Name: bioengineering of humanized bone marrow microenvironments in mouse and their visualization by live imaging
Uploaded: 2017-08-01T15:00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging at JoVE.com

אנו מודים לעובדים במתקני הליבה במכון פרנסיס קריק (מתקן מחקר ביולוגי, בויו דימות והיסטופתולוגיה ניסיונית) ויולנדה סאבדרה-טורס ומרצדס סאנצ&#39;ס-גרזון, הווטרינרים בקריק וב- LRI בהתאמה, על עזרתם החשובה. אנו מודים לד&quot;ר וו גריי על קריאת כתב היד. DP נתמך על ידי עמית מחקר קליני של EHA. עבודה זו נתמכה על ידי מכון פרנסיס קריק, שמקבל את המימון הליבה שלו ממחקר הסרטן בבריטניה (FC001045), המועצה למחקר רפואי בבריטניה (FC001045), ואת Welcome Trust (FC001045).

למחברים אין מה לחשוף.

<html> משמעות ביחס לשיטות הקיימות: בפרוטוקול זה, תיארנו שיטה ליצירת microenvironments אנושית שונים בעכברים כדי לדמיין את הארכיטקטורה שלהם באמצעות מיקרוסקופ שני פוטון היסטולוגיה. הנתונים המייצגים שסופקו מראים את ההיתכנות של הגישה, תוך שימוש בתאים סטרומה שונים להנדסת רקמות אנושיות. הפרוטוקול יש יישומים ספציפיים לחקר תאים hematopoietic האדם תאים מוח העצם נגזרות בתנאים נורמליים ופתולוגיים. יישומים אלה כוללים את המחקר של האבולוציה המשובצת, בדיקות סמים, crosstalk בין HSCs האדם רכיבים סטרומה. בתחום המתפתח של הנדסת רקמות, כמה גישות חלופיות הוצעו. גישות של הערה כוללים את הפיתוח של מבנים תלת מימדיים בבני אדם במבחנה 55 , 56 , 57 ,S = &quot;xref&quot;&gt; 58 , 59 , 60 , 61 , 62 , 63 ואת השתל אורתופוטיק של פיגומי BM אנושיים בעכברים 64 . הגישה שלנו יש את היתרון של שילוב הן המורכבות של מערכת vivo עם נגישות אנטומית קלה של שתל רקמות אנושית. שינויים ופתרון בעיות: מקור השתנות בפרוטוקול זה ניתן למצוא את הבחירה של תאים המשמש זרע את הפיגומים. בעבודה שלנו, השתמשנו BM- נגזר hMSCs. עם זאת, תאים mesenchymal ניתן להשיג מספר רקמות, אשר עשוי להראות מאפיינים ייחודיים בהתאם למקור. לכן, השימוש hMSCs נגזר איברים שונים יכולים להיחשב. עם זאת, היכולת שלהם ליצור רקמת עצם in vivo יש לבדוק לפני השימוש זה עמ &#39;פרוטוקול rotocol.This משתמשת מסחרית זמין בתא האדם האנדותל ( כלומר, E4ORF1-transduced HUVEC). לאחרונה, השימוש בתאי האנדותל ספציפיים עבור איברים למטרות שונות כבר דיווח 65 , 66 . יתר על כן, השימוש hECs העיקרי נגזר BM יכול לייצג שיפור מעניין לפרוטוקול. לכן, השימוש במקורות שונים של תאים אנדותל עשוי לייצר תוצאות שונות vivo . השתמשנו NSG immunocompromised עכברים המקבל לטובת השתלת פיגומים אנושיים כדי למנוע דחייה רקמות. אנחנו לא שוללים את האפשרות של שימוש בפרוטוקול זה כדי להנדס רקמות מוח עצם ectopic זנים העכבר אחרים. ואכן, rhBMP-2 יכול לעורר היווצרות עצם במודלים שונים של יונקים 47 , 48 , 49 , 50 <sup&gt;, 52. עם זאת, הבדלים הכדאיות התא השתלות לטווח ארוך צפויים להיות נצפו באמצעות זנים שונים / דגמים. עיתוי התאוששות הפיגומים יכול גם להיות גמיש, בהתאם המטרה הסופית של הניסוי. בפרוטוקול המוצג, אנו לשחזר דגימות ב 8-12 שבועות