليد ميكرونفيرونمنتس أنسنة مختلفة في الفئران وتصور بنيتهم ​​عن طريق اثنين من الفوتون المجهري والأنسجة. البيانات التمثيلية المقدمة تبين جدوى النهج، وذلك باستخدام خلايا انسجة مختلفة لهندسة الأنسجة أنسنة. بروتوكول لديه تطبيقات محددة لدراسة الخلايا المكونة للدم البشرية ونخاع العظام المشتق الخلايا المتخصصة في الظروف العادية والمرضية. وتشمل هذه التطبيقات دراسة تطور النسيلي، وفحص المخدرات، والتداخل المتبادل بين هسس الإنسان ومكونات انسجة. في المجال الناشئ للهندسة الأنسجة، وقد اقترحت عدة نهج بديلة. وتشمل مقاربات ملاحظة تطوير الهياكل 3D أنسنة بم في المختبر 55 ، 56 ، 57 ،s = &quot;كريف&quot;&gt; 58 ، 59 ، 60 ، 61 ، 62 ، 63 والكسب غير المشروع مثلي من السقالات بم أنسنة في الفئران 64 . نهجنا لديه ميزة الجمع بين كل من تعقيد النظام في الجسم الحي مع سهولة الوصول التشريحية من الكسب غير المشروع الأنسجة أنسنة. التعديلات وتحري الخلل وإصلاحه: مصدر التباين في هذا البروتوكول يمكن العثور عليها في اختيار الخلايا المستخدمة لبذور السقالات. في عملنا، استخدمنا همسكس بم المشتقة. ومع ذلك، يمكن الحصول على خلايا الوسيطة من عدة أنسجة، والتي قد تظهر خصائص مميزة اعتمادا على الأصل. لذلك، يمكن النظر في استخدام همسس المستمدة من أجهزة مختلفة. ومع ذلك، يجب اختبار قدرتها على تشكيل أنسجة العظام في الجسم الحي قبل استخدامها في هذا صيستخدم هذا البروتوكول المتاحة تجاريا مصدر الخلايا البطانية البشرية ( أي E4ORF1-ترانسدوسد هوفيك). في الآونة الأخيرة، تم الإبلاغ عن استخدام الخلايا البطانية الخاصة بالأعضاء لأغراض مختلفة 65 ، 66 . وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام هيكس الأولية المستمدة من بم تمثل تحسنا للاهتمام للبروتوكول. ولذلك، فإن استخدام مصادر مختلفة من الخلايا البطانية قد تنتج مختلفة في نتائج الجسم الحي . استخدمنا نسغ الفئران المتلقي المناعة لصالح زرع السقالات المتوافقة مع البشر وتجنب رفض الأنسجة. نحن لا نستبعد إمكانية استخدام هذا البروتوكول لمهندس الأنسجة خارج الرحم نخاع العظام في سلالات الماوس الأخرى. في الواقع، ربم-2 يمكن أن تحفز تكوين العظام في نماذج الثدييات المختلفة 47 ، 48 ، 49 ، 50 <sup&gt;، 52 . ومع ذلك، فإن الاختلافات في بقاء الخلية والزرع على المدى الطويل من المرجح أن يلاحظ باستخدام سلالات / نماذج مختلفة. توقيت الانتعاش سقالة يمكن أيضا أن تكون مرنة، وهذا يتوقف على الغرض النهائي من التجربة. في بروتوكول المقدمة، ونحن استعادة العينات في 8-12 أسابيع بعد زرع لتقييم إنغرافتمنت المكونة للدم على المدى الطويل. لدراسة الخطوات المبكرة للإنسان تشكيل بم المتخصصة (على سبيل المثال، تشكيل نسيج عظمي غضروفي 47 أو تطوير الأوعية الدموية)، ويمكن اختيار نقاط زمنية مختلفة. يشار إلى تقنية التصوير الحي وصفنا في هذا البروتوكول للتصوير على المدى القصير من إكسلانتس. ينبغي النظر في استخدام لغرفة معايرتها للحفاظ على درجة حرارة الفسيولوجية، توتر الأوكسجين، وتركيز CO 2 في حالات التصوير على المدى الطويل، مثل لدراسة السلوكيات الحركة. شارع الحرجةإبس ضمن البروتوكول: ومن بين التحديات المتعلقة بالبروتوكول، نسلط الضوء على المهارات التقنية المطلوبة لبعض الخطوات. وينبغي استخدام الخلايا الوسيطة والخلايا البطانية في أرقام مرور الخلايا منخفضة. وإلا، فإنها لن تكون قادرة على دعم الإنسان المكونة للدم الخلية إنغرافتمنت في الجسم الحي أو للمشاركة في دي نوفو الأوعية الدموية وتشكيل العظام في الجسم الحي . نوصي باستخدام همسكس و هيكس في الممرات 1 - 5. إعداد سقالة وخلايا البذر الخطوات تتطلب المهارات الأساسية خلية الثقافة والمعرفة من خصائص الخلايا المحددة المستخدمة في هذا الإجراء. بروتوكول الجراحة هو واضح جدا ولكن يتطلب بعض الممارسة. صيانة بيئة معقمة لتجنب تلوث السقالات المزروع في الفئران العوز المناعي أمر بالغ الأهمية لضمان نجاح التجربة. عينة إكسلانت والتصوير الحي تتطلب الممارسة الجراحية (وخاصة بالنسبة لاستخدام ميكرودريل) ومعرفةنظام المجهر. وأخيرا، معالجة العينات والأنسجة تتطلب معرفة أساسية من التقنيات التي سيتم استخدامها. قيود التقنية: النهج الذي وصفنا يسمح لتصور الخلايا المكونة للدم الإنسان الحية البذر المكروية نخاع العظام المكروية، مع الخلايا البطانية البشرية تشكيل هياكل الأوعية الدموية والخلايا الوسيطة تشكيل العظام / نخاع العظام الفضاء. كما يتم تشكيل الأنسجة في الجسم الحي ، والسقالة المهندسة النهائية لا تزال تكون خيالية (الإنسان والفئران). وينبغي أن تؤخذ هذه المسألة في الاعتبار، كما أن الأنسجة الخيميائية قد لا تحاكي تماما الإنسان نخاع العظام تعقيد والبيئة. السقالات المزروع لها حجم محدود (حاولنا بحد أقصى 6.6 × 7.5 × 7 مم)، وبالتالي، فهي قادرة على استضافة عدد محدود من الخلايا لزرع الأعضاء. كما أن العدد المطلق للخلايا المستعادة سيكون محدودا. وبالتالي، ينبغي أن عدد من السقالات المزروعتحسب كدالة لعدد الخلايا المطلوبة للتجربة. تطبيق التصوير وصفنا مفيد بشكل خاص لمراقبة مساحات كبيرة من الأنسجة الحية على أعماق 150-200 ميكرون من السطح دون تعطيل العمارة وإلحاق الضرر بالخلايا. لذلك، فإنه لا يسمح لتصور السقالة كله. إذا كان مطلوبا مسح كامل من الأنسجة، ومناهج القياسية المناعي سيكون أكثر ملاءمة. تطبيقات المستقبل: الاتجاه المستقبلي لهذا النموذج الحيوي سوف يكون لزيادة تعقيد المكونات البشرية في الأنسجة. وقد تقدمت المعرفة وتوصيف البشرية بم المتخصصة في السنوات الأخيرة 67 ، ويمكن أن يكون البروتوكول وصفها منصة مثيرة للاهتمام لدراسة وظيفة هذه المكونات الخلوية الجديدة والعوامل القابلة للذوبان، وكذلك دورها في دعم طبيعي / الخبيثةالنمل هسس. وعلاوة على ذلك، فإن تقنية التصوير يوفر إمكانية التصوير إنترافيتال من السقالات في الدراسات الطولية، الأمر الذي يتطلب تحسينات تقنية في تصوير السقالات في الفئران الحية، تخدير، مع الانتعاش بعد الجراحة. وسيتطلب هذا النهج اتخاذ خطوات إضافية ويجري حاليا التحقيق فيه في المختبر.