לאחר ההשתלה להעריך engraftment hematopoietic לטווח ארוך. כדי לחקור את השלבים המוקדמים של היווצרות האדם בנישה BM ( למשל, היווצרות רקמות אוסטאוכונדרל 47 או התפתחות כלי הדם), נקודות זמן שונות ניתן לבחור. טכניקת הדמיה חיה שתיארנו בפרוטוקול זה מסומן עבור הדמיה לטווח קצר של explants. השימוש בתא equilibrated לשמירה על טמפרטורה פיזיולוגית, מתח חמצן, ריכוז CO 2 צריך להיחשב במקרים של הדמיה לטווח ארוך, כגון ללמוד התנהגות התנהגויות. רחוב קריטיאפס בתוך הפרוטוקול: בין האתגרים הקשורים בפרוטוקול, היינו להדגיש את הכישורים הטכניים הדרושים כמה צעדים. Mesenchymal ותאי האנדותל יש להשתמש במספר נמוך תא המעבר; אחרת, הם לא יוכלו לתמוך engraftment hematopoietic תא in vivo או להשתתף wasculature נובו דה עצם היווצרות in vivo . אנו ממליצים להשתמש hMSCs ו hECs על מעברים 1 - 5. הכנת הפיגום ושלבים זריעת תאים דורשים בסיסי התרבות תאים מיומנויות וידע של המאפיינים של תאים ספציפיים בשימוש בהליך. פרוטוקול הניתוח הוא פשוט למדי, אבל דורש קצת תרגול. תחזוקה של סביבה aseptic כדי למנוע זיהום של פיגומים מושתלים בעכברים immunodeficient חיוני כדי להבטיח את הצלחת הניסוי. לדוגמה explant ו הדמיה לחיות דורשים כירורגית בפועל (במיוחד עבור השימוש של microdrill) וידע שלמערכת מיקרוסקופ. לבסוף, עיבוד דגימה והיסטולוגיה דורשים ידע בסיסי של הטכניקות לשימוש. מגבלות הטכניקה: הגישה שאנו מתארים מאפשרת הדמיה של תאים חיים hematopoietic חיים האדם זריעת microenvironment מוח העצם האנושית, עם תאים האנדותל האנושי ויוצרים מבנים וסקולריים תאים mesenchymal ויצירת העצם / מרחב מוח העצם. כמו הרקמה נוצרת in vivo , הפיגום הסופי מהונדסים עדיין יהיה chimeric (האדם ואת Murine). בעיה זו צריכה להילקח בחשבון, כמו רקמה chimeric לא יכול לחקות באופן מלא המורכבות מוח העצם האנושי והסביבה. פיגומים מושתלים יש גודל מוגבל (ניסינו מקסימלית של 6.6 x 7.5 x 7 מ&quot;מ), ולכן, הם יכולים לארח מספר מוגבל של תאים xenotransplantation. המספר המוחלט של תאים התאושש יהיה גם מוגבל; ולכן, מספר פיגומים מושתל צריךיחושב כפונקציה של מספר התאים הנדרשים לניסוי. יישום הדמיה שתיארנו הוא שימושי במיוחד עבור תצפית על שטחים גדולים של רקמה חיה בעומקים של 150-200 מיקרומטר מפני השטח מבלי לשבש את הארכיטקטורה ופגיעה בתאים. לכן, הוא אינו מאפשר הדמיה של כל הפיגום. אם סריקה מלאה של הרקמה נדרשת, גישות immunofluorescence תקן יהיה מתאים יותר. יישומים עתידיים: הכיוון העתידי של המודל הביו-הנדסי הזה יהיה להגדיל את המורכבות של המרכיבים האנושיים ברקמה. הידע והאפיון של גומחת האדם האנושי התקדמו בשנים האחרונות 67 , והפרוטוקול המתואר יכול להיות פלטפורמה מעניינת לחקור את תפקודם של מרכיבים אלה של תאים חדשים ושל גורמים מסיסים, כמו גם את תפקידם בתמיכה נורמלית /HSCs נמלים. יתר על כן, טכניקת הדמיה מספקת את הפוטנציאל הדמיה intravital של הפיגומים במחקרים אורך, אשר ידרוש שיפורים טכניים הדמיה הפיגומים בעכברים חיים, הרדים, עם ההתאוששות שלאחר הניתוח. גישה זו תידרש צעדים נוספים והיא נמצאת כעת במעבדה במעבדה.