يتم تنظيم قرارات مصير الخلية لوحظ في مقصورات الخلايا الجذعية بإحكام من قبل العوامل الجوهرية والخارجية. على وجه الخصوص، فمن المسلم به الآن على نطاق واسع أن المكروية بم يلعب دورا أساسيا في السيطرة على التبديل في هسس من هادئة إلى حالة نشطة، وكذلك في تجديد الذات أو التمايز مصير القرار 1 . وعلاوة على ذلك، تشير النتائج الأخيرة إلى أن الأورام الخبيثة الدموية تؤثر على وظيفة المكروية بم، مشيرا إلى وجود الحديث المتبادل النشط بين المقصورات 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 . على الرغم من التقدم المحرز مؤخرا، لا تزال هناك العديد من الأسئلة الرئيسية حول كيفية مساهمة نشاط مكونات محددة بم-نيش في سلوك هسك والتحول الخبيث. المكروية بم هي متغاير للغاية<html> خليط معقدة ومتكاملة من العديد من أنواع الخلايا المختلفة، ولكل منها وظائف متخصصة. و البطانية وفيرة (إيك) ومكون الأوعية الدموية تنظيم المغذيات ودوران الأيض، ودخول وخروج الخلايا المختلفة من وإلى بم، والعديد من وظائف هسك 7 ، 8 . خلايا انسجة اللحمة الوسيطة (مسس)، وهي مجموعة غير متجانسة من الخلايا الجذعية غير المتمايزة والأسلاف التي ترتكب من خلال ثلاثة أنواع مختلفة من الأنساب ( أي عظمية، غضروفية، أديبوجينيك)، هي عنصر أساسي آخر في مكانة بم. هذه اللجان الدائمة المحلية توطين سواء في المناطق الوسطى من بم وبالقرب من المنطقة إندوستيل. قد تكون مرتبطة مع هياكل الأوعية الدموية والمتورطين في تنظيم وظيفة هسك 9 ، 10 ، 11 ، 12 ، 13 ،&quot;&gt; 14 ، 15 . وتشير العديد من التقارير إلى أن هسس يقيمون في مواقع محددة مختلفة داخل النخاع وأن وظيفتهم قد تعتمد على توطينها بدقة. معظم المعرفة الحالية بشأن هسس وتفاعلها مع المكروية بم مستمد من دراسات الفئران 1 . استخدام نماذج طعم أجنبي وقد وسعت هذه المعرفة ل هسس الطبيعية والخبيثة الإنسان، إنغرافتينغ داخل بم الفئران من الفئران المناعية 16 ، 17 ، 18 ، 19 ، 20 . على الرغم من أن هذا يمثل نموذجا صالحا، فإنه لا يزال يقدم العديد من التحديات، مثل الحاجة إلى شرط الماوس المتلقي في معظم الحالات للسماح الإنسان هسك صاروخ موجه و إنغرافتمنت أو حاجز عبر الأنواع وأثره غير مفهومة جيدا على التفاعلات خلية الخلية و المهام. وكان استخدام الأجسام المضادة تحييد والفئران المعدلة وراثيا، جنبا إلى جنب مع زرع الأعضاء، دورا أساسيا في تسليط الضوء على الحوار المعقدة التي هسس الإنسان إنشاء مع ميكرونفيرونمنتس بهم. وقد أدخلت مقدمة وتطوير إنترافيتال ثنائي الفوتون المجهري متحد البؤر هذه الدراسات خطوة إلى الأمام، مما يسمح للتصوير المباشر، عالية الدقة، وديناميكية من نخاع العظام 19 و 20 و 21 و 22 ويوفر أداة قوية ل فونكتيونال توصيف المكروية بم ودوره في تنظيم وظيفة هسك. من أجل الالتفاف على بعض المشاكل الناشئة في النماذج التقليدية زرع الأعضاء، وقد تم تقديم مفهوم هندسة هيكل بم أنسنة إلى الواجهة. دمج المواد الحيوية ومفاهيم زرع الخلايا، وقد أظهرت تقارير جدوى محاكاة العظام البشرية مأرو المكروية في المناطق متباينة 23 ، 24 ، 25 ، 26 ، 27 . هذا يفتح إمكانية استخدام الهندسة الحيوية في نماذج الفأر لدراسة الدم الطبيعي والخبيث البشري 28 ، 29 ، 30 ، 31 ، 32 ، 33 ، 34 ، 35 ، 36 ، 37 ، 38 ، 39 ، أورام الأورام، ورم خبيث 40 ، 41 ، 42 ، 43 ، 44 . استنادا إلى الخبرة السابقة في هندسة أنسجة العظام وفي الجسم الحي التصوير 19 ، 22 ، 45 ، 46 ، 47 ، 48 ، 49 ، 50 ، 51 ، 52 ، نحن تصف بروتوكول إلى الهندسة الحيوية وصورة حية عضوي النمط الأنسجة بم الإنسان. هذه الهياكل تنشأ من زرع خلايا انسجة مستمدة من الإنسان إلى السقالات المستندة إلى الكولاجين تحت الجلد المطعمة في الفئران عوز المناعة. في تقرير سابق، أثبتنا أن مسس الإنسان ضمان تشكيل المكروية الإنسان كافية ل إنغرافتمنت من خلايا المكونة للدم البشرية 45 . وعلاوة على ذلك، هنا نحن تصف كيف شارك في زرع المكونات البشرية الخلوية بم الأخرىمثل الخلايا البشرية البطانية (هيك) و / أو السيتوكينات الهامة لتكوين العظام (على سبيل المثال، HBMP2)، والتعاون مع همسكس لتوليد ميكرونفيرونمنتس أنسنة مختلفة، والتي يمكن أن تكون حية تصويرها في الموقع .

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1378">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:277px;">Ge Healthcare</td>
			<td style="width:229px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Cd34 positive selection Kit</td>
			<td style="width:277px;">Stemcell</td>
			<td style="width:229px;">18056</td>
			<td style="width:480px;">Store a 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Magnet</td>
			<td style="width:277px;">Stemcell</td>
			<td style="width:229px;">18000</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Anti-human CD3 antibody, clone OKT-3</td>
			<td style="width:277px;">Bioxcell</td>
			<td style="width:229px;">BE0001-2</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Used for T cell depletion in primary AML samples.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:392px;">Cytokines (IL3, G-CSF, and TPO)</td>
			<td style="width:277px;">PeproTech</td>
			<td style="width:229px;">200-03, 300-23 and 300-18</td>
			<td style="width:480px;">For doing the stock: Dilute each one of the cytokines in 100&#956;L of water and mix them. Add 200&#956;L, do alicuots of 45&#956;L and Store at -20&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">DMSO</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">D4540</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:392px;">FBS</td>
			<td style="width:277px;">Life technologies</td>
			<td style="width:229px;">10270106</td>
			<td style="width:480px;">Heat-inactivate at 56&#176;C during 30 minutes, do aliquots and freeze down. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">MEM-&#945;</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">32571-028</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Myelocult H5100</td>
			<td style="width:277px;">corning</td>
			<td style="width:229px;">5100</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">199</td>
			<td style="width:277px;">Gibco</td>
			<td style="width:229px;">41150-020</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:392px;">hMSC-FBS, Heat-inactivated</td>
			<td style="width:277px;">Gibco</td>
			<td style="width:229px;">12662-029</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">P/S</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">P0781</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">ECGS</td>
			<td style="width:277px;">Millipore</td>
			<td style="width:229px;">02-102</td>
			<td style="width:480px;">Dilute in culture media and use 0.22 mm filter.</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:392px;">HEPES</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">S1558-50ML</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Heparin</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">H3149</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Glutamine</td>
			<td style="width:277px;">Gibco</td>
			<td style="width:229px;">25030</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Collagen 1 coated cell culture plate</td>
			<td style="width:277px;">corning</td>
			<td style="width:229px;">354505</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Trypsin-EDTA solution</td>
			<td style="width:277px;">Thermo-Fisher</td>
			<td style="width:229px;">25200056</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:392px;">hMSC</td>
			<td style="width:277px;">Lonza</td>
			<td style="width:229px;">PT-2501</td>
			<td style="width:480px;">Alternatively, hMSCs we also kindly provided by Dr. Dosquet (University Paris Diderot, Paris) from human bone marrow obtained during orthopaedic surgery under ethical approval 10-038 from IRB00006477.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">VeraVec HUVEC endothelial cells</td>
			<td style="width:277px;">Angiocrine bioscience</td>
			<td style="width:229px;">hVera101</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:392px;">Human hematopoietic cells</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Umbilical Cord blood or primary Acute Myeloid Leukemia (AML) samples were obtained from the Royal London Hospital (London, UK) after informed consent and protocol of use was approved by the East London Ethical Committee and carried out in accordance with the Declaration of Helsinki.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:392px;">Gelfoam, Size 12-7mm</td>
			<td style="width:277px;">Pfizer</td>
			<td style="width:229px;">00009-0315-08</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">PBS</td>
			<td style="width:277px;">Thermo-Fisher</td>
			<td style="width:229px;">10010023</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Surgical material</td>
			<td style="width:277px;">Multiple</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Sterile forceps, tweezers and sharp scissors.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Sterile tissues</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Heat-sterilize paper tissues.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">1 ml Syringe with needle of 25G</td>
			<td style="width:277px;">Terumo</td>
			<td style="width:229px;">SS+01H25161</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:392px;">Ultra Low Attachment Multiple Well Plates</td>
			<td style="width:277px;">Corning</td>
			<td style="width:229px;">3473 or 3471</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">BMP2</td>
			<td style="width:277px;">Noricum</td>
			<td style="width:229px;">rhBMP-2</td>
			<td style="width:480px;">Dilute at 5 mg/ml in acetic acid 50 mM and store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">Thrombin</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">T9010</td>
			<td style="width:480px;">Dilute in CaCl2 2%, 500 mL per vial, and store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:392px;">Fibrinogen</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">F3879</td>
			<td style="width:480px;">Dilute at 4 mg/100 mL in PBS. Store at -20C. Warm before use.</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:392px;">Tissue-culture dishes 35 mm x 10 mm</td>
			<td style="width:277px;">Falcon</td>
			<td style="width:229px;">353001</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:392px;">U-Botton 96 well plate</td>
			<td style="width:277px;">Falcon</td>
			<td style="width:229px;">353077</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:392px;">NSG mice</td>
			<td style="width:277px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:229px;">5557</td>
			<td style="width:480px;">NSG mice were a kind gift from Dr Leonard Shultz (The Jackson Laboratory).</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Chlorhexidine</td>
			<td style="width:277px;">G9</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Dilute 1:10 before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Carprofen</td>