החלטות גורל תאים שנצפו תאי תא גזע מוסדרים בחוזקה על ידי גורמים פנימיים חיצוניים. בפרט, עכשיו הוא זיהה נרחב כי microenvironment BM משחק תפקיד בסיסי בשליטה על הבורר ב- HSCs מן שקט אל מדינה פעילה, כמו גם שלהם התחדשות עצמית או הבדל ההחלטה גורל 1 . יתר על כן, הממצאים האחרונים מראים כי ממאירות המטולוגיות משפיעות על תפקוד המיקרו-סביבה של BM, ומצביעות על קיומו של crosstalk פעיל בין שני תאים 2 , 3 , 4 , 5 , 6 . למרות ההתקדמות האחרונות, שאלות מפתח רבות נותרו על האופן שבו פעילותם של מרכיבי BM-Niche ספציפיים תורמת להתנהגות HSC ולטרנספורמציה ממאירה. Microenvironment BM הוא הטרוג מאוד<html> תערובת קנאית ומורכבת של סוגי תאים שונים, כל אחד עם פונקציות מיוחדות. האנדותל השופע (EC) ורכיב כלי הדם מסדירים מחזור חומרים תזונתיים ומטבוליטים, החדירה והמעבר של תאים שונים ל- BM וממנו, וכמה פונקציות HSC 7 , 8 . תאים ממאנצ&#39;ימלים סטרומלים (MSC), אוכלוסייה הטרוגנית של תאי גזע לא מובחנים ואבות שבוצעו באמצעות שלוש שושלות שונות ( כלומר, אוסטאוגני, chondrogenic, adipogenic), הם מרכיב בסיסי נוסף של נישה BM. אלה MSCs להתמקם הן באזורים מרכזיים של BM ו בקרבה לאזור endosteal. הם עשויים להיות קשורים עם מבנים וסקולריים והם מעורבים הרגולציה של הפונקציה HSC 9 , 10 , 11 , 12 , 13 ,&quot;&gt; 14 , 15 . דיווחים רבים מציעים כי HSCs מתגוררים באתרים מוגדרים שונים בתוך המוח, וכי תפקידם עשוי להיות תלוי לוקליזציה המדויק שלהם. רוב הידע הנוכחי לגבי HSCs ואת האינטראקציה שלהם עם microenvironment BM נובע ממחקרים Murine 1 . השימוש מודלים xenograft הרחיב את הידע הזה כדי HSCs נורמלי וממאיר אדם, engrafting בתוך BM Murine של עכברים immunodeficient 16 , 17 , 18 , 19 , 20 . למרות שזה מייצג מודל חוקי, הוא עדיין מציג אתגרים רבים, כגון הצורך התנאי העכבר הנמען ברוב המקרים כדי לאפשר הומאניות HSC האנושי engraftment או מחסום בין המינים והשפעתו הבינו היטב על אינטראקציות התא התא פונקציות. השימוש בנטרול נוגדנים ועכברים מהונדסים גנטית, יחד עם xenotransplantation, היה אינסטרומנטלי להדגיש את הדיאלוג המורכב כי HSCs האדם להקים עם microenvironments שלהם. ההקדמה והתפתחות של מיקרוסקופיה intravital two-photon confocal יש עבר מחקרים אלה צעד קדימה, המאפשר ישיר, ברזולוציה גבוהה, דימות דינמי של מוח העצם 19 , 20 , 21 , 22 ומספק כלי רב עוצמה עבור תפקודית אפיון של microenvironment BM ותפקידה בוויסות פונקציה HSC. על מנת לעקוף חלק מהבעיות המתעוררות במודלים קסנו-טרנסלנטליים קלאסיים, המושג הנדסה מבנה BM אנושי הובא לידי ביטוי. מיזוג בין biomaterials ו מושתל תא מושגים, דוחות הראו את הכדאיות של מחקה את עצם האדםחץ מיקרו-סביבה באזורים ההטרוטופיים 23 , 24 , 25 , 26 , 27 . זה פותח את האפשרות של שימוש bioengineering במודלים עכבר ללמוד hematopoiesis רגיל וממאיר 28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , tumorigenesis, וגרורות 40 , 41 , 42 , 43 , 44 . בהתבסס על ניסיון קודם בהנדסת רקמות עצם ובדמיית vivo 19 , 22 , 45 , 46 , 47 , 48 , 49 , 50 , 51 , 52 , אנו מתארים פרוטוקול של bioengineer ו- live-image organotypic BM tissues אנושיים. מבנים אלה מקורם בהשתלה של תאים אנושיים המופקעים על ידי BM- אדם לתוך פיגומים מבוססי קולגן תת עורית מורכבים בעכברים החיסוניים. בדו&quot;ח הקודם, הראינו כי MSCs אנושי להבטיח את הקמתה של microenvironment האדם מתאים engraftment של תאים hematopoietic האדם 45 . יתר על כן, כאן אנו מתארים כיצד שיתוף ההשתלה של מרכיבי האדם האחרים סלולרS, כגון תאי אנדותל אנושיים (hEC) ו / או ציטוקינים חשובים להיווצרות עצם ( למשל, hBMP2), משתפים פעולה עם hMSC כדי ליצור microenvironments אנושיים שונים, אשר ניתן לחיות הדמיה באתרם .