			<td style="width:277px;">Pfizer</td>
			<td style="width:229px;">Rimadyl</td>
			<td style="width:480px;">5 mg/g of mouse</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:277px;">Alstoe</td>
			<td style="width:229px;">Vetergesic</td>
			<td style="width:480px;">0.1 mg/g of mouse body weight</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:277px;">Abbott</td>
			<td style="width:229px;">B506</td>
			<td style="width:480px;">Induction of anaesthesia 2%, maintenance 1%</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Trimmer</td>
			<td style="width:277px;">Wella</td>
			<td style="width:229px;">Contura HS61</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Surgical glue</td>
			<td style="width:277px;">3M</td>
			<td style="width:229px;">Vetbond</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">carbomer (polyacrylic acid)&#160; as Ophthalmic gel</td>
			<td style="width:277px;">Novartis</td>
			<td style="width:229px;">Viscotears Liquid Gel</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:392px;">Human Normal Immunoglobulin</td>
			<td style="width:277px;">Gammaplex</td>
			<td style="width:229px;">10g vial</td>
			<td style="width:480px;">100 ml/mouse intravenously, 30 min before infusion of specific antibody.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:392px;">NT-QTracker</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">Q21021MP</td>
			<td style="width:480px;">Vessel-pooling agent. Administrate 15 ml/mouse intravenously 5 min before imaging.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">AF488-hCD45</td>
			<td style="width:277px;">Biolegend</td>
			<td style="width:229px;">304017</td>
			<td style="width:480px;">100 ml/mouse intravenously, 30 min before imaging.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">FITC-hCD31</td>
			<td style="width:277px;">BD Pharmigen</td>
			<td style="width:229px;">555445</td>
			<td style="width:480px;">100 ml/mouse intravenously, 30 min before imaging.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Super glue</td>
			<td style="width:277px;">Loctite&#160;</td>
			<td style="width:229px;">Super Glue</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Micro-Drill Kit</td>
			<td style="width:277px;">IDEAL - Fisher Scientific</td>
			<td style="width:229px;">NC9010016</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microsurgical microscope</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">No specific brand/company is adviced.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:392px;">LSM 710 NLO</td>
			<td style="width:277px;">Zeiss</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Upright confocal microscope with motorized stage, two-photon laser and 20x 1.0 NA water immersion lens. Alternatively, a microscope with similar specifications could be used.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:392px;">MaiTai &#8220;High Performance&#8221; fully automated 1-box 517 mode-locked Ti:Sapphire laser with DeepSee dispersion compensation</td>
			<td style="width:277px;">&#160;Spectra-Physics</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Formalin solution, neutral buffered, 10%&#160;</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">HT501128</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Ethanol</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">32294</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Osteosoft</td>
			<td style="width:277px;">Millipore</td>
			<td style="width:229px;">1.01728.1000</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Polysine slices</td>
			<td style="width:277px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:229px;">J2800AMNZ</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">Antigen unmasking solution</td>
			<td style="width:277px;">Vector</td>
			<td style="width:229px;">H-3300</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C. Dilute 1:100 in H2O for working solution.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Triton 100x</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">T9284</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">A96470</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Normal Goat serum (NGS)</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">G9023</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Endomucin Antibody</td>
			<td style="width:277px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:229px;">sc-65495</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">hVimentin antibody</td>
			<td style="width:277px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:229px;">sc-6260</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">hCD31 antibody</td>
			<td style="width:277px;">DAKO</td>
			<td style="width:229px;">M0823</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">hCD45 antibody</td>
			<td style="width:277px;">DAKO</td>
			<td style="width:229px;">M0701</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">ADRP (Perilipin2)</td>
			<td style="width:277px;">antibodies-online</td>
			<td style="width:229px;">ABIN283918</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;width:392px;">Goat anti mouse secondary antibodies</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">A11029 or A11005</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:392px;">Goat anti Rabbit secondary antibodies</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">A11037 or A11008</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Goat anti Rat secondary antibodies</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">A11007 or A21247</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:392px;">Sudan Black</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">S2380</td>
			<td style="width:480px;">Prepare a stock of 1% sudan black in ethanol 70%. Store at RT. Prepare working solution of 0.1% sudan black in ethanol 70% and filter using filter-paper before use.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">DAPI</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">D8417</td>
			<td style="width:480px;">Prepare stock in H20 at 100 mg/mg. Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Fluorescent mounting media</td>
			<td style="width:277px;">Dako</td>
			<td style="width:229px;">S3023</td>
			<td style="width:480px;">Add DAPI before use (1:400 from DAPI stock).</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Cover glass</td>
			<td style="width:277px;">VWR</td>
			<td style="width:229px;">631-0147</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bioengineering of humanized bone marrow microenvironments in mouse and their visualization by live imaging

الخلايا الجذعية المكونة للدم البشرية (هسس) تقع في نخاع العظام (بم) المتخصصة، وهي شبكة معقدة متعددة العوامل من مكونات إنتاج السيتوكينات، وعوامل النمو، والمصفوفة خارج الخلية. قدرة هسس على البقاء هادئة، تجديد الذات أو التفريق، واكتساب الطفرات وتصبح خبيثة يعتمد على التفاعلات المعقدة التي تنشأ مع مكونات انسجة مختلفة. لمراقبة الحديث المتبادل بين هسس الإنسان والمكان بم الإنسان في الظروف الفسيولوجية والمرضية، قمنا بتصميم بروتوكول لنموذج إكتوبيكالي وصورة مكانة بم أنسنة في الفئران العوز المناعي. وتبين لنا أن استخدام المكونات الخلوية المختلفة يسمح لتشكيل الهياكل أنسنة وفرصة للحفاظ على المدى الطويل إنغرافتمنت الإنسان المكونة للدم. باستخدام اثنين من الفوتون المجهري، يمكننا أن نعيش صورة هذه الهياكل في الموقع في قرار خلية واحدة، وتوفير أداة جديدة قوية للتوصيف الوظيفي للإنسان بم مالبيئة ودورها في تنظيم تكون الدم الطبيعي والخبيث.