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1378">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Ficoll-Paque</td>
			<td style="width:277px;">Ge Healthcare</td>
			<td style="width:229px;">17-1440-03</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Cd34 positive selection Kit</td>
			<td style="width:277px;">Stemcell</td>
			<td style="width:229px;">18056</td>
			<td style="width:480px;">Store a 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Magnet</td>
			<td style="width:277px;">Stemcell</td>
			<td style="width:229px;">18000</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Anti-human CD3 antibody, clone OKT-3</td>
			<td style="width:277px;">Bioxcell</td>
			<td style="width:229px;">BE0001-2</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Used for T cell depletion in primary AML samples.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:392px;">Cytokines (IL3, G-CSF, and TPO)</td>
			<td style="width:277px;">PeproTech</td>
			<td style="width:229px;">200-03, 300-23 and 300-18</td>
			<td style="width:480px;">For doing the stock: Dilute each one of the cytokines in 100&#956;L of water and mix them. Add 200&#956;L, do alicuots of 45&#956;L and Store at -20&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">DMSO</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">D4540</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="44">
			<td height="44" style="height:44px;width:392px;">FBS</td>
			<td style="width:277px;">Life technologies</td>
			<td style="width:229px;">10270106</td>
			<td style="width:480px;">Heat-inactivate at 56&#176;C during 30 minutes, do aliquots and freeze down. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">MEM-&#945;</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">32571-028</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Myelocult H5100</td>
			<td style="width:277px;">corning</td>
			<td style="width:229px;">5100</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">199</td>
			<td style="width:277px;">Gibco</td>
			<td style="width:229px;">41150-020</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:392px;">hMSC-FBS, Heat-inactivated</td>
			<td style="width:277px;">Gibco</td>
			<td style="width:229px;">12662-029</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">P/S</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">P0781</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">ECGS</td>
			<td style="width:277px;">Millipore</td>
			<td style="width:229px;">02-102</td>
			<td style="width:480px;">Dilute in culture media and use 0.22 mm filter.</td>
		</tr>
		<tr height="52">
			<td height="52" style="height:52px;width:392px;">HEPES</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">S1558-50ML</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Heparin</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">H3149</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Glutamine</td>
			<td style="width:277px;">Gibco</td>
			<td style="width:229px;">25030</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Collagen 1 coated cell culture plate</td>
			<td style="width:277px;">corning</td>
			<td style="width:229px;">354505</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Trypsin-EDTA solution</td>
			<td style="width:277px;">Thermo-Fisher</td>
			<td style="width:229px;">25200056</td>
			<td style="width:480px;">Store at -20&#176;C. Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:392px;">hMSC</td>
			<td style="width:277px;">Lonza</td>
			<td style="width:229px;">PT-2501</td>
			<td style="width:480px;">Alternatively, hMSCs we also kindly provided by Dr. Dosquet (University Paris Diderot, Paris) from human bone marrow obtained during orthopaedic surgery under ethical approval 10-038 from IRB00006477.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">VeraVec HUVEC endothelial cells</td>
			<td style="width:277px;">Angiocrine bioscience</td>
			<td style="width:229px;">hVera101</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:392px;">Human hematopoietic cells</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Umbilical Cord blood or primary Acute Myeloid Leukemia (AML) samples were obtained from the Royal London Hospital (London, UK) after informed consent and protocol of use was approved by the East London Ethical Committee and carried out in accordance with the Declaration of Helsinki.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:392px;">Gelfoam, Size 12-7mm</td>
			<td style="width:277px;">Pfizer</td>
			<td style="width:229px;">00009-0315-08</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">PBS</td>
			<td style="width:277px;">Thermo-Fisher</td>
			<td style="width:229px;">10010023</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Surgical material</td>
			<td style="width:277px;">Multiple</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Sterile forceps, tweezers and sharp scissors.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Sterile tissues</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Heat-sterilize paper tissues.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">1 ml Syringe with needle of 25G</td>
			<td style="width:277px;">Terumo</td>
			<td style="width:229px;">SS+01H25161</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:392px;">Ultra Low Attachment Multiple Well Plates</td>
			<td style="width:277px;">Corning</td>
			<td style="width:229px;">3473 or 3471</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">BMP2</td>
			<td style="width:277px;">Noricum</td>
			<td style="width:229px;">rhBMP-2</td>
			<td style="width:480px;">Dilute at 5 mg/ml in acetic acid 50 mM and store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">Thrombin</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">T9010</td>
			<td style="width:480px;">Dilute in CaCl2 2%, 500 mL per vial, and store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:62px;width:392px;">Fibrinogen</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">F3879</td>
			<td style="width:480px;">Dilute at 4 mg/100 mL in PBS. Store at -20C. Warm before use.</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:392px;">Tissue-culture dishes 35 mm x 10 mm</td>
			<td style="width:277px;">Falcon</td>
			<td style="width:229px;">353001</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:392px;">U-Botton 96 well plate</td>
			<td style="width:277px;">Falcon</td>
			<td style="width:229px;">353077</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:392px;">NSG mice</td>
			<td style="width:277px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:229px;">5557</td>
			<td style="width:480px;">NSG mice were a kind gift from Dr Leonard Shultz (The Jackson Laboratory).</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Chlorhexidine</td>
			<td style="width:277px;">G9</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Dilute 1:10 before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Carprofen</td>
			<td style="width:277px;">Pfizer</td>
			<td style="width:229px;">Rimadyl</td>
			<td style="width:480px;">5 mg/g of mouse</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:277px;">Alstoe</td>
			<td style="width:229px;">Vetergesic</td>
			<td style="width:480px;">0.1 mg/g of mouse body weight</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:277px;">Abbott</td>
			<td style="width:229px;">B506</td>
			<td style="width:480px;">Induction of anaesthesia 2%, maintenance 1%</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Trimmer</td>
			<td style="width:277px;">Wella</td>
			<td style="width:229px;">Contura HS61</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Surgical glue</td>
			<td style="width:277px;">3M</td>
			<td style="width:229px;">Vetbond</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">carbomer (polyacrylic acid)&#160; as Ophthalmic gel</td>
			<td style="width:277px;">Novartis</td>
			<td style="width:229px;">Viscotears Liquid Gel</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:392px;">Human Normal Immunoglobulin</td>
			<td style="width:277px;">Gammaplex</td>
			<td style="width:229px;">10g vial</td>
			<td style="width:480px;">100 ml/mouse intravenously, 30 min before infusion of specific antibody.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:392px;">NT-QTracker</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">Q21021MP</td>
			<td style="width:480px;">Vessel-pooling agent. Administrate 15 ml/mouse intravenously 5 min before imaging.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">AF488-hCD45</td>
			<td style="width:277px;">Biolegend</td>
			<td style="width:229px;">304017</td>
			<td style="width:480px;">100 ml/mouse intravenously, 30 min before imaging.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">FITC-hCD31</td>
			<td style="width:277px;">BD Pharmigen</td>
			<td style="width:229px;">555445</td>
			<td style="width:480px;">100 ml/mouse intravenously, 30 min before imaging.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Super glue</td>
			<td style="width:277px;">Loctite&#160;</td>
			<td style="width:229px;">Super Glue</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Micro-Drill Kit</td>
			<td style="width:277px;">IDEAL - Fisher Scientific</td>
			<td style="width:229px;">NC9010016</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Microsurgical microscope</td>
			<td style="width:277px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">No specific brand/company is adviced.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:392px;">LSM 710 NLO</td>
			<td style="width:277px;">Zeiss</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;">Upright confocal microscope with motorized stage, two-photon laser and 20x 1.0 NA water immersion lens. Alternatively, a microscope with similar specifications could be used.</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:392px;">MaiTai &#8220;High Performance&#8221; fully automated 1-box 517 mode-locked Ti:Sapphire laser with DeepSee dispersion compensation</td>
			<td style="width:277px;">&#160;Spectra-Physics</td>
			<td style="width:229px;"></td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Formalin solution, neutral buffered, 10%&#160;</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">HT501128</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Ethanol</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">32294</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Osteosoft</td>
			<td style="width:277px;">Millipore</td>
			<td style="width:229px;">1.01728.1000</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Polysine slices</td>
			<td style="width:277px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:229px;">J2800AMNZ</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">Antigen unmasking solution</td>
			<td style="width:277px;">Vector</td>
			<td style="width:229px;">H-3300</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C. Dilute 1:100 in H2O for working solution.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Triton 100x</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">T9284</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">A96470</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Normal Goat serum (NGS)</td>
			<td style="width:277px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:229px;">G9023</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Endomucin Antibody</td>
			<td style="width:277px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:229px;">sc-65495</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">hVimentin antibody</td>
			<td style="width:277px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:229px;">sc-6260</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">hCD31 antibody</td>
			<td style="width:277px;">DAKO</td>
			<td style="width:229px;">M0823</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">hCD45 antibody</td>
			<td style="width:277px;">DAKO</td>
			<td style="width:229px;">M0701</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">ADRP (Perilipin2)</td>
			<td style="width:277px;">antibodies-online</td>
			<td style="width:229px;">ABIN283918</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;width:392px;">Goat anti mouse secondary antibodies</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">A11029 or A11005</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:392px;">Goat anti Rabbit secondary antibodies</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">A11037 or A11008</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Goat anti Rat secondary antibodies</td>
			<td style="width:277px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:229px;">A11007 or A21247</td>
			<td style="width:480px;">Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:392px;">Sudan Black</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">S2380</td>
			<td style="width:480px;">Prepare a stock of 1% sudan black in ethanol 70%. Store at RT. Prepare working solution of 0.1% sudan black in ethanol 70% and filter using filter-paper before use.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:392px;">DAPI</td>
			<td style="width:277px;">Sigma</td>
			<td style="width:229px;">D8417</td>
			<td style="width:480px;">Prepare stock in H20 at 100 mg/mg. Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Fluorescent mounting media</td>
			<td style="width:277px;">Dako</td>
			<td style="width:229px;">S3023</td>
			<td style="width:480px;">Add DAPI before use (1:400 from DAPI stock).</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:392px;">Cover glass</td>
			<td style="width:277px;">VWR</td>
			<td style="width:229px;">631-0147</td>
			<td style="width:480px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bioengineering of humanized bone marrow microenvironments in mouse and their visualization by live imaging