في الشكل 1 ، يتم عرض صور تمثيلية من البذر خلية سقالة وعمليات زرع. في الشكل 1C ، لاحظ أن الخلايا يتم حقن مباشرة في سقالة. في الشكل 1G ، لاحظ أن يتم إجراء شق في الجزء الخلفي من الماوس، حيث يتم إنشاء جيب تحت الجلد ويتم زرع سقالة. ويبين الشكل 2 مورفولوجيا الإجمالي من السقالات المختلفة زرعها في الفئران نسغ واسترجاعها بعد 8 أسابيع. لاحظ الأوعية الدموية طفيف في همسك السقالات المصنف ( الشكل 2A ). شارك البذر من إكس الإنسان مع همسس في سقالة يسمح لتشكيل الأوعية الدموية أكثر ملاءمة في السقالات ( الشكل 2B ). أخيرا، وجود ربمب-2 يدفع تكوين العظام. السقالات استرجاعها هي أكبر في هذه الحالة، وأنها تشكلت من قبلالعظام تشبه الأنسجة الصلبة. ويبين الشكل 3 إعداد التكوين قناة على المجهر للعيش التصوير مع ند (التفاصيل في أسطورة الشكل). الشكل 4 والفيديو 1 تظهر خلايا المكونة للدم البشرية في السقالات المغلفة همسك. تم الكشف عن السقالات 8 أسابيع بعد الزرع وبعد التلقيح عن طريق الوريد من الأجسام المضادة AF488-HCD45 و 655-فبا. هذا الإجراء يسمح لتصور الخلايا المكونة للدم زرع الإنسان وهيكل الأوعية الدموية من قبل اثنين من الفوتون المجهري متحد البؤر. في هذه الحالة، تظهر الصور الأوعية الدموية (655-فبا) في السقالات و إنغرافتمنت على المدى الطويل من الخلايا المكونة للدم البشري (AF488-hCD45) في حمة سقالة. الشكل 5 والفيديو 2 تتوافق مع السقالات البشرية المصنفة مع هيكس و همسس. 8 أسابيع بعد الجراحة، و إكسلانتيد السقالات بعد إنترافنأوس التلقيح من الأجسام المضادة فيتس-HCD31 و 655-فبا، وتم الحصول على الصور مع المجهر متحد البؤر ثنائي الفوتون، كما ذكر من قبل. تظهر الصور مشاركة هيكس في تشكيل السفن في السقالة، مما أدى إلى الأوعية الدموية الخيمياء الفئران البشري. ويبين الشكل 6A بيانات تمثيلية من النهج المستخدم لتحفيز تشكيل العظام في سقالات مسك. على غرار الأرقام السابقة، بعد 8 أسابيع من الزرع، تم إجراء التلقيح عن طريق الوريد من 655-فبا، تم استرجاع السقالات، وتم الحصول على الصور مع اثنين من الفوتون المجهر متحد البؤر. رابم-2-السقالات حفز تحفز تشكيل الأنسجة العظمية، والتي يمكن تصور بسبب شغ (اللون سماوي في الصور) التي يقدمها الكالسيوم في العظام. تظهر الصور المقدمة أيضا تشكيل تجاويف والأوعية الدموية الأنسجة إندوستيل، والتي تشبه إلى حد كبير الأنسجة إندستول بم. في الشكل 6B </sترونغ&gt; والفيديو 3 ، هيكس زرع مشترك مع همسكس. تم استرداد السقالات بعد التلقيح عن طريق الوريد من الأجسام المضادة فيتس-hCD31 و 655-فبا، واثنين من الفوتون الصور المجهري متحد البؤر تظهر مشاركة هيكس في الأوعية الدموية في سقالة العظام تشكيل. ويبين الشكل 7 صور تمثيلية من الأنسجة، وهو إجراء يؤدي إلى دعم النتائج الموصوفة سابقا. تظهر الصور المناعية الأوعية الدموية الماوس، هيكس، همسكس، وطويلة الأجل إنغرافتيد خلايا المكونة للدم البشرية في الهياكل سقالة. تم إصلاح السقالات المستردة من الفئران واستخدامها لمناعي. في ربمب-2 الناقل السقالات العظام تشكيل ( الشكل 7D -F )، لاحظ التشكل من الأنسجة، وتشبه نخاع العظام ناضجة مع الأنسجة الدهنية. في هذا السقالة العظام تشكيل، وتبين لنا أن همسس هي الخلايا الليفية، والتي من شأنها أن تشير رقبعة أنها تساهم في الأنسجة التي شكلت حديثا كخلايا انسجة. وتبين لنا أيضا التعبير علامة شحمية الإنسان، والتي من شأنها أن تشير إلى أن همسكس تساهم أيضا في تشكيل الأنسجة الدهنية. <img alt="شكل 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig1.jpg" /> الشكل 1. صور الممثل من زرع الخلايا وعمليات زرع. أ) السقالة الأولي وطريقة القطع باستخدام مشرط. ب) 24 قطعة تم الحصول عليها من السقالة الأولية. ج) سقالة الخلية طريقة البذر باستخدام حقنة. د) السقالات المزروعة بالخلايا مع وسط الاستزراع، جاهزة لزرعها. إف) خطوات محددة للسقالات العظام تشكيل: E) سقالة يجري نقلها إلى 96 جيدا، لوحة u- أسفل و F) صورة ممثلة من الطريقة المستخدمة لإضافة rhbMP2، الثرومبين، والفيبرينوجين إلى سقالة. غ) سورجي<html> عملية زرع كال تحت التخدير العام: G) الجرح التي تم إنشاؤها في الجلد وزرع سقالة، H) طريقة زرع، و إيج) الجرح إغلاق الإجراء باستخدام الغراء الجراحي. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig2.jpg" /> الشكل 2. مختلف السقالات المستردة من الفئران. صور ممثل للسقالات مسك (يسار)، مسك + إيك السقالات (الأوسط)، و مسك + إيك + بمب السقالات (يمين). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> 4 / 55914fig3.jpg &quot;/&gt; الشكل 3. تكوين القناة. يتم عرض الإعداد مرشح المجهر. أ) هناك أربعة وحدات الكشف عن ند: في الوحدة الأولى، وهناك نوعان من مكعبات مرشح. وحدات الثانية والثالثة لديها واحد مرشح مكعب لكل منهما؛ وآخر وحدة لا يوجد لديه مكعب (لا تستخدم). أول أنبوب المضاعفات الضوئية (بمت) هو للقناة الحمراء البعيدة (640 - 690 نانومتر)، مما يعكس أطوال موجات أقل؛ التالية هي 380 - 485 نانومتر، 500 - 550 نانومتر، و 555 - 625 نانومتر (النظام هو دائما من أقل إلى أطوال موجية أعلى). ب) الانبعاثات فلورفور للكشف مع تكوينات أعلاه (لون مشفرة). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig4.jpg" /> الشكل 4. مسك سقالة<html> s السماح لتشكيل مكانة للخلايا المكونة للدم البشرية. A) و B) 3D إعادة بناء Z- مداخن اتخذت بعد إكسبلانت، بعد التلقيح عن طريق الوريد مع AF488-HCD45 (الأخضر)، لتسمية الخلايا المكونة للدم البشرية، و 655-فبا (أرجواني) م لتسمية الأوعية الدموية. أشرطة مقياس تمثل 20 ميكرون في A و B (لوحات العليا) و 5 ميكرون في B (لوحات أقل). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="فيديو 1" src="/files/ftp_upload/55914/55914video1.jpg" /> فيديو 1. مسك سقالات تسمح لتشكيل مكانة للخلايا المكونة للدم البشرية . 3D إعادة الإعمار من الخلايا المكونة للدم البشري (AF488-hCD45) المرتبطة الأوعية الدموية (655-فبا) في سقالة مسك (هياكل الكولاجين: شغ، سماوي). كل كومة التدابير 140 × 140 ميكرون.إف = &quot;http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914video1.mov&quot; تارجيت = &quot;_ بلانك&quot;&gt; الرجاء النقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.) <img alt="الشكل 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig5.jpg" /> الشكل 5. المشاركة الإنسانية البشرية في تشكيل سفن إنسانية في سقالات مسك. 3D إعادة بناء الأوعية الدموية (655-فبا) واصطف من قبل إكس من أصل الإنسان (فيتس-hCD31) في سقالات مسك + إيك. تمثل الحانات مقياس 20 ميكرون. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="فيديو 2" src="/files/ftp_upload/55914/55914video2.jpg" /> فيديو 2. المشاركة الإنسانية الإنسان في تشكيل السفن الإنسانية في سقالات مسك. 3D إعادة الإعمار من إكس الإنسان (فيتس-hCD31) بطانة فا<html> سكولاتور (655-فبا) في سقالات مسك + إيك. كل كومة التدابير 240 × 240 ميكرون. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914video2.mov" target="_blank">الرجاء النقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.)</a> <img alt="الشكل 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig6.jpg" /> الشكل 6. ربمب-2 السقالات الناقل لها السطوح العظام والأنسجة الوعائية أنسنة على غرار نخاع العظام. أ) 3D إعادة الإعمار من مسك + بمب السقالات تظهر تشكيل هياكل العظام (شغ-سماوي) والأوعية الدموية (655-فبا). أشرطة مقياس تمثل 100 ميكرون (يسار)، 70 ميكرون (وسط)، و 50 ميكرون (يمين). ب) 3D إعادة الإعمار من مسك + إيك + بمب السقالات تظهر الأوعية أنسنة (655-فبا) واصطف مع إكس البشري (فيتس-hCD31). تمثل الحانات مقياس 50 ميكرون (يسار) و 30 ميكرون (الوسط واليمين).14 / 55914fig6large.jpg &quot;تارجيت =&quot; _ بلانك &quot;&gt; الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. <img alt="فيديو 3" src="/files/ftp_upload/55914/55914video3.jpg" /> فيديو 3. ربمب-2 السقالات الناقل لها السطوح العظام والأنسجة الوعائية أنسنة مماثلة لنخاع العظام. 3D إعادة الإعمار من مسك + فيرا + بمب سقالة (العظام: شغ؛ الأوعية: 655-فبا؛ إكس الإنسان: فيتس-hCD31). كل كومة يقيس 600 × 600 ميكرون. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914video3.mov" target="_blank">الرجاء النقر هنا لمشاهدة هذا الفيديو. (انقر بزر الماوس الأيمن للتحميل.)</a> <img alt="الشكل 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig7.jpg" /> الشكل 7. صور الممثل من المناعي نفذت على السقالات الثابتة. أف) الدراسات المناعية التي أجريت لتحديد موقع الخلايا البشرية زرعها طn السقالات. أس) السقالات زرعها مع هيكس، همسكس، و هسس. دف) السقالات تشكيل العظام مزروع مع هيكس، همسكس، و هسس. قنوات اللون هي كما يلي: أد) الإنسان إيك (hcd31) والفأر هيكل الأوعية الدموية (إندوموسين، إيندوم)، بي) همسكس (هفيمنتين، هفيم) والفأر خلايا الأوعية الدموية (إندوموسين، إيندوم)، ج) خلايا المكونة للدم البشري (hcd45) والأوعية الدموية الماوس (إندوموسين، إندوم)، و F) البروتين الدهني التمايز ذات الصلة البشرية (هادرب) والأوعية الدموية الماوس (إندوموسين، إندوم). أشرطة مقياس تمثل 10 ميكرون (A و C)، 20 ميكرون (B و E)، و 40 (D و F) ميكرون. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig7large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging at JoVE.com

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

يتم تقديم طريقة لإنشاء وصورة حية مختلفة ناسخ نخاع العظام أنسنة في الفئران. استنادا إلى مكانة داعمة التي أنشأتها خلايا الوسيطة الإنسان، وإضافة الخلايا البطانية البشرية يدفع تشكيل الأوعية البشرية، في حين أن إضافة ربمب-2 يدفع تشكيل الإنسان-الماوس خيالية نسيج العظام ناضجة.

الهندسة الحيوية من أنسنة نخاع العظام ميكرونفيرونمنتس في الماوس والتصور من خلال التصوير لايف

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Human Mesenchymal Stem Cells and their Cultivation on the Porous Bone Matrix

عزل الوسيطة الإنسان الخلايا الجذعية وزراعتها على المسامية مصفوفة العظام

Mesenchymal stem cells (MSCs) have a differentiation potential towards osteoblastic lineage when they are stimulated with soluble factors or specific ...

Isolating Mesangiogenic Progenitor Cells (MPCs) from Human Bone Marrow

Isolating Mesangiogenic Progenitor Cells MPCs from Human Bone Marrow

عزل خلايا Mesangiogenic السلف (البلدان المتوسطية الشريكة) من نخاع العظام البشرية

In a research study aimed to isolate human bone marrow (hBM)-derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) for clinical applications, we identified a novel ...

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

في المختبر تمايز الناضجة Myofibers للتصوير لايف

Skeletal muscles are composed of myofibers, the biggest cells in the mammalian body and one of the few syncytia. How the complex and evolutionarily ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

يعيش متحد البؤر التصوير من تطوير نبات الأرابيدوبسيس الزهور

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

تحديد أسلاف ريدثروميلويد وذريتهم في الجنين الماوس عن طريق التدفق الخلوي

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

في المختبر زراعة ovule للتصوير خلايا حية من الاستقطاب الزيجوت والزخرفة الجنين في التمويل نبات

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

تصوير لايف من ماوس الثانوي باليت فيوجن

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

A RANKL-based Osteoclast Culture Assay of Mouse Bone Marrow to Investigate the Role of mTORC1 in Osteoclast Formation

على أساس رانكل "اوستيوكلاست الثقافة المقايسة للماوس نخاع العظام" التحقيق في دور mTORC1 في "تشكيل اوستيوكلاست"

Osteoclasts are unique bone-resorbing cells that differentiate from the monocyte/macrophage lineage of bone marrow. Dysfunction of osteoclasts may result ...

Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice

العزلة، والثقافة، وتمايز الخلايا اللحمية في النخاع العظمى وفروعه اوستيوكلاست من الفئران

Bone marrow stromal cells (BMSCs) constitute a cell population routinely used as a representation of mesenchymal stem cells in vitro. They reside within ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

تصوير الخلايا الحية لفصل الكروموسومات أثناء الانقسام

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...