תאי גזע ההמטופויטים (HSCs) מתגוררים בגומחה של מח עצם (BM), רשת מורכבת ומורכבת של רכיבים המרכיבים ציטוקינים, גורמי גדילה ומטריצה ​​חוץ-תאית. היכולת של HSCs להישאר שקטים, לחדש את עצמם או להבדיל, ולרכוש מוטציות ולהפוך ממאיר תלוי אינטראקציות מורכבות שהם מקימים עם רכיבים סטרומה שונים. כדי לבחון את crosstalk בין HSCs האדם ואת גומחה BM האדם בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים, עיצבנו פרוטוקול מודל ectopically ותמונה גומחה BM האנושית בעכברים immunodeficient. אנו מראים כי השימוש של רכיבים סלולריים שונים מאפשר להיווצרות מבנים אנושיים הזדמנות לקיים engraftment hematopoietic לטווח ארוך האדם. באמצעות מיקרוסקופ שני פוטונים, אנו יכולים לחיות את התמונה מבנים אלה באתרו ברזולוציה תא יחיד, מתן כלי חדש עוצמה עבור אפיון פונקציונלי של האדם BMIcroenvironment ותפקידה בוויסות hematopoiesis נורמלי וממאיר.

באיור 1 , תמונות נציג של זריעת תאים פיגום ותהליכי ההשתלה מוצגים. בתרשים 1C , שים לב תאים מוזרקים ישירות לתוך הפיגום. בתרשים 1G , שים לב כי חתך נעשה בחלק האחורי של העכבר, שם נוצר כיס תת עורית ואת הפיגום הוא מושתל. איור 2 מציג את המורפולוגיה ברוטו של פיגומים שונים מושתלים בעכברים NSG ואחזר לאחר 8 שבועות. הערה וסקולריזציה קלה hMSC פיגומים פיגומים ( איור 2 א ). שיתוף זריעת של ECs אנושיים עם hMSCs ב פיגום מאפשר להיווצרות של כלי הדם הרלוונטיים יותר פיגומים ( איור 2 ב ). לבסוף, הנוכחות של rhBMP-2 מעוררת היווצרות עצם. את הפיגומים אחזור הם גדולים יותר במקרה זה, והם מיוצרים על ידיעצם הדומה לרקמה קשה. איור 3 מציג את הגדרת תצורת הערוץ על המיקרוסקופ עבור הדמיה חיה עם NDD (פרטים באגדה דמות). איור 4 ווידאו 1 להראות תאים hematopoietic האדם himsc מצופה פיגומים. פיגומים היו explanted 8 שבועות לאחר ההשתלה ואחרי חיסון תוך ורידי של נוגדן AF488-hCD45 ו 655-VPA. הליך זה מאפשר הדמיה של תאים hematopoietic מושתל האדם ואת מבנה כלי הדם על ידי מיקרוסקופ שני photon confocal. במקרה זה, התמונות מראות כלי דם (655-VPA) בפיגומים ואת engraftment לטווח ארוך של תאים hematopoietic האדם (AF488-hCD45) ב parenchyma הפיגום. איור 5 ווידאו 2 מתאימות פיגומים האדם seeded עם hECs ו hMSCs. 8 שבועות לאחר הניתוח, פיגומים היו explanted לאחר intravenחיסון ous של FITC-hCD31 נוגדן ו 655-VPA, ותמונות נרכשו עם מיקרוסקופ confocal שני פוטון, כאמור לעיל. תמונות להראות את ההשתתפות של hecs במבנה כלי שיט בתוך הפיגום, וכתוצאה מכך וסקולטור chimeric האדם Murine. איור 6 א מציג נתונים נציג של הגישה המשמשים לעורר היווצרות עצם פיגומים MSC. בדומה לנתונים קודמים, 8 שבועות לאחר ההשתלה, בוצעה חיסון תוך ורידי של 655-VPA, פיגומים נלקחו, ותמונות נרכשו עם מיקרוסקופ שני פוטון confocal. RhBMP-2-פיגומים מעוררים לגרום להיווצרות רקמות עצם, אשר יכול להיות דמיינו בשל SHG (צבע ציאן בתמונות) המסופקים על ידי סידן בעצם. התמונות שסופקו גם מראים את היווצרות חללים ורקמות אנדוסקטל וסקולרי, אשר דומה מאוד לרקמה endosteal BM. באיור 6 ב </sTrong&gt; ו וידאו 3 , hECs היו שיתוף implanted עם hmscs. פיגומים נלקחו לאחר חיסון תוך ורידי של נוגדנים FITC-hCD31 ו 655-VPA, ו -2 פוטון תמונות מיקרוסקופיה confocal להראות את השתתפותם של hECs ב neovascularization ב פיגום העצם להרכיב. איור 7 מציג תמונות מייצגות של היסטולוגיה, הליך המבוצע כדי לאשש תוצאות שתוארו לעיל. תמונות Immunofluorescent להראות vasculature העכבר, hECs, hMSCs, ו לטווח ארוך engrafted תאים hematopoietic האדם במבנים פיגומים. פיגומים שנלקחו עכברים היו קבועים המשמשים immunofluorescence. ב rhBMP-2 נושאת עצם הפיגום פיגומים ( איור 7D -F ), לציין את המורפולוגיה של הרקמה, הדומה מוח העצם בוגרת עם רקמת השומן. ב פיגום זה עצם ליצירת, אנו מראים כי hMSCs הם fibroblasts, אשר יציין tהם תורמים לרקמה שזה עתה נוצרה כתאי סטרומה. כמו כן, אנו מראים ביטוי סמן אדיפוציטים אנושיים, אשר יציין כי hMSCs גם לתרום היווצרות רקמות השומן. <img alt="איור 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig1.jpg" /> איור 1. נציג תמונות של זריעת תאים ותהליכי ההשתלה. א) פיגום ראשוני ושיטת חיתוך שלה באמצעות איזמל. ב) 24 חתיכות המתקבל פיגום הראשוני. ג) פיגומים תא הזרוע בשיטה באמצעות מזרק. D) פיגומים Cell seeded עם בינוני תרבות, מוכן להיות מושתל. EF) צעדים ספציפיים עבור הפיגום העצמות: E) הפיגום מועבר צלחת 96-well, U- התחתון ו F) נציג תמונה של השיטה המשמשת כדי להוסיף rhBMP2, thrombin, ופיברינוגן על הפיגום. GJ)<html> הליך ההשתלה Cal תחת הרדמה כללית: G) הפצע נוצר בהשתלת העור ואת פיגום, H) שיטת ההשתלה, IJ) הפצע הליך הסגירה באמצעות דבק כירורגי. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig2.jpg" /> איור 2. פיגומים שונים מאוחזרים עכברים. תמונות נציג של MSC פיגומים (משמאל), MSC + EC פיגומים (באמצע), MSC + EC + BMP פיגומים (מימין). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 4 / 55914fig3.jpg &quot;/&gt; איור 3. תצורת ערוץ. המסנן מיקרוסקופ ההתקנה מוצג. א) ישנם ארבעה מודולים NDD גלאי: במודול הראשון, יש שני קוביות מסנן; המודולים השני והשלישי יש קובייה אחת מסנן כל; ואת המודול האחרון אין קובייה (לא בשימוש). צינור מכפיל ראשון (PMT) הוא עבור ערוץ אדום רחוק (640 - 690 ננומטר), המשקף את אורכי הגל התחתון; אלה הם 380 - 485 ננומטר, 500 - 550 ננומטר, ו 555 - 625 ננומטר (הסדר הוא תמיד מן הגל התחתון עד גבוה). ב) פליטות fluorophore לגילוי עם תצורות לעיל (מקודד צבע). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig4.jpg" /> איור 4. MSC פיגום<html> S לאפשר גיבוש של נישה עבור תאים heatopoietic האדם. A) ו- B) השחזור 3D של Z- ערימות נלקח שלאחר אקספלנט, לאחר חיסון תוך ורידי עם AF488-hCD45 (ירוק), כדי התווית תאים hematopoietic האדם, ו 655-VPA (מגנטה) מ כדי תווית כלי הדם. סולם ברים מייצגים 20 מיקרומטר A ו- B (לוחות העליונים) ו 5 מיקרומטר ב (לוחות התחתון). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="סרטון 1" src="/files/ftp_upload/55914/55914video1.jpg" /> וידאו 1. MSC פיגומים לאפשר לגיבוש של נישה עבור תאים heatopoietic האדם . שחזור 3D של תאים hematopoietic האדם (AF488-hCD45) הקשורים עם כלי הדם (655-VPA) ב MSC פיגום (מבנים קולגן: SHG, ציאן). כל ערימה אמצעים 140 x 140 מיקרומטר.Ef = &quot;http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914video1.mov&quot; target = &quot;_ blank&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בסרטון זה. (לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני כדי להוריד). <img alt="איור 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig5.jpg" /> איור 5. ECs האדם להשתתף בהצבת כלי רכב הומאניים ב MSC פיגומים. שחזור 3D של כלי הדם (655-VPA) בשורה של ECS ממוצא אנושי (FITC-hCD31) ב MSC + EC פיגומים. פסי סולם מייצגים 20 מיקרומטר. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="סרטון 2" src="/files/ftp_upload/55914/55914video2.jpg" /> וידאו 2. אנושי ECs להשתתף בעיצוב של כלי אנושי ב MSC פיגומים. שחזור 3D של ECs האדם (FITC-hCD31) רירית VA<html> Sculature (655-VPA) ב MSC + EC פיגומים. כל ערימה אמצעים 240 x 240 מיקרומטר. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914video2.mov" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בסרטון זה. (לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני כדי להוריד).</a> <img alt="איור 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig6.jpg" /> איור 6. rhBMP-2 פיגומים נושאות יש משטחי העצם וסקולטור אנושי דומה מח עצם. א) שחזור 3D של MSC + BMP פיגומים מראה את היווצרותם של מבנים עצם (SHG- ציאן) ו כלי הדם (655-VPA). סולם ברים מייצגים 100 מיקרומטר (משמאל), 70 מיקרומטר (באמצע), ו 50 מיקרומטר (מימין). ב) שחזור 3D של MSC + EC + BMP פיגומים מראה כלי אנושיים (655-VPA) בשורה עם ECs האדם (FITC-hCD31). סולם ברים מייצגים 50 מיקרומטר (משמאל) ו 30 מיקרומטר (באמצע וימין).14 / 55914fig6large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="וידאו 3" src="/files/ftp_upload/55914/55914video3.jpg" /> וידאו 3. rhBMP-2 המוביל פיגומים יש משטחי העצם וסקולטור אנושי דומה מח עצם. שחזור 3D של MSC + VERA + BMP פיגום (העצם: SHG; כלי: 655-VPA, ECs האדם: FITC-hCD31). כל ערימה אמצעים 600 x 600 מיקרומטר. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914video3.mov" target="_blank">לחץ כאן כדי לצפות בסרטון זה. (לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני כדי להוריד).</a> <img alt="איור 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55914/55914fig7.jpg" /> איור 7. נציג תמונות של Immunofluorescence מבוצע על פיגומים קבועים. AF) מחקרים Immunofluorescence לבצע לאיתור תאים אנושיים מושתל אניN פיגומים. AC) פיגומים מושתלים עם HECs, hMSCs, ו hHSCs. DF) עצם פיגומים המושתלים עם hECs, hMSCs, ו hHSCs. ערוצי הצבע הם כדלקמן: AD) האדם EC (hed31) ומבנה כלי הדם העכבר (endomucin, ENDOM), BE) hMSCs (hVimentin, hVIM) ואת תאי כלי הדם העכבר (endomucin, ENDOM), C) תאים hematopoietic האדם (hCD45) ו vasculature העכבר (endomucin, ENDOM), ו F) האדם שומן השונה חלבון הקשורים (hADRP) ו vasculature העכבר (endomucin, ENDOM). סולם ברים מייצגים 10 מיקרומטר (A ו- C), 20 מיקרומטר (B ו- E), ו 40 (D ו- F) מיקרומטר. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55914/55914fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging at JoVE.com

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

שיטה ליצור ולחיות תמונות שונים מוח העצמות נישות בעכברים מוצג. בהתבסס על נישה תומכת שנוצרו על ידי תאים mesenchymal האדם, תוספת של תאים אנדותל האדם גורם להיווצרות של כלי אדם, ואילו תוספת של rhBMP-2 גורם להיווצרות של רקמת העצם של המוח האנושי.

הנדסת ביו-הנדסה של Microenvironments מוח העצם של עכבר ויזואליזציה שלהם על ידי הדמיה חיה

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Human Mesenchymal Stem Cells and their Cultivation on the Porous Bone Matrix

בידוד של תאי גזע mesenchymal האדם והטיפוח שלהם על עצם מטריקס הנקבובי

Mesenchymal stem cells (MSCs) have a differentiation potential towards osteoblastic lineage when they are stimulated with soluble factors or specific ...

Isolating Mesangiogenic Progenitor Cells (MPCs) from Human Bone Marrow

Isolating Mesangiogenic Progenitor Cells MPCs from Human Bone Marrow

תאי בידוד ובתאי Mesangiogenic (MPCs) מן האדם מח עצם

In a research study aimed to isolate human bone marrow (hBM)-derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) for clinical applications, we identified a novel ...

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

In Vitro Differentiation of Mature Myofibers for Live Imaging

במבחנת הבידול של בוגרות Myofibers עבור הדמיה חיה

Skeletal muscles are composed of myofibers, the biggest cells in the mammalian body and one of the few syncytia. How the complex and evolutionarily ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

חי Confocal הדמיה של פיתוח פרחים ארבידופסיס

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

זיהוי של אבות אריתרומיאלואידים צאצאיהם בעובר עכבר על ידי זרימת cytometry

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

במבחנה ביצית טיפוח עבור Live-תא הדמיה של הזיגוטה קיטוב והמתבנת העובר ב תודרנית לבנה

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

הדמיה חיה של עכבר משניים פיוז &#39;ן

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

A RANKL-based Osteoclast Culture Assay of Mouse Bone Marrow to Investigate the Role of mTORC1 in Osteoclast Formation

מבוסס רנקל אוסטאוקלסט תרבות וזמינותו של העכבר מח העצם כדי לחקור את התפקיד של mTORC1 במבנה אוסטאוקלסט

Osteoclasts are unique bone-resorbing cells that differentiate from the monocyte/macrophage lineage of bone marrow. Dysfunction of osteoclasts may result ...

Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice

בידוד, תרבות, התמיינות של תאי סטרומה מח עצם ו אוסטאוקלסט אבות של עכברים

Bone marrow stromal cells (BMSCs) constitute a cell population routinely used as a representation of mesenchymal stem cells in vitro. They reside within ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

תא חי הדמיה של הפרדה בין כרומוזום במהלך מיטוזה

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